尿液中33种毒品的液相色谱-串联质谱检测方法1/9页
技术领域
本发明涉及一种毒品的检测方法，特别是一种适用于尿液中33种毒品的液相色谱-串联质谱检测方法。[0001]
背景技术
吸毒、贩毒已成为全球性的社会公害。人一旦沾染毒品. 就会经常沉湎于毒品所幻想出的畸形“快感”之中，无心工作和学习。吸毒还会引发一系列的家庭社会问题。鉴于吸食毒品对家庭，特别是对社会的严重危害，国外一些国家除对本国吸毒者采取相应的管理措施外，对入境者也要求提供申请人不吸毒的证明，如俄罗斯。随着全球经济一体化进程加快，其他国家对入境者不可避免的将陆续出台类似的规定。为积极应对国外一些国家对我人员入境签证时涉及健康状况方面提出加做毒品检测的要求，检验检疫部门要按照国家局的要求，一方面积极进行物质和技术上的准备以应对国外对我入境人员健康检查的要求；另一方面从保护我国人民身体健康和维护社会稳定目的出发，也应采取对等的原则，对来华人员增加毒品检测的要求。
[0003] 目前国内外最广泛使用的人体内毒品成分检验的测试技术是免疫测试技术以及气相色谱法(GC)，国外也有使用气质联用检测的(GC/MS)。检索中国标准网发现，在标准中仅有公安部的关于吗啡、可卡因、海洛因等几类毒品的行业标准，主要是直接对毒品的检测，而并不是针对体液方面的检测方法。目前检验检疫部门对出入境人员尿液进行毒品检测的方法主要采用胶体金技术快速检测吗啡和甲基安非他明，假阳性率极高，而且只能检测2种毒品。因此建立一种快速、灵敏、准确的多种毒品同时检测方法变得尤为重要。[0002] 发明内容
[0004] 本发明所要解决的技术问题是针对现有技术的不足，提供一种方法针对性强、操作简单、检测速度快、检测面广、降低了测试成本，易于推广应用的尿液中33种毒品的液相色谱-串联质谱检测方法。
[0005] 本发明所要解决的技术问题是通过以下的技术方案来实现的。本发明是一种尿液中33种毒品的液相色谱-串联质谱检测方法，其特点是，其步骤如下：
[0006] (1)样品处理：称取2g 待检尿样，精确到0.01g ，置于50mL 具塞离心管中，加入10ml 乙酸乙酯，在液体混匀器上充分混匀1min ，以4000r/min离心10min ，吸取上层乙酸乙酯于试管中，再加入1mL 0.1mol/L NaOH溶液，在液体混匀器上充分混匀后，加入10ml 乙酸乙酯重复提取一次，合并两次提取液；提取液用氮气吹干仪在40℃吹干，加入1mL 体积比为30∶70的甲醇∶水涡旋后，过0.25μm 滤膜，得待测样品；
[0007] (2)测定：待测样品用液相色谱-串联四极杆质谱仪进行测定；在33种毒品的液相色谱-串联质谱分析法中，除了巴比妥类药物使用负离子模式分析之外，其余化合物都使用正离子模式分析；
[0008] 其中正离子模式的质谱条件为：电离源：ESI 源；扫描模式：正离子选择扫描模式
SRM ；电喷雾电压：2.5kV ；干燥气温度：400℃；气帘气压力：45arb ；辅助气压力：7arb ；毛细管温度：350℃；碰撞气：高纯氩气；
[0009] 负离子模式的质谱条件为：电离源：ESI 源；扫描模式：负离子选择扫描模式SRM ；电喷雾电压：2.5kV ；干燥气温度：400℃；气帘气压力：50arb ；辅助气压力：7arb ；毛细管温度：320℃；碰撞气：高纯氩气；
色谱条件为：色谱柱：Phenomenex Gemini C18 100×2.0，3μm ；柱温：室温；流速：250μL/min；进样体积：25μL ；
[0011] 正负离子模式的流动相梯度见表1和表2：
[0012] 表1. 正离子模式流动相梯度
[0010]
[0013]
[0014] 表2. 负离子模式流动相梯度
[0015]
33种毒品、监测离子对及碰撞能量见表3，其中，带*的为定量离子；
[0017] 表3 33种毒品的中英文名、保留时间及选择离子[0016]
[0018] [0019]
