实验3 细菌增殖曲线的测定
一．实验目的：
通过细菌数量的测量了解大肠杆菌的生物特征和规律，绘制生长曲线图 二．实验原理
大多数细菌的繁殖速率很快，在合适的条件下，一定时期的大肠杆菌细胞每20min分裂一次。将一定量的细菌转入新鲜液体培养基中，在适宜的条件下培养细胞要经历延迟期、对数期、稳定期和衰亡期四个阶段。以培养时间为横坐标，以细菌数目的对数或生长速率为纵坐标作图所绘制的曲线称为该细菌的生长曲线。不同的细菌在相同的培养条件下其生长曲线不同，同样的细菌在不同的培养条件下所绘制的生长曲线也不相同。测定细菌的生长曲线，了解其生长繁殖规律，这对人们根据不同的需要，有效地利用和控制细菌的生长具有重要意义。
三．菌种与培养基
菌种：大肠杆菌
培养基：牛肉膏蛋白胨培养基 四．仪器
光电比色计，摇床，冰箱
五．操作步骤
1、将在种子培养基中培养20 h的培养液3000rpm离心10min倾去上层液，加入无菌的生理盐水，成均匀液，细胞数系109/m1。 2．取盛发酵培养液的三角瓶，各接10%菌液作种子，在摇床上相同位置34℃振荡培养，之后于培养1h、2h、3h、4h、5h、6h、7h、8h、10h、24h各取1ml的菌液。
3．用蒸馏水为空白对照，将上述菌液于波长600nm处比色，但要求消光度在0.2~0.8之间，若超过，用未接种培养液适当稀释。
六．实验结果：
1．结果
(1) 将测定的OD600值填入下表
培养时间（h） 光密度值OD600
对照
1
2
3
4
5
6
7
8
10
24
（2）以菌悬液0D值为纵坐标，培养时间为横坐标，绘出大肠杆菌培养的增殖曲线． OD600值
培养时间（h）
七．思考题
(1) 细菌生长繁殖所经历的四个时期中，哪个时期其代时最短?若细胞密度为103／m1，培 养4.5h后，其密度高达2×108／m3，请计算出其代时。
(2) 次生代谢产物的大量积累在哪个时期?根据细菌生长繁殖的规律，采用哪些措施可使 次生代谢产物积累更多？
实验3 细菌增殖曲线的测定
一．实验目的：
通过细菌数量的测量了解大肠杆菌的生物特征和规律，绘制生长曲线图 二．实验原理
大多数细菌的繁殖速率很快，在合适的条件下，一定时期的大肠杆菌细胞每20min分裂一次。将一定量的细菌转入新鲜液体培养基中，在适宜的条件下培养细胞要经历延迟期、对数期、稳定期和衰亡期四个阶段。以培养时间为横坐标，以细菌数目的对数或生长速率为纵坐标作图所绘制的曲线称为该细菌的生长曲线。不同的细菌在相同的培养条件下其生长曲线不同，同样的细菌在不同的培养条件下所绘制的生长曲线也不相同。测定细菌的生长曲线，了解其生长繁殖规律，这对人们根据不同的需要，有效地利用和控制细菌的生长具有重要意义。
三．菌种与培养基
菌种：大肠杆菌
培养基：牛肉膏蛋白胨培养基 四．仪器
光电比色计，摇床，冰箱
五．操作步骤
1、将在种子培养基中培养20 h的培养液3000rpm离心10min倾去上层液，加入无菌的生理盐水，成均匀液，细胞数系109/m1。 2．取盛发酵培养液的三角瓶，各接10%菌液作种子，在摇床上相同位置34℃振荡培养，之后于培养1h、2h、3h、4h、5h、6h、7h、8h、10h、24h各取1ml的菌液。
3．用蒸馏水为空白对照，将上述菌液于波长600nm处比色，但要求消光度在0.2~0.8之间，若超过，用未接种培养液适当稀释。
六．实验结果：
1．结果
(1) 将测定的OD600值填入下表
培养时间（h） 光密度值OD600
对照
1
2
3
4
5
6
7
8
10
24
（2）以菌悬液0D值为纵坐标，培养时间为横坐标，绘出大肠杆菌培养的增殖曲线． OD600值
培养时间（h）
七．思考题
(1) 细菌生长繁殖所经历的四个时期中，哪个时期其代时最短?若细胞密度为103／m1，培 养4.5h后，其密度高达2×108／m3，请计算出其代时。
(2) 次生代谢产物的大量积累在哪个时期?根据细菌生长繁殖的规律，采用哪些措施可使 次生代谢产物积累更多？