第ｌ９卷．第４期
２ｏｏ光谱实验室Ｃｈｉ饨ｅ靶Ｊ锄ｍｄ主ｏ｝ｓ扯ｃｔｒｏｓｃｏ争，Ｉ抽０ｒｍｏｒ了ＶｏｌＮｏ．４００２年７月Ｊｕｌｙ２
快速测定植物叶片叶绿素含量方法的探讨
杨敏文①
（台州职业技术学院医学院浙Ⅱ省台州市高等教育园区３１８０００）
摘要
本文应用分光光度珐研究了３种提取溶剂对测定植物叶片叶绿素台量的影响，结果表明．用不同提
取溶剂提取叶绿素，提取液吸收光谱相似．其中丙酮一乙醇提取法速度快。叶绿素得率高、稳定性好．精密
度高．并提出了一种快速测定叶绿素含量的方法．
关键词叶绿素含量．测定，方法．叶片．
中图分类号：０６５７．３２文献标识码：Ａ文章编号：１００４—８１３８（２００２）０４－０４７８一０４
１前言
植物叶片叶绿紊含量与光合速率、营养状况等密切相关，实践上通常测定叶绿素含量以表征植
物生长状况，也往往把叶色变化作为看苗诊断和肥水管理的重要指标。叶绿素含量测定方法主要有分光光度法和活体叶绿素仪法两大类［“，最近又发展了光声光谱法“］。其中，应用最为广泛的是分光光度法。用得较多的是由Ｍａｃｋｉｎｎｅｙ“提出经Ａｒｎｏｎ…解释和推导的Ａｒｎｏｎ法以及８０年代初提出的乙醇提取法［“，本试验提出另一种提取溶剂——丙酮一乙醇混合法提取叶绿紊，以常规的Ａｍｏｎ法（提取溶剂为８０％丙酮）和乙醇提取法作对比，就３种提取液对测定植物叶片叶绿素台量的影响进行了研究比较，并提出了一种快速测定叶绿素含量的方法。
２实验部分
２．１仪器与试剂
ｕｖ２４０１Ｐｃ型紫外可见分光光度计（日本岛津，狭缝宽度ｏ．２ｎｍ，吸光池厚１ｃｍ），ＦｓＨ一Ⅱ高速
电动匀浆器（金坛望华科教仪器厂），ＦＡｌ００４Ａ型电子天平（上海精天电子仪器厂）。
将珊瑚树嫩叶用双蒸水洗净，吸水纸吸千表面水分，作为试验材料。叶绿素提取溶剂为：９５％丙
酮一乙醇（用体积比为２：１的丙酮一无水乙醇混合液配成９５％的水溶液，下同）、９５“乙醇和８０％丙酮，均为分析纯。
２．２实验方法
叶绿素的提取；将材料去脉剪碎（约ｌ一２ｍｍ见方），随机取样，准确称重取ｏ．５９（精确到
ｏ．１ｍｇ），放入５０ｍＬ比色管中，分别加入上述三种提取液２５ｍＬ；另称ｏ．５９样品，加６ｍＬ双蒸水和少量ｃａｃｏ。，匀浆，定容至２５ｍＬ，过滤，取２．ｚ５ｍＬ滤液放人５０ｍＬ比色管中，加ｚ３．７５ｍＩ。丙酮一乙①联系八．电话；（ｏｓ７６）５１５７１３Ｂ
作者简舟，橱敏文ｎ９６５一），女．浙扛省台州市人，高级讲师，华东师范大学２∞１年在职教育碰士，从事『七学教学与研究
收稿日期ｔ２００２一ｏｌ—ｏｌ－
第ｉ朝杨敏文：快速删定植物叶片叶绿素台量方珐的探讨
醇【２：１），使之成为９ｊ％丙酮一乙醇匀桨提取液。比色管加塞放置于２５ｃ生化培养箱内暗中提取叶
绿素。每种提取方法重复３次。
叶绿素提取液吸收光谱的测定：用分光光度计在６００一７００ｎｍ范围内对不同叶绿素提取液进
行扫描，波长精度为ｏ．２ｎｍ。
叶绿素含量测定：分别以提取溶剂作空白，测定叶绿素提取液吸光度“。。，１。。利用Ａｒｎ。ｎ公
式：
叶绿素Ⅱ浓度（ｍｇ／Ｉ。）：Ｃ一１２．７Ａｍ一２．６９ＡⅢ；
叶绿素６浓度（ｍｇ／Ｌ）：已一２ｚ．９—６。５—４，６８Ａ６６３；
叶绿素总浓度（ｍｇ／Ｌ）：ｃ。。一Ｃ＋（ｊ。
