CNAST0458水产品中恩诺沙星、环丙沙星
检测能力验证计划结果报告
中国合格评定国家认可委员会威海出入境检验检疫局检验检疫技术中心
二OO九年十一月
组织机构：中国合格评定国家认可委员会
能力验证负责人：翟培军联系人：何平王腊梅
联系地址：北京市崇文区南花市大街8号邮政编码：100062
联系电话：010-[1**********]-67105289传真：010-67105053/67105055
实施机构：威海出入境检验检疫局检验检疫技术中心计划负责人：杨丽君联系人：时文春邮政编码：264205
联系电话：[***********]2786传真：0631-5961661
E-mail：[email protected]统计专家：卢行安传真：0631-5961661技术专家：牟峻
徐成钢
联系电话：[***********]2786传真：0631-5961661
时文春
丛伟红
徐成钢
联系地址：威海市大庆路检验检疫局技术中心
联系电话：[***********]8278
目
录
一、前言
二、本次计划的特点
三、统计分析的设计及能力评价原则四、统计处理结果及能力评价五、技术分析和建议六、附录
附录A实验室的检测结果和统计处理A-1实验室检测结果和统计处理结果A-2实验室Z比分数柱状图
附录B样品制备和均匀性/稳定性检验B-1样品制备报告B-2样品均匀性评价报告B-3样品稳定性评价报告附录C相关文件
C-1被测物品接收状态确认表C-2作业指导书C-3结果报告单
C-4能力验证计划结果通知单附录D参考文献
34678
[1**********]5
3031333434
一、前言
本报告是对CNAST0458《水产品中恩诺沙星、环丙沙星检测》能力验证计划结果的总结，由威海出入境检验检疫局检验检疫技术中心负责起草，中国合格评定国家认可委员会（CNAS）秘书处审核并批准发布。
CNAST00458《水产品中恩诺沙星、环丙沙星检测》能力验证计划由CNAS组织，威海出入境检验检疫局检验检疫技术中心负责协调及实施。
CNAS依据ISO/IEC导则43：1997的要求运作能力验证计划。
CNASRL02:2007《能力验证规则》规定申请认可和获准认可的实验室必须通过参加能力验证活动（包括CNAS组织实施或承认的能力验证计划、实验室间比对和测量审核）证明其技术能力。只有在能力验证活动中表现满意，或对于不满意结果能证明已开展了有效纠正措施的实验室，CNAS方受理或予以认可；对于未按规定的频次和领域参加能力验证的获准认可实验室，CNAS将采取警告、暂停、撤销资格等处理措施。对参加了CNAS组织及其承认的能力验证活动且有稳定满意表现的机构，在CNAS的各类评审中可适当根据情况简化相关项目的能力确认过程。
获CNAS认可的实验室，在参加能力验证中出现不满意结果时，CNAS要求其立即停止在相关项目的证书/报告中使用CNAS的认可标识，并按其体系文件规定程序实施有效的纠正措施。实验室只有将实施纠正措施的记录以及纠正措施有效性证明材料在规定的期限内报CNAS确认后，方可恢复使用认可标识。
如果实验室的结果虽为不满意，但仍符合认可项目依据标准所规定的判定要求，实验室可向CNAS提出，经CNAS确认后，可恢复使用认可标识，但实验室仍需采取相关改进措施；对于出现可疑结果的机构，CNAS建议其采取相应的自查措施。
二、本次能力验证的特点
1、计划的目的和意义
本次能力验证计划的主要目的是为了考察相关实验室进行喹诺酮类药物(环丙沙星和恩诺沙星)残留检测的能力，对提高实验室水产品兽药残留检测技术水平，促进食品安全检测有重要意义。
能力验证计划是CNAS判定实验室能力的重要技术手段，也是实验室的重要的外部质量保证手段，同时，参加能力验证计划获得满意的结果，还能增加客户及相关方对实验室出具可靠数据的信心。2、参加实验室的范围
本次能力验证参加实验室均是自愿参加，共计有71家实验室参加了本次计划，有60家单位是认可实验室，另有11家为非认可实验室，41家参加项目为认可项目，30家为非认可项目，非认可实验室及非认可项目参加实验室所占比例较高，表明准备申请实验室认可和扩项认可的实验室较多，说明整个社会对实验室认可工作的重视程度正在加强；参加实验室包括产品质量监督和检验检验检疫技术中心（实验室）、专业的社会检测机构（公司）、药检所及企业质量检测中心（实验室）等。来自东南沿海经济发达地区的实验室有63家，中西部地区参加实验室为8家，表明检测技术实力与经济发展水平相适应的特点；同时专门从事检测服务的机构（包括跨国检测机构）明显增多，共14家，表明检测市场化的逐步增强，检测市场的竞争会更加激烈；企业质检部门实验室22家，所占比例较高，表明企业对质量控制的重视程度显著提高。本次能力验证活动的实验室地域分布见表2。
表1参加实验室专业性质分类情况
质量监督检验检验检疫部门实验室专业检测机构实验室
24家33.8%14家19.7%
企业质检部门实验室其他实验室
22家11家
31.0%15.5%
表2参加能力验证实验室地区分布一览表
省、自治区、直辖市实验室数量山东福建浙江辽宁
天津
省、自治区、直辖市广东上海河北北京
其他
实验室数量18532
8
20643
2
3、计划测试项目和要求
1）本次能力验证测试样品为冻干鲤鱼肉粉，其中测试项目为恩诺沙星、环丙沙星含量。
2）样品采用不透光塑料瓶盛装样品，每瓶约8.0g，密封包装。样品经分装编号后，随机向每个参加实验室发放，检测样品通过邮局以特快方式邮寄。参加实验室按作业指导书的要求，对样品中每个测试项目测定双份，并将测定结果填写在结果报告单中，作业指导书和结果报告单均随样品发送给每个参加实验室（附录C）。
3）检验的样品由威海出入境检验检疫局检验检疫技术中心制备，并由制备机构出具样品均匀性评价报告和稳定性评价报告（附录B）。稳定性报告表明，制备的样品在能力验证计划期间各个检验项目相对稳定，均匀性评价报告表明，制备的样品充分均匀，从而确保能力验证过程中出现的离群值不是由样品的差异及不稳定所致。
4）出于保密的需要，对每个参加实验室赋予了一个代码。在本报告中，凡说明参加实验室的检测结果和能力评价时均以代码表示，结果报告将发给每一个提交最终结果的实验室。4、计划日程
本次能力验证计划从2009年4月份开始设计方案，9月11日向参加实验室分发样品，9月25日回收实验室检测结果，随后对结果进行汇总、分析，2009年11月底完成结果报告。本次能力验证结果的统计分析和技术分析由计划小组的技术专家和统计专家完成。
三、统计分析的设计及能力评价原则
本次能力验证的评价依据CNAS-GL02：2006《能力验证结果的统计处理和能力评价指南》执行。
对本次能力验证计划实验室的检测结果，按下式计算Z值：Z=(x-X)/σ
式中：x-实验室测试结果；X-指定值；
σ-变动性度量值（目标标准偏差）。
本次能力验证计划统计分析采用稳健（Robust）技术处理，即采用稳健统计的中位值作为指定值，标准化四分位距（NIQR）为变动性度量值（目标标准偏差）计算各实验室结果的Z比分数（Z值）。
