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《山东医药工业》2003年第二十二卷第1期
提取, 逐一确定其结构, 并修正过去的错误结论。与此同时, 鞣质作为一种药用有效成分也逐渐为人们所认识。迄今为止, 已发现了400多种新的鞣质及多元酚类化合物。
11结构类型 鞣质结构类型可分为三大类:水
22例单纯用西药治疗,4周后进行疗效评估。结果治
疗组总有效率90%, 对照组6812%(P
111腰椎间盘突出症 治疗组35例, 用β-七叶
解鞣质(hydrolyzable tannins ) , 缩合鞣质(condensed
tannins ) 以及综合鞣质与水解鞣质中的葡萄糖以碳键
皂苷钠20mg 加入019%氯化钠注射液500ml 静脉滴注,qd , 治疗期间不用消炎镇痛和营养神经药物,10d 为1个疗程。对照组:腰痛宁5粒,qn , 氯唑沙宗片μg ,im , 012g ,tid , 维生素B 120mg ,tid 。维生素B 12500
qd ,10d 为1个疗程。结果:治疗组效果明显优于对
连接而成的复合鞣质(complex tannins ) 。根据其水解所得的酚酸及多元醇的不同, 分为没食子酸鞣质
(gallictannins ) , 逆没食子酸鞣质(ellagi tannins ) , C —
苷鞣质(C —glycosidic tannins ) 和咖啡鞣质。根据可水解鞣质所含多元醇核(通常是葡萄糖核) 的数目不同, 又可分为可水解鞣质单元体(monomer ) 、二聚体
(dimer ) 、三聚体(trimer ) 和四聚体(tetramer ) 。缩合
照组, 且有效率100%。
121暴泻 暴泻是指突然暴泻如倾, 泻下多水,
频繁而下, 或肠鸣腹痛, 或不鸣不痛的一种病证。123例患者, 用β-七叶皂苷钠注射液25mg 加入019%氯化钠注射液500ml 内静脉滴注,qd , 另外根据病人的失水程度, 及时补充液体及电解质, 有津伤气脱证者, 加用生脉注射液80ml , 稀释于5%葡萄注500ml 中静脉滴注。结果鞣质一般不水解, —醇和羟基黄烷—3—。各单元之间—C O , 故不为, 其理化性质不同, 结构、提取分离方法、鉴别、含量方法也不相同。
21结构测定 在鞣质的结构测定中, 近年来大
1
量使用光谱分析,UV 、IR 、FAB —MS 、CD 、H —NMR 、13X —射线、C —NMR 以及HPLC 等。
及次数转为正常β-, 偶见过敏性休克、全身药疹、急性肾功能衰竭等。因此用药前应询问患者药物过敏史, 以防止或减少严重过敏反应的发生; 用药前后要检查肾功能; 注射时勿使药液漏至血管外, 若已发生, 可用普鲁卡因或透明质酸酶局封。
参考文献(略)
211 缩合鞣质 通过降解缩合的方法可以测定
羟基黄烷醇之间缩合的位置, 这是缩合鞣质中最常用的一种化学测定结构方法。
根据13C —NMR 确定各单元之间的缩合位置及缩合相对构型, 结构化学降解产物的比旋度, 以及1H —NMR 分析得到整个分子的绝对构型。
212 可水解鞣质
21211 化学方法:化学方法是研究可水解鞣质
植物中鞣质类化合物的化学研究
进展
山东中医药大学 闫滨济南市药品检验所 张秋红济南市历城区中医院 刘秀芳
鞣质一词是Seguin 于1796年首次提出的, 仅指槲树皮内的能生成皮革的成分, 并指出鞣质能使明胶沉淀。1981年以来,Haslam 将“植物鞣质”改称为“植
(plantpolyphenols ) 或物多酚”“复杂酚”, 而对药用植
结构的一种必不可少的重要手段, TLC 显色剂往往选用NaNO 2—HAc 试剂喷雾, 逆没食子酸鞣质显示特征颜色。制备甲基衍生物和不同方法的水解也很重要, 尤其是对于含醚键的Valoneoyl 基团(由六羟基联苯基和没食子酰基以醚键结合而成) 、去氢双没食子酰基(DHD G ) 结构的复杂二聚体、三聚体等。
