龙葵抗肿瘤的作用机制和治疗进展

龙葵抗肿瘤的作用机制和治疗进展

08中西七1班

曹蓓(032008129)

【摘要】龙葵,作为一种传统中药,具有显著的抗肿瘤、抗菌、抗病毒、保肝护肾、免疫调节等作用,临床应用广泛。其中,临床上发现龙葵对多种实体肿瘤具有良好的防治效果。为促进龙葵的的进一步合理开发和有效利用,故对近年来龙葵抗肿瘤的作用机制以及对多种肿瘤的治疗进展进行收集总结,以供参考。

龙葵出自《药性论》,为一年生草本茄科植物龙葵的全草,别名苦菜(《唐本草》),苦葵、老鸦眼睛草、天茄子(《本草图经》),天茄苗儿(《救荒本草》),天天茄(《滇南本草》),救儿草、后红子(《滇南本草图说》),水茄、天泡草、老鸦酸浆草(《本草纲目》),天泡果(《植物名实图考》),七粒扣、乌疗草(《福建民间草药》),黑天棵(《江苏植药志》)。李时珍曰:“龙葵,言其胜滑如葵也。苦以菜味名,茄以叶行名,天泡,老鸦眼睛皆以子形名也。与酸浆相类,故加老鸦以别之。”《本草纲目》日:其性味苦微甘,滑,寒,无毒。龙葵有清热,解毒,活血,消肿等作用,可治痈疽肿毒,跌打损伤等。

龙葵含龙葵碱(solanigrine)澳茄胺(oslasodine),龙葵定碱(solanigridine)、皂甙、维生素C、树脂。作为传统中药的龙葵近年来得到了海内外学者的广泛关注,对其化学成分进行了人量深入的研究,逐步弄清其药效作用的物质基础,尤其是在抗肿瘤作用的研究方面取得一系列的研究成果。现就龙葵的主要功能作用、抗肿瘤作用机制和治疗进展等方面进行相关综述,为进一步有效利用龙葵的相应功效奠定基础。

一.相关肿瘤治疗探讨

1.肝癌

(1)高某采用HPLC方法,以2-氨基芴(2-AF)为底物,以2-AF被NAT乙酰化为2-乙酰氨基芴(2-AAF)的量,探讨龙葵碱对HepG2细胞N-乙酰基转移酶(NAT)活性的影响。实验结果表明,龙葵碱对HepG2完整细胞膜和细胞质内NAT酶都有一定的影响:龙葵碱能够降低HepG2完整细胞和细胞质内2 -AAF生成的量,并目_具有剂量相关性;随着作用时间的延长,2 -AAF生成的量逐渐增多,但在相同作用时间下龙葵碱均能够降低2-AAF的生成。因此,龙葵碱是一种NAT的抑制剂,龙葵碱对HepG2细胞的抑制作用与其抑制NAT活性有一定关系,作为NAT抑制剂,分为非竞争性抑制、竞争性抑制和反竞争性抑制剂。

(2)季某采用倒置显微镜观察形态学变化,Annexin V-FITC联合PI双染法和Tunel法检测龙葵碱诱导人肝癌HepG2细胞凋亡作用.结果发现龙葵碱作用24 h后,贴壁细胞数量减少、体积缩小,变圆等明显凋亡形态; 在激光共聚焦显微镜下观察到AnnexinV-FITC阳性信号为绿[1]

色荧光,PI为红色荧光; Tunel阳性信号为绿色荧光.表明龙葵碱通过诱导HepG2细胞凋亡达到抗肿瘤的作用. [2]

(3)徐某和高某通过透射电镜观察凋亡细胞形态变化,原位缺口末端检测法(TUNEL法)检测DNA断裂情况,流式细胞术检测细胞凋亡率,间接免疫荧光法激光共聚焦扫描显微术检测Bcl-2与Bax蛋白表达,比色法检测caspase-3活性的变化。结果在透射电镜下观察,龙葵碱组细胞出现细胞固缩,染色质致密,核凝聚固缩,染色体断裂形成核碎块,凋亡小体形成等细胞凋亡特征形态。TUNEL法发现龙葵碱高、中、低剂量组HepG2细胞均有绿色荧光,阴性对照组无荧光。流式细胞术分析表明0.4、2、10μmol/L龙葵碱作用HepG2细胞24h凋亡率分别为4.0%、8.5%、20.1%。同时,龙葵碱升高caspase-3活性,下调Bcl-2蛋白表达,上调Bax蛋白表达。结论龙葵碱通过降低Bcl-2/Bax的值,激活caspase-3酶活性诱导HepG2细胞凋亡。

