关于中压柱的知识点
★中压制备柱色谱
经典柱色谱与低压柱色谱的分辨率一般还是有限的，因为它们所用的分离材料的颗粒一般比较大。如果要进一步提高制备色谱的分辨率，通常只有进一步减小材料的颗粒或者增加色谱柱的长度，这样无疑会增大色谱柱的阻力及降低流动相的流速。另外，不同的冲洗溶剂所造成的流动相流速也有很大差别，如采用正相，以环己烷作为流动相时，流动相的流速较快；而采用反相，以水作为流动相时，则流速较慢，使用一些黏度较大的有机溶剂，如正丁醇也有同样的结果。为进一步提高制备色谱的分辨率又能保证有较快的分离速度，使用中压制备色谱是行之有效的办法。
中压柱色谱与经典柱色谱或低压柱色谱相比需要更多的组件，最简单的配置是除色谱柱外，再加上一台能够提供几十公斤压力的恒流泵。中压柱色谱的工作原理是由恒流泵输送移动相，通过进样阀上样，在色谱柱对样品进行分离后，利用检测器检测，记录仪记录，并同时收集各个馏分。在实际工作中，往往并不一定需要购置成套的装置，而是根据自己的研究需要和经费状况，分别购置适宜的组件自己组装。中压制备柱色谱一般由下面最主要的几个部件组成。
恒流泵 中压制备柱色谱除色谱柱外，唯一不能省掉的就是恒流泵。恒流泵的类型很多，从高效液相常规使用的泵到蠕动泵，都是恒流泵，也即都能以恒定的流量输出液体。所不同的是高效液相使用的泵通常要求最高压力能达到40MPa ，最大流量达到10mL/min,流量的精确度和准确度也要求很高。低压柱色谱恒流泵压力为0.3-0.5MPa ，中压柱色谱对泵的要求则介于二者之间。一个恒流泵能达到的压力越高，输出流量的精确度和准确度要求也越高，在实验室购买恒流泵时，主要考虑的是其能达到的最大压力最大流量，其次才是精确度和准确度。目前使用的恒流泵多数是柱塞式往复泵。
色谱柱 多数情况下中压制备色谱的色谱柱都是由耐压的强化玻璃制成，并且都是由自己装填柱子，最常用的分离材料颗粒的大小为15-25微米和25-40微米。在中压柱色谱中，湿法填充技术除使用一般的经典柱色谱的湿法填充外，对于颗粒较小，如小于20微米的分离材料通常采用匀浆法进行装柱。最简单的干法装柱是按照一般的干柱色谱法装填好色谱柱然后将装好的色谱柱与一氮气瓶相连，打开氮气瓶开关及色谱柱出口，使氮气瓶输出压力在1.5MPa ，利用高压气体将填料压紧。该法装填的柱子密度比湿法至少提高20%，因而更有利于分离难分离物质。
检测器 检测器的使用可以使样品的收集变得有的放矢，根据检测器信号的变化可以进行及时的收集，检测器的检测范围，检测器的灵敏度，基线稳定性等参数决定了仪器的性能高低。
自动馏分收集器和进样阀 在配置较为完备的中压制备色谱中，一般都有自动馏分收集器和进样阀。自动离分收集器有两种模式，一种是间隔一定的时间收集，一种是间隔一定的流出滴数而自动调换收集。
中压柱色谱的操作方法与经典柱色谱基本相似，下面以植物红豆杉中抗癌成分紫杉醇的分离为例来说明它的具体操作。