21212 紫外光谱(UV ) ; UV 光谱一般在205～224nm 和261～283nm 范围内显示两个中强的特征
吸收峰。
21213 红外光谱(IR ) :以K Br 压片进行测定
物中鞣质的研究是在1975年以后, 由日本学者奥田拓男(Okuda ) 和西冈五夫(Nishioka ) 首先开始的。随着实验手段的不断提高, 越来越多的鞣质单体被分离
时, 酯羰基出现在1740～1710cm -1范围内。若含有双键共轭的羟基, 在更低波数处出现另外的吸收峰,
《山东医药工业》2003年第二十二卷第1期
如咖啡酰基在1680cm -1处出现吸收峰。羟基一般在
3400cm -1处呈现强峰, 该芳香环一般在1620～1420cm -1范围内出现三个特征吸收峰。这三组峰对
35
据测定水解液的反相HPLC 及分离后对水解物的1H —NMR 谱, 即可判断该HHDP 基团连接于葡萄糖的哪一位置上。为了控制反应进行到某种程度或使反应产物不因时间过长而再度破坏, 可在反应过程中每间隔一定时间取样一次做HPLC 分析, 以确定反应终点。
31提取分离
311 总鞣质的提取:可利用Me 2CO —H 2O (5∶5
于鉴别可水解鞣质及推测新的结构类型很有作用。
21214 质谱(MS ) :快原子轰击质谱(FAB -MS ) 为可水解鞣质的分子量确定提供有效的手段。
21215 核磁共振氢谱(H -NMR ) :H -NMR
1
1
谱配合鞣质酶水解已成为可水解鞣质结构测定的重要工具。主要可以出现芳氢和葡萄糖氢两类质子信号, 一般用200MHz 以上核磁共振仪测定, 多数氢可获得很好的分辨。
21216 核磁共振碳谱(13C -NMR ) :13C -NMR
～7∶3) 作溶剂来提取可水解鞣质。将植物药研碎, 过筛, 用上述溶剂于室温冷浸或渗漉, 将冷浸液减压浓缩至一定程度, 分别用乙醚或氯仿、乙酸乙酯和正丁醇萃取, 乙醚或氯仿可去除亲脂性杂质及色素等, 乙酸乙酯和正丁醇即为含鞣质粗品的提取液。
312 凝胶柱层析:用于可水解鞣质分离的凝胶
谱对逆没食子鞣质的结构论证可以提供更为丰富的情报, 包括多元酚的本质和数量, 如没食子酰基、六羟基联苯基(HHDP ) 、去氢六羟基联苯基(DHHDP )
13等。C -NMR 中糖碳上的化学位移指出糖与没食子
多为葡聚凝胶, L H -20, 。缺点是, 特别对大分子, 不易用有机溶媒从柱上洗脱, 凝胶使用寿命缩短。聚乙烯凝胶Toyopearl HW -40可用碱水再生, 可长期使用。这些凝胶柱进行液相层析或与液滴逆流层析(DCCC ) 配合使用, 可将混合鞣质很好的分离。
313 大孔吸附树脂层析:Piaion HP -20和MCI -gel CHP -20P 经常被用于一些鞣质异构体的分
酰基的连接位置, 关于13C -NMR 的规律有关专门的文章报道。
21217 圆二色谱(CD ) 绝对构型, CD 基团的绝
对构型。
21218 高效液相色谱:高效液相色结合光敏二
极管组检测器, 可识别植物提取物中的鞣质是普通型的还是咖啡酰鞣质, 类黄酮鞣质或其他物质。这一方法对研究各种植物中的鞣质和其他有关的多酚化合物的分布情况特别有效。另外, 高效液相色谱法在判β一断可水解鞣质分子的大小, 判断各组分纯度及α、异构体、鞣质水解发生的位置及进行程度均具有重要意义。
分子大小及基团极性的不同, 可使其正相HPLC 中的保留时间(t R ) 产生显著的正比差异。在同一展开溶媒中, 分子量越大,t R 越大, 因而利用正相HPLC 可初步判断被试样品中各组分的分子大小情况。在对粗鞣质进行凝胶柱层析分离时, 可利用正相或反相