本次能力验证计划涉及的统计量有结果数、中位值、标准化四分位距（NIQR）、稳健的变异系数（CV）、Z比分数、最小值、最大值和极差等。各统计量的意义及相关计算方法参见CNASGL02:2006《能力验证结果的统计处理和能力评价指南》。
本次能力验证计划以Z比分数评价实验室的结果，即：∣Z∣≤2为满意结果；2＜∣Z∣＜3为有问题结果；∣Z∣≥3为不满意结果（离群值）。
为了清晰表示各实验室参加能力验证计划的结果，将Z值按大小顺序排列作柱状图（附录A），每一个柱条标有该实验室的代码。从该柱状图上，每一个实验室很容易将其结果与其他参加实验室进行比较，了解其结果在本次计划中所处的水平。
四、统计处理结果及能力评价
本次能力验证试验共有71家实验室，其中按要求返回结果的有70家实验室，其中，参加报告环丙沙星含量的实验室有70家，报告恩诺沙星的含量的实验室69家；007号实验室由于仪器故障未能上报结果。
采用稳健（Robust）统计技术对70家实验室提交的数据进行了统计处理，实验室检测结果和统计处理数据见附录A-1。
结果满意的实验室有62个，占88.6%；结果有问题的实验室8个，占11.4%；结果不满意的实验室2个，占2.9%。不满意、存有问题的实验室情况统计汇总见表2。
1检测项目的稳健统计参数表3-3-1统计参数结果总数中位值Q1Q3IQRNIQR
恩诺沙星[**************].3
环丙沙星70115.5102.2512219.7514.612.732388.1234.9
稳健的变异系数（CV）8.0极大值极小值极差
835139696
表3-2不满意和有问题结果实验室情况统计汇总
恩诺沙星
∣Z∣≥32＜∣Z∣＜3
002；054
环丙沙星
002；054
031，040,066,067,012,052
五、技术分析和建议
为进行充分的技术分析，现将本次能力验证所设计的检测标准、主要前处理方法及主要检测仪器汇总如下：
表4-1检测标准使用情况
标准号GB/T20366-2006
实验室代码
002,008,013,014,016,020,027,029,031,034,038,039,046,047,048,055,063,064,070
GB/T20751-2006GB/T21312-2007
018,021,030,035,040,043,045,049,051,056,062,067004,011,012,019,024,061,065
农业部公告[2003]003,005,006,054,057,060,066第236号SN/T1751.2-2007
028,041,068
农业部783号公告-022,037,053,058,0692-2006
农业部1025号公告-023,044,052,07114-2008
农业部781号公告-015,0176-2006其他标准
001,009,010,025,026,032,033,036,042,050,059
备注：检测标准号及名称
GB/T20366-2006:动物源食品中喹诺酮类药物残留的测定
SN/T1751.2-2007:进出口动物源食品中喹诺酮类药物残留量检测方法第2部分：液相色谱-质谱/质谱法
GB/T20751-2006:鳗鱼及制品中十五种喹诺酮类药物残留量的测定液相色谱串联质谱法
GB/T21312-2007:动物源性食品中14种喹诺酮药物残留检测方法液相色谱-质谱质谱法
农业部公告[2003]第236号:动物源食品中恩诺沙星.环丙沙星残留量检测方法高效液相色谱法
农业部1025号公告-14-2008:动物源食品中喹诺酮类药物残留检测色谱法
农业部783号公告-2-2006:水产品中诺氟沙星.盐酸环丙沙星.恩诺沙星残留量的测定
其他标准：包括实验室方法、地方标准及引用的国外标准，标准名称可能推知实验室名称，在此不具体罗列。
高效液相
表4-2主要前处理方法
磷酸缓冲盐提取003，005，006，015，017，022，023,054，056，057，060，
066，071
EDTA-Mcllvaine004，012，019，024，061，065缓冲液
酸化乙腈提取
020,021，025，026,027，028，029，030,031，032,033，044,045，046，047，048，049，050，051，052，
053,055,058,059，062，063，064，067，068，069，070
固相萃取净化
003，004，005，006，011，012，014，015，017，018，019，021，022，023,024，030,035，038，040,045，054，056，057，058,060，061，065，066，071
表4-3主要检测仪器
001，003，005，006，010，015，017，018，022，
液相色谱仪
053，054，057，058,059，060，066，069，071液相色谱串联四极杆质谱仪
034，038，039，040，041，042,043，045，046，047，048，051，055，056，061，062，063，064，065，067，068，070
本次能力验证活动达到预期的效果，现将产生偏差的可能原因分析归纳如下：1.样品前处理：
样品前处理步骤对检测结果具有重要影响。提取是否完全及操作的准确性都是保证检测结果准确的重要因素。检测过程中多家实验室反映加水提取与不加水提取检测差异很大，我们前期测试表明不加水提取只有加水润湿提取的20-30%（见表4-4），因此鱼粉在提取前须先用适量的水润湿（特别是采用酸化乙腈提取时），否则提取不完全，提取要进行充分的均质并防止交叉污染，均质提取，且采用适量的提取液淋洗刀头，试验所使用的器皿都必须采用超声清洗，然后按蒸馏水、去离子水的顺序反复冲洗干净；提取净化完全的样品溶液应是无色或微黄色。
参加本次能力验证的实验室有25家采取固相萃取的方式净化样品，采用固相萃取方式净化时应注意：不同的固相萃取柱淋洗、洗脱所使用的溶剂量会有较大的差异，特别是洗脱液的用量会直接影响回收率和检测灵敏度，不同生产商、不同批次的固
相萃取柱都应在检测前作加标回收实验，以确定适合的溶剂用量。不同的定容溶液对于测定也会产生影响，例如，用乙酸铵定容的测定结果比用甲酸的测定结果定量离子丰度大25%左右，但在基质存在的情况下盐类易结晶，可能导致堵塞，特别是LC-MS-MS的电喷雾针及毛细管，建议标准使用液和处理好的样品都采用流动相定容。
表4-4提取溶剂对检测结果的影响（含量单位ug/kg）
样品编号
加水润
环丙沙星
湿提取
不加水润29.0湿提取加水润
恩诺沙星
湿提取不加水润136湿提取
2.不同仪器分析的影响。
本次能力验证涉及的主要检测仪器有高效液相色谱仪（HPLC）配荧光检测器和液相色谱串联四极杆质谱仪（LC-MS-MS）两种。有28家采用液相色谱法（HPLC）检测，有42家采用液相色谱串联四极杆质谱仪法(LC-MS-MS),实验表明HPLC法和LC-MS-MS法检测对本次能力验证检测项目的结果没有显著差异，HPLC法测定结果比LC-MS-MS法检测结果略低（见表4-5），但两种方法的检测对最终统计结果不会造成显著影响。应当注意的是不同仪器的线性范围是不一样的，液相色谱的线性范围较宽，质谱的相对较窄，同时不同品牌的质谱线性范围也有较大差异，线性范围窄对高浓度待测物的定量产生明显影响,当检测液稀释时对应的仪器响应值不成比例，即表明检测液的浓度已经超出仪器响应的线性范围，应当考虑将检测液进一步稀释，对本
