板蓝根的有效成分抗内毒素作用研究开题
报告
摘 要
板蓝根为临床常用中药，始载于《神农本草经》，味苦，性寒，有清热解毒，凉血利咽功能。用于温毒发斑、舌绛紫暗、疼腮、烂喉丹疹、大头瘟疫、丹毒、痈肿等症。目前所用的板蓝根分为两种:一种为十宇花科植物落蓝Isatis indigrotica Fort. 的根，全国多数地区，特别北方地区广泛使用，习称“北板蓝”。另一种为爵科植物马蓝Strobilanthes curia ( Nees ) . Ktze.的根，华南地区及西南大部分地区习惯应用，习称“南板蓝”。两者在中医临床上均有应用，《中国药典》(2000版) 规定板蓝根为十字花植物藕蓝Isatis uufigotica Fort.的干燥根，是板蓝根的主要来源。现今板蓝根在临床上常用于病毒性疾病及细菌感染疾病，尤其在抗病毒方面疗效确切。众多文献报道板蓝根对于病毒引起的流感、乙型肝炎、单纯疤疹、病毒性心肌炎、肾病综合征、出血热等多种疾病均有较好的治疗或预防作用，可以认为板蓝根是较为广谱的天然抗病毒药物。为进一步研究板蓝根抗病毒的成分，现将目前板蓝根化学成分和抗病毒药理作用的研究情况作以综述。
关键词：板蓝根；动态浊度法；苯甲酸；杭内毒素
板蓝根的有效成分抗内毒素作用的
研究
一、 研究背景及本选题意义
细菌内毒素(endotoxin)是迄今发现的生物活性最为广泛的物质之一。在众多多发常见病的发生、发展中起关键作用。它可刺激机体防御系统过渡释放炎性因 子，引起发热、脓毒性休克、弥漫性血管内凝血(DIC)、多器官功能衰竭综合征 （MODS ）, 以至死亡内毒素拮抗剂的研究已成为生命科学的热门课题。中药材清热解毒之功效主要集中于其抗细菌内毒素和抗病原微生物作用。板蓝根是传统的清热解毒中药，为十字花科植物藕蓝Isatis tinctoria L.的根，其化学成分复杂。作为清热解毒中药的典型代表，板蓝根以治疗温热病等感染性炎症疾病见长，研究
表明，抗内毒素是中药板蓝根的主要作用，也是其清热解毒的主要机制，说明该作用可作为板蓝根的临床疗效的指针。自发现其抗内毒素作用以来，已对其进行了大量研究川板蓝根中所分得的四种有机酸:苯甲酸、丁香酸、邻氨基苯甲酸、水杨酸具有较强的抗内毒素活性，其中苯甲酸和水杨酸的作用最强，丁香酸作用最弱，邻氨基苯甲酸居中。所以苯甲酸等4种有机酸可以考虑作为其抗内毒素作用指标成分。
对于抗内毒素作用的研究，有传统的家兔热原法和鳖试剂法。家兔热原法由于操作复杂，影响因素多，准确性差，不能标准化，对试验结果影响很大。本课题采用动态浊度法对板蓝根样品的抗内毒素活性进行定量研究，希望能摸索出一套适合中药板蓝根的抗内毒素检测方法。
二、国内外发展状况：
基于热原反应导致的严重后果，人们开始了这一领域的研究1923年Seibert 提出了用家兔检测热原的方法在1942年美国药典首先将家兔热原检查项收人药典成为法定方法，中国药典1953年版开始收载该方法，随后的世界各国药典都以动物热原检查法作为药品质量监测的方法之一。内毒素被认为是药品热原的本质，细菌内毒素存在于革兰氏阴性菌细胞壁中，革兰氏阴性菌死亡后从细胞壁释放出来。静脉、鞘内注射后在人体内能引起一系列生理反应，导致发热，肝脏直接或间接受损，甚至死亡。为提高药品质量和用药安全，人们对细菌内毒素进行了广泛的研究，内毒素检查源于生物学家Dr levin 和Bang 发现了内毒素与堂血细胞溶解物的反应，并于1968年提出内毒素凝胶法。目前国外在实际检测中7000以上运用的是定量法，我国也在200。版药典中正式列入了细菌内毒素定量检测法应用指导原则，使定量法在我国得到肯定、应用和推广。近几年我国对定量鳖试剂、内毒素标准品的研制和管理水平的不断提高，增加了检测结果的可靠性。
从最早的家兔法检测热原的方法到细菌内毒素检测的经典方法凝胶法，再到目前国内外广泛研究和逐步采用的细菌内毒素定量检测法，人们对细菌内毒素的认识在提高，检测的方法也不断优化。
