茉莉花茶提取液对部分免疫效应的影响

·1428·中国病理生理杂志Chinese Journal of Pathophysiology 2011，27（7）：1428－1430

［文章编号］1000－4718（2011）07－1428－03

茉莉花、茉莉花茶提取液对部分免疫效应的影响

王

112

密，蒋昀靓，邝晓聪△，秦

333箐△，欧冰凝，李海东

（1广西卫生管理干部学院，广西医科大学病理生理教研室，化学教研室，广西南宁530021）

［摘要］目的：观察茉莉花茶提取液和茉莉花提取组分对脾淋巴细胞转化及中性粒细胞增殖活性的影响，

为茉莉花茶和茉莉花的应用提供前期研究数据。方法：采用水提法制作茉莉花茶浸出液，采用石油醚浸泡制备茉莉花脱脑油并进行柱层析分离。采用脾淋巴细胞转化实验与中性粒细胞吞噬实验检测茉莉花茶浸出液的免疫调另外采用淋巴细胞增殖法（MTT 法）测定茉莉花脱脑油和茉莉花提取组分B －Ⅱ的免疫激活作用。结果：节效应，

（1）茉莉花茶浸出液能明显提高小鼠淋巴细胞转化率，但对中性粒细胞吞噬率无明显影响。（2）MTT 证实茉莉花脱脑油和B －Ⅱ能促进小鼠淋巴细胞生长。结论：茉莉花茶浸出液、茉莉花脱脑油和B －Ⅱ具有一定的免疫促进效应。

［关键词］茉莉花；茉莉花茶；淋巴细胞转化率；免疫效应［中图分类号］R363

［文献标识码］A

doi ：10．3969/j．issn．1000－4718．2011．07．034

Effects of jasmine and jasmine tea extracts on functions of mouse immune cells

WANG Mi 1，JIANG Yun －liang 1，KUANG Xiao －cong 2，QIN Jing 3，OU Bing －ning 3，LI Hai －dong 3

（1Health Management Institute of Guangxi ，Department of Pathophysiology ，Department of Chemistry ，Guangxi Medical U-

niversity ，Nanning 530021，China．E －mail ：bskxc @yahoo．com．cn ；qqxx 103@163．com ）

［ABSTRACT ］AIM ：To observe the effects of jasmine and jasmine tea extracts on the transformation of mouse spleen lymphocytes as well as on the proliferative activity of mouse neutrophil granulocytes．METHODS ：The leachate of jasmine tea was made using water extraction．The jasmine essential oil was prepared by petroleum ether soaking and the parallel column chromatography．Mouse spleen lymphocytes were used to perform the transformation test and the neutrophil phagocytosis was also assayed．The lymphocyte proliferation was measured to determine the immune activation effects of jas-mine essential oil and extracted component from jasmine （B －Ⅱ）．RESULTS ：Jasmine tea leachate evidently improved the rate of lymphocyte transformation in mice ，but had no effect on the rate of neutrophil phagocytosis．The jasmine essen-tial oil and the component B －Ⅱpromoted the growth of mouse lymphocytes．CONCLUSION ：Leachate of jasmine tea ，jasmine essential oil and component B －Ⅱhave certain promoting effect on the immune system and improve the lymphocyte transformation in mice．

［KEY WORDS ］Jasmine ；Jasmine tea ；Lymphocyte transformation rate ；Immune effect JT ），在绿茶中加入茉莉花制成的茉莉花茶（jasmine tea ，因其特有的花香味而为众多饮茶者喜爱。国内外已有学者对茉莉花茶进行了一些研究，表明茉莉花茶可以抑制人体脂质过氧化反应，增强人体免疫功能脂

［4］

［1］

［2、3］

，、具有抗癌降血

［5］

、抗动脉硬化等功效。茉莉花历来备受人们喜爱，早

莉花及茉莉花茶是否具有免疫调节作用进行研究，通过MTT 实验及细胞培养技术对茉莉花作初步免疫活性筛选，观察其体外免疫激活作用，为今后对茉莉花化学成分免疫活性的研究和开发利用提供实验依据。

《本草纲目》“辛热甘温，在明代李时珍中已有记载，称该花中。文献报道茉莉花的化学物质和下气，僻秽浊，治下痢腹癖”有挥发性物质及环烯醚萜苷

［6］

材

材料

料和方法

。目前国内、外针对茉莉花及

［7］

其化学成分药用效能的研究非常少，对其研究和开发利用多局限于其精油作为添加剂在茶叶和食品方面的作用

，尚无

对其在现代医学和药学方面的研究报道。本实验对单纯茉［收稿日期］2010－10－22

［修回日期］2011－05－26

1．1药品与试剂茉莉花（由广西石乳茶业有限公司提

供）；茉莉花茶（广西横县茶协会提供）；茉莉花脱脑油和B －Ⅱ（为茉莉花提取物，由广西医科大学化学教研室制备）；外周血淋巴细胞培养液（湖南湘雅基因技术有限公司，批号为