HPLC 对各个流份进行纯度检查。在正相HPLC 中,
离, 它们均用不同比例的MeOH -H 2O 和EtOH -CH 3COCH 3作为洗脱剂。
314 液滴逆流色谱法和离心分离色谱法(CPC ) :DCCC法目前已成为可水解鞣质类化合物分
离中的一种常规必需手段, 常以不同比例的n -BuOH :n-ProH :H 2O 做流动相。优点是不是需要固
体支持剂, 避免因各物质的吸附而造成的鞣质损失, 缺点是展开时间长。
CPC 法是在DCCC 法的基础上发展起来的, 在离
心机内进行的逆流色谱法。展开时间可缩短到DC 2
CC 的1/4或1/5, 溶媒用量少, 对分离低聚的水解鞣
样品呈现为单峰, 而用反相HPLC 展开时呈现双峰, 则可在样品溶液中加入少量NaBH 4, 振摇, 待不产生气泡, 再在同样条件下测反相HPLC , 若原来双峰消失, 产生新的比原来的双峰都稍快的单峰, 则该样品β—为α、异构体; 如不因加入NaBH 4而使葡萄糖还原开环而变化, 则说明该样品为两种成分的混合物。根
质效果特别好。
315 高效液相色谱法:奥用拓男等利用Shi 2madzu -Dupont -LC -1型高效液相色谱仪, 以烃聚
合物为填充剂进行反相高效液相层析, 对从日本天然药G eranium thunbergii 中分离出来的 牛儿素
(G eraniin ) 和从野梧桐(Mallottus japonicus ) 中分离出
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《山东医药工业》2003年第二十二卷第1期
淀的原理, 对剩余量滴定。先使鞣质与标准醋锌中的
Zn 2+生成络合物沉淀, 用铬黑T 作指示剂, 用EDTA -Na 2滴定剩余的醋酸锌, 测得的鞣质含量与药典法
来的mallotusinic acid , mallotinic acid 及诃子(termina 2
lia chebula ) 鞣质myrobalans 进行研究, 结果表明, 当
用100cmx719cm 1I 1D 柱、烯聚合物(Z ipax Hcp ) 为填充剂和移动相015M KH 2PO 4(1L ) -EtOH (10ml ) -EtOAc (1ml ) 时, 尽管鞣质酸和没食子酸被溶剂峰掩
相近, 因此认为该法测定的为某一生药中所含的总鞣质量。有人对吕氏络合量法中的提取部分进行了改进, 以50%丙酮直接振摇浸提取代水蒸汽提取方法, 使过滤容易, 操作更加简便快速。
415 高锰酸钾法:采用高锰酸钾滴定液滴定, 用
盖, 所研究的各种逆没食子酸和六羟基联苯二甲酸均得到互相分离。
316 鞣质去除方法:在中药的提取过程中, 鞣质
常被作为杂质而除去, 除鞣方法归纳起来有7种:碱性醇沉、透析、酸沉、石灰硫酸沉淀、铅盐沉淀、聚酰胺吸附、明胶沉淀及氧化镁吸附法。胡冠时在明胶沉淀法的基础上改进的在明胶中加入甲醛, 使明胶分子的游离氨基和甲醛分子交联, 空间结构也相应改变, 直链产生旋转、折叠, 生成变性明胶, 不溶于水, 可选择性的与鞣质结合。为使变性明胶有足够多的表面积, 并采了微球化工艺, 制定固相多孔微球, 提高了除鞣效率。另外, 李俊等采用先明胶、后硅藻土的处理方法也获得良好的除杂效果。
41含量测定 空白实验校正, 计算测得。方法简便易行, 测定鞣质的含量与皮粉法相似, 测定得到总鞣质量, 但误差较大。
416 酒石酸铁法:根据酒石酸铁能与多酚类化
合物生成紫色络合物的特征, 而络合物的量与颜色深浅性关系。采用酒石酸铁法来测定小儿止泻冲剂中鞣质含量。该法简单易行, , 比较接, 。
Folin 试
3, 获得较好的线性关系, 有人利用紫外分光光度法测定了五倍子、诃子、儿茶和大黄4种有代表性的中药。结果表明,4种药材所含鞣质的得到结果与皮粉法和络合量法的结果相近, 可见紫外分光光度法直接用于中药鞣质含量的测定是完全适用的。