(4)季某和高某通过MTT法测定龙葵碱对HepG2细胞的细胞毒作用; AO/EB双染,激光共聚焦扫描显微镜观察龙葵碱对HepG2细胞形态学的影响; TMRE和Fluo-3/AM双染,激光共聚焦扫描显微镜同时观察细胞线粒体膜电位和细胞内[Ca2+]i的变化。结果龙葵碱对HepG2细胞有细胞毒作用; 龙葵碱诱导HepG2细胞形态出现凋亡形态时TMRE和Fluo-3/AM双染观察表明,龙葵碱在降低线粒体膜电位的同时能够升高细胞内[Ca2+]i浓度。结论龙葵碱降低膜电位,开放细胞膜PT通道,使细胞内Ca2+顺浓度梯度转运,从而升高细胞内Ca2+浓度启动细胞凋亡机制。

(5) 濮某和华某通过对有关文献的研究,发现中药及其提取物通过作用于信号转导通路诱导肝癌细胞凋亡、影响肝癌血管生成。其中,龙葵糖蛋白对多种肿瘤细胞具有细胞毒和促细胞凋亡作用。龙葵碱通过开放PT通道,引起线粒体内Ca2+释放造成细胞内Ca2+升高,接着细胞线粒体膜电位降低,进而启动凋亡[5] [4][3]

(6)高某,徐某和季某通过倒置显微镜观察细胞形态,Annexin V/PI双染激光共聚焦扫描显微术检测细胞凋亡,流式细胞仪检测细胞凋亡率。透射电镜观察细胞线粒体超微结

构,CDFH-DA染色激光共聚焦扫描显微术检测活性氧(ROS)相对量,比色法检测还原型谷胱甘肽(GSH)量。结果龙葵碱组HepG2细胞贴壁细胞数量减少,部分出现死亡。Annexin V/PI双染激光共聚焦扫描显微镜下观察发现龙葵碱组细胞Annexin V-FITC高染,细胞膜呈绿色荧光; PI低染,细胞核呈红色荧光,呈现明显的早期凋亡特征。流式细胞术分析0.4、2、10μmol/L龙葵碱作用HepG2细胞24 h后,早期凋亡率分别为4.0%、8.5%、20.1%。透射电镜观察发现龙葵碱作用HepG2细胞24 h,细胞线粒体超微结构出现肿胀,嵴排列紊乱、嵴消失,重度空泡样变性等变化; 细胞内ROS水平升高,GSH的水平降低。结论龙葵碱通过降低HepG2细胞内GSH量,使ROS不能被及时清除而损伤线粒体结构,导致HepG2细胞凋亡。

2.胃癌 [6]

谷某等人通过在不同条件下,测定不同指标(CAMP水平和PKA活性)了解复方中药处理MGc80 —3细胞时,细胞内cAMP/PKA(环腺苷酸/蛋白激酶A)和DAG/PKC(二酰基甘油/蛋白激酶C)两条信号通路表现出调控关系。结果当用复方中药(Bailong)处理MGc80—3细胞时,细胞内cAMP水平和PKA活性较对照组水平分别升高11.3%和19.7%,而DAG含量和PKC活性则降低40.0%和64.2%;当PKC通路被PKC抑制剂GF—109203X阻断时,cAMP水平和PKA活性分别较对照组升高78.8%和33.5%,而DAG含量和PKC活性则降低40.3%和56.3%;但用Bailong处理细胞时同时阻断PKA通路,cAMP水平和PKA活性较中药组分别降低46.0%和28.9%,另一方面,DAG含量和PKC活性则分别升高50.7%和51.6%。结论:MGc80—3细胞的增殖分化同信号通路之间存在因果关系。研究结果与HMBA的相似性说明信号通路是中西医药调节MGc80—3细胞增殖分化的物质基础。