目前，常用的细菌内毒素定量法主要有终点浊度法、终点显色法、动态浊度法、动态显色法以及基于内毒素抗原抗体结合的火箭电泳免疫法和酶联免疫吸附法等。这些方法中，以动态浊度法更为省时、经济、准确、抗干扰能力强，成为定量检测细菌内毒素的首选方法。动态浊度法通过鳖试剂与细菌内毒素的反应物的OD 值(光密度Optical density)变化检测细菌内毒素浓度，内毒素浓度越高成胶时间就越短，即内毒素浓度和成胶时间为负相关我们选用的BET- 32B 型仪器取OD 值上升到0.02的点的时间作为反应时间，该点在反应曲线上的位置为浊度开始快速变化的时期，该取值能够快速、稳定的获得反应时间，使检测速度大大提
高，一般可在半小时内检测到。0.1Eu/ml以下的内毒素BET-32M 检测波长可选择为450nm 或660nm ，一般产品用450nm 的检测波长，黄色物质对检测光的吸收小，应采用 660nm 的检测波长。
三、研究内容
采用动态浊度法测定板蓝根中有效成分的抗内毒素作用，通过薄层色谱、醇浸出物测定等方法对所购板蓝根药材进行质量鉴定; 同时以0.25%苯甲酸水溶液为样品，采用动态浊度法检测其杭内毒素作用。
四、技术路线
1. 板蓝根药材的真实性研究： 薄层鉴定（板蓝根药材标准品，精氨酸标准品，
浸出物测定
板蓝根水煎液荧光鉴定
2. 板蓝根抗内毒作用研究 ：板蓝根提取液的制备细菌内毒素试验准曲线的制备甲酸抗内毒素作用定量检测结果
五、研究方法及手段
1、检索CNKI 等数据库，收集有关板蓝根的有效成分的文献资料，全面了解相关验证方法和手段。
2、查阅药典及有关受控文件，分析研究板蓝根的有效成分的检测方法和条件。
3、了解动态浊度法的检测方法。
4、对设计的论文进行试验研究。
六、本课题特点
1、采用动态浊度法测定板蓝根中有效成分的抗内毒素作用，通过薄层色谱、醇浸出物测定等方法对所购板蓝根药材进行质量鉴定; 同时以0.25%苯甲酸水溶液为样品，采用动态浊度法检测其杭内毒素作用。
2、试验条件相对温和，常温下均可进行。
七、可能出现的技术问题及解决办法
实验过程中可能出现的影响实验结果的因素，如环境因素、人为操作误差及仪器误差。对这些影响因素进行充分的考虑，并对这些存在的因素剔除可行性建议，为实验的顺利实施提供有价值的参考。
八、工作基础及条件
1、本实习单位在一定范围内给我提供了相关的数据信息。
2、通过互联网获取相关信息。
3、实习单位提供必要的试验仪器及试剂的条件支持。
4、指导老师是单位化学室的主任，可以提供关于动态浊度法测定板蓝根中有效成分的抗内毒素作用的相关建议和意见。
九、参考文献
[1]刘云海，力建川，上文洁板蓝根抗内毒素下舌性物质筛选[期刊论文]一中南药学2011 (06)
[2]卫川，郑江细菌内毒素定贵检测的影啊囚素分析及对策[期刊论文]一局解手术学杂志2011 (03)
[3]李敬，江一, 陈竟，刘云海板蓝根中苯甲酸的抗内毒素作用[期刊论文]一中南药学2010(03)
[4]刘云海，刘彦斌小同地产板蓝根抗内毒素作用比较2009 (02)
[5]刘云海，刘进民，中正义色基质法测定板蓝根氛仿捉取物的抗内毒素作用2010 (05)
采用动态浊度法测定板蓝根中有效成分的抗内毒素作用，通过薄层色谱、醇浸出物测定等方法对所购板蓝根药材进行质量鉴定; 同时以0.25%苯甲酸水溶液为样品，采用动态浊度法检测其杭内毒素作用。
参考文献
[1] 何文斌, 何作民, 潘志文.RP-HPLC 法测定凉茶中非法添加对乙酰氨基酚和咖啡因的含量[J].中国药事,2011,25(2):126-128.
[2] 王兰, 张晓文, 赵广才等. 中草药茶饮料凉茶的功效及安全性研究评述[J].中医学报,2010,25(150):914-916.
[3] 饶金华. 高效液相色谱法在检测“非法添加化学药”中的应用[J].首都医
药,2008,1:47-48.
[4] 欧志葵, 牛思远, 赵兵辉. 广东凉茶销量今年增长30%. http://www.foods1.com/content/1917600/. 2012-12-12.
[5]
史晓菲. 灌装饮料 凉茶超可乐. http://www.xfrb.com.cn/newsf/2012/12/13/1355363878.htm.2012-12-15.