定性定量方法为：以各毒品的相对保留时间和各毒品的监测离子对的丰度比为定性依据，各毒品的保留时间见表3；用外标法定量，
[0021] 以各毒品的峰面积或峰高计算其在样品中的残留量。
[0022] 残留量可以按以下公式计算：[0020]
[0023]
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式中R-样本中毒品含量(μg/g)
[0025] C 标-标准样品浓度(μg/mL)
[0026] V 标-标准样品进样量(μL)
[0027] V 终-样本溶液最终定容体积(mL)
[0028] V 样-样本溶液进样体积(μL)
2[0029] S 样(H样)-注入标准溶液的峰面积(mm) 或(峰高)(mm)
2[0030] S 标(H标)-注入样本溶液的峰面积(mm) 或(峰高)(mm)
[0031] L 1-提取液的总量(mL)
[0032] L 2-提取液的取用量(mL)
[0033] W-称样量(g)。
[0034] 与现有技术相比，本发明技术方案的优选如下：
[0035] 1、本发明采用液液萃取的方法进行提取和净化，通过加入氢氧化钠溶液实现蛋白变性和调节pH 值，乙酸乙酯液液萃取进行提取。操作简单方便，净化效果好，整体回收率好，同时节省了有机溶剂和处理时间，简化了样品的前处理过程。
[0036] 2、本发明检测方法采用C18柱在线阀切换净化，串联质谱分析。由于涉及的毒品的种类较多，再进一步净化时很难选择一种固相萃取柱来达到满意的结果。通过色谱柱的在线切换进行了净化，用来降低样品对质谱仪器的污染。具体的做法就是通过质谱仪上的在线切换阀，在分析的所有化合物没有出峰之前和所有组分都已经流出色谱柱后，将色谱柱流出的溶液切换到废液中，不进质谱分析，质谱只分析组分流出这一时间段的流出液。这样组分流出前的大量的低保留的盐和杂质和强保留的弱极性的化合物都没有进到质谱的离子源，有效的降低了样品对质谱的污染。
[0037] 3、本发明选用耐碱性的色谱柱，氨水调节流动相pH 值，提高吗啡的色谱保留。
[0038] 4、本发明方法最低检出限达到1-2μg/kg。在2-100ng/mL浓度范围内，33种毒品线性良好，相关系数为0.9771-0.9995。在尿样中，大部分药物的回收在70-110％之间，少数药物的回收率在60-70％之间，RSD 小于13.5％，满足日常定量分析的需要。
[0039] 5、本发明检测方法建立了液相色谱-串联质谱法检测尿液中33种常见毒品的检测方法。一次性分析33种毒品，方法针对性强、操作简单、检测速度快、检测面广、降低了测试成本，易于推广应用。可用于出入境检验检疫、疾病控制中心、公安部门快速检测及阳性结果的确证。[0024]
具体实施方式
[0040] 以下进一步描述本发明的具体技术方案，以便于本领域的技术人员进一步地理解本发明，而不构成对其权利的限制。
[0041] 实施例1。一种尿液中33种毒品的液相色谱-串联质谱检测方法，其步骤如下：
[0042] (1)样品处理：称取2g 待检尿样，精确到0.01g ，置于50mL 具塞离心管中，加入10ml 乙酸乙酯，在液体混匀器上充分混匀1min ，以4000r/min离心10min ，吸取上层乙酸乙
6/9页酯于试管中，再加入1mL 0.1mol/L NaOH溶液，在液体混匀器上充分混匀后，加入10ml 乙酸乙酯重复提取一次，合并两次提取液；提取液用氮气吹干仪在40℃吹干，加入1mL 体积比为30∶70的甲醇∶水涡旋后，过0.25μm 滤膜，得待测样品；
[0043] (2)测定：待测样品用液相色谱-串联四极杆质谱仪进行测定；在33种毒品的液相色谱-串联质谱分析法中，除了巴比妥类药物使用负离子模式分析之外，其余化合物都使用正离子模式分析；