3.膀胱癌

张某通过对20例浅表性膀胱癌患者术后采用丝裂毒素C膀胱内灌注加服龙葵方以预防复发,疗效显著,总结出:临床上膀胱内灌注治疗和预防术后复发的药物主要有细胞毒性药物和免疫制剂两大类。常见细胞毒性药物为丝裂霉素,其卞要作用是抑制DNA的合成,可有效地治疗各种实体性肿瘤,但局部膀胱刺激症状较明显,本组患者应用小剂量,稀释成低浓度,可减少局部刺激症状,同时配合龙葵方,兼有抗癌.止痛、利尿作用;龙葵、蛇毒、白花蛇舌草、白英等药治疗癌肿,防止复发;配合泽泻、术通等药治疗水肿、小便不利等证,减少丝裂毒素膀胱刺激症状,对旱期浅表性肿瘤效果显著,为预防膀胱癌术后复发提供了一种新的方法。

4.前列腺癌

章某和施某分别用0、30、40、50μg/ml浓度的龙葵碱作用PC-3细胞,12、24、48 h后应用CCK-8法检测细胞生长活性、24 h后流式细胞仪测定细胞周期及细胞凋亡变化,荧光显微镜观察细胞凋亡,24 h后应用Western印迹方法检测细胞内IкBα和Bcl-2蛋白的表达。结果:龙葵碱能显著抑制PC-3细胞的生长,呈剂量与时间依赖性,不同浓度龙葵碱组之间与不同作用时间组之间的差异具有显著性意义(P均

5.肺癌

李某等人分别采用接种S180移植性实体瘤及Lewis肺癌瘤株的方法造成两种荷瘤小鼠。注射给予药物后,观测荷瘤(S180)小鼠瘤重及抑瘤率、血清TNF-α及IL-2水平、胸腺及脾指数[9][8] [7]

指标; 观测Lewis肺癌移植瘤小鼠瘤重及抑瘤率、血清IL-6及IL-8水平,观察龙葵甾体类生物碱对荷瘤(S180)小鼠及对Lewis肺癌移植瘤小鼠的影响。结论:龙葵甾体类生物碱不仅具有抑制肿瘤增长的作用,还可以显著提高荷瘤小鼠血清TNF-α、IL-2、IL-6、IL-8的水平,对肿瘤的治疗具有积极意义,这可能是其发挥抗肿瘤作用的机理之一。

6.多发性骨髓瘤

王某利用U266细胞株与龙葵总提取物共同培养,用CCK 8试剂检测细胞毒作用; 用流式细胞仪测定细胞周期及凋亡。结果:龙葵总提取物对U266细胞有细胞毒作用,半数抑制(质量)浓度约为117mg/L; 龙葵总提取物影响U266细胞周期,G0 /G1 期细胞减少,S期、G2 /M期细胞增加,凋亡细胞增加。用AnnexinV/PI染色及TFAR19染色流式细胞仪检测,均显示细胞凋亡与龙葵总提取物有剂量依赖关系。结论:龙葵总提取物对U266细胞有体外细胞毒作用,其作用机制部分是诱导细胞凋亡。[11][10]

二.抗肿瘤作用机制的总结

1.季某认为龙葵抗肿瘤作用主要与细胞膜上的钠泵及钙泵活性有关。将荷瘤小鼠分为治疗组(高剂量、中剂量、低剂量)和对照组(生理盐水组、环磷酰胺组),分别测定各组肿瘤细胞膜的Na+,K+-ATPase及Ca++,Mg++-ATPase活性。结果:龙葵总碱对S180小鼠及H22小鼠肿瘤细胞膜Na+,K+-ATPase及Ca++,Mg++-ATPase活性均有明显的抑制作用,并且其抑制作用呈量效正相关。说明龙葵总碱对S180小鼠及H22小鼠肿瘤细胞膜Na+,K+-ATPase及Ca++,Mg++- ATPase活性有影响龙葵总碱这一作用可能是其抗肿瘤作用机理之一。[12]

2.李某等人用3种浓度的龙葵口服液,即高剂量(3000mg/kg体质量),中剂量(1500mg/kg体质量),低剂量(750mg/kg体质量)连续灌胃不同组别小鼠,28d后分别采用Jerne改良玻片法进行小鼠的抗体生成细胞检测试验; MTT法进行小鼠的淋巴细胞转化实验; 乳酸脱氢酶测定进行小鼠NK细胞活性测定试验.结果 小鼠抗体生成细胞数、NK细胞活性在高剂量组与对照组间比较有显著性差异(P0.05); 吞噬率、吞噬指数及淋巴细胞的增殖能力在低、中、高剂量组与对照组间比较均无显著性差异(P>0.05).结论 高剂量的龙葵浓缩汁能明显增加小鼠的抗体生成细胞数,增强小鼠NK细胞的活性; 而龙葵浓缩汁对小鼠巨噬细胞吞噬功能及对ConA诱导的小鼠淋巴细胞转化的能力无影响。[13]