418 高效液相色谱法:近年来随着技术水平的
很多, 411 :
, 所用供试品量少而能在短时间内完成。对这一方法的改进是用了亚甲蓝作为比色的底物以代替溶血后的血红蛋白。
412 药典法:即皮粉重量法, 通过对总水溶性部
提高, 高效液相色谱法在中药研究中的应用越来越广泛。由于它系统误差小, 样品用量少, 重现性好, 在含量测定中具有重要地位。
有人利用RP —HPLC 法首次测定了茶叶70%丙酮提取物及一种抗癌有效成分在分离过程中各个组成的含量, 用峰面积或高度通过标准曲线求得。采用
RP —HPLC 法测定了诃子中3种主要可水解鞣质的
分, 不与皮粉结合的水溶性部分以及水溶性部分的测定, 计算而得。皮粉无选择性, 其测定结果偏高很多, 与疗效之间无任何关系。只适用于测定鞣质含量高的生药(>50%) , 且此法分析周期较长, 温度对鞣质含量的影响很大。另外还有磷钨酸一皮粉比色法
(PTAHP 法) , 欧洲药典正文Ratanhiac Radix 项下及
英国药典(1998) Rhatany Root 项下收载。
413 干酪素法:1976年Scheiderg 提出了干酪素
含量, 方法简便, 重现性好。该法可以经过一般提取处理直接用于植物材料中各种鞣质的含量测定。
参考文献(略)
法, 罗文毓等报道了改良干酪素法, 认为其特点在干酪素能选择性地结合有生理活性的鞣质, 因此测出的是有疗效的鞣质, 而无疗效的鞣质如鞣酐等则不被测定。改良干酪素法采用室温提取过夜的方法, 在p H5的缓冲溶液中进行, 接近蛋白质的等电点, 可使反应进行的更为完全。
414 络合量法:吕湘林等采用络合量法测定植
全蝎抗肿瘤药理研究进展
山东鲁宁监狱生活卫生科 张敏山东中医药大学 张永清
全蝎为钳蝎科动物东亚钳蝎Buthus martensii
物鞣质含量。根据鞣质与金属离子能生成络合物沉
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提取, 逐一确定其结构, 并修正过去的错误结论。与此同时, 鞣质作为一种药用有效成分也逐渐为人们所认识。迄今为止, 已发现了400多种新的鞣质及多元酚类化合物。
11结构类型 鞣质结构类型可分为三大类:水
22例单纯用西药治疗,4周后进行疗效评估。结果治
疗组总有效率90%, 对照组6812%(P
111腰椎间盘突出症 治疗组35例, 用β-七叶
解鞣质(hydrolyzable tannins ) , 缩合鞣质(condensed
tannins ) 以及综合鞣质与水解鞣质中的葡萄糖以碳键
皂苷钠20mg 加入019%氯化钠注射液500ml 静脉滴注,qd , 治疗期间不用消炎镇痛和营养神经药物,10d 为1个疗程。对照组:腰痛宁5粒,qn , 氯唑沙宗片μg ,im , 012g ,tid , 维生素B 120mg ,tid 。维生素B 12500
qd ,10d 为1个疗程。结果:治疗组效果明显优于对
连接而成的复合鞣质(complex tannins ) 。根据其水解所得的酚酸及多元醇的不同, 分为没食子酸鞣质
(gallictannins ) , 逆没食子酸鞣质(ellagi tannins ) , C —
苷鞣质(C —glycosidic tannins ) 和咖啡鞣质。根据可水解鞣质所含多元醇核(通常是葡萄糖核) 的数目不同, 又可分为可水解鞣质单元体(monomer ) 、二聚体
(dimer ) 、三聚体(trimer ) 和四聚体(tetramer ) 。缩合
照组, 且有效率100%。
121暴泻 暴泻是指突然暴泻如倾, 泻下多水,
