尿促性素工作标准品的标定
实验动物养殖06（25） 居朝娟 指导老师 沈晓鹏
摘要：尿促性素（HMG ），系从绝经期妇女尿中提取, 其中含有FSH 和LH 两种激素，主
要具有促卵泡成熟素(FSH ) 的作用和促黄体生成素(LH) 生物活性的作用。旧批号的工作标准品已经用完, 为了使尿促性素生物活性测定提供一种延续的可靠的标准物质, 特标定新批号的工作标准品。本次标定使用HMG 国家标准品标定HMG 工作标准品的效价。HMG 工作标准品适用于本公司的原料、中间品、成品、稳定性试验以及外来委托样品的测定。结果已成功标定新批号的尿促性素工作标准品的生物效价, 现已分发使用。
关键词：尿促性素; 标定; 标准品; 卵巢; 精囊 1. 实验日期
2008.12～2009.05
2. 实验用具
pH 计﹑天平﹑烧杯﹑移液器﹑震荡器﹑手术刀剪﹑滤纸﹑称量瓶﹑离心管﹑针管﹑试管﹑不锈钢勺﹑枪头。
3. 实验目的
由于本公司旧批号工作标准品已经用完需要建立新的生物测定用标准品体系，以提高测定的准确度。当一旦国家标准品更换或引进其他国家标准品的时候，可用工作标准品进行标定。
4. 工作标准品的批号及来源
5. 使用的法定标准品的名称与批号
6. 实验动物 无特定病原体SD 大鼠, 日龄19～22天, 由上海必凯实验动物中心提供。 7. 实验方法及步骤
7.1 FSH生物效价测定方法: 幼龄雌性大鼠卵巢增重法
7.1.1 溶媒的配制：0.9％氯化钠。0.1％牛血清蛋白，每ml 20单位的HCG 溶液，用1mol/L
氢氧化钠调节pH 为7.2±0.2。
7.1.2 标准品的配制：用配好的溶媒按效价稀释至每ml 含45.3单位FSH ，取2ml 稀释至
20ml 使之成为高剂量；取1ml 稀释至20ml 使之成为中剂量；取0.5ml 稀释至20ml 使之成为低剂量。该剂量使低剂量组卵巢应明显增重，高剂量组增重不致达到极限。
7.1.3 样品的配制：用溶媒按估计效价稀释至与标准品一样的浓度，高中低剂量和标准品
的一致。
7.1.4 注射：每鼠大致每日相同的时间皮下注射0.5ml ，第一天大腿左侧进一针，第二天
大腿右侧进一针，第三天注入尾根部，连续给药三天。每次注射后更换垫料。
7.1.5 R值的计算：第4日上午按上述给药顺序处死动物，称取每鼠体重，解剖，取出卵
巢。剥离附着的脂肪等组织。用滤纸吸干卵巢周围的水分并立即称重。
Y=总卵巢重(mg)/总体重（g ）×10
R=D×antilogIV/W D=1 I=logr V=1/3×(T高+T中+T低－S 高－S 中－S 低) W=1/4（T 高－T 低+S高－S 低）
7.1.6 本法的可信限率不得大于45％，测定结果为标示量的80％-125％。
7.2 LH生物效价测定方法：幼龄雄性大鼠精囊增重法
7.2.1 溶媒的配制：0.9％氯化钠。0.1％牛血清蛋白，用1mol/L氢氧化钠调节pH 为7.2
±0.2。
7.2.2 标准品的配制：用配好的溶媒按效价稀释至每ml 含120单位LH ，取2ml 稀释至20ml
使之成为高剂量；取1ml 稀释至20ml 使之成为中剂量；取0.5ml 稀释至20ml 使之成为低剂量。该剂量使低剂量组精囊应明显增重，高剂量组增重不致达到极限。
7.2.3 样品的配制：用溶媒按估计效价稀释至与标准品一样的浓度，高中低剂量和标准品
的一致。
7.2.4 注射：每鼠大致每日相同的时间皮下注射0.5ml ，第一天大腿左侧进一针，第二天
大腿右侧进一针，第三天第四天重复一、二天进针顺序。每次注射后更换垫料。
7.2.5 R值的计算：第5日上午按上述给药顺序处死动物，称取每鼠体重，解剖，取出精
囊。剥离附着的脂肪等组织。用滤纸吸干精囊周围的水分并立即称重。
Y=总精囊重(mg)/总体重（g ）×100
R=D×antilogIV/W D=1 I=logr V=1/3×(T高+T中+T低－S 高－S 中－S 低) W=1/4（T 高－T 低+S高－S 低）
7.2.6 本法的可信限率不得大于45％，测定结果为标示量的80％-125％。
8．实验结果（见附录）
附录1：HMG 工作标准品A043 FSH标定结果
附录2：HMG 工作标准品A043 LH标定结果