板蓝根的有效成分抗内毒素作用研究开题
报告
摘 要
板蓝根为临床常用中药，始载于《神农本草经》，味苦，性寒，有清热解毒，凉血利咽功能。用于温毒发斑、舌绛紫暗、疼腮、烂喉丹疹、大头瘟疫、丹毒、痈肿等症。目前所用的板蓝根分为两种:一种为十宇花科植物落蓝Isatis indigrotica Fort. 的根，全国多数地区，特别北方地区广泛使用，习称“北板蓝”。另一种为爵科植物马蓝Strobilanthes curia ( Nees ) . Ktze.的根，华南地区及西南大部分地区习惯应用，习称“南板蓝”。两者在中医临床上均有应用，《中国药典》(2000版) 规定板蓝根为十字花植物藕蓝Isatis uufigotica Fort.的干燥根，是板蓝根的主要来源。现今板蓝根在临床上常用于病毒性疾病及细菌感染疾病，尤其在抗病毒方面疗效确切。众多文献报道板蓝根对于病毒引起的流感、乙型肝炎、单纯疤疹、病毒性心肌炎、肾病综合征、出血热等多种疾病均有较好的治疗或预防作用，可以认为板蓝根是较为广谱的天然抗病毒药物。为进一步研究板蓝根抗病毒的成分，现将目前板蓝根化学成分和抗病毒药理作用的研究情况作以综述。
关键词：板蓝根；动态浊度法；苯甲酸；杭内毒素
板蓝根的有效成分抗内毒素作用的
研究
一、 研究背景及本选题意义
细菌内毒素(endotoxin)是迄今发现的生物活性最为广泛的物质之一。在众多多发常见病的发生、发展中起关键作用。它可刺激机体防御系统过渡释放炎性因 子，引起发热、脓毒性休克、弥漫性血管内凝血(DIC)、多器官功能衰竭综合征 （MODS ）, 以至死亡内毒素拮抗剂的研究已成为生命科学的热门课题。中药材清热解毒之功效主要集中于其抗细菌内毒素和抗病原微生物作用。板蓝根是传统的清热解毒中药，为十字花科植物藕蓝Isatis tinctoria L.的根，其化学成分复杂。作为清热解毒中药的典型代表，板蓝根以治疗温热病等感染性炎症疾病见长，研究
表明，抗内毒素是中药板蓝根的主要作用，也是其清热解毒的主要机制，说明该作用可作为板蓝根的临床疗效的指针。自发现其抗内毒素作用以来，已对其进行了大量研究川板蓝根中所分得的四种有机酸:苯甲酸、丁香酸、邻氨基苯甲酸、水杨酸具有较强的抗内毒素活性，其中苯甲酸和水杨酸的作用最强，丁香酸作用最弱，邻氨基苯甲酸居中。所以苯甲酸等4种有机酸可以考虑作为其抗内毒素作用指标成分。
对于抗内毒素作用的研究，有传统的家兔热原法和鳖试剂法。家兔热原法由于操作复杂，影响因素多，准确性差，不能标准化，对试验结果影响很大。本课题采用动态浊度法对板蓝根样品的抗内毒素活性进行定量研究，希望能摸索出一套适合中药板蓝根的抗内毒素检测方法。
二、国内外发展状况：
基于热原反应导致的严重后果，人们开始了这一领域的研究1923年Seibert 提出了用家兔检测热原的方法在1942年美国药典首先将家兔热原检查项收人药典成为法定方法，中国药典1953年版开始收载该方法，随后的世界各国药典都以动物热原检查法作为药品质量监测的方法之一。内毒素被认为是药品热原的本质，细菌内毒素存在于革兰氏阴性菌细胞壁中，革兰氏阴性菌死亡后从细胞壁释放出来。静脉、鞘内注射后在人体内能引起一系列生理反应，导致发热，肝脏直接或间接受损，甚至死亡。为提高药品质量和用药安全，人们对细菌内毒素进行了广泛的研究，内毒素检查源于生物学家Dr levin 和Bang 发现了内毒素与堂血细胞溶解物的反应，并于1968年提出内毒素凝胶法。目前国外在实际检测中7000以上运用的是定量法，我国也在200。版药典中正式列入了细菌内毒素定量检测法应用指导原则，使定量法在我国得到肯定、应用和推广。近几年我国对定量鳖试剂、内毒素标准品的研制和管理水平的不断提高，增加了检测结果的可靠性。
从最早的家兔法检测热原的方法到细菌内毒素检测的经典方法凝胶法，再到目前国内外广泛研究和逐步采用的细菌内毒素定量检测法，人们对细菌内毒素的认识在提高，检测的方法也不断优化。