紫杉醇是最早由美国Wani 等于1971年首先从短叶红豆杉的茎皮中分离出来的，1979年美国的Horwitz 等发现良好的抗癌活性和独特的抑微管解聚和稳定微管的作用机理。1992年美国药品与食品管理局正式批准作为治疗晚期卵巢癌的药物首次上市，临床还发现对肺癌，头颈部肿瘤，恶性黑色素瘤等具有疗效。我国的中国红豆杉，东北红豆杉，云南红豆杉，西藏红豆杉等都已证明含有紫杉醇及紫杉烷类物质。在紫杉醇的分离中，通常认为其中的三尖杉磷碱最难除去，因为它们的结构非常相似。分离首先从红豆杉树皮中提取浸膏，氯仿萃取后得到深褐色物质，将此深褐色武装进行反相高效液相分析可以看出三尖杉磷鉴于紫杉醇出峰位置非常接近。紫杉醇浸膏经初分后，干扰物种类大大减少。紫杉醇能否提纯到98%以上，关键在于两点：一是柱效的高低，二是溶剂选择性的大小。第二步利用中压柱色谱对初分收集物进行分离。采用干法上柱，所用硅胶为10-40微米的薄层硅胶，加压为国产恒流泵，筛选出的诗意溶剂系统为氯仿-甲醇（100：6），分离物通过反相高效液相分析，此时三尖杉磷碱已被去除。再用容积系统为环己烷-乙酸乙酯（1：1）进行第二次中压柱色谱分离，收集物反相高效液相分析纯度达到了98%以上，一种复杂的抗癌物质，经过一次硅胶低压色谱，两次硅胶中压色谱，就将其从浸膏中分离出来了。
★白藜芦醇的分离实例
将一定量硅胶装入搪瓷盘置于烘箱中, 于105C 活化2h 后，取出放至室温即可装柱。柱子采用干法填充，填满整个柱体，不留死体积，密封后用柱塞式计量溶剂泵按石油醚-乙酸乙酯5：1比例泵入溶剂，至溶剂流出为止。将虎杖的提取物400g 用少量乙酸乙酯溶解，泵人中压柱柱头，然后泵入石油醚(60～90C)1000mL 。以一定比例的石油醚-乙酸乙酯为洗脱液，60mL/min的流速进行梯度洗脱，柱的使用压力为2～3 MPa：定量分批连续接收洗脱液，TLC 检识，展开剂为二氯甲烷-乙酸乙酯4：1，UV 照射下白藜芦醇蓝色荧光显色，至洗脱完全，相同流分合并，减压回收溶剂，产物浓缩至干。有效成分经TLC 检识全部流出后，用纯乙酸乙酯5000mL 再生，乙酸乙酯-石油醚1：5平衡后，再次上样，反复使用。
洗脱曲线如图1。根据薄层色谱的跟踪分析，可确定，谱峰3对应的洗脱液(收集区间为15～32瓶，每瓶500mL) 含有白藜芦醇，00
谱峰1(收集区间为1～9瓶) 为大黄素类物质，谱峰2为未知物。考虑到峰3和峰2的交叉，合并瓶号18～28的洗脱液，减压浓缩, 乙醇重结晶, 得白色晶体，mp258～260C ；紫外光下呈蓝色荧光IR(KBr，cm )3280，1600，1580，1409，1151；以上数据与文献值一致, 为反-3,4,5-三羟基二苯乙烯，即白藜芦醇。经HPLC 测定产物纯度为99.28％。 0-1
★反相硅胶柱是怎么装柱？是用什么溶剂装的？有什么注意事项吗？
反相硅胶柱是怎么装柱？是用什么溶剂装的？ 有什么注意事项吗？
答：通常是用甲醇装柱，沉降好后用起步溶剂（一定比例的甲醇-水）置换一下即可。注意一定不要超声，这样会破坏ODS 。由于其颗粒细，流速会慢一些，通常可用中压柱加快流速。
反相柱湿法上样的时候 ，样品是用起始洗脱剂溶解好，还是用纯甲醇或水溶解好呢？
答：能溶最好是用起始洗脱剂溶解，不行的话尽量用接近起始洗脱剂比例的系统溶解，此外还可以试试超声溶解，上样前记得过滤一下。 超声是欠考虑的 起始洗脱剂就OK 。
★各位老师，我这几天实验郁闷，苦无良策，请教一个问题。
老板（导师）最近买了一台瑞士BUCHI 的中压柱系统，填料是C18，我手上有黄酮（苷元）单体纯度是98％左右，但有个明显的杂质，意欲在这上面分开，我用HPLC ，岛津C18柱，150mm ，甲醇－水＝70：30的条件，目标黄酮在2.5min ，杂质在5.0min 。但在中压柱上试了丙酮－水=70:30,100mL/MIN,根本分不开（用丙酮主要考虑丙酮的溶解度大一点，这样一次上样量能大点）