9．异常情况处理
在实验过程中，操作人员应严格按照本计划进行，当实验过程中出现任何异常情况应及时与部门经理报告。本次标定的剂量不是一层不变的可能会随着季节的变化老鼠来源的改变做适当的调整。
讨论
生物测定中, 凡是量反应平行线实验设计, 我们认为必需做空白对照组, 目的是可以了解低剂量引起的反应值是否达到有效作用的剂量, 这样可以更好地来设计实验的高、中、低的剂量范围。在LH 的生物活性测定中, 经常也会出现二次曲线和反向二次曲线的显著情况, 本人认为主要是剂量设计不合理, 造成低剂量、中剂量的反应值分不开或分的不如中剂量和高剂量的反应值开, 如是这样的情况, 应该往高调整高剂量的值, 我们使用12、6、3IU/ml鼠的剂量反应值就比较理想。
参考文献
[ 1 ] 国家药典委员会编，中国药典[S]二部, 化学工业出版社，2005, 附录, 106。 [ 2 ] 冷炜主编，药品的生物检定[M]，北京:气象出版社,1995,114。
[ 3 ] 周海钧, 申蕴如, 朱承伟等，生物检定统计方法[M]，北京: 人民卫生出版社, 1988。 [ 4 ]中国药品标准2007年第8卷第4期第２版。
[ 5 ]杨纪珂编，数理统计方法在医学科学中的应用，上海科学技术出版社，1963。
致谢
真挚的感谢指导老师沈晓鹏老师指导我顺利完成论文，并不时的讨论并指点我正确的方向，其次也要感谢上海天伟生物医药公司的大力支持使我顺利完成本次实验，也非常感谢所有曾经教过我们实验动物养殖班的各科老师，以及所有关心过我们的老师，你们辛苦了！你们的谆谆教诲我们永远铭记在心！
上来大学后，跟各位老师、各位同学都有很多的接触；他们在很多方面都给以我很大的帮助和启发。在这里，很难一一罗列出来，只能是挑选其中的几片树叶来映射出我的那堆已经变黄的叶子；很多人说树叶变黄是因为缺少养分；但是对我的那几片树叶来说，它的黄意味着我就要离开，意味着我对学校的一切一切的珍惜；我会把它们做成标本，然后把它们夹在《人生》这本书中，让树叶的脉络和那乏陈的文字相映成辉，与时间交叉成一道亮丽的风景。
尿促性素工作标准品的标定
实验动物养殖06（25） 居朝娟 指导老师 沈晓鹏
摘要：尿促性素（HMG ），系从绝经期妇女尿中提取, 其中含有FSH 和LH 两种激素，主
要具有促卵泡成熟素(FSH ) 的作用和促黄体生成素(LH) 生物活性的作用。旧批号的工作标准品已经用完, 为了使尿促性素生物活性测定提供一种延续的可靠的标准物质, 特标定新批号的工作标准品。本次标定使用HMG 国家标准品标定HMG 工作标准品的效价。HMG 工作标准品适用于本公司的原料、中间品、成品、稳定性试验以及外来委托样品的测定。结果已成功标定新批号的尿促性素工作标准品的生物效价, 现已分发使用。
关键词：尿促性素; 标定; 标准品; 卵巢; 精囊 1. 实验日期
2008.12～2009.05
2. 实验用具
pH 计﹑天平﹑烧杯﹑移液器﹑震荡器﹑手术刀剪﹑滤纸﹑称量瓶﹑离心管﹑针管﹑试管﹑不锈钢勺﹑枪头。
3. 实验目的
由于本公司旧批号工作标准品已经用完需要建立新的生物测定用标准品体系，以提高测定的准确度。当一旦国家标准品更换或引进其他国家标准品的时候，可用工作标准品进行标定。
4. 工作标准品的批号及来源
5. 使用的法定标准品的名称与批号
6. 实验动物 无特定病原体SD 大鼠, 日龄19～22天, 由上海必凯实验动物中心提供。 7. 实验方法及步骤
7.1 FSH生物效价测定方法: 幼龄雌性大鼠卵巢增重法
7.1.1 溶媒的配制：0.9％氯化钠。0.1％牛血清蛋白，每ml 20单位的HCG 溶液，用1mol/L
氢氧化钠调节pH 为7.2±0.2。
7.1.2 标准品的配制：用配好的溶媒按效价稀释至每ml 含45.3单位FSH ，取2ml 稀释至
20ml 使之成为高剂量；取1ml 稀释至20ml 使之成为中剂量；取0.5ml 稀释至20ml 使之成为低剂量。该剂量使低剂量组卵巢应明显增重，高剂量组增重不致达到极限。
7.1.3 样品的配制：用溶媒按估计效价稀释至与标准品一样的浓度，高中低剂量和标准品
的一致。
7.1.4 注射：每鼠大致每日相同的时间皮下注射0.5ml ，第一天大腿左侧进一针，第二天