目前，常用的细菌内毒素定量法主要有终点浊度法、终点显色法、动态浊度法、动态显色法以及基于内毒素抗原抗体结合的火箭电泳免疫法和酶联免疫吸附法等。这些方法中，以动态浊度法更为省时、经济、准确、抗干扰能力强，成为定量检测细菌内毒素的首选方法。动态浊度法通过鳖试剂与细菌内毒素的反应物的OD 值(光密度Optical density)变化检测细菌内毒素浓度，内毒素浓度越高成胶时间就越短，即内毒素浓度和成胶时间为负相关我们选用的BET- 32B 型仪器取OD 值上升到0.02的点的时间作为反应时间，该点在反应曲线上的位置为浊度开始快速变化的时期，该取值能够快速、稳定的获得反应时间，使检测速度大大提
高，一般可在半小时内检测到。0.1Eu/ml以下的内毒素BET-32M 检测波长可选择为450nm 或660nm ，一般产品用450nm 的检测波长，黄色物质对检测光的吸收小，应采用 660nm 的检测波长。
三、研究内容
采用动态浊度法测定板蓝根中有效成分的抗内毒素作用，通过薄层色谱、醇浸出物测定等方法对所购板蓝根药材进行质量鉴定; 同时以0.25%苯甲酸水溶液为样品，采用动态浊度法检测其杭内毒素作用。
四、技术路线
1. 板蓝根药材的真实性研究： 薄层鉴定（板蓝根药材标准品，精氨酸标准品，
浸出物测定
板蓝根水煎液荧光鉴定
2. 板蓝根抗内毒作用研究 ：板蓝根提取液的制备细菌内毒素试验准曲线的制备甲酸抗内毒素作用定量检测结果
五、研究方法及手段
1、检索CNKI 等数据库，收集有关板蓝根的有效成分的文献资料，全面了解相关验证方法和手段。
2、查阅药典及有关受控文件，分析研究板蓝根的有效成分的检测方法和条件。
3、了解动态浊度法的检测方法。
4、对设计的论文进行试验研究。
六、本课题特点
1、采用动态浊度法测定板蓝根中有效成分的抗内毒素作用，通过薄层色谱、醇浸出物测定等方法对所购板蓝根药材进行质量鉴定; 同时以0.25%苯甲酸水溶液为样品，采用动态浊度法检测其杭内毒素作用。
2、试验条件相对温和，常温下均可进行。
七、可能出现的技术问题及解决办法
实验过程中可能出现的影响实验结果的因素，如环境因素、人为操作误差及仪器误差。对这些影响因素进行充分的考虑，并对这些存在的因素剔除可行性建议，为实验的顺利实施提供有价值的参考。
八、工作基础及条件
1、本实习单位在一定范围内给我提供了相关的数据信息。
2、通过互联网获取相关信息。
3、实习单位提供必要的试验仪器及试剂的条件支持。
4、指导老师是单位化学室的主任，可以提供关于动态浊度法测定板蓝根中有效成分的抗内毒素作用的相关建议和意见。
九、参考文献
[1]刘云海，力建川，上文洁板蓝根抗内毒素下舌性物质筛选[期刊论文]一中南药学2011 (06)
[2]卫川，郑江细菌内毒素定贵检测的影啊囚素分析及对策[期刊论文]一局解手术学杂志2011 (03)
[3]李敬，江一, 陈竟，刘云海板蓝根中苯甲酸的抗内毒素作用[期刊论文]一中南药学2010(03)
[4]刘云海，刘彦斌小同地产板蓝根抗内毒素作用比较2009 (02)
[5]刘云海，刘进民，中正义色基质法测定板蓝根氛仿捉取物的抗内毒素作用2010 (05)
采用动态浊度法测定板蓝根中有效成分的抗内毒素作用，通过薄层色谱、醇浸出物测定等方法对所购板蓝根药材进行质量鉴定; 同时以0.25%苯甲酸水溶液为样品，采用动态浊度法检测其杭内毒素作用。
参考文献
[1] 何文斌, 何作民, 潘志文.RP-HPLC 法测定凉茶中非法添加对乙酰氨基酚和咖啡因的含量[J].中国药事,2011,25(2):126-128.
[2] 王兰, 张晓文, 赵广才等. 中草药茶饮料凉茶的功效及安全性研究评述[J].中医学报,2010,25(150):914-916.
[3] 饶金华. 高效液相色谱法在检测“非法添加化学药”中的应用[J].首都医
药,2008,1:47-48.
[4] 欧志葵, 牛思远, 赵兵辉. 广东凉茶销量今年增长30%. http://www.foods1.com/content/1917600/. 2012-12-12.
[5]
史晓菲. 灌装饮料 凉茶超可乐. http://www.xfrb.com.cn/newsf/2012/12/13/1355363878.htm.2012-12-15.