[0044] 其中正离子模式的质谱条件为：电离源：ESI 源；扫描模式：正离子选择扫描模式SRM ；电喷雾电压：2.5kV ；干燥气温度：400℃；气帘气压力：45arb ；辅助气压力：7arb ；毛细管温度：350℃；碰撞气：高纯氩气；
[0045] 负离子模式的质谱条件为：电离源：ESI 源；扫描模式：负离子选择扫描模式SRM ；电喷雾电压：2.5kV ；干燥气温度：400℃；气帘气压力：50arb ；辅助气压力：7arb ；毛细管温度：320℃；碰撞气：高纯氩气；
[0046] 色谱条件为：色谱柱：Phenomenex Gemini C18 100×2.0，3μm ；柱温：室温；流速：250μL/min；进样体积：25μL ；
[0047] 正负离子模式的流动相梯度见表1和表2：
[0048] 表1. 正离子模式流动相梯度
[0049]
[0050] 表2. 负离子模式流动相梯度
[0051]
33种毒品、监测离子对及碰撞能量见表3，其中，带*的为定量离子；
[0053] 表3 33种毒品的中英文名、保留时间及选择离子
[0052]
[0054]
[0055] [0056]
定性定量方法为：以各毒品的相对保留时间和各毒品的监测离子对的丰度比为定性依据，各毒品的保留时间见表3；用外标法定量，以各毒品的峰面积或峰高计算其在样品中的残留量。
[0058] 采用本实施例方法进行的检测实验。
[0059] 连云港检验检疫局于2010年对144名赴俄罗斯人员进行了毒品检测，按俄方要求检测甲基苯丙胺和吗啡，方法为胶体金免疫层析法和本实施例方法。用胶体金免疫层析法发现疑似吗啡1例，用本实施例方法进行确证，确证结果显示，尿样中不仅含有吗啡还含有可待因，吗啡含量为356μg/kg，可待因含量为4.3μg/kg。经调查该人员在体检前服用了某公司的止咳药(复方磷酸可待因) ，由于该口服液含有可待因，而可待因代谢后产生吗啡。停止服用该药2天后，用这两个方法检测结果为阴性。实验证明，本实施例方法准确可靠。[0057]
尿液中33种毒品的液相色谱-串联质谱检测方法1/9页
技术领域
本发明涉及一种毒品的检测方法，特别是一种适用于尿液中33种毒品的液相色谱-串联质谱检测方法。[0001]
背景技术
吸毒、贩毒已成为全球性的社会公害。人一旦沾染毒品. 就会经常沉湎于毒品所幻想出的畸形“快感”之中，无心工作和学习。吸毒还会引发一系列的家庭社会问题。鉴于吸食毒品对家庭，特别是对社会的严重危害，国外一些国家除对本国吸毒者采取相应的管理措施外，对入境者也要求提供申请人不吸毒的证明，如俄罗斯。随着全球经济一体化进程加快，其他国家对入境者不可避免的将陆续出台类似的规定。为积极应对国外一些国家对我人员入境签证时涉及健康状况方面提出加做毒品检测的要求，检验检疫部门要按照国家局的要求，一方面积极进行物质和技术上的准备以应对国外对我入境人员健康检查的要求；另一方面从保护我国人民身体健康和维护社会稳定目的出发，也应采取对等的原则，对来华人员增加毒品检测的要求。
[0003] 目前国内外最广泛使用的人体内毒品成分检验的测试技术是免疫测试技术以及气相色谱法(GC)，国外也有使用气质联用检测的(GC/MS)。检索中国标准网发现，在标准中仅有公安部的关于吗啡、可卡因、海洛因等几类毒品的行业标准，主要是直接对毒品的检测，而并不是针对体液方面的检测方法。目前检验检疫部门对出入境人员尿液进行毒品检测的方法主要采用胶体金技术快速检测吗啡和甲基安非他明，假阳性率极高，而且只能检测2种毒品。因此建立一种快速、灵敏、准确的多种毒品同时检测方法变得尤为重要。[0002] 发明内容
[0004] 本发明所要解决的技术问题是针对现有技术的不足，提供一种方法针对性强、操作简单、检测速度快、检测面广、降低了测试成本，易于推广应用的尿液中33种毒品的液相色谱-串联质谱检测方法。
[0005] 本发明所要解决的技术问题是通过以下的技术方案来实现的。本发明是一种尿液中33种毒品的液相色谱-串联质谱检测方法，其特点是，其步骤如下：