频繁而下, 或肠鸣腹痛, 或不鸣不痛的一种病证。123例患者, 用β-七叶皂苷钠注射液25mg 加入019%氯化钠注射液500ml 内静脉滴注,qd , 另外根据病人的失水程度, 及时补充液体及电解质, 有津伤气脱证者, 加用生脉注射液80ml , 稀释于5%葡萄注500ml 中静脉滴注。结果鞣质一般不水解, —醇和羟基黄烷—3—。各单元之间—C O , 故不为, 其理化性质不同, 结构、提取分离方法、鉴别、含量方法也不相同。
21结构测定 在鞣质的结构测定中, 近年来大
1
量使用光谱分析,UV 、IR 、FAB —MS 、CD 、H —NMR 、13X —射线、C —NMR 以及HPLC 等。
及次数转为正常β-, 偶见过敏性休克、全身药疹、急性肾功能衰竭等。因此用药前应询问患者药物过敏史, 以防止或减少严重过敏反应的发生; 用药前后要检查肾功能; 注射时勿使药液漏至血管外, 若已发生, 可用普鲁卡因或透明质酸酶局封。
参考文献(略)
211 缩合鞣质 通过降解缩合的方法可以测定
羟基黄烷醇之间缩合的位置, 这是缩合鞣质中最常用的一种化学测定结构方法。
根据13C —NMR 确定各单元之间的缩合位置及缩合相对构型, 结构化学降解产物的比旋度, 以及1H —NMR 分析得到整个分子的绝对构型。
212 可水解鞣质
21211 化学方法:化学方法是研究可水解鞣质
植物中鞣质类化合物的化学研究
进展
山东中医药大学 闫滨济南市药品检验所 张秋红济南市历城区中医院 刘秀芳
鞣质一词是Seguin 于1796年首次提出的, 仅指槲树皮内的能生成皮革的成分, 并指出鞣质能使明胶沉淀。1981年以来,Haslam 将“植物鞣质”改称为“植
(plantpolyphenols ) 或物多酚”“复杂酚”, 而对药用植
结构的一种必不可少的重要手段, TLC 显色剂往往选用NaNO 2—HAc 试剂喷雾, 逆没食子酸鞣质显示特征颜色。制备甲基衍生物和不同方法的水解也很重要, 尤其是对于含醚键的Valoneoyl 基团(由六羟基联苯基和没食子酰基以醚键结合而成) 、去氢双没食子酰基(DHD G ) 结构的复杂二聚体、三聚体等。
21212 紫外光谱(UV ) ; UV 光谱一般在205～224nm 和261～283nm 范围内显示两个中强的特征
吸收峰。
21213 红外光谱(IR ) :以K Br 压片进行测定
物中鞣质的研究是在1975年以后, 由日本学者奥田拓男(Okuda ) 和西冈五夫(Nishioka ) 首先开始的。随着实验手段的不断提高, 越来越多的鞣质单体被分离
时, 酯羰基出现在1740～1710cm -1范围内。若含有双键共轭的羟基, 在更低波数处出现另外的吸收峰,
《山东医药工业》2003年第二十二卷第1期
如咖啡酰基在1680cm -1处出现吸收峰。羟基一般在
3400cm -1处呈现强峰, 该芳香环一般在1620～1420cm -1范围内出现三个特征吸收峰。这三组峰对
35
据测定水解液的反相HPLC 及分离后对水解物的1H —NMR 谱, 即可判断该HHDP 基团连接于葡萄糖的哪一位置上。为了控制反应进行到某种程度或使反应产物不因时间过长而再度破坏, 可在反应过程中每间隔一定时间取样一次做HPLC 分析, 以确定反应终点。
31提取分离
311 总鞣质的提取:可利用Me 2CO —H 2O (5∶5
于鉴别可水解鞣质及推测新的结构类型很有作用。
21214 质谱(MS ) :快原子轰击质谱(FAB -MS ) 为可水解鞣质的分子量确定提供有效的手段。
21215 核磁共振氢谱(H -NMR ) :H -NMR
1
1
谱配合鞣质酶水解已成为可水解鞣质结构测定的重要工具。主要可以出现芳氢和葡萄糖氢两类质子信号, 一般用200MHz 以上核磁共振仪测定, 多数氢可获得很好的分辨。
21216 核磁共振碳谱(13C -NMR ) :13C -NMR
