菌落总数测定
一、设备和材料
250ML 锥形瓶3个 100ML烧杯1个
250ML 量筒1个 1000ML烧杯1个
15*150mm试管3个 1ML刻度吸管4个
培养皿7个 玻璃棒1个
洗耳球 剪刀1把
药匙2个 均质器
天平（感量0.1g ） 电炉
酒精灯
二、实验准备
1、平板计数琼脂的配制
用天平称取11.75g 培养基于锥形瓶中
加入500ML 蒸馏水
加热煮沸至完全溶解
高温灭菌备用
2、生理盐水
取4.25g 氯化钠于大烧杯中
加入500ML 蒸馏水溶解
取225ML 生理盐水于锥形瓶中
分别取9ML 生理盐水于3只小试管中
将分装好的生理盐水进行高温灭菌
3、灭菌：将均质杯、100ML 烧杯、刻度吸管、剪刀、洗耳球高温灭菌备用
三、取样
在提交的产品中随机抽取三箱，从每箱中随机抽取未打开包装的产品1袋~3袋，抽取不低于250g 的样品作为微生物指标检验试样。
四、检验程序
五、操作步骤
1、称取25g 样品，放人盛有225m 生理盐水的无菌均质杯内，8
00or/min-10 000r/min 均质1 min-2 min ，制成1:10 的样品匀液。
2、用1ml 无菌吸管吸取1:10 样品匀液1ml ，沿管壁缓缓注人9ml 生
理盐水的无菌试管中（注意吸管或吸头尖端不要触及稀释液面），振摇试管，使其混合均匀，制成1:100 的样品匀液。
3、换一只新的1ml 无菌吸管吸取1:100样品匀液1ml ，沿管壁缓缓
注人9ml 生理盐水的无菌试管中（注意吸管或吸头尖端不要触及稀释液面），振摇试管，使其混合均匀，制成1:1000 的样品匀液。
4、将三个连续稀释梯度的样品原液在进行10倍递增稀释时，吸取1
ml 样品匀液于无菌平皿内，每个稀释度做两个平皿。同时，分别吸取1 ml生理盐水加入两个无菌平皿内作空白对照。
5、及时将15-20 ml冷却至46℃的平析计数琼脂培养基倾注平皿，
并转动平皿使其混合均匀。
6、待琼脂凝固后，将平板翻转，36℃±1℃培养48±2小时。
7、菌落计数，可用肉眼观察。必要时用放大镜或菌落计数器，记录
稀释倍数和相应的菌落数量。
六、菌落计数的报告
选取菌落数在30-300CFU 之间、无蔓延菌落生长的平板计数菌落总数。低于30CFU 的平板记录具体菌落数，大于300CFU 的可记录为多不可计。
每个稀释度的菌落数应采用两个平板的平均数；其中一个平板有较大片状菌落生长时，则不宜采用，而应以无片状菌落生长的平板作为该稀释度的菌落数；
若片状菌落不到平板的一半，而其余一半中菌落分布又很均匀，即可计算半个平板后乘2，代表一个平板菌落数。
平板内出现菌落间无明显界线的链状生长时，则应将每条单链作为一个菌落计数。
七、菌落总数的计算方法
若只有一个稀释度平板上的菌落数在适宜计数范围内，计算两个平板菌落数的平均值，再将平均值乘以相应稀释度，作为每g(ml)样品中菌落总数结果。
若有两个连续稀释度的平均菌落数在适宜计数范围内时，按以下公式计算：
ΣC
N = （n 1＋0.1n 2）d
式中：
N ——样品中菌落数；
ΣC——平板（含适宜范围菌落数的平板）菌落数之和；
n 1——第一稀释度（低稀释度）平板个数；
n 2——第二稀释度（高稀释度）平板个数；
d ——稀释因子（第一稀释度）
若所有稀释度的平板上菌落数均大于300CFU ，则对稀释度最高的平板进行计数，其他平板可记录为多不可计，结果按平均菌落数乘以最高稀释倍数计算。
若所有稀释度的平板菌落数均小于30CFU ，则应按稀释度最低的平均菌落数乘以稀释倍数计算。
若所有稀释度（包括液体样品原液）平板均无菌落生长，则以小于1乘以最低稀释倍数计算。
若所有稀释度的平板菌落数均不在30-300CFU 之间，其中一部分小于30CFU 或大于300CFU ，则以最接近30CFU 或300CFU 的平均菌落数乘以稀释倍数计算。
八、菌落数的报告
菌落数小于100CFU 时，按“四舍五入”原则修约，以整数报告。 菌落数大于或等于100时，第3位数字采用“四舍五入”原则修约后，取前2位数字，后面用0代替位数；也可用10的指数形式来表示，按“四舍五入”原则修约后，采用两位有效数字。
若所有平板上为蔓延菌落而无法计数，则报告菌落蔓延。 若空白对照上有菌落生长，则此次检测结果无效。
称重取样以CFU/g为单位报告，体积取样以CFU/ml为单位报告。