[0006] (1)样品处理：称取2g 待检尿样，精确到0.01g ，置于50mL 具塞离心管中，加入10ml 乙酸乙酯，在液体混匀器上充分混匀1min ，以4000r/min离心10min ，吸取上层乙酸乙酯于试管中，再加入1mL 0.1mol/L NaOH溶液，在液体混匀器上充分混匀后，加入10ml 乙酸乙酯重复提取一次，合并两次提取液；提取液用氮气吹干仪在40℃吹干，加入1mL 体积比为30∶70的甲醇∶水涡旋后，过0.25μm 滤膜，得待测样品；
[0007] (2)测定：待测样品用液相色谱-串联四极杆质谱仪进行测定；在33种毒品的液相色谱-串联质谱分析法中，除了巴比妥类药物使用负离子模式分析之外，其余化合物都使用正离子模式分析；
[0008] 其中正离子模式的质谱条件为：电离源：ESI 源；扫描模式：正离子选择扫描模式
SRM ；电喷雾电压：2.5kV ；干燥气温度：400℃；气帘气压力：45arb ；辅助气压力：7arb ；毛细管温度：350℃；碰撞气：高纯氩气；
[0009] 负离子模式的质谱条件为：电离源：ESI 源；扫描模式：负离子选择扫描模式SRM ；电喷雾电压：2.5kV ；干燥气温度：400℃；气帘气压力：50arb ；辅助气压力：7arb ；毛细管温度：320℃；碰撞气：高纯氩气；
色谱条件为：色谱柱：Phenomenex Gemini C18 100×2.0，3μm ；柱温：室温；流速：250μL/min；进样体积：25μL ；
[0011] 正负离子模式的流动相梯度见表1和表2：
[0012] 表1. 正离子模式流动相梯度
[0010]
[0013]
[0014] 表2. 负离子模式流动相梯度
[0015]
33种毒品、监测离子对及碰撞能量见表3，其中，带*的为定量离子；
[0017] 表3 33种毒品的中英文名、保留时间及选择离子[0016]
[0018] [0019]
定性定量方法为：以各毒品的相对保留时间和各毒品的监测离子对的丰度比为定性依据，各毒品的保留时间见表3；用外标法定量，
[0021] 以各毒品的峰面积或峰高计算其在样品中的残留量。
[0022] 残留量可以按以下公式计算：[0020]
[0023]
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式中R-样本中毒品含量(μg/g)
[0025] C 标-标准样品浓度(μg/mL)
[0026] V 标-标准样品进样量(μL)
[0027] V 终-样本溶液最终定容体积(mL)
[0028] V 样-样本溶液进样体积(μL)
2[0029] S 样(H样)-注入标准溶液的峰面积(mm) 或(峰高)(mm)
2[0030] S 标(H标)-注入样本溶液的峰面积(mm) 或(峰高)(mm)
[0031] L 1-提取液的总量(mL)
[0032] L 2-提取液的取用量(mL)
[0033] W-称样量(g)。
[0034] 与现有技术相比，本发明技术方案的优选如下：
[0035] 1、本发明采用液液萃取的方法进行提取和净化，通过加入氢氧化钠溶液实现蛋白变性和调节pH 值，乙酸乙酯液液萃取进行提取。操作简单方便，净化效果好，整体回收率好，同时节省了有机溶剂和处理时间，简化了样品的前处理过程。
[0036] 2、本发明检测方法采用C18柱在线阀切换净化，串联质谱分析。由于涉及的毒品的种类较多，再进一步净化时很难选择一种固相萃取柱来达到满意的结果。通过色谱柱的在线切换进行了净化，用来降低样品对质谱仪器的污染。具体的做法就是通过质谱仪上的在线切换阀，在分析的所有化合物没有出峰之前和所有组分都已经流出色谱柱后，将色谱柱流出的溶液切换到废液中，不进质谱分析，质谱只分析组分流出这一时间段的流出液。这样组分流出前的大量的低保留的盐和杂质和强保留的弱极性的化合物都没有进到质谱的离子源，有效的降低了样品对质谱的污染。
