根癌农杆菌介导的'魏可'葡萄遗传转化体系的优化

　　 　　摘要： 以‘魏可’葡萄离体叶片为外植体，利用植物表达载体上含有卡那霉素抗性基因（nptⅡ）的根癌农杆菌LBA4404 （pCAMBIA2301）对影响‘魏可’葡萄遗传转化效率的因素进行系统研究。结果表明，最佳农杆菌介导‘魏可’葡萄遗传转化体系为农杆菌侵染4 min，共培养3 d，卡那霉素质量浓度5 mg·L-1，羧苄青霉素质量浓度200 mg·L-1。采用此体系对‘魏可’葡萄进行转化，共获得9株抗性苗。利用GUS组织化学染色、PCR扩增的方法检测，结果表明，有4株通过了PCR检测，1株通过了RT-PCR检测，初步证明nptⅡ基因已经整合进入‘魏可’葡萄基因组中。将PCR产物回收，经测序验证nptⅡ基因完全整合进入‘魏可’葡萄基因组中。对CK及经PCR检测呈阳性的株系进行卡那霉素抗性鉴定，发现PCR呈阳性的株系均比CK抗Kan的能力明显增强。

　　 　　摘要： 以‘魏可’葡萄离体叶片为外植体，利用植物表达载体上含有卡那霉素抗性基因（nptⅡ）的根癌农杆菌LBA4404 （pCAMBIA2301）对影响‘魏可’葡萄遗传转化效率的因素进行系统研究。结果表明，最佳农杆菌介导‘魏可’葡萄遗传转化体系为农杆菌侵染4 min，共培养3 d，卡那霉素质量浓度5 mg·L-1，羧苄青霉素质量浓度200 mg·L-1。采用此体系对‘魏可’葡萄进行转化，共获得9株抗性苗。利用GUS组织化学染色、PCR扩增的方法检测，结果表明，有4株通过了PCR检测，1株通过了RT-PCR检测，初步证明nptⅡ基因已经整合进入‘魏可’葡萄基因组中。将PCR产物回收，经测序验证nptⅡ基因完全整合进入‘魏可’葡萄基因组中。对CK及经PCR检测呈阳性的株系进行卡那霉素抗性鉴定，发现PCR呈阳性的株系均比CK抗Kan的能力明显增强。