动物细胞融合
【实验原理】
在诱导物（如仙台病毒，聚乙二醇）作用下，相互靠近的细胞发生凝集，随后在质膜接触处发生质膜成份的一系列变化，主要是某些化学键的断裂与重排，进而细胞质沟通，形成一个大的双核或多核细胞（此时称同核体或异核体）。
【实验目的】
1．了解PEG 诱导细胞融合的基本原理。
2．通过PEG 诱导鸡红细胞之间的融合实验，初步掌握细胞融合技术。
【仪器、材料及试剂】
1．仪器：显微镜 离心机 天平 离心管 注射器 细滴管 载片、盖片。
2．材料：一龄公鸡静脉血
3．试剂：Alsever 溶液、GKN 溶液、0.85%生理盐水、50%PEG溶液、双蒸水。
附试剂的配配制：
①Alsever 溶液：葡萄糖 2.05g ，柠檬酸钠0.80g ，NaCl 0.42g，溶于100ml 双蒸水中。 ②GKN 溶液：NaCl 8g，KCl 0.4g，Na2HPO4·2H2O 1.77g，NaH2PO4.H2O 0.69g，葡萄糖 2g ，酚红 0.01g ，溶于1000ml 双蒸水中。
③0.85%生理盐水
④50%PEG溶液：称取一定量的PEG （WM=4000）放入烧杯中，沸水浴加热，使之熔化，待冷却至50℃时，加入等体积预热至50℃的GKN 溶液，混匀，置37℃备用。
【操作步骤】
1．在公鸡翼下静脉抽取2 ml鸡血，加入盛有8 ml的Alsver 液中，使血液与Alsver 液的比例达1：4，混均后可在冰箱中存放一周。
2．取此贮存鸡血1ml 加入4ml 0.85%生理盐水，充分混均，800rpm 离心3min ，弃去上清，重复上述条件离心两次。最后弃去上清，加GKN 液4ml ，离去。
3．弃去上清，加GKN 液，制成10%细胞悬液。
4．取上述细胞悬液以血球计数器计数，用GKN 液将其调整为1×106个/ ml。
5．取以上细胞悬液1 ml于离心管，放入37℃水浴中预热。同时将50%PEG液一并预热20min 。
6．20min 后将0.5ml 50%PEG溶液逐滴沿离心管壁加入到1 ml细胞悬液中，边加边摇匀，然后放入37℃水浴中保温20min 。
7．20 min后，加入GKN 溶液至8ml ，静止于水浴中20 min左右。
8．800rpm 离心3min ，弃去上清，加GKN 溶液再离心1次。
9．弃去上清，加入GKN 液少许，混均，取少量悬浮于载玻片上，加入Janus green染液，用牙签混均，3min 盖上盖玻片，观察细胞融合情况。
10．计算融合率，融合率=视野内发生融合的细胞核总数/视野内所有细胞核总数×100%。
【实验报告】
1．简述动物细胞融合的基本过程；
2．选一理想视野，根据镜下结果绘图，并以上面公式计算融合率。
动物细胞融合
【实验原理】
在诱导物（如仙台病毒，聚乙二醇）作用下，相互靠近的细胞发生凝集，随后在质膜接触处发生质膜成份的一系列变化，主要是某些化学键的断裂与重排，进而细胞质沟通，形成一个大的双核或多核细胞（此时称同核体或异核体）。
【实验目的】
1．了解PEG 诱导细胞融合的基本原理。
2．通过PEG 诱导鸡红细胞之间的融合实验，初步掌握细胞融合技术。
【仪器、材料及试剂】
1．仪器：显微镜 离心机 天平 离心管 注射器 细滴管 载片、盖片。
2．材料：一龄公鸡静脉血
3．试剂：Alsever 溶液、GKN 溶液、0.85%生理盐水、50%PEG溶液、双蒸水。
附试剂的配配制：
①Alsever 溶液：葡萄糖 2.05g ，柠檬酸钠0.80g ，NaCl 0.42g，溶于100ml 双蒸水中。 ②GKN 溶液：NaCl 8g，KCl 0.4g，Na2HPO4·2H2O 1.77g，NaH2PO4.H2O 0.69g，葡萄糖 2g ，酚红 0.01g ，溶于1000ml 双蒸水中。
③0.85%生理盐水
④50%PEG溶液：称取一定量的PEG （WM=4000）放入烧杯中，沸水浴加热，使之熔化，待冷却至50℃时，加入等体积预热至50℃的GKN 溶液，混匀，置37℃备用。
【操作步骤】
1．在公鸡翼下静脉抽取2 ml鸡血，加入盛有8 ml的Alsver 液中，使血液与Alsver 液的比例达1：4，混均后可在冰箱中存放一周。
2．取此贮存鸡血1ml 加入4ml 0.85%生理盐水，充分混均，800rpm 离心3min ，弃去上清，重复上述条件离心两次。最后弃去上清，加GKN 液4ml ，离去。
3．弃去上清，加GKN 液，制成10%细胞悬液。
4．取上述细胞悬液以血球计数器计数，用GKN 液将其调整为1×106个/ ml。
5．取以上细胞悬液1 ml于离心管，放入37℃水浴中预热。同时将50%PEG液一并预热20min 。
6．20min 后将0.5ml 50%PEG溶液逐滴沿离心管壁加入到1 ml细胞悬液中，边加边摇匀，然后放入37℃水浴中保温20min 。
7．20 min后，加入GKN 溶液至8ml ，静止于水浴中20 min左右。
8．800rpm 离心3min ，弃去上清，加GKN 溶液再离心1次。
9．弃去上清，加入GKN 液少许，混均，取少量悬浮于载玻片上，加入Janus green染液，用牙签混均，3min 盖上盖玻片，观察细胞融合情况。
10．计算融合率，融合率=视野内发生融合的细胞核总数/视野内所有细胞核总数×100%。
【实验报告】
1．简述动物细胞融合的基本过程；
2．选一理想视野，根据镜下结果绘图，并以上面公式计算融合率。