我现在已经用了半箱丙酮了，不见效果，不知哪位高人指点一二，告诉我用中压分离黄酮的方法，不胜感激！
你应用丙酮代替液相摸出的甲醇行吗？两者的洗脱能力一致吗？有没有用丙酮－水=70:30走hplc ，看分离效果如何？2.5分钟就出峰太快了，你把这个条件直接应用到中压上肯定不行。我这里有些化合物的分离hplc 保留时间10min ，然后把对应的洗脱溶剂有机相比例降低一半应用到中压，必要时可以类似梯度。
你buchi 用的C18柱填料粒径多大？40～60um 的？这个分辨率很低，你可以试试20～40um 的，这个柱效能高很多，buchi 的设备也能耐受的了这么高的压力。
另外，你应该如2楼说的，先用丙酮在HPLC 上摸一下，看能否分开，然后再线性放大到MPLC 上。
★中压柱 压力约为50ba,c18填料应该买什么样的(400目?)
第一个看你的需要了。300-400也可以。只要洗脱液能下来。在压力允许的条件下，要尽量选用较细的填料，这样才能有较高的柱效。
本人试过50µm的ODS C-18填料，2.2cm×50cm，基本常压就可以分离了，改装一下利用液相的崩和检测器（由于分析型液相检测器的管路较细，会导致压力升高），流速到2.5ml/min，压力也不会超过10bar 。
楼主的这个问题比较具体，可以问一下专业的公司，很多卖仪器的公司都有专门的技术支持部门，他们应该可以给出具体的答案。xiexie 楼上的了. 决定买40-60µm,虽然别人说40-60的可以常压洗脱. 为了保险起见。
关于中压柱的知识点
★中压制备柱色谱
经典柱色谱与低压柱色谱的分辨率一般还是有限的，因为它们所用的分离材料的颗粒一般比较大。如果要进一步提高制备色谱的分辨率，通常只有进一步减小材料的颗粒或者增加色谱柱的长度，这样无疑会增大色谱柱的阻力及降低流动相的流速。另外，不同的冲洗溶剂所造成的流动相流速也有很大差别，如采用正相，以环己烷作为流动相时，流动相的流速较快；而采用反相，以水作为流动相时，则流速较慢，使用一些黏度较大的有机溶剂，如正丁醇也有同样的结果。为进一步提高制备色谱的分辨率又能保证有较快的分离速度，使用中压制备色谱是行之有效的办法。
中压柱色谱与经典柱色谱或低压柱色谱相比需要更多的组件，最简单的配置是除色谱柱外，再加上一台能够提供几十公斤压力的恒流泵。中压柱色谱的工作原理是由恒流泵输送移动相，通过进样阀上样，在色谱柱对样品进行分离后，利用检测器检测，记录仪记录，并同时收集各个馏分。在实际工作中，往往并不一定需要购置成套的装置，而是根据自己的研究需要和经费状况，分别购置适宜的组件自己组装。中压制备柱色谱一般由下面最主要的几个部件组成。
恒流泵 中压制备柱色谱除色谱柱外，唯一不能省掉的就是恒流泵。恒流泵的类型很多，从高效液相常规使用的泵到蠕动泵，都是恒流泵，也即都能以恒定的流量输出液体。所不同的是高效液相使用的泵通常要求最高压力能达到40MPa ，最大流量达到10mL/min,流量的精确度和准确度也要求很高。低压柱色谱恒流泵压力为0.3-0.5MPa ，中压柱色谱对泵的要求则介于二者之间。一个恒流泵能达到的压力越高，输出流量的精确度和准确度要求也越高，在实验室购买恒流泵时，主要考虑的是其能达到的最大压力最大流量，其次才是精确度和准确度。目前使用的恒流泵多数是柱塞式往复泵。