菌落总数测定
一、设备和材料
250ML 锥形瓶3个 100ML烧杯1个
250ML 量筒1个 1000ML烧杯1个
15*150mm试管3个 1ML刻度吸管4个
培养皿7个 玻璃棒1个
洗耳球 剪刀1把
药匙2个 均质器
天平（感量0.1g ） 电炉
酒精灯
二、实验准备
1、平板计数琼脂的配制
用天平称取11.75g 培养基于锥形瓶中
加入500ML 蒸馏水
加热煮沸至完全溶解
高温灭菌备用
2、生理盐水
取4.25g 氯化钠于大烧杯中
加入500ML 蒸馏水溶解
取225ML 生理盐水于锥形瓶中
分别取9ML 生理盐水于3只小试管中
将分装好的生理盐水进行高温灭菌
3、灭菌：将均质杯、100ML 烧杯、刻度吸管、剪刀、洗耳球高温灭菌备用
三、取样
在提交的产品中随机抽取三箱，从每箱中随机抽取未打开包装的产品1袋~3袋，抽取不低于250g 的样品作为微生物指标检验试样。
四、检验程序
五、操作步骤
1、称取25g 样品，放人盛有225m 生理盐水的无菌均质杯内，8
00or/min-10 000r/min 均质1 min-2 min ，制成1:10 的样品匀液。
2、用1ml 无菌吸管吸取1:10 样品匀液1ml ，沿管壁缓缓注人9ml 生
理盐水的无菌试管中（注意吸管或吸头尖端不要触及稀释液面），振摇试管，使其混合均匀，制成1:100 的样品匀液。
3、换一只新的1ml 无菌吸管吸取1:100样品匀液1ml ，沿管壁缓缓
注人9ml 生理盐水的无菌试管中（注意吸管或吸头尖端不要触及稀释液面），振摇试管，使其混合均匀，制成1:1000 的样品匀液。
4、将三个连续稀释梯度的样品原液在进行10倍递增稀释时，吸取1
ml 样品匀液于无菌平皿内，每个稀释度做两个平皿。同时，分别吸取1 ml生理盐水加入两个无菌平皿内作空白对照。
5、及时将15-20 ml冷却至46℃的平析计数琼脂培养基倾注平皿，
并转动平皿使其混合均匀。
6、待琼脂凝固后，将平板翻转，36℃±1℃培养48±2小时。
7、菌落计数，可用肉眼观察。必要时用放大镜或菌落计数器，记录
稀释倍数和相应的菌落数量。
六、菌落计数的报告
选取菌落数在30-300CFU 之间、无蔓延菌落生长的平板计数菌落总数。低于30CFU 的平板记录具体菌落数，大于300CFU 的可记录为多不可计。
每个稀释度的菌落数应采用两个平板的平均数；其中一个平板有较大片状菌落生长时，则不宜采用，而应以无片状菌落生长的平板作为该稀释度的菌落数；
若片状菌落不到平板的一半，而其余一半中菌落分布又很均匀，即可计算半个平板后乘2，代表一个平板菌落数。
平板内出现菌落间无明显界线的链状生长时，则应将每条单链作为一个菌落计数。
七、菌落总数的计算方法
若只有一个稀释度平板上的菌落数在适宜计数范围内，计算两个平板菌落数的平均值，再将平均值乘以相应稀释度，作为每g(ml)样品中菌落总数结果。
若有两个连续稀释度的平均菌落数在适宜计数范围内时，按以下公式计算：
ΣC
N = （n 1＋0.1n 2）d
式中：
N ——样品中菌落数；
ΣC——平板（含适宜范围菌落数的平板）菌落数之和；
n 1——第一稀释度（低稀释度）平板个数；
n 2——第二稀释度（高稀释度）平板个数；
d ——稀释因子（第一稀释度）
若所有稀释度的平板上菌落数均大于300CFU ，则对稀释度最高的平板进行计数，其他平板可记录为多不可计，结果按平均菌落数乘以最高稀释倍数计算。
若所有稀释度的平板菌落数均小于30CFU ，则应按稀释度最低的平均菌落数乘以稀释倍数计算。
若所有稀释度（包括液体样品原液）平板均无菌落生长，则以小于1乘以最低稀释倍数计算。
若所有稀释度的平板菌落数均不在30-300CFU 之间，其中一部分小于30CFU 或大于300CFU ，则以最接近30CFU 或300CFU 的平均菌落数乘以稀释倍数计算。
八、菌落数的报告
菌落数小于100CFU 时，按“四舍五入”原则修约，以整数报告。 菌落数大于或等于100时，第3位数字采用“四舍五入”原则修约后，取前2位数字，后面用0代替位数；也可用10的指数形式来表示，按“四舍五入”原则修约后，采用两位有效数字。
若所有平板上为蔓延菌落而无法计数，则报告菌落蔓延。 若空白对照上有菌落生长，则此次检测结果无效。
称重取样以CFU/g为单位报告，体积取样以CFU/ml为单位报告。