190.0
296.0
398.6
4101
596.3
698.3
30.228.530.538.230.2
[***********]
[**************]
次能力验证而言，0.5g鱼粉提取后最终定容体积2-6ml为宜。
3.回收率的影响LC-MS-MS检测灵敏度较高，更易受到流动相、基体等的干扰影响。同样浓度的标准溶液，在基质存在时响应值有一定差异，特别是当检测物含量较低时差异会更大。随着基体量的增加，基体干扰成增加趋势，其中普通鲤鱼肉的2.5g样品与鲤鱼肉冻干粉0.5g样品的基质效应相近（见表4-5）。同时我们前期测试表明，环丙沙星和恩诺沙星工作液稳定性较差，响应值8小时即可显著降低，但在基质溶液中很稳定，响应值24小时基本不变，因此为消除基体干扰及标准溶液不稳定因素，须采用添加回收校正可得到满意的测定结果；另外有部分实验室回收率较高（大于130%），可能是标准溶液从冷冻冷藏状态下取出，与室温平衡时间太短，实际添加量远大于计算添加量。
表4-5液相与液质检测中位值的比较（含量单位ug/kg）
环丙沙星
液相色谱法111.5
液相色谱串两种方法联质谱法116.5
合并统计115.5
液相色谱法481
恩诺沙星液相色谱串联质谱法502
两种方法合并统计492
以上三点均会对测定结果产生影响，如可有效的降低影响，可得到满意的测定结果。
另外通过对养殖过程中鱼体两种沙星的浓度监控检测发现，环丙沙星和恩诺沙星在肌肉中分布的浓度约为1：4~1：5的关系，因此这一比例关系可以为检测结果的正确性提供客观依据。
表4-5鲤鱼基质对回收率的影响
（环丙沙星添加量100ug/kg；恩诺沙星添加量500ug/kg）
样品编号环丙沙星恩诺沙星
1
293.2
380.5
483.0
586.0
687.3
0.5g鱼94.1粉添加2.5g鱼96.2肉添加0.5g鱼94.6粉添加2.5g鱼94.5肉添加
90.983.276.482.786.0
95.184.488.499.898.8
92.384.483.697.697.6
六、附录A实验室的检测结果和统计处理
A-1实验室检测结果和统计处理结果实验室编号
444001
440758.3002
761.5003
未参加
-------------91
835
8.73
263.992.1
80.2
113
-0.17
85.5
517
0.64
124272.4
83
323
14.17
125
95.9
130
0.99
检测结果回收率报告结果
Z值
（ug/kg)
%
（ug/kg)
（ug/kg)
%
（ug/kg)
检测结果回收率
报告结果
Z值
恩诺沙星
环丙沙星
88.7
439004
458378.5005
388.9408006
382007
未报告439.3008
423.8402009
411377.2010
386430011
436497012
484551013
568278014
425
99.2
104
448
-1.12
9982.9
82.4
466
-0.66
84.388.8
84.5-----468-------0.61
79.4----未报告136
89.1
484
-0.20
130.683.3
82.7
492
0.00
79.171.06
89.7
425
-1.71
76.3769.4
90
481
-0.28
65.9166
95.7
513
0.53
15384.1
107.6
530
0.97
88.2113
70
502
0.25
107
98
112
-0.24
80.6
107
-0.58
103
155
2.70
59.2
114
-0.10
76.7
96.1
-1.33
78.2
104
-0.79
96.3
138
1.54
------------71.7
117
0.10
71.5
117
0.10
100.5
99.1
-1.12
015
470371016
407487017
493401018
419497019
499424020
417357021
361368022
364479023
474407.9024
412.5618025
656
98
481
-0.28
104104
80.7
482
-0.25
111109
103
476
-0.41
10569.7
85.5
481
-0.28
82.8124
90
553
1.55
117103
100
420
-1.83
10368.2
77
466
-0.66
68.392
74.8
488
-0.10
91.197.6
99.2
480
-0.31
99.895.48
87
471
-0.53
92.51107
154
414
-1.99
99.1
98.7
104
-0.79
80.3
117
0.10
98
101
-0.99
78.7
116
0.03
68
100
-1.06
100
103
-0.85
98
123
0.51
71.5
107
-0.58
88
122
0.44
84.3
127
0.79
82
119
0.24
026
392.5470027
481303028
321459029
456460030
457466.6031
480.8349032
357558033
579515034
532385035
387444036
430
73
534
1.07
73.557.1
96.3
494
0.05
54.456
61
511
0.48
5551.9
84
545
1.35
57.379.5
83.5
549
1.45
78.176.44
78.08
607
2.93
67.1369.4
69.5
508
0.41
78.5149
107.5
529
0.94
12499
103
508
0.41
10377.4
80
484
-0.20
78.567.4
88
497
0.13
68.9
66
103
-0.85
66.4
118
0.17
93.6
108
-0.51
107.5
127
0.79
67.1
110
-0.38
77.91
92.1
-1.60
73.2
108
-0.51
56.4
96.8
-1.28
49.3
113
-0.17
58.3
95.6
-1.36
72
98.8
-1.14
037
399509038
507616039
597407040
396463041
479510042
526651043
576403.7044
380.8387045
386463046
474392.8047
399.2
77
521
0.74
79102
91
558
1.68
10190.9
125
485
-0.18
87.5120
100
402
-2.29
11667.2
90
524
0.81
75.3125
88.7
518