[0037] 3、本发明选用耐碱性的色谱柱，氨水调节流动相pH 值，提高吗啡的色谱保留。
[0038] 4、本发明方法最低检出限达到1-2μg/kg。在2-100ng/mL浓度范围内，33种毒品线性良好，相关系数为0.9771-0.9995。在尿样中，大部分药物的回收在70-110％之间，少数药物的回收率在60-70％之间，RSD 小于13.5％，满足日常定量分析的需要。
[0039] 5、本发明检测方法建立了液相色谱-串联质谱法检测尿液中33种常见毒品的检测方法。一次性分析33种毒品，方法针对性强、操作简单、检测速度快、检测面广、降低了测试成本，易于推广应用。可用于出入境检验检疫、疾病控制中心、公安部门快速检测及阳性结果的确证。[0024]
具体实施方式
[0040] 以下进一步描述本发明的具体技术方案，以便于本领域的技术人员进一步地理解本发明，而不构成对其权利的限制。
[0041] 实施例1。一种尿液中33种毒品的液相色谱-串联质谱检测方法，其步骤如下：
[0042] (1)样品处理：称取2g 待检尿样，精确到0.01g ，置于50mL 具塞离心管中，加入10ml 乙酸乙酯，在液体混匀器上充分混匀1min ，以4000r/min离心10min ，吸取上层乙酸乙
6/9页酯于试管中，再加入1mL 0.1mol/L NaOH溶液，在液体混匀器上充分混匀后，加入10ml 乙酸乙酯重复提取一次，合并两次提取液；提取液用氮气吹干仪在40℃吹干，加入1mL 体积比为30∶70的甲醇∶水涡旋后，过0.25μm 滤膜，得待测样品；
[0043] (2)测定：待测样品用液相色谱-串联四极杆质谱仪进行测定；在33种毒品的液相色谱-串联质谱分析法中，除了巴比妥类药物使用负离子模式分析之外，其余化合物都使用正离子模式分析；
[0044] 其中正离子模式的质谱条件为：电离源：ESI 源；扫描模式：正离子选择扫描模式SRM ；电喷雾电压：2.5kV ；干燥气温度：400℃；气帘气压力：45arb ；辅助气压力：7arb ；毛细管温度：350℃；碰撞气：高纯氩气；
[0045] 负离子模式的质谱条件为：电离源：ESI 源；扫描模式：负离子选择扫描模式SRM ；电喷雾电压：2.5kV ；干燥气温度：400℃；气帘气压力：50arb ；辅助气压力：7arb ；毛细管温度：320℃；碰撞气：高纯氩气；
[0046] 色谱条件为：色谱柱：Phenomenex Gemini C18 100×2.0，3μm ；柱温：室温；流速：250μL/min；进样体积：25μL ；
[0047] 正负离子模式的流动相梯度见表1和表2：
[0048] 表1. 正离子模式流动相梯度
[0049]
[0050] 表2. 负离子模式流动相梯度
[0051]
33种毒品、监测离子对及碰撞能量见表3，其中，带*的为定量离子；
[0053] 表3 33种毒品的中英文名、保留时间及选择离子
[0052]
[0054]
[0055] [0056]
定性定量方法为：以各毒品的相对保留时间和各毒品的监测离子对的丰度比为定性依据，各毒品的保留时间见表3；用外标法定量，以各毒品的峰面积或峰高计算其在样品中的残留量。
[0058] 采用本实施例方法进行的检测实验。
[0059] 连云港检验检疫局于2010年对144名赴俄罗斯人员进行了毒品检测，按俄方要求检测甲基苯丙胺和吗啡，方法为胶体金免疫层析法和本实施例方法。用胶体金免疫层析法发现疑似吗啡1例，用本实施例方法进行确证，确证结果显示，尿样中不仅含有吗啡还含有可待因，吗啡含量为356μg/kg，可待因含量为4.3μg/kg。经调查该人员在体检前服用了某公司的止咳药(复方磷酸可待因) ，由于该口服液含有可待因，而可待因代谢后产生吗啡。停止服用该药2天后，用这两个方法检测结果为阴性。实验证明，本实施例方法准确可靠。[0057]