3.王某等人采用荧光探针DPH标记法测定肿瘤细胞膜流动性,考马斯亮蓝法测定肿瘤细胞膜蛋白水平。结果龙葵碱可显著降低H22荷瘤小鼠肿瘤细胞膜流动性,降低H22小鼠肿瘤细胞膜蛋白水平。结论龙葵碱是通过影响肿瘤细胞膜的流动性和肿瘤细胞膜上的蛋白水平恢复细胞的正常生理活性而达到抗肿瘤作用。[14]

4.归某认为龙葵抗肿瘤机制主要分为3方面

(1)对肿瘤细胞膜的作用:恢复肿瘤细胞膜的流动性,降低肿瘤细胞膜蛋白水平,降低肿瘤细胞膜唾液酸水平,降低肿瘤细胞膜封闭度,抑制肿瘤细胞膜ATP酶活性。

(2)抑制肿瘤细胞增殖

(3)诱导肿瘤细胞凋亡

(4)增强红细胞免疫功能

(5)抑制血管新生[15]

诚然,龙葵确是一味较好的清热解毒之药。肿瘤之生,每为气滞血瘀热毒结聚,或者阴虚内热邪毒内盛所致。临床用龙葵配蒲公英、蛇莓、半枝莲、石上柏、沙参、大贝母等治疗肺癌患者,常可收到宣肺平喘、祛痰镇咳和止血效果;配白花蛇舌草、半枝莲、猪苓、泽泻、车前仁、侧柏炭治疗膀胱癌病人,常可缓解尿血症状;配石上柏、山慈姑、银花藤、山豆根对晚期鼻咽癌病有改善患部炎症的作用。[16]

笔者认为,除了以上对龙葵生理作用机制的探索外,也不能忽视龙葵不同部位提取物对肿瘤的影响,可以从这些化学成份如6一甲氧基一7羟基香豆素、3 ,4一二轻基苯甲酸、对轻基苯甲酸.3一甲氧基一4一轻基苯甲酸、腺苷等进行相应的研究。[17]

一般,中药治疗癌症具有多成分,多环节,多靶点效应的优势,但是其中具体有哪些环节和传导通路来干扰肿瘤的增殖与分化,目前大部分不是很清楚。想要弄清楚中间的奥妙,还有待于更深入的研究和探讨,以上资料仅供参考。

【参考文献】

[1]高世勇,季宇彬,龙葵碱对人肝癌HepG2细胞N-乙酰基转移酶活性的影响[J].中草药,2008,(11).

[2] 季宇彬,徐丽丽,高世勇,. 龙葵碱对HepG_2细胞磷脂酰丝氨酸及断裂DNA研究[J]. 哈尔滨商业大学学报(自然科学版),2008,(3).

[3] 高世勇,徐丽丽,季宇彬,. 龙葵碱调控Bcl-2与Bax蛋白表达及caspase-3活性诱导HepG2细胞凋亡的研究

[J]. 中草药,2009,(10).

[4] 季宇彬,高世勇,. 龙葵碱诱导HepG_2细胞凋亡的线粒体通路研究[J]. 中国药学杂志,2008,(4).

[5] 濮忠建,华海清,. 中药对肝癌细胞信号转导通路影响的研究进展[J]. 中国中药杂志,2011,(7).

[6] 高世勇,徐丽丽,季宇彬,. 龙葵碱调控还原型谷胱甘肽和活性氧氧化还原体系损伤线粒体超微结构诱导HepG2细胞凋亡[J]. 中草药,2009,(11).

[7] 谷善青,梁云燕,樊立人,李宝元,王代树. 白英龙葵复方制剂诱导人胃癌细胞分化时两条信号通路的共调作用(英文)[J]. China National Journal of New Gastroenterology,1997,(1).

[8] 张绍磊,. 膀胱内灌注加龙葵方预防膀胱癌复发的疗效观察[J]. 现代中西医结合杂志,2008,(3).

[9] 章俊,施国伟,. 龙葵碱对前列腺癌细胞系PC-3的体外抑制作用[J]. 中华男科学杂志,2011,(3).