0.66
125131
112
546
1.37
12277.48
88.14
445
-1.20
73.1296.9
84.2
460
-0.81
92.7104
98.4
476
-0.41
10360
80.1
494
0.05
63.6
63.1
97.9
-1.20
84.9
122
0.44
80.1
118
0.17
80.36
93.7
-1.49
110
115
-0.03
85.4
125
0.65
71
102
-0.92
100
118
0.17
91.4
97.6
-1.22
88
116
0.03
71
110
-0.38
048
473420049
433556050
553438051
433462052
464509053
52599.4054
102305055
371385056
355.5395057
388371058
390
100
475
-0.43
10474.8
93.3
457
-0.89
75.9121
97.35
570
1.99
112133
100
436
-1.43
135119
92
503
0.28
121102
100
517
0.64
95.8162
72.1
139
-8.98
164115
65
520
0.71
116125.5
72.3
512
0.51
121.580.5
86
455
-0.94
78.1104
76.2
499
0.18
107
74.3
142
1.81
79
100
-1.06
98.3
126
0.72
86.7
133
1.20
70.1
230
7.82
100
98.9
-1.13
81
148
2.22
100
134
1.26
92.52
126
0.72
85.6
88.1
-1.87
100
114
-0.10
059
422.8464060
454503.1061
501.5353062
359513063
488423064
425472065
516373.6066
355.2601.2067
646.2574068
612361069
358
93
462
-0.76
86.1105
87.8
523
0.79
97.9131.1
100
502
0.25
130.383.2
80.8
441
-1.30
80114
90
556
1.63
11495.3
86.1
492
0.00
96.5114
94.9
521
0.74
12191.7
90
405
-2.21
86.5539.9
105.6
590
2.49
45134
115
516
0.61
10076
77.6
464
-0.71
72.3
70.6
105
-0.72
99.7
117
0.10
46.8
90.7
-1.69
87.5
102
-0.92
93.5
126
0.72
81.4
118
0.17
96.5
118
0.17
69.9
117
0.10
100
131
1.06
75.5
121
0.38
89
98
-1.20
466070
485375071
379
80.8
467
-0.64
100
476
-0.41
121
100
123.589.9
79.1
93.9
116
0.03
122
0.44
实验室Z比分数柱状图
21
22
附录B样品制备及样品的稳定性和均匀性检验（依据CNAS-GL03）
B-1样品制备报告一、样品来源
本次能力验证样品为1个，样品通过养殖添加得到,购买适量的活体鲤鱼,先通过监控检测确认是否含有恩诺沙星和环丙沙星,根据预先设计的含量值,添加适当浓度的恩诺沙星、环丙沙星进行养殖，并间隔适当的时间对鱼体内目标物浓度进行监控检测，当目标检测物浓度适合并相对稳定时，将鱼捕捞，取肌肉部分。二、样品制备
把鱼肉搅碎、混匀制成鱼糜（20kg），冻干粉碎混匀制成肉粉（约4kg），每份8g分装，进行均匀性稳定性试验。三、实验样品编号规则
样品共分装397份，按从小到大的顺序编号，均检和稳检以及发放样品时均随机抽取。样品均匀性和稳定性检测使用115份，发放样品71份，还剩余211份。B-2均匀性检验
一、依据CNAS-GL-03：2006《能力验证样品均匀性和稳定性评价指南》，采用F检验法对样品进行均匀性检验。
二、从分装好的样品随机抽取10个样品，称取0.50克，加2.5克水还原，依据GB/T20366-2006《动物源产品中喹诺酮类残留量的测定》进行检测，每个样品在同样的条件下测试2次。样品的均匀性检验采用单因子方差统计分析进行评定。
样品均匀性检验结果（μg/Kg）如下：环丙沙星
样本号
测定1
[1**********]总平均值
106.7110.7115.6104.1112.3114.8113.1142.6115.6137.7114
测定2111.5104.1105.8107.4104.9109.0113.1122.1119.7116.4
测定1526.0533.1591.2500.6558.0580.1558.0629.8569.1585.6558
测定2558.0531.5532.0540.9529.8538.1558.0580.1569.1585.6
恩诺沙星
样品间自由度为9，样品内自由度为10，在约定的自由度水平α=0.05的显著水平下，计算临界值Fα(9、10)，计算结果与查表得到的F临界值比较；若计算值小于F临界值，则表明在α=0.05的显著水平下，样品中个组份（环丙沙星、恩诺沙星）是均匀的，反之，则不均匀。
样品中的环丙沙星单因子方差分析结果
方差来源样品间样品内
自由度
910
平方和1404.864576.4579
均方156.09657.64579
F2.7078477
F临界值F0.05(9,10)=3.02，F值计算结果为2.71，表明在0.05显著性水平时，样品中环丙沙星的含量是均匀的。
样品中的恩诺沙星单因子方差分析结果
方差来源样品间样品内
自由度
910
平方和11219.745590.183
均方1246.638559.0183
F2.2300487
F临界值F0.05(9,10)=3.02，F值计算结果为2.23，表明在0.05显著性水平时，样品中恩诺沙星的含量是均匀的。B-3稳定性检验一、稳定性检验设计
依据CNAS-GL03：2006《能力验证样品均匀性和稳定性评价指南》，采用平均值一致性检验法评价样品的稳定性检验。按下式计算t值：
t=
x2−x1
−2+−2+
式中：x1—第一次检验测量数据的平均值；
x2—第二次检验测量数据的平均值；s1—第一次检验测量数据的标准偏差；s2—第二次检验测量数据的标准偏差；n1—第一次检验测量的测量次数；n2—第二次检验测量的测量次数。
注：为了保证平均值和标准偏差的准确度，n1和n2均≥6
若t＜显著性水平α（通常α=0.05）自由度为n1+n2-2的临界值(n1+n2−2)tα，则两个平均值之间无显著性差异。
2009年8月9日均匀性结果检验完成后4天，11天，以及能力验证结果回收后分别进行了稳定性检验，同时进行了32℃连续72小时稳定性检验以及在密封干燥条件下储运，样品自本室发往新疆再由新疆发回本室稳定性测试，与均匀性检验结果相比较进行t检验，与t临界值t0.05(14)=1.761相比较，计算得到的t值均＜t临界值，这表明在0.05显著性水平时，样品中的恩诺沙星、环丙沙星是稳定的。