计算提取液中叶绿素浓度，换算为每克鲜叶叶绿素含量（ｍｇ／ｇ鲜重）。
３结果与讨论
３．１叶绿素提取液的吸收光谱
４种叶绿素提取液的吸收光谱在６００一
７００ｎｍ范围内基本相似（图１），说明４种叶绿
素提取液的光吸收性质基本相似，可以用
Ａｒｎｏｎ公式进行叶绿素含量的计算。
３．２不同提取溶荆对叶绿素提取总量的影响
不同提取溶剂对叶绿素提取总量有着明显
的ｇ；响（表１】，９５％丙酮一乙醇提取的叶绿素总
量最高，高于传统的８０％丙酮提取法２９．５％，被长』ｍｍ
９５％乙醇提取的叶绿素总量亦比８０％丙酮法
高９．５％。９５％丙酮乙醇提取叶片匀浆的叶绿图ｌ珊瑚树叶片叶绿素在不同提取液中的吸收觅洁
索电量与提取叶片碎片的叶绿素总量没有显著３—８０“丙酮；４ｊ＿一９５“酉酮一乙醇；？一％“乙醇；
９５蟛丙酮乙醇（匀浆１。
差异。
３．３不同提取溶剂提取叶绿素的进程
不同提取溶剂提取叶绿素速度差异较大，提取完全程度也不同（表１）。提取速度最快的是９ｊ％
丙酮乙醇，叶绿素经过８ｈ已经基本提取完全，叶片碎片变白；其次是９５％乙醇，而８０％丙酮提取
速度最慢，后两者在２４ｈ内没有完全提取出叶绿素。从提取速度来看．９５％丙酮一乙醇要优于９５％
乙醇和８０％丙酮。叶片匀浆后用９５％丙酮一乙醇在ｏ．５ｈ就已经提取完全，大大加快了叶绿素提取
速度。
表１不同提取溶剂提取叶绿素的进程和叶绿泵总量。ｐ括号内的数据为叶绿素相对含量．
光谱实验室第ｌ９卷
３．４不同提取液中叶绿素的稳定性
用不同提取溶剂提取珊瑚树叶片叶绿素，在２５ｃ生化培养箱中暗中放置ｏ、３、６天后测定提取
液中叶绿素含量，结果见表２。叶绿素提取液放置６天后，叶绿素ｎＴ降了ｊ．８％一１１．９％，叶绿素＾下降了２．７％一７．４％，叶绿素总量下降了４．９％一ｌｏ．ｊ％。这些都说明，在这些提取液中，叶绿素６比叶绿素ｎ稳定。叶绿素提取液中叶绿紊ｎ、叶绿素６的含量、稳定性与提取材料、提取液性质和提取液含水量有关“…。为了提高叶绿素提取液的稳定性．可通过降低提取液中的含水量来实现。但若昕用的材料是干粉，提取液中最好含有适量的水分，使叶绿素分子中亲水的基因易与蛋白质分离．利于叶绿素从类囊体膜中游离出来。有些学者曾采用比传统丙酮法含水量更低的丙酮提取液提取鲜叶叶绿素，效果较好”’…。本试验结果表明，叶绿素在不同提取液中稳定性的大小依次为：９ｊ％丙酮乙醇＞９５％乙醇＞８０％丙酮。
表２不同提取液中叶绿素的稳定性。
放西天数（ｍｇ／ｇ鲜重）８０％两酮叶绿素
。９５“丙酮乙醇９５“乙醇
。
ｍ
。８＂７ｉ
。３∞５
ｊ卅
。
。ｍ
、ｌ括号内的数据为叶绿素相对含量。”¨”
３．５精密度实验
９５％丙酮一乙醇提取效果好，提取速
度快，具有较高的精密度（表３）。
４表３不同提取方法的精密度“结论
分光光度法测定植物叶片叶绿素含
①５次重复量．由于所用提取溶剂不同，测定结果差
异显著。一种好的提取溶剂应该提取速度快，叶绿素得率高。稳定性好，测定结果精密度高．吸收光谱与传统丙酮法一致，能用Ａｒｎｏｎ公式计算叶绿素含量。本试验结果表明，９５％丙酮一乙醇法具有上述特点，是～种较好的叶绿素提取溶剂，而传统的８０％丙酮法和９５％乙醇法提取叶绿素速度慢，提取不完全，应慎用。叶片经匀浆后再用丙酮一乙醇提取，叶绿素得率与叶片浸泡法伯似，但大大提高了提取速度，这对于快速测定大量样品叶绿紊含量具有实际意义。