△通讯作者邝晓聪Tel ：0770－2851185；E －mail ：bskxc@yahoo．com．cn ；秦箐Tel ：0770－2851185；E －mail ：qqxx103@163．com

·1429·

0610290202）；淋巴细胞分离液（中国医学科学院生物工程医学研究所）；灭活金葡菌悬液；RPMI －1640培养基（Hy-Clone ）；MTT （Hualayuan Biotechnology ）。1．2

流式细胞仪；SP030水夹套培养箱（上海实验仪

器厂有限公司）；MK3酶标仪（美国热电公司）；96孔细胞培

仪器

培养。培养结束前4－6h 加入MTT （20μL /well），低温离心10min （2500r /min），取上清液，再加入DMSO （100μL /well ），振荡溶解，用酶标仪于570nm 和630nm 双波长测A 值。3统计学处理

采用SPSS 10. 0统计软件进行方差分析及t 检验。

养板（加拿大杰特生物国际公司）；YS2－H 光学显微镜为Ni-kon 产品。1．3

动物SD 大鼠200－250g ，雄性；BALB /c小鼠，体重（25ʃ 5）g ，雄性，广西医科大学实验动物中心［桂动许字

结果

茉莉花茶浸出液对中性粒细胞吞噬率与脾淋巴细胞转化

（2001）第001号］提供，合格证号为桂医动字第23003号。2方法2．1

茉莉花茶浸出液制备将10g 茉莉花茶加入100mL 90ħ 双蒸水中浸泡30min 加入0. 8g NaCl 配成等渗原液，0. 22μm 微孔除菌过滤，收集滤液备用。

2．2实验分组（1）对照组（control ）：在反应体系中加入1/5体积生理盐水；（2）茉莉花茶A 组（JTA ）：在反应体系中对应加入1/5体积的茉莉花茶原液；（3）茉莉花茶B 组（JTB ）：在反应体系中对应加入1/10体积的茉莉花茶原液；（4）茉莉花茶C 组（JTC ）：在反应体系中对应加入1/20体积的茉莉花茶原液。

2．3免疫调节实验

①小鼠脾淋巴细胞转化实验

取BALB /c小鼠脾，撕碎，采

用淋巴细胞分离液分离和纯化脾淋巴细胞，调细胞浓度为

率的影响

较高浓度的茉莉花茶浸出液能明显提高小鼠淋巴细胞

。转化率，但对中性粒细胞吞噬率无明显影响，见图1、

Figure 1．The effect of jasmine tea （JT ）extract on the rate of

ʃ s．n =10．neutrophil phagocytosis．x 珋

图1

茉莉花茶浸出液对中性粒细胞吞噬率的影响

1. 0ˑ 109/L，96孔板每孔加入100μL 细胞悬液，并按2. 2的

实验分组按比例加入茉莉花茶原液，含PHA （植物血球凝集phytohemagglutinin ）培养液中培养72h ，素，取细胞悬液制片，吉姆萨－瑞氏染色，油镜下观察200个细胞中转化的淋巴细胞，计算淋巴细胞转化率。每个实验组为6个复孔。

②中性粒细胞吞噬实验SD 大鼠腹主动脉抽取抗凝血，采用明胶生理盐水沉淀法分离血中性白细胞，调细胞浓度为

1. 0ˑ 10/L，取0．2mL 用血浆配制细胞悬液，加入5μL 灭活

然后根据分组按比例加入茉莉花茶金葡菌悬液（1ˑ 10/L），

37ħ 孵育30min ，Wright 染色，油镜取细胞悬液制片，原液，

下观察200个中性粒细胞吞噬细菌的情况，计算吞噬率，进行10个样本检测。2．4

体外免疫活性实验（MTT 实验法）

①受试样品的制备将10mg 茉莉花脱脑油于2mL 50%乙醇中溶解，超声5min ，然后用蒸馏水将茉莉花脱脑油和茉莉花提取物B －Ⅱ逐级稀释成4个不同的浓度，备用。每个浓度各设1个阴性对照孔。

［8］

②MTT 实验将制备好的小鼠脾淋巴细胞悬液分别加入96孔细胞培养板中（100μL /well），再加入各浓度梯度受试样

Figure 2．The effect of jasmine tea （JT ）extract on the transfor-ming rate of spleen lymphocytes．x ʃ s．n =10．*P ＜珋

0. 05vs control group．

图22

茉莉花茶浸出液对脾淋巴细胞转化率的影响MTT 实验结果

每个浓度2个复孔。于37ħ 含5%CO 2的培养箱品20μL ，

中培养36h 后加入RPMI －1640培养液（100μL /well ）继续

4个浓度的B －Ⅱ和茉莉花脱脑油均可能有促进小鼠淋巴细胞增长的作用，但与对照组相比无显著差异，且与浓度2。无线性关系，见表1、

表1茉莉花提取物B －Ⅱ对体外培养小鼠淋巴细胞活力的影响

Table 1．Effect of jasmine extract B －Ⅱon viability of cultured mouse lymphocytes （A value．x ʃ s．n =10）珋Group Control B －Ⅱ