样品稳定性检验结果汇总表恩诺沙星
测定时间
检测结果
平均值
（ug/kg）
542.0532.3561.6520.8543.9
2009.8.9
559.1558.0605.0569.1585.6574.5557.0
2009.8.13
584.0554.0
环丙沙星检测结果
t值
（ug/kg）
109.1107.4110.7105.8108.6
558
--111.9113.1132.4117.6127.0114.5112.5
559
0.09
115.5112.0
113
0.39
114
--平均值
t值
514.0569.5555.5518.0580.5
2009.8.20
531.0525.5603.5523.0537.0546.0
2009.9.27
575.5545.5561.5564.0
32℃连续72小时
588.8544.1
566
0.7
548
0.85
552
0.38
109.5114.0117.5108.5122.0
116
111.0116.0119.0110.5111.0110.5
114
119.5113.0117.0111.7108.9109.7
110
1.370.210.34
570.9593.2536.3543506
新疆发回结果
557
540.8
540545554
1.49
105.2111.7109.7113108120
113.0
106118113
0.35
C-1被测物品接收状态确认表
被测物品接收状态确认表
编号：
能力验证计划名称
组织机构发送机构电话/传真发送日期
CNAST0458水产品中恩诺沙星、环丙沙星检测中国合格评定国家认可委员会(CNAS)威海出入境检验检疫局检验检疫技术中心[**************]-[1**********].9.11完好□不完好□
接收实验室名称：联系地址：邮编：
联系电话/传真：联系人：
接收人签名：
是
□
接收时间：否
□
联系人运输单据号码发送人签名
时文春时文春
接收时，被测物品状态是否良好：如需要，对接收状态的详细说明：
注(此栏适用于传递被测物品的方式)：1.请于
年
月
日前完成测试，并将被测物品于
年
月
日前传送至
（详细信息见CNAS“能力验证样品发送表”）；
2.传送被测物品时，请注意填写随附的能力验证样品发送表，并传真至指定机构和上述实验室；
3.注意计划的保密性，请勿向下一实验室通告本实验室的测试结果。
备注：请各实验室将填好的表格传真至指定机构。
附录C-2作业指导书
CNAST0458水产品中恩诺沙星、环丙沙星检测能力验证作业指导书各实验室：
欢迎参加CNAST0458《水产品中恩诺沙星、环丙沙星检测》能力验证。本次能力验证计划由中国合格评定国家认可委员会（CNAS）组织，威海出入境检验检疫局检验检疫技术中心负责实施。在本次能力验证计划中，贵实验室的代码为
，
在以后的联系单、结果报告等均使用该代码。本次能力验证计划发放样品1份，贵实验室的样品编号为：
随样同时发放如下文本：
（1）CNAST0458《能力验证计划作业指导书》（2）CNAST0458《被测物品接收状态确认表》
（3）CNAST0458《水产品中恩诺沙星、环丙沙星检测结果报告单》为保证本次能力验证工作顺利进行，特作如下说明：1、样品描述及检查要求
本次测试样品为冻干鲤鱼肉粉一份，样品净重约8g，密封包装，各实验室的样品编号见外包装标签。
各实验室在收到样品后，应先对样品是否完好进行确认。同时将确认信息填写在《被测物品接收状态确认表》中,以传真方式于收到样品之日返回实施机构。
如收到的样品编号不符或样品存在破损、污染等无法测试的情况，请及时联系更换事宜。样品应干燥保存，防止吸潮。
2、测试方法
本次能力验证计划要求实验室按照日常检测程序检测恩诺沙星、环丙沙星的含量。但在《水产品中恩诺沙星、环丙沙星检测结果报告单》中需注明样品前处理方法、测定方法、所使用仪器信息，详细要求见报告单。
注：本次能力验证均匀性实验称样量为0.5g，加2.5g水还原后检测,未检出显著性差异。
3、结果报告
测试结果保留3位有效数字，单位为μg/kg；每份样品平行测试2次，取平均值的回收率校正结果作为报告结果，并依此结果进行统计分析,禁止使用“”填报结果。
本次计划的检测结果等相关信息请填写在《水产品中恩诺沙星、环丙沙星检测结果报告单》中，各实验室务必于2009年9月25日前传真或邮寄至联系人；同时将报告单正本和检测原始记录单（包括谱图）寄送联系人。无故未按期提交结果单的实验室，其结果将不列入本次计划统计。
在本次能力验证计划实施过程中，严禁参加实验室相互串通结果，一经发现CNAS将撤销相关项目的认可资格。
4、联系方式
威海出入境检验检疫局检验检疫技术中心联系人：时文春徐成钢
联系电话：0631-5900158-6510，[1**********]，[1**********]传真：0631-5961661
通讯地址：威海市经济技术开发区大庆路威海检验检疫局技术中心邮编：264205
E－mail:[email protected]
3结果报告单附录C-C-3
CNAST0458《水产品中恩诺沙星、环丙沙星检测结果报告单》实验室代码:样品编号检测项目恩诺沙星
检测结果(μg/kg)
回收率
报告结果(μg/kg)
方法名称:主要前处理过程:
所用仪器仪器名称/型号:
1结果以恩诺沙星、环丙沙星单体计。
2测试结果保留3位有效数字，单位为μg/kg；每份样品平
备注
行测试2次，取平均值的回收率校正结果作为报告结果。3.检测过程中如有异常情况可添加附页说明。
请务必于2009年9月25日前将结果报告单传真或邮寄至联系人:0631-5961661测试人员（签字）：实验室负责人（签字）：签发日期：
年
月
日
实验室名称（盖章）：
4能力验证计划结果通知单C-C-4
能力验证计划结果通知单
计划编号及名称：CNAST0458水产品中恩诺沙星、环丙沙星检测实验室名称：样品名称
测试项目
实验室结果（ug/kg）
恩诺沙星
冻干鲤鱼肉粉
实验室代码：中位值
标准化IQR（ug/kg）
Z值
注：1、|Z|≤2为满意结果；2
2、本结果通知单应与能力验证计划结果报告结合使用。
附录D参考文献
1、CNASRL02:2007能力验证规则
2、CNASGL02:2006能力验证结果的统计处理和能力评价指南3、CNASGL03:2006能力验证样品均匀性
CNAST0458水产品中恩诺沙星、环丙沙星
检测能力验证计划结果报告
中国合格评定国家认可委员会威海出入境检验检疫局检验检疫技术中心
二OO九年十一月
组织机构：中国合格评定国家认可委员会
能力验证负责人：翟培军联系人：何平王腊梅
联系地址：北京市崇文区南花市大街8号邮政编码：100062
联系电话：010-[1**********]-67105289传真：010-67105053/67105055