杨敏文ｚ快速测定植物叶片叶绿素含量方法的探’对————————————————————————————————————————————————————————————————————————————————————————４８１第４期
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快速测定植物叶片叶绿素含量方法的探讨
作者：
作者单位：
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英文刊名：
年，卷(期)：
被引用次数：杨敏文台州职业技术学院医学院,浙江省台州市高等教育园区,318000光谱实验室CHINESE JOURNAL OF SPECTROSCOPY LABORATORY2002,19(4)84次
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本文链接：http://d.g.wanfangdata.com.cn/Periodical_gpsys200204015.aspx
第ｌ９卷．第４期
２ｏｏ光谱实验室Ｃｈｉ饨ｅ靶Ｊ锄ｍｄ主ｏ｝ｓ扯ｃｔｒｏｓｃｏ争，Ｉ抽０ｒｍｏｒ了ＶｏｌＮｏ．４００２年７月Ｊｕｌｙ２
快速测定植物叶片叶绿素含量方法的探讨
杨敏文①
（台州职业技术学院医学院浙Ⅱ省台州市高等教育园区３１８０００）
摘要
本文应用分光光度珐研究了３种提取溶剂对测定植物叶片叶绿素台量的影响，结果表明．用不同提
取溶剂提取叶绿素，提取液吸收光谱相似．其中丙酮一乙醇提取法速度快。叶绿素得率高、稳定性好．精密
度高．并提出了一种快速测定叶绿素含量的方法．
关键词叶绿素含量．测定，方法．叶片．
中图分类号：０６５７．３２文献标识码：Ａ文章编号：１００４—８１３８（２００２）０４－０４７８一０４
１前言
植物叶片叶绿紊含量与光合速率、营养状况等密切相关，实践上通常测定叶绿素含量以表征植
物生长状况，也往往把叶色变化作为看苗诊断和肥水管理的重要指标。叶绿素含量测定方法主要有分光光度法和活体叶绿素仪法两大类［“，最近又发展了光声光谱法“］。其中，应用最为广泛的是分光光度法。用得较多的是由Ｍａｃｋｉｎｎｅｙ“提出经Ａｒｎｏｎ…解释和推导的Ａｒｎｏｎ法以及８０年代初提出的乙醇提取法［“，本试验提出另一种提取溶剂——丙酮一乙醇混合法提取叶绿紊，以常规的Ａｍｏｎ法（提取溶剂为８０％丙酮）和乙醇提取法作对比，就３种提取液对测定植物叶片叶绿素台量的影响进行了研究比较，并提出了一种快速测定叶绿素含量的方法。
２实验部分
２．１仪器与试剂
ｕｖ２４０１Ｐｃ型紫外可见分光光度计（日本岛津，狭缝宽度ｏ．２ｎｍ，吸光池厚１ｃｍ），ＦｓＨ一Ⅱ高速
电动匀浆器（金坛望华科教仪器厂），ＦＡｌ００４Ａ型电子天平（上海精天电子仪器厂）。
将珊瑚树嫩叶用双蒸水洗净，吸水纸吸千表面水分，作为试验材料。叶绿素提取溶剂为：９５％丙
酮一乙醇（用体积比为２：１的丙酮一无水乙醇混合液配成９５％的水溶液，下同）、９５“乙醇和８０％丙酮，均为分析纯。