[10] 李明慧,孙世顷,曹亮,刘世聪,丁岗,刘景晶,. 龙葵甾体类生物碱对S_(180)及Lewis肺癌移植瘤小鼠的影响

[J]. 中国天然药物,2008,(3).

[11] 王蔚,陆道培. 龙葵总提取物对多发性骨髓瘤U266细胞株的作用[J]. 北京大学学报(医学版),2005,(3).

[12] 季宇彬,高世勇,王宏亮,邹翔,. 龙葵总碱对肿瘤细胞膜钠泵及钙泵活性影响的研究[J]. 世界科学技术,2006,(4).

[13] 李咏梅,王冰梅,艾金霞. 龙葵浓缩汁对小鼠细胞免疫功能的影响[J]. 北华大学学报(自然科学

版),2005,(3).

[14] 季宇彬,王胜惠,高世勇,汲晨锋,邹翔. 龙葵碱对H_(22)荷瘤小鼠细胞膜流动性和膜蛋白水平的影响[J]. 中草药,2005,(2).

[15] 归小龙,. 龙葵碱抗肿瘤作用机制研究进展[J]. 中国中医药信息杂志,2009,(S1).

[16] 谢启梅. 龙葵在肿瘤治疗中的运用[J]. 江西中医药,1996,(2).

[17] 卢汝梅,谭新武,周媛媛,. 龙葵的研究进展[J]. 时珍国医国药,2009,(7).

龙葵抗肿瘤的作用机制和治疗进展

08中西七1班

曹蓓(032008129)

【摘要】龙葵,作为一种传统中药,具有显著的抗肿瘤、抗菌、抗病毒、保肝护肾、免疫调节等作用,临床应用广泛。其中,临床上发现龙葵对多种实体肿瘤具有良好的防治效果。为促进龙葵的的进一步合理开发和有效利用,故对近年来龙葵抗肿瘤的作用机制以及对多种肿瘤的治疗进展进行收集总结,以供参考。

龙葵出自《药性论》,为一年生草本茄科植物龙葵的全草,别名苦菜(《唐本草》),苦葵、老鸦眼睛草、天茄子(《本草图经》),天茄苗儿(《救荒本草》),天天茄(《滇南本草》),救儿草、后红子(《滇南本草图说》),水茄、天泡草、老鸦酸浆草(《本草纲目》),天泡果(《植物名实图考》),七粒扣、乌疗草(《福建民间草药》),黑天棵(《江苏植药志》)。李时珍曰:“龙葵,言其胜滑如葵也。苦以菜味名,茄以叶行名,天泡,老鸦眼睛皆以子形名也。与酸浆相类,故加老鸦以别之。”《本草纲目》日:其性味苦微甘,滑,寒,无毒。龙葵有清热,解毒,活血,消肿等作用,可治痈疽肿毒,跌打损伤等。

龙葵含龙葵碱(solanigrine)澳茄胺(oslasodine),龙葵定碱(solanigridine)、皂甙、维生素C、树脂。作为传统中药的龙葵近年来得到了海内外学者的广泛关注,对其化学成分进行了人量深入的研究,逐步弄清其药效作用的物质基础,尤其是在抗肿瘤作用的研究方面取得一系列的研究成果。现就龙葵的主要功能作用、抗肿瘤作用机制和治疗进展等方面进行相关综述,为进一步有效利用龙葵的相应功效奠定基础。

一.相关肿瘤治疗探讨

1.肝癌

(1)高某采用HPLC方法,以2-氨基芴(2-AF)为底物,以2-AF被NAT乙酰化为2-乙酰氨基芴(2-AAF)的量,探讨龙葵碱对HepG2细胞N-乙酰基转移酶(NAT)活性的影响。实验结果表明,龙葵碱对HepG2完整细胞膜和细胞质内NAT酶都有一定的影响:龙葵碱能够降低HepG2完整细胞和细胞质内2 -AAF生成的量,并目_具有剂量相关性;随着作用时间的延长,2 -AAF生成的量逐渐增多,但在相同作用时间下龙葵碱均能够降低2-AAF的生成。因此,龙葵碱是一种NAT的抑制剂,龙葵碱对HepG2细胞的抑制作用与其抑制NAT活性有一定关系,作为NAT抑制剂,分为非竞争性抑制、竞争性抑制和反竞争性抑制剂。