实施机构：威海出入境检验检疫局检验检疫技术中心计划负责人：杨丽君联系人：时文春邮政编码：264205
联系电话：[***********]2786传真：0631-5961661
E-mail：[email protected]统计专家：卢行安传真：0631-5961661技术专家：牟峻
徐成钢
联系电话：[***********]2786传真：0631-5961661
时文春
丛伟红
徐成钢
联系地址：威海市大庆路检验检疫局技术中心
联系电话：[***********]8278
目
录
一、前言
二、本次计划的特点
三、统计分析的设计及能力评价原则四、统计处理结果及能力评价五、技术分析和建议六、附录
附录A实验室的检测结果和统计处理A-1实验室检测结果和统计处理结果A-2实验室Z比分数柱状图
附录B样品制备和均匀性/稳定性检验B-1样品制备报告B-2样品均匀性评价报告B-3样品稳定性评价报告附录C相关文件
C-1被测物品接收状态确认表C-2作业指导书C-3结果报告单
C-4能力验证计划结果通知单附录D参考文献
34678
[1**********]5
3031333434
一、前言
本报告是对CNAST0458《水产品中恩诺沙星、环丙沙星检测》能力验证计划结果的总结，由威海出入境检验检疫局检验检疫技术中心负责起草，中国合格评定国家认可委员会（CNAS）秘书处审核并批准发布。
CNAST00458《水产品中恩诺沙星、环丙沙星检测》能力验证计划由CNAS组织，威海出入境检验检疫局检验检疫技术中心负责协调及实施。
CNAS依据ISO/IEC导则43：1997的要求运作能力验证计划。
CNASRL02:2007《能力验证规则》规定申请认可和获准认可的实验室必须通过参加能力验证活动（包括CNAS组织实施或承认的能力验证计划、实验室间比对和测量审核）证明其技术能力。只有在能力验证活动中表现满意，或对于不满意结果能证明已开展了有效纠正措施的实验室，CNAS方受理或予以认可；对于未按规定的频次和领域参加能力验证的获准认可实验室，CNAS将采取警告、暂停、撤销资格等处理措施。对参加了CNAS组织及其承认的能力验证活动且有稳定满意表现的机构，在CNAS的各类评审中可适当根据情况简化相关项目的能力确认过程。
获CNAS认可的实验室，在参加能力验证中出现不满意结果时，CNAS要求其立即停止在相关项目的证书/报告中使用CNAS的认可标识，并按其体系文件规定程序实施有效的纠正措施。实验室只有将实施纠正措施的记录以及纠正措施有效性证明材料在规定的期限内报CNAS确认后，方可恢复使用认可标识。
如果实验室的结果虽为不满意，但仍符合认可项目依据标准所规定的判定要求，实验室可向CNAS提出，经CNAS确认后，可恢复使用认可标识，但实验室仍需采取相关改进措施；对于出现可疑结果的机构，CNAS建议其采取相应的自查措施。
二、本次能力验证的特点
1、计划的目的和意义
本次能力验证计划的主要目的是为了考察相关实验室进行喹诺酮类药物(环丙沙星和恩诺沙星)残留检测的能力，对提高实验室水产品兽药残留检测技术水平，促进食品安全检测有重要意义。
能力验证计划是CNAS判定实验室能力的重要技术手段，也是实验室的重要的外部质量保证手段，同时，参加能力验证计划获得满意的结果，还能增加客户及相关方对实验室出具可靠数据的信心。2、参加实验室的范围
本次能力验证参加实验室均是自愿参加，共计有71家实验室参加了本次计划，有60家单位是认可实验室，另有11家为非认可实验室，41家参加项目为认可项目，30家为非认可项目，非认可实验室及非认可项目参加实验室所占比例较高，表明准备申请实验室认可和扩项认可的实验室较多，说明整个社会对实验室认可工作的重视程度正在加强；参加实验室包括产品质量监督和检验检验检疫技术中心（实验室）、专业的社会检测机构（公司）、药检所及企业质量检测中心（实验室）等。来自东南沿海经济发达地区的实验室有63家，中西部地区参加实验室为8家，表明检测技术实力与经济发展水平相适应的特点；同时专门从事检测服务的机构（包括跨国检测机构）明显增多，共14家，表明检测市场化的逐步增强，检测市场的竞争会更加激烈；企业质检部门实验室22家，所占比例较高，表明企业对质量控制的重视程度显著提高。本次能力验证活动的实验室地域分布见表2。
表1参加实验室专业性质分类情况
质量监督检验检验检疫部门实验室专业检测机构实验室
24家33.8%14家19.7%
企业质检部门实验室其他实验室
22家11家
31.0%15.5%
表2参加能力验证实验室地区分布一览表
省、自治区、直辖市实验室数量山东福建浙江辽宁
天津
省、自治区、直辖市广东上海河北北京
其他
实验室数量18532
8
20643
2
3、计划测试项目和要求
1）本次能力验证测试样品为冻干鲤鱼肉粉，其中测试项目为恩诺沙星、环丙沙星含量。
2）样品采用不透光塑料瓶盛装样品，每瓶约8.0g，密封包装。样品经分装编号后，随机向每个参加实验室发放，检测样品通过邮局以特快方式邮寄。参加实验室按作业指导书的要求，对样品中每个测试项目测定双份，并将测定结果填写在结果报告单中，作业指导书和结果报告单均随样品发送给每个参加实验室（附录C）。
3）检验的样品由威海出入境检验检疫局检验检疫技术中心制备，并由制备机构出具样品均匀性评价报告和稳定性评价报告（附录B）。稳定性报告表明，制备的样品在能力验证计划期间各个检验项目相对稳定，均匀性评价报告表明，制备的样品充分均匀，从而确保能力验证过程中出现的离群值不是由样品的差异及不稳定所致。
4）出于保密的需要，对每个参加实验室赋予了一个代码。在本报告中，凡说明参加实验室的检测结果和能力评价时均以代码表示，结果报告将发给每一个提交最终结果的实验室。4、计划日程
本次能力验证计划从2009年4月份开始设计方案，9月11日向参加实验室分发样品，9月25日回收实验室检测结果，随后对结果进行汇总、分析，2009年11月底完成结果报告。本次能力验证结果的统计分析和技术分析由计划小组的技术专家和统计专家完成。
三、统计分析的设计及能力评价原则
本次能力验证的评价依据CNAS-GL02：2006《能力验证结果的统计处理和能力评价指南》执行。
对本次能力验证计划实验室的检测结果，按下式计算Z值：Z=(x-X)/σ
式中：x-实验室测试结果；X-指定值；
σ-变动性度量值（目标标准偏差）。
本次能力验证计划统计分析采用稳健（Robust）技术处理，即采用稳健统计的中位值作为指定值，标准化四分位距（NIQR）为变动性度量值（目标标准偏差）计算各实验室结果的Z比分数（Z值）。
本次能力验证计划涉及的统计量有结果数、中位值、标准化四分位距（NIQR）、稳健的变异系数（CV）、Z比分数、最小值、最大值和极差等。各统计量的意义及相关计算方法参见CNASGL02:2006《能力验证结果的统计处理和能力评价指南》。
本次能力验证计划以Z比分数评价实验室的结果，即：∣Z∣≤2为满意结果；2＜∣Z∣＜3为有问题结果；∣Z∣≥3为不满意结果（离群值）。
为了清晰表示各实验室参加能力验证计划的结果，将Z值按大小顺序排列作柱状图（附录A），每一个柱条标有该实验室的代码。从该柱状图上，每一个实验室很容易将其结果与其他参加实验室进行比较，了解其结果在本次计划中所处的水平。