２．２实验方法
叶绿素的提取；将材料去脉剪碎（约ｌ一２ｍｍ见方），随机取样，准确称重取ｏ．５９（精确到
ｏ．１ｍｇ），放入５０ｍＬ比色管中，分别加入上述三种提取液２５ｍＬ；另称ｏ．５９样品，加６ｍＬ双蒸水和少量ｃａｃｏ。，匀浆，定容至２５ｍＬ，过滤，取２．ｚ５ｍＬ滤液放人５０ｍＬ比色管中，加ｚ３．７５ｍＩ。丙酮一乙①联系八．电话；（ｏｓ７６）５１５７１３Ｂ
作者简舟，橱敏文ｎ９６５一），女．浙扛省台州市人，高级讲师，华东师范大学２∞１年在职教育碰士，从事『七学教学与研究
收稿日期ｔ２００２一ｏｌ—ｏｌ－
第ｉ朝杨敏文：快速删定植物叶片叶绿素台量方珐的探讨
醇【２：１），使之成为９ｊ％丙酮一乙醇匀桨提取液。比色管加塞放置于２５ｃ生化培养箱内暗中提取叶
绿素。每种提取方法重复３次。
叶绿素提取液吸收光谱的测定：用分光光度计在６００一７００ｎｍ范围内对不同叶绿素提取液进
行扫描，波长精度为ｏ．２ｎｍ。
叶绿素含量测定：分别以提取溶剂作空白，测定叶绿素提取液吸光度“。。，１。。利用Ａｒｎ。ｎ公
式：
叶绿素Ⅱ浓度（ｍｇ／Ｉ。）：Ｃ一１２．７Ａｍ一２．６９ＡⅢ；
叶绿素６浓度（ｍｇ／Ｌ）：已一２ｚ．９—６。５—４，６８Ａ６６３；
叶绿素总浓度（ｍｇ／Ｌ）：ｃ。。一Ｃ＋（ｊ。
计算提取液中叶绿素浓度，换算为每克鲜叶叶绿素含量（ｍｇ／ｇ鲜重）。
３结果与讨论
３．１叶绿素提取液的吸收光谱
４种叶绿素提取液的吸收光谱在６００一
７００ｎｍ范围内基本相似（图１），说明４种叶绿
素提取液的光吸收性质基本相似，可以用
Ａｒｎｏｎ公式进行叶绿素含量的计算。
３．２不同提取溶荆对叶绿素提取总量的影响
不同提取溶剂对叶绿素提取总量有着明显
的ｇ；响（表１】，９５％丙酮一乙醇提取的叶绿素总
量最高，高于传统的８０％丙酮提取法２９．５％，被长』ｍｍ
９５％乙醇提取的叶绿素总量亦比８０％丙酮法
高９．５％。９５％丙酮乙醇提取叶片匀浆的叶绿图ｌ珊瑚树叶片叶绿素在不同提取液中的吸收觅洁
索电量与提取叶片碎片的叶绿素总量没有显著３—８０“丙酮；４ｊ＿一９５“酉酮一乙醇；？一％“乙醇；
９５蟛丙酮乙醇（匀浆１。
差异。
３．３不同提取溶剂提取叶绿素的进程
不同提取溶剂提取叶绿素速度差异较大，提取完全程度也不同（表１）。提取速度最快的是９ｊ％
丙酮乙醇，叶绿素经过８ｈ已经基本提取完全，叶片碎片变白；其次是９５％乙醇，而８０％丙酮提取
速度最慢，后两者在２４ｈ内没有完全提取出叶绿素。从提取速度来看．９５％丙酮一乙醇要优于９５％
乙醇和８０％丙酮。叶片匀浆后用９５％丙酮一乙醇在ｏ．５ｈ就已经提取完全，大大加快了叶绿素提取
速度。
表１不同提取溶剂提取叶绿素的进程和叶绿泵总量。ｐ括号内的数据为叶绿素相对含量．
光谱实验室第ｌ９卷
３．４不同提取液中叶绿素的稳定性
用不同提取溶剂提取珊瑚树叶片叶绿素，在２５ｃ生化培养箱中暗中放置ｏ、３、６天后测定提取