500mg /L0．077ʃ 0．0270．262ʃ 0．043

250mg /L－0．090ʃ 0．1300．200ʃ 0．016

125mg /L0．061ʃ 0．0140．153ʃ 0．021

50mg /L0．383ʃ 0．4530．194ʃ 0．003

·1430·

表2

Group

Jasmine essential oil Control

400mg /L0．110ʃ 0．0650．031ʃ 0．051

茉莉花脱脑油对小鼠淋巴细胞活力的影响

200mg /L0．145ʃ 0．1120．071ʃ 0．033

100mg /L0．165ʃ 0．0740．096ʃ 0．152

50mg /L0．128ʃ 0．0920．059ʃ 0．120

Table 2．Effect of jasmine essential oil on viability of cultured mouse lymphocytes （x ʃ s．n =10）珋

讨论

现茉莉花脱脑油和B －Ⅱ均可能促进淋巴细胞生长，对增强免疫活性有一定作用，但本实验中4个不同浓度的脱脑油和B －Ⅱ的结果都不是很明显。这可能有以下主要原因：一是实验鼠的个体差异，从每只鼠的脾脏中提取的淋巴细胞数相差过大；二是实验例数不够，有待今后工作中作进一步的研究。

（致谢：本研究得到广西医科大学病理生理学教研室及化学教研室的大力支持，何薇、伍国俊、刘国萍、陆璐、覃志乾）等提供材料，特此致谢。

［参

考

文

献］

目前已从茉莉花花蕾乙醇提取物的乙酸乙酯和水溶液中分离获得9个化合物，通过波谱分析并与已知化合物的数据对照，分别鉴定为：苄基－O －β－D －葡萄吡喃糖甙、苄基－O －β－D －木吡喃糖基（1→6）－β－D －葡萄吡喃糖、te-traol 、molihuaoside D 、sambacoside A 、sambacoside E 、芦丁（ru-tin ）、山奈酚－3－O －α－L －鼠李吡喃糖基（1→2）［α－L －鼠李吡喃糖基（1→6）］－β－D －半乳吡喃糖甙和槲皮素－3－O －α－L －鼠李吡喃糖基（1→2）［α－L －鼠李吡喃糖基（1

［7］

→6）］－β－D －半乳吡喃糖甙。本实验通过在反应体系

中加入不同浓度茉莉花茶浸出液，并与生理盐水组进行对照发现，直接将茉莉花茶浸出液加入中性粒细胞吞噬细菌的反应体系中，并不能显著影响中性粒细胞吞噬细菌的能力，其吞噬率与对照组差异不显著，均在70%－80%范围左右变动。但对于脾淋巴细胞转化率，茉莉花茶浸出液在较高浓度（原液稀释了1/5和1/10）情况下均可以显著提高脾淋巴细胞转化率，提示茉莉花茶浸出液可以促进PHA 诱导脾淋巴细胞增殖。从免疫学角度分析，中性粒细胞吞噬细菌是机体非特异性免疫，是抵御细菌入侵的第一道防线，而淋巴细胞转细胞免疫是机体抗菌、抗病毒化率是反映细胞免疫的指标，

以及抗肿瘤的重要特异性免疫防御系统，是机体调控免疫反应的中枢部分。本实验发现茉莉花茶浸出液可以直接促进脾淋巴细胞增殖，提示茉莉花茶可以通过调节细胞免疫来提但不能直接促进中性粒细胞吞噬细高机体的免疫防御功能，

菌。因此，对于特异性免疫而言，茉莉花茶中的相关组分有一定调节效应，值得进一步研究。机体正常免疫功能依赖于各种免疫细胞及细胞间的相互作用。其中T 淋巴细胞和B 淋巴细胞又称为免疫活性淋巴细胞，主要定居于脾脏和淋巴结等外周淋巴器官中，是特异性免疫应答的主要细胞。MTT 法可以检测细胞存活和生长，其原理是活细胞内线粒体脱氢酶能将四氮唑化物（MTT ）由黄色还原为蓝色的甲臜（formazan ），后者溶于有机溶剂（如二甲基亚砜、无水乙醇或酸化异丙醇等），产量与活细胞数成正比。通过酶标仪检测吸光度值来判断细胞内线粒体氧化酶活性，亦可间接反映细胞的增殖水平。T 淋巴细胞转化增殖程度可反映药物对细胞免疫功能的影响

［9］

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。茉莉花脱脑油和B －Ⅱ（是用改良快速

低压干柱柱层析法从茉莉花中分离纯化获得的白色粉状结晶化合物）在茉莉花中含量较高，通过体外免疫活性实验发