四、统计处理结果及能力评价
本次能力验证试验共有71家实验室，其中按要求返回结果的有70家实验室，其中，参加报告环丙沙星含量的实验室有70家，报告恩诺沙星的含量的实验室69家；007号实验室由于仪器故障未能上报结果。
采用稳健（Robust）统计技术对70家实验室提交的数据进行了统计处理，实验室检测结果和统计处理数据见附录A-1。
结果满意的实验室有62个，占88.6%；结果有问题的实验室8个，占11.4%；结果不满意的实验室2个，占2.9%。不满意、存有问题的实验室情况统计汇总见表2。
1检测项目的稳健统计参数表3-3-1统计参数结果总数中位值Q1Q3IQRNIQR
恩诺沙星[**************].3
环丙沙星70115.5102.2512219.7514.612.732388.1234.9
稳健的变异系数（CV）8.0极大值极小值极差
835139696
表3-2不满意和有问题结果实验室情况统计汇总
恩诺沙星
∣Z∣≥32＜∣Z∣＜3
002；054
环丙沙星
002；054
031，040,066,067,012,052
五、技术分析和建议
为进行充分的技术分析，现将本次能力验证所设计的检测标准、主要前处理方法及主要检测仪器汇总如下：
表4-1检测标准使用情况
标准号GB/T20366-2006
实验室代码
002,008,013,014,016,020,027,029,031,034,038,039,046,047,048,055,063,064,070
GB/T20751-2006GB/T21312-2007
018,021,030,035,040,043,045,049,051,056,062,067004,011,012,019,024,061,065
农业部公告[2003]003,005,006,054,057,060,066第236号SN/T1751.2-2007
028,041,068
农业部783号公告-022,037,053,058,0692-2006
农业部1025号公告-023,044,052,07114-2008
农业部781号公告-015,0176-2006其他标准
001,009,010,025,026,032,033,036,042,050,059
备注：检测标准号及名称
GB/T20366-2006:动物源食品中喹诺酮类药物残留的测定
SN/T1751.2-2007:进出口动物源食品中喹诺酮类药物残留量检测方法第2部分：液相色谱-质谱/质谱法
GB/T20751-2006:鳗鱼及制品中十五种喹诺酮类药物残留量的测定液相色谱串联质谱法
GB/T21312-2007:动物源性食品中14种喹诺酮药物残留检测方法液相色谱-质谱质谱法
农业部公告[2003]第236号:动物源食品中恩诺沙星.环丙沙星残留量检测方法高效液相色谱法
农业部1025号公告-14-2008:动物源食品中喹诺酮类药物残留检测色谱法
农业部783号公告-2-2006:水产品中诺氟沙星.盐酸环丙沙星.恩诺沙星残留量的测定
其他标准：包括实验室方法、地方标准及引用的国外标准，标准名称可能推知实验室名称，在此不具体罗列。
高效液相
表4-2主要前处理方法
磷酸缓冲盐提取003，005，006，015，017，022，023,054，056，057，060，
066，071
EDTA-Mcllvaine004，012，019，024，061，065缓冲液
酸化乙腈提取
020,021，025，026,027，028，029，030,031，032,033，044,045，046，047，048，049，050，051，052，
053,055,058,059，062，063，064，067，068，069，070
固相萃取净化
003，004，005，006，011，012，014，015，017，018，019，021，022，023,024，030,035，038，040,045，054，056，057，058,060，061，065，066，071
表4-3主要检测仪器
001，003，005，006，010，015，017，018，022，
液相色谱仪
053，054，057，058,059，060，066，069，071液相色谱串联四极杆质谱仪
034，038，039，040，041，042,043，045，046，047，048，051，055，056，061，062，063，064，065，067，068，070
本次能力验证活动达到预期的效果，现将产生偏差的可能原因分析归纳如下：1.样品前处理：
样品前处理步骤对检测结果具有重要影响。提取是否完全及操作的准确性都是保证检测结果准确的重要因素。检测过程中多家实验室反映加水提取与不加水提取检测差异很大，我们前期测试表明不加水提取只有加水润湿提取的20-30%（见表4-4），因此鱼粉在提取前须先用适量的水润湿（特别是采用酸化乙腈提取时），否则提取不完全，提取要进行充分的均质并防止交叉污染，均质提取，且采用适量的提取液淋洗刀头，试验所使用的器皿都必须采用超声清洗，然后按蒸馏水、去离子水的顺序反复冲洗干净；提取净化完全的样品溶液应是无色或微黄色。
参加本次能力验证的实验室有25家采取固相萃取的方式净化样品，采用固相萃取方式净化时应注意：不同的固相萃取柱淋洗、洗脱所使用的溶剂量会有较大的差异，特别是洗脱液的用量会直接影响回收率和检测灵敏度，不同生产商、不同批次的固
相萃取柱都应在检测前作加标回收实验，以确定适合的溶剂用量。不同的定容溶液对于测定也会产生影响，例如，用乙酸铵定容的测定结果比用甲酸的测定结果定量离子丰度大25%左右，但在基质存在的情况下盐类易结晶，可能导致堵塞，特别是LC-MS-MS的电喷雾针及毛细管，建议标准使用液和处理好的样品都采用流动相定容。
表4-4提取溶剂对检测结果的影响（含量单位ug/kg）
样品编号
加水润
环丙沙星
湿提取
不加水润29.0湿提取加水润
恩诺沙星
湿提取不加水润136湿提取
2.不同仪器分析的影响。
本次能力验证涉及的主要检测仪器有高效液相色谱仪（HPLC）配荧光检测器和液相色谱串联四极杆质谱仪（LC-MS-MS）两种。有28家采用液相色谱法（HPLC）检测，有42家采用液相色谱串联四极杆质谱仪法(LC-MS-MS),实验表明HPLC法和LC-MS-MS法检测对本次能力验证检测项目的结果没有显著差异，HPLC法测定结果比LC-MS-MS法检测结果略低（见表4-5），但两种方法的检测对最终统计结果不会造成显著影响。应当注意的是不同仪器的线性范围是不一样的，液相色谱的线性范围较宽，质谱的相对较窄，同时不同品牌的质谱线性范围也有较大差异，线性范围窄对高浓度待测物的定量产生明显影响,当检测液稀释时对应的仪器响应值不成比例，即表明检测液的浓度已经超出仪器响应的线性范围，应当考虑将检测液进一步稀释，对本
190.0
296.0
398.6
4101
596.3
698.3
30.228.530.538.230.2
[***********]
[**************]