液中叶绿素含量，结果见表２。叶绿素提取液放置６天后，叶绿素ｎＴ降了ｊ．８％一１１．９％，叶绿素＾下降了２．７％一７．４％，叶绿素总量下降了４．９％一ｌｏ．ｊ％。这些都说明，在这些提取液中，叶绿素６比叶绿素ｎ稳定。叶绿素提取液中叶绿紊ｎ、叶绿素６的含量、稳定性与提取材料、提取液性质和提取液含水量有关“…。为了提高叶绿素提取液的稳定性．可通过降低提取液中的含水量来实现。但若昕用的材料是干粉，提取液中最好含有适量的水分，使叶绿素分子中亲水的基因易与蛋白质分离．利于叶绿素从类囊体膜中游离出来。有些学者曾采用比传统丙酮法含水量更低的丙酮提取液提取鲜叶叶绿素，效果较好”’…。本试验结果表明，叶绿素在不同提取液中稳定性的大小依次为：９ｊ％丙酮乙醇＞９５％乙醇＞８０％丙酮。
表２不同提取液中叶绿素的稳定性。
放西天数（ｍｇ／ｇ鲜重）８０％两酮叶绿素
。９５“丙酮乙醇９５“乙醇
。
ｍ
。８＂７ｉ
。３∞５
ｊ卅
。
。ｍ
、ｌ括号内的数据为叶绿素相对含量。”¨”
３．５精密度实验
９５％丙酮一乙醇提取效果好，提取速
度快，具有较高的精密度（表３）。
４表３不同提取方法的精密度“结论
分光光度法测定植物叶片叶绿素含
①５次重复量．由于所用提取溶剂不同，测定结果差
异显著。一种好的提取溶剂应该提取速度快，叶绿素得率高。稳定性好，测定结果精密度高．吸收光谱与传统丙酮法一致，能用Ａｒｎｏｎ公式计算叶绿素含量。本试验结果表明，９５％丙酮一乙醇法具有上述特点，是～种较好的叶绿素提取溶剂，而传统的８０％丙酮法和９５％乙醇法提取叶绿素速度慢，提取不完全，应慎用。叶片经匀浆后再用丙酮一乙醇提取，叶绿素得率与叶片浸泡法伯似，但大大提高了提取速度，这对于快速测定大量样品叶绿紊含量具有实际意义。
杨敏文ｚ快速测定植物叶片叶绿素含量方法的探’对————————————————————————————————————————————————————————————————————————————————————————４８１第４期
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ｍｅｔｈｏｄ．ｔｈｅｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎｏｆｃｈｌｏｒｏｐｈｙｌｌｃｏｎｔｅｎｔｓｏｆｌｅａｖｅｓｗａｓａｒｅｓｔｕｄｉｅｄｂｙｓｐｅｃｔｒｏｐｈｏｔｏｍｅｔｒｉｃＴｈｅｒｅｓｕｔｔｓｓｈｏｗｔｈａｔｃｈｌｏｒｏｐｈｙｌｌａｂｓｏｒｐｔｉｏｎｓｐｅｃｔｒｕｍｓ
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ＫｅｙｗｏｒｄｓＣｈｌｏｒｏｐｈｙⅡｃｏｎｔｅｎｔ，Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉ。ｎ，Ｍｅｔｈｏｄ，Ｉ七ａｆ．
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‘光谱实验室，编辑部
快速测定植物叶片叶绿素含量方法的探讨
作者：
作者单位：
刊名：
英文刊名：
年，卷(期)：
被引用次数：杨敏文台州职业技术学院医学院,浙江省台州市高等教育园区,318000光谱实验室CHINESE JOURNAL OF SPECTROSCOPY LABORATORY2002,19(4)84次
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