(2)季某采用倒置显微镜观察形态学变化,Annexin V-FITC联合PI双染法和Tunel法检测龙葵碱诱导人肝癌HepG2细胞凋亡作用.结果发现龙葵碱作用24 h后,贴壁细胞数量减少、体积缩小,变圆等明显凋亡形态; 在激光共聚焦显微镜下观察到AnnexinV-FITC阳性信号为绿[1]

色荧光,PI为红色荧光; Tunel阳性信号为绿色荧光.表明龙葵碱通过诱导HepG2细胞凋亡达到抗肿瘤的作用. [2]

(3)徐某和高某通过透射电镜观察凋亡细胞形态变化,原位缺口末端检测法(TUNEL法)检测DNA断裂情况,流式细胞术检测细胞凋亡率,间接免疫荧光法激光共聚焦扫描显微术检测Bcl-2与Bax蛋白表达,比色法检测caspase-3活性的变化。结果在透射电镜下观察,龙葵碱组细胞出现细胞固缩,染色质致密,核凝聚固缩,染色体断裂形成核碎块,凋亡小体形成等细胞凋亡特征形态。TUNEL法发现龙葵碱高、中、低剂量组HepG2细胞均有绿色荧光,阴性对照组无荧光。流式细胞术分析表明0.4、2、10μmol/L龙葵碱作用HepG2细胞24h凋亡率分别为4.0%、8.5%、20.1%。同时,龙葵碱升高caspase-3活性,下调Bcl-2蛋白表达,上调Bax蛋白表达。结论龙葵碱通过降低Bcl-2/Bax的值,激活caspase-3酶活性诱导HepG2细胞凋亡。

(4)季某和高某通过MTT法测定龙葵碱对HepG2细胞的细胞毒作用; AO/EB双染,激光共聚焦扫描显微镜观察龙葵碱对HepG2细胞形态学的影响; TMRE和Fluo-3/AM双染,激光共聚焦扫描显微镜同时观察细胞线粒体膜电位和细胞内[Ca2+]i的变化。结果龙葵碱对HepG2细胞有细胞毒作用; 龙葵碱诱导HepG2细胞形态出现凋亡形态时TMRE和Fluo-3/AM双染观察表明,龙葵碱在降低线粒体膜电位的同时能够升高细胞内[Ca2+]i浓度。结论龙葵碱降低膜电位,开放细胞膜PT通道,使细胞内Ca2+顺浓度梯度转运,从而升高细胞内Ca2+浓度启动细胞凋亡机制。

(5) 濮某和华某通过对有关文献的研究,发现中药及其提取物通过作用于信号转导通路诱导肝癌细胞凋亡、影响肝癌血管生成。其中,龙葵糖蛋白对多种肿瘤细胞具有细胞毒和促细胞凋亡作用。龙葵碱通过开放PT通道,引起线粒体内Ca2+释放造成细胞内Ca2+升高,接着细胞线粒体膜电位降低,进而启动凋亡[5] [4][3]

(6)高某,徐某和季某通过倒置显微镜观察细胞形态,Annexin V/PI双染激光共聚焦扫描显微术检测细胞凋亡,流式细胞仪检测细胞凋亡率。透射电镜观察细胞线粒体超微结

构,CDFH-DA染色激光共聚焦扫描显微术检测活性氧(ROS)相对量,比色法检测还原型谷胱甘肽(GSH)量。结果龙葵碱组HepG2细胞贴壁细胞数量减少,部分出现死亡。Annexin V/PI双染激光共聚焦扫描显微镜下观察发现龙葵碱组细胞Annexin V-FITC高染,细胞膜呈绿色荧光; PI低染,细胞核呈红色荧光,呈现明显的早期凋亡特征。流式细胞术分析0.4、2、10μmol/L龙葵碱作用HepG2细胞24 h后,早期凋亡率分别为4.0%、8.5%、20.1%。透射电镜观察发现龙葵碱作用HepG2细胞24 h,细胞线粒体超微结构出现肿胀,嵴排列紊乱、嵴消失,重度空泡样变性等变化; 细胞内ROS水平升高,GSH的水平降低。结论龙葵碱通过降低HepG2细胞内GSH量,使ROS不能被及时清除而损伤线粒体结构,导致HepG2细胞凋亡。

2.胃癌 [6]