～7∶3) 作溶剂来提取可水解鞣质。将植物药研碎, 过筛, 用上述溶剂于室温冷浸或渗漉, 将冷浸液减压浓缩至一定程度, 分别用乙醚或氯仿、乙酸乙酯和正丁醇萃取, 乙醚或氯仿可去除亲脂性杂质及色素等, 乙酸乙酯和正丁醇即为含鞣质粗品的提取液。
312 凝胶柱层析:用于可水解鞣质分离的凝胶
谱对逆没食子鞣质的结构论证可以提供更为丰富的情报, 包括多元酚的本质和数量, 如没食子酰基、六羟基联苯基(HHDP ) 、去氢六羟基联苯基(DHHDP )
13等。C -NMR 中糖碳上的化学位移指出糖与没食子
多为葡聚凝胶, L H -20, 。缺点是, 特别对大分子, 不易用有机溶媒从柱上洗脱, 凝胶使用寿命缩短。聚乙烯凝胶Toyopearl HW -40可用碱水再生, 可长期使用。这些凝胶柱进行液相层析或与液滴逆流层析(DCCC ) 配合使用, 可将混合鞣质很好的分离。
313 大孔吸附树脂层析:Piaion HP -20和MCI -gel CHP -20P 经常被用于一些鞣质异构体的分
酰基的连接位置, 关于13C -NMR 的规律有关专门的文章报道。
21217 圆二色谱(CD ) 绝对构型, CD 基团的绝
对构型。
21218 高效液相色谱:高效液相色结合光敏二
极管组检测器, 可识别植物提取物中的鞣质是普通型的还是咖啡酰鞣质, 类黄酮鞣质或其他物质。这一方法对研究各种植物中的鞣质和其他有关的多酚化合物的分布情况特别有效。另外, 高效液相色谱法在判β一断可水解鞣质分子的大小, 判断各组分纯度及α、异构体、鞣质水解发生的位置及进行程度均具有重要意义。
分子大小及基团极性的不同, 可使其正相HPLC 中的保留时间(t R ) 产生显著的正比差异。在同一展开溶媒中, 分子量越大,t R 越大, 因而利用正相HPLC 可初步判断被试样品中各组分的分子大小情况。在对粗鞣质进行凝胶柱层析分离时, 可利用正相或反相
HPLC 对各个流份进行纯度检查。在正相HPLC 中,
离, 它们均用不同比例的MeOH -H 2O 和EtOH -CH 3COCH 3作为洗脱剂。
314 液滴逆流色谱法和离心分离色谱法(CPC ) :DCCC法目前已成为可水解鞣质类化合物分
离中的一种常规必需手段, 常以不同比例的n -BuOH :n-ProH :H 2O 做流动相。优点是不是需要固
体支持剂, 避免因各物质的吸附而造成的鞣质损失, 缺点是展开时间长。
CPC 法是在DCCC 法的基础上发展起来的, 在离
心机内进行的逆流色谱法。展开时间可缩短到DC 2
CC 的1/4或1/5, 溶媒用量少, 对分离低聚的水解鞣
样品呈现为单峰, 而用反相HPLC 展开时呈现双峰, 则可在样品溶液中加入少量NaBH 4, 振摇, 待不产生气泡, 再在同样条件下测反相HPLC , 若原来双峰消失, 产生新的比原来的双峰都稍快的单峰, 则该样品β—为α、异构体; 如不因加入NaBH 4而使葡萄糖还原开环而变化, 则说明该样品为两种成分的混合物。根
质效果特别好。
315 高效液相色谱法:奥用拓男等利用Shi 2madzu -Dupont -LC -1型高效液相色谱仪, 以烃聚
合物为填充剂进行反相高效液相层析, 对从日本天然药G eranium thunbergii 中分离出来的 牛儿素
(G eraniin ) 和从野梧桐(Mallottus japonicus ) 中分离出
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《山东医药工业》2003年第二十二卷第1期
淀的原理, 对剩余量滴定。先使鞣质与标准醋锌中的
Zn 2+生成络合物沉淀, 用铬黑T 作指示剂, 用EDTA -Na 2滴定剩余的醋酸锌, 测得的鞣质含量与药典法
来的mallotusinic acid , mallotinic acid 及诃子(termina 2