色谱柱 多数情况下中压制备色谱的色谱柱都是由耐压的强化玻璃制成，并且都是由自己装填柱子，最常用的分离材料颗粒的大小为15-25微米和25-40微米。在中压柱色谱中，湿法填充技术除使用一般的经典柱色谱的湿法填充外，对于颗粒较小，如小于20微米的分离材料通常采用匀浆法进行装柱。最简单的干法装柱是按照一般的干柱色谱法装填好色谱柱然后将装好的色谱柱与一氮气瓶相连，打开氮气瓶开关及色谱柱出口，使氮气瓶输出压力在1.5MPa ，利用高压气体将填料压紧。该法装填的柱子密度比湿法至少提高20%，因而更有利于分离难分离物质。
检测器 检测器的使用可以使样品的收集变得有的放矢，根据检测器信号的变化可以进行及时的收集，检测器的检测范围，检测器的灵敏度，基线稳定性等参数决定了仪器的性能高低。
自动馏分收集器和进样阀 在配置较为完备的中压制备色谱中，一般都有自动馏分收集器和进样阀。自动离分收集器有两种模式，一种是间隔一定的时间收集，一种是间隔一定的流出滴数而自动调换收集。
中压柱色谱的操作方法与经典柱色谱基本相似，下面以植物红豆杉中抗癌成分紫杉醇的分离为例来说明它的具体操作。
紫杉醇是最早由美国Wani 等于1971年首先从短叶红豆杉的茎皮中分离出来的，1979年美国的Horwitz 等发现良好的抗癌活性和独特的抑微管解聚和稳定微管的作用机理。1992年美国药品与食品管理局正式批准作为治疗晚期卵巢癌的药物首次上市，临床还发现对肺癌，头颈部肿瘤，恶性黑色素瘤等具有疗效。我国的中国红豆杉，东北红豆杉，云南红豆杉，西藏红豆杉等都已证明含有紫杉醇及紫杉烷类物质。在紫杉醇的分离中，通常认为其中的三尖杉磷碱最难除去，因为它们的结构非常相似。分离首先从红豆杉树皮中提取浸膏，氯仿萃取后得到深褐色物质，将此深褐色武装进行反相高效液相分析可以看出三尖杉磷鉴于紫杉醇出峰位置非常接近。紫杉醇浸膏经初分后，干扰物种类大大减少。紫杉醇能否提纯到98%以上，关键在于两点：一是柱效的高低，二是溶剂选择性的大小。第二步利用中压柱色谱对初分收集物进行分离。采用干法上柱，所用硅胶为10-40微米的薄层硅胶，加压为国产恒流泵，筛选出的诗意溶剂系统为氯仿-甲醇（100：6），分离物通过反相高效液相分析，此时三尖杉磷碱已被去除。再用容积系统为环己烷-乙酸乙酯（1：1）进行第二次中压柱色谱分离，收集物反相高效液相分析纯度达到了98%以上，一种复杂的抗癌物质，经过一次硅胶低压色谱，两次硅胶中压色谱，就将其从浸膏中分离出来了。
★白藜芦醇的分离实例
将一定量硅胶装入搪瓷盘置于烘箱中, 于105C 活化2h 后，取出放至室温即可装柱。柱子采用干法填充，填满整个柱体，不留死体积，密封后用柱塞式计量溶剂泵按石油醚-乙酸乙酯5：1比例泵入溶剂，至溶剂流出为止。将虎杖的提取物400g 用少量乙酸乙酯溶解，泵人中压柱柱头，然后泵入石油醚(60～90C)1000mL 。以一定比例的石油醚-乙酸乙酯为洗脱液，60mL/min的流速进行梯度洗脱，柱的使用压力为2～3 MPa：定量分批连续接收洗脱液，TLC 检识，展开剂为二氯甲烷-乙酸乙酯4：1，UV 照射下白藜芦醇蓝色荧光显色，至洗脱完全，相同流分合并，减压回收溶剂，产物浓缩至干。有效成分经TLC 检识全部流出后，用纯乙酸乙酯5000mL 再生，乙酸乙酯-石油醚1：5平衡后，再次上样，反复使用。