谷某等人通过在不同条件下,测定不同指标(CAMP水平和PKA活性)了解复方中药处理MGc80 —3细胞时,细胞内cAMP/PKA(环腺苷酸/蛋白激酶A)和DAG/PKC(二酰基甘油/蛋白激酶C)两条信号通路表现出调控关系。结果当用复方中药(Bailong)处理MGc80—3细胞时,细胞内cAMP水平和PKA活性较对照组水平分别升高11.3%和19.7%,而DAG含量和PKC活性则降低40.0%和64.2%;当PKC通路被PKC抑制剂GF—109203X阻断时,cAMP水平和PKA活性分别较对照组升高78.8%和33.5%,而DAG含量和PKC活性则降低40.3%和56.3%;但用Bailong处理细胞时同时阻断PKA通路,cAMP水平和PKA活性较中药组分别降低46.0%和28.9%,另一方面,DAG含量和PKC活性则分别升高50.7%和51.6%。结论:MGc80—3细胞的增殖分化同信号通路之间存在因果关系。研究结果与HMBA的相似性说明信号通路是中西医药调节MGc80—3细胞增殖分化的物质基础。

3.膀胱癌

张某通过对20例浅表性膀胱癌患者术后采用丝裂毒素C膀胱内灌注加服龙葵方以预防复发,疗效显著,总结出:临床上膀胱内灌注治疗和预防术后复发的药物主要有细胞毒性药物和免疫制剂两大类。常见细胞毒性药物为丝裂霉素,其卞要作用是抑制DNA的合成,可有效地治疗各种实体性肿瘤,但局部膀胱刺激症状较明显,本组患者应用小剂量,稀释成低浓度,可减少局部刺激症状,同时配合龙葵方,兼有抗癌.止痛、利尿作用;龙葵、蛇毒、白花蛇舌草、白英等药治疗癌肿,防止复发;配合泽泻、术通等药治疗水肿、小便不利等证,减少丝裂毒素膀胱刺激症状,对旱期浅表性肿瘤效果显著,为预防膀胱癌术后复发提供了一种新的方法。

4.前列腺癌

章某和施某分别用0、30、40、50μg/ml浓度的龙葵碱作用PC-3细胞,12、24、48 h后应用CCK-8法检测细胞生长活性、24 h后流式细胞仪测定细胞周期及细胞凋亡变化,荧光显微镜观察细胞凋亡,24 h后应用Western印迹方法检测细胞内IкBα和Bcl-2蛋白的表达。结果:龙葵碱能显著抑制PC-3细胞的生长,呈剂量与时间依赖性,不同浓度龙葵碱组之间与不同作用时间组之间的差异具有显著性意义(P均

5.肺癌

李某等人分别采用接种S180移植性实体瘤及Lewis肺癌瘤株的方法造成两种荷瘤小鼠。注射给予药物后,观测荷瘤(S180)小鼠瘤重及抑瘤率、血清TNF-α及IL-2水平、胸腺及脾指数[9][8] [7]

指标; 观测Lewis肺癌移植瘤小鼠瘤重及抑瘤率、血清IL-6及IL-8水平,观察龙葵甾体类生物碱对荷瘤(S180)小鼠及对Lewis肺癌移植瘤小鼠的影响。结论:龙葵甾体类生物碱不仅具有抑制肿瘤增长的作用,还可以显著提高荷瘤小鼠血清TNF-α、IL-2、IL-6、IL-8的水平,对肿瘤的治疗具有积极意义,这可能是其发挥抗肿瘤作用的机理之一。

6.多发性骨髓瘤

王某利用U266细胞株与龙葵总提取物共同培养,用CCK 8试剂检测细胞毒作用; 用流式细胞仪测定细胞周期及凋亡。结果:龙葵总提取物对U266细胞有细胞毒作用,半数抑制(质量)浓度约为117mg/L; 龙葵总提取物影响U266细胞周期,G0 /G1 期细胞减少,S期、G2 /M期细胞增加,凋亡细胞增加。用AnnexinV/PI染色及TFAR19染色流式细胞仪检测,均显示细胞凋亡与龙葵总提取物有剂量依赖关系。结论:龙葵总提取物对U266细胞有体外细胞毒作用,其作用机制部分是诱导细胞凋亡。[11][10]