大腿右侧进一针，第三天注入尾根部，连续给药三天。每次注射后更换垫料。
7.1.5 R值的计算：第4日上午按上述给药顺序处死动物，称取每鼠体重，解剖，取出卵
巢。剥离附着的脂肪等组织。用滤纸吸干卵巢周围的水分并立即称重。
Y=总卵巢重(mg)/总体重（g ）×10
R=D×antilogIV/W D=1 I=logr V=1/3×(T高+T中+T低－S 高－S 中－S 低) W=1/4（T 高－T 低+S高－S 低）
7.1.6 本法的可信限率不得大于45％，测定结果为标示量的80％-125％。
7.2 LH生物效价测定方法：幼龄雄性大鼠精囊增重法
7.2.1 溶媒的配制：0.9％氯化钠。0.1％牛血清蛋白，用1mol/L氢氧化钠调节pH 为7.2
±0.2。
7.2.2 标准品的配制：用配好的溶媒按效价稀释至每ml 含120单位LH ，取2ml 稀释至20ml
使之成为高剂量；取1ml 稀释至20ml 使之成为中剂量；取0.5ml 稀释至20ml 使之成为低剂量。该剂量使低剂量组精囊应明显增重，高剂量组增重不致达到极限。
7.2.3 样品的配制：用溶媒按估计效价稀释至与标准品一样的浓度，高中低剂量和标准品
的一致。
7.2.4 注射：每鼠大致每日相同的时间皮下注射0.5ml ，第一天大腿左侧进一针，第二天
大腿右侧进一针，第三天第四天重复一、二天进针顺序。每次注射后更换垫料。
7.2.5 R值的计算：第5日上午按上述给药顺序处死动物，称取每鼠体重，解剖，取出精
囊。剥离附着的脂肪等组织。用滤纸吸干精囊周围的水分并立即称重。
Y=总精囊重(mg)/总体重（g ）×100
R=D×antilogIV/W D=1 I=logr V=1/3×(T高+T中+T低－S 高－S 中－S 低) W=1/4（T 高－T 低+S高－S 低）
7.2.6 本法的可信限率不得大于45％，测定结果为标示量的80％-125％。
8．实验结果（见附录）
附录1：HMG 工作标准品A043 FSH标定结果
附录2：HMG 工作标准品A043 LH标定结果
9．异常情况处理
在实验过程中，操作人员应严格按照本计划进行，当实验过程中出现任何异常情况应及时与部门经理报告。本次标定的剂量不是一层不变的可能会随着季节的变化老鼠来源的改变做适当的调整。
讨论
生物测定中, 凡是量反应平行线实验设计, 我们认为必需做空白对照组, 目的是可以了解低剂量引起的反应值是否达到有效作用的剂量, 这样可以更好地来设计实验的高、中、低的剂量范围。在LH 的生物活性测定中, 经常也会出现二次曲线和反向二次曲线的显著情况, 本人认为主要是剂量设计不合理, 造成低剂量、中剂量的反应值分不开或分的不如中剂量和高剂量的反应值开, 如是这样的情况, 应该往高调整高剂量的值, 我们使用12、6、3IU/ml鼠的剂量反应值就比较理想。
参考文献
[ 1 ] 国家药典委员会编，中国药典[S]二部, 化学工业出版社，2005, 附录, 106。 [ 2 ] 冷炜主编，药品的生物检定[M]，北京:气象出版社,1995,114。
[ 3 ] 周海钧, 申蕴如, 朱承伟等，生物检定统计方法[M]，北京: 人民卫生出版社, 1988。 [ 4 ]中国药品标准2007年第8卷第4期第２版。
[ 5 ]杨纪珂编，数理统计方法在医学科学中的应用，上海科学技术出版社，1963。
致谢
真挚的感谢指导老师沈晓鹏老师指导我顺利完成论文，并不时的讨论并指点我正确的方向，其次也要感谢上海天伟生物医药公司的大力支持使我顺利完成本次实验，也非常感谢所有曾经教过我们实验动物养殖班的各科老师，以及所有关心过我们的老师，你们辛苦了！你们的谆谆教诲我们永远铭记在心！
上来大学后，跟各位老师、各位同学都有很多的接触；他们在很多方面都给以我很大的帮助和启发。在这里，很难一一罗列出来，只能是挑选其中的几片树叶来映射出我的那堆已经变黄的叶子；很多人说树叶变黄是因为缺少养分；但是对我的那几片树叶来说，它的黄意味着我就要离开，意味着我对学校的一切一切的珍惜；我会把它们做成标本，然后把它们夹在《人生》这本书中，让树叶的脉络和那乏陈的文字相映成辉，与时间交叉成一道亮丽的风景。