lia chebula ) 鞣质myrobalans 进行研究, 结果表明, 当
用100cmx719cm 1I 1D 柱、烯聚合物(Z ipax Hcp ) 为填充剂和移动相015M KH 2PO 4(1L ) -EtOH (10ml ) -EtOAc (1ml ) 时, 尽管鞣质酸和没食子酸被溶剂峰掩
相近, 因此认为该法测定的为某一生药中所含的总鞣质量。有人对吕氏络合量法中的提取部分进行了改进, 以50%丙酮直接振摇浸提取代水蒸汽提取方法, 使过滤容易, 操作更加简便快速。
415 高锰酸钾法:采用高锰酸钾滴定液滴定, 用
盖, 所研究的各种逆没食子酸和六羟基联苯二甲酸均得到互相分离。
316 鞣质去除方法:在中药的提取过程中, 鞣质
常被作为杂质而除去, 除鞣方法归纳起来有7种:碱性醇沉、透析、酸沉、石灰硫酸沉淀、铅盐沉淀、聚酰胺吸附、明胶沉淀及氧化镁吸附法。胡冠时在明胶沉淀法的基础上改进的在明胶中加入甲醛, 使明胶分子的游离氨基和甲醛分子交联, 空间结构也相应改变, 直链产生旋转、折叠, 生成变性明胶, 不溶于水, 可选择性的与鞣质结合。为使变性明胶有足够多的表面积, 并采了微球化工艺, 制定固相多孔微球, 提高了除鞣效率。另外, 李俊等采用先明胶、后硅藻土的处理方法也获得良好的除杂效果。
41含量测定 空白实验校正, 计算测得。方法简便易行, 测定鞣质的含量与皮粉法相似, 测定得到总鞣质量, 但误差较大。
416 酒石酸铁法:根据酒石酸铁能与多酚类化
合物生成紫色络合物的特征, 而络合物的量与颜色深浅性关系。采用酒石酸铁法来测定小儿止泻冲剂中鞣质含量。该法简单易行, , 比较接, 。
Folin 试
3, 获得较好的线性关系, 有人利用紫外分光光度法测定了五倍子、诃子、儿茶和大黄4种有代表性的中药。结果表明,4种药材所含鞣质的得到结果与皮粉法和络合量法的结果相近, 可见紫外分光光度法直接用于中药鞣质含量的测定是完全适用的。
418 高效液相色谱法:近年来随着技术水平的
很多, 411 :
, 所用供试品量少而能在短时间内完成。对这一方法的改进是用了亚甲蓝作为比色的底物以代替溶血后的血红蛋白。
412 药典法:即皮粉重量法, 通过对总水溶性部
提高, 高效液相色谱法在中药研究中的应用越来越广泛。由于它系统误差小, 样品用量少, 重现性好, 在含量测定中具有重要地位。
有人利用RP —HPLC 法首次测定了茶叶70%丙酮提取物及一种抗癌有效成分在分离过程中各个组成的含量, 用峰面积或高度通过标准曲线求得。采用
RP —HPLC 法测定了诃子中3种主要可水解鞣质的
分, 不与皮粉结合的水溶性部分以及水溶性部分的测定, 计算而得。皮粉无选择性, 其测定结果偏高很多, 与疗效之间无任何关系。只适用于测定鞣质含量高的生药(>50%) , 且此法分析周期较长, 温度对鞣质含量的影响很大。另外还有磷钨酸一皮粉比色法
(PTAHP 法) , 欧洲药典正文Ratanhiac Radix 项下及
英国药典(1998) Rhatany Root 项下收载。
413 干酪素法:1976年Scheiderg 提出了干酪素
含量, 方法简便, 重现性好。该法可以经过一般提取处理直接用于植物材料中各种鞣质的含量测定。
参考文献(略)
法, 罗文毓等报道了改良干酪素法, 认为其特点在干酪素能选择性地结合有生理活性的鞣质, 因此测出的是有疗效的鞣质, 而无疗效的鞣质如鞣酐等则不被测定。改良干酪素法采用室温提取过夜的方法, 在p H5的缓冲溶液中进行, 接近蛋白质的等电点, 可使反应进行的更为完全。
414 络合量法:吕湘林等采用络合量法测定植
全蝎抗肿瘤药理研究进展
山东鲁宁监狱生活卫生科 张敏山东中医药大学 张永清
全蝎为钳蝎科动物东亚钳蝎Buthus martensii
物鞣质含量。根据鞣质与金属离子能生成络合物沉