洗脱曲线如图1。根据薄层色谱的跟踪分析，可确定，谱峰3对应的洗脱液(收集区间为15～32瓶，每瓶500mL) 含有白藜芦醇，00
谱峰1(收集区间为1～9瓶) 为大黄素类物质，谱峰2为未知物。考虑到峰3和峰2的交叉，合并瓶号18～28的洗脱液，减压浓缩, 乙醇重结晶, 得白色晶体，mp258～260C ；紫外光下呈蓝色荧光IR(KBr，cm )3280，1600，1580，1409，1151；以上数据与文献值一致, 为反-3,4,5-三羟基二苯乙烯，即白藜芦醇。经HPLC 测定产物纯度为99.28％。 0-1
★反相硅胶柱是怎么装柱？是用什么溶剂装的？有什么注意事项吗？
反相硅胶柱是怎么装柱？是用什么溶剂装的？ 有什么注意事项吗？
答：通常是用甲醇装柱，沉降好后用起步溶剂（一定比例的甲醇-水）置换一下即可。注意一定不要超声，这样会破坏ODS 。由于其颗粒细，流速会慢一些，通常可用中压柱加快流速。
反相柱湿法上样的时候 ，样品是用起始洗脱剂溶解好，还是用纯甲醇或水溶解好呢？
答：能溶最好是用起始洗脱剂溶解，不行的话尽量用接近起始洗脱剂比例的系统溶解，此外还可以试试超声溶解，上样前记得过滤一下。 超声是欠考虑的 起始洗脱剂就OK 。
★各位老师，我这几天实验郁闷，苦无良策，请教一个问题。
老板（导师）最近买了一台瑞士BUCHI 的中压柱系统，填料是C18，我手上有黄酮（苷元）单体纯度是98％左右，但有个明显的杂质，意欲在这上面分开，我用HPLC ，岛津C18柱，150mm ，甲醇－水＝70：30的条件，目标黄酮在2.5min ，杂质在5.0min 。但在中压柱上试了丙酮－水=70:30,100mL/MIN,根本分不开（用丙酮主要考虑丙酮的溶解度大一点，这样一次上样量能大点）
我现在已经用了半箱丙酮了，不见效果，不知哪位高人指点一二，告诉我用中压分离黄酮的方法，不胜感激！
你应用丙酮代替液相摸出的甲醇行吗？两者的洗脱能力一致吗？有没有用丙酮－水=70:30走hplc ，看分离效果如何？2.5分钟就出峰太快了，你把这个条件直接应用到中压上肯定不行。我这里有些化合物的分离hplc 保留时间10min ，然后把对应的洗脱溶剂有机相比例降低一半应用到中压，必要时可以类似梯度。
你buchi 用的C18柱填料粒径多大？40～60um 的？这个分辨率很低，你可以试试20～40um 的，这个柱效能高很多，buchi 的设备也能耐受的了这么高的压力。
另外，你应该如2楼说的，先用丙酮在HPLC 上摸一下，看能否分开，然后再线性放大到MPLC 上。
★中压柱 压力约为50ba,c18填料应该买什么样的(400目?)
第一个看你的需要了。300-400也可以。只要洗脱液能下来。在压力允许的条件下，要尽量选用较细的填料，这样才能有较高的柱效。
本人试过50µm的ODS C-18填料，2.2cm×50cm，基本常压就可以分离了，改装一下利用液相的崩和检测器（由于分析型液相检测器的管路较细，会导致压力升高），流速到2.5ml/min，压力也不会超过10bar 。
楼主的这个问题比较具体，可以问一下专业的公司，很多卖仪器的公司都有专门的技术支持部门，他们应该可以给出具体的答案。xiexie 楼上的了. 决定买40-60µm,虽然别人说40-60的可以常压洗脱. 为了保险起见。