二.抗肿瘤作用机制的总结

1.季某认为龙葵抗肿瘤作用主要与细胞膜上的钠泵及钙泵活性有关。将荷瘤小鼠分为治疗组(高剂量、中剂量、低剂量)和对照组(生理盐水组、环磷酰胺组),分别测定各组肿瘤细胞膜的Na+,K+-ATPase及Ca++,Mg++-ATPase活性。结果:龙葵总碱对S180小鼠及H22小鼠肿瘤细胞膜Na+,K+-ATPase及Ca++,Mg++-ATPase活性均有明显的抑制作用,并且其抑制作用呈量效正相关。说明龙葵总碱对S180小鼠及H22小鼠肿瘤细胞膜Na+,K+-ATPase及Ca++,Mg++- ATPase活性有影响龙葵总碱这一作用可能是其抗肿瘤作用机理之一。[12]

2.李某等人用3种浓度的龙葵口服液,即高剂量(3000mg/kg体质量),中剂量(1500mg/kg体质量),低剂量(750mg/kg体质量)连续灌胃不同组别小鼠,28d后分别采用Jerne改良玻片法进行小鼠的抗体生成细胞检测试验; MTT法进行小鼠的淋巴细胞转化实验; 乳酸脱氢酶测定进行小鼠NK细胞活性测定试验.结果 小鼠抗体生成细胞数、NK细胞活性在高剂量组与对照组间比较有显著性差异(P0.05); 吞噬率、吞噬指数及淋巴细胞的增殖能力在低、中、高剂量组与对照组间比较均无显著性差异(P>0.05).结论 高剂量的龙葵浓缩汁能明显增加小鼠的抗体生成细胞数,增强小鼠NK细胞的活性; 而龙葵浓缩汁对小鼠巨噬细胞吞噬功能及对ConA诱导的小鼠淋巴细胞转化的能力无影响。[13]

3.王某等人采用荧光探针DPH标记法测定肿瘤细胞膜流动性,考马斯亮蓝法测定肿瘤细胞膜蛋白水平。结果龙葵碱可显著降低H22荷瘤小鼠肿瘤细胞膜流动性,降低H22小鼠肿瘤细胞膜蛋白水平。结论龙葵碱是通过影响肿瘤细胞膜的流动性和肿瘤细胞膜上的蛋白水平恢复细胞的正常生理活性而达到抗肿瘤作用。[14]

4.归某认为龙葵抗肿瘤机制主要分为3方面

(1)对肿瘤细胞膜的作用:恢复肿瘤细胞膜的流动性,降低肿瘤细胞膜蛋白水平,降低肿瘤细胞膜唾液酸水平,降低肿瘤细胞膜封闭度,抑制肿瘤细胞膜ATP酶活性。

(2)抑制肿瘤细胞增殖

(3)诱导肿瘤细胞凋亡

(4)增强红细胞免疫功能

(5)抑制血管新生[15]

诚然,龙葵确是一味较好的清热解毒之药。肿瘤之生,每为气滞血瘀热毒结聚,或者阴虚内热邪毒内盛所致。临床用龙葵配蒲公英、蛇莓、半枝莲、石上柏、沙参、大贝母等治疗肺癌患者,常可收到宣肺平喘、祛痰镇咳和止血效果;配白花蛇舌草、半枝莲、猪苓、泽泻、车前仁、侧柏炭治疗膀胱癌病人,常可缓解尿血症状;配石上柏、山慈姑、银花藤、山豆根对晚期鼻咽癌病有改善患部炎症的作用。[16]

笔者认为,除了以上对龙葵生理作用机制的探索外,也不能忽视龙葵不同部位提取物对肿瘤的影响,可以从这些化学成份如6一甲氧基一7羟基香豆素、3 ,4一二轻基苯甲酸、对轻基苯甲酸.3一甲氧基一4一轻基苯甲酸、腺苷等进行相应的研究。[17]

一般,中药治疗癌症具有多成分,多环节,多靶点效应的优势,但是其中具体有哪些环节和传导通路来干扰肿瘤的增殖与分化,目前大部分不是很清楚。想要弄清楚中间的奥妙,还有待于更深入的研究和探讨,以上资料仅供参考。

【参考文献】

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[3] 高世勇,徐丽丽,季宇彬,. 龙葵碱调控Bcl-2与Bax蛋白表达及caspase-3活性诱导HepG2细胞凋亡的研究

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[5] 濮忠建,华海清,. 中药对肝癌细胞信号转导通路影响的研究进展[J]. 中国中药杂志,2011,(7).

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[16] 谢启梅. 龙葵在肿瘤治疗中的运用[J]. 江西中医药,1996,(2).

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