次能力验证而言，0.5g鱼粉提取后最终定容体积2-6ml为宜。
3.回收率的影响LC-MS-MS检测灵敏度较高，更易受到流动相、基体等的干扰影响。同样浓度的标准溶液，在基质存在时响应值有一定差异，特别是当检测物含量较低时差异会更大。随着基体量的增加，基体干扰成增加趋势，其中普通鲤鱼肉的2.5g样品与鲤鱼肉冻干粉0.5g样品的基质效应相近（见表4-5）。同时我们前期测试表明，环丙沙星和恩诺沙星工作液稳定性较差，响应值8小时即可显著降低，但在基质溶液中很稳定，响应值24小时基本不变，因此为消除基体干扰及标准溶液不稳定因素，须采用添加回收校正可得到满意的测定结果；另外有部分实验室回收率较高（大于130%），可能是标准溶液从冷冻冷藏状态下取出，与室温平衡时间太短，实际添加量远大于计算添加量。
表4-5液相与液质检测中位值的比较（含量单位ug/kg）
环丙沙星
液相色谱法111.5
液相色谱串两种方法联质谱法116.5
合并统计115.5
液相色谱法481
恩诺沙星液相色谱串联质谱法502
两种方法合并统计492
以上三点均会对测定结果产生影响，如可有效的降低影响，可得到满意的测定结果。
另外通过对养殖过程中鱼体两种沙星的浓度监控检测发现，环丙沙星和恩诺沙星在肌肉中分布的浓度约为1：4~1：5的关系，因此这一比例关系可以为检测结果的正确性提供客观依据。
表4-5鲤鱼基质对回收率的影响
（环丙沙星添加量100ug/kg；恩诺沙星添加量500ug/kg）
样品编号环丙沙星恩诺沙星
1
293.2
380.5
483.0
586.0
687.3
0.5g鱼94.1粉添加2.5g鱼96.2肉添加0.5g鱼94.6粉添加2.5g鱼94.5肉添加
90.983.276.482.786.0
95.184.488.499.898.8
92.384.483.697.697.6
六、附录A实验室的检测结果和统计处理
A-1实验室检测结果和统计处理结果实验室编号
444001
440758.3002
761.5003
未参加
-------------91
835
8.73
263.992.1
80.2
113
-0.17
85.5
517
0.64
124272.4
83
323
14.17
125
95.9
130
0.99
检测结果回收率报告结果
Z值
（ug/kg)
%
（ug/kg)
（ug/kg)
%
（ug/kg)
检测结果回收率
报告结果
Z值
恩诺沙星
环丙沙星
88.7
439004
458378.5005
388.9408006
382007
未报告439.3008
423.8402009
411377.2010
386430011
436497012
484551013
568278014
425
99.2
104
448
-1.12
9982.9
82.4
466
-0.66
84.388.8
84.5-----468-------0.61
79.4----未报告136
89.1
484
-0.20
130.683.3
82.7
492
0.00
79.171.06
89.7
425
-1.71
76.3769.4
90
481
-0.28
65.9166
95.7
513
0.53
15384.1
107.6
530
0.97
88.2113
70
502
0.25
107
98
112
-0.24
80.6
107
-0.58
103
155
2.70
59.2
114
-0.10
76.7
96.1
-1.33
78.2
104
-0.79
96.3
138
1.54
------------71.7
117
0.10
71.5
117
0.10
100.5
99.1
-1.12
015
470371016
407487017
493401018
419497019
499424020
417357021
361368022
364479023
474407.9024
412.5618025
656
98
481
-0.28
104104
80.7
482
-0.25
111109
103
476
-0.41
10569.7
85.5
481
-0.28
82.8124
90
553
1.55
117103
100
420
-1.83
10368.2
77
466
-0.66
68.392
74.8
488
-0.10
91.197.6
99.2
480
-0.31
99.895.48
87
471
-0.53
92.51107
154
414
-1.99
99.1
98.7
104
-0.79
80.3
117
0.10
98
101
-0.99
78.7
116
0.03
68
100
-1.06
100
103
-0.85
98
123
0.51
71.5
107
-0.58
88
122
0.44
84.3
127
0.79
82
119
0.24
026
392.5470027
481303028
321459029
456460030
457466.6031
480.8349032
357558033
579515034
532385035
387444036
430
73
534
1.07
73.557.1
96.3
494
0.05
54.456
61
511
0.48
5551.9
84
545
1.35
57.379.5
83.5
549
1.45
78.176.44
78.08
607
2.93
67.1369.4
69.5
508
0.41
78.5149
107.5
529
0.94
12499
103
508
0.41
10377.4
80
484
-0.20
78.567.4
88
497
0.13
68.9
66
103
-0.85
66.4
118
0.17
93.6
108
-0.51
107.5
127
0.79
67.1
110
-0.38
77.91
92.1
-1.60
73.2
108
-0.51
56.4
96.8
-1.28
49.3
113
-0.17
58.3
95.6
-1.36
72
98.8
-1.14
037
399509038
507616039
597407040
396463041
479510042
526651043
576403.7044
380.8387045
386463046
474392.8047
399.2
77
521
0.74
79102
91
558
1.68
10190.9
125
485
-0.18
87.5120
100
402
-2.29
11667.2
90
524
0.81
75.3125
88.7
518
0.66
125131
112
546
1.37
12277.48
88.14
445
-1.20
73.1296.9
84.2
460
-0.81
92.7104
98.4
476
-0.41
10360
80.1
494
0.05
63.6
63.1
97.9
-1.20
84.9
122
0.44
80.1
118
0.17
80.36
93.7
-1.49
110
115
-0.03
85.4
125
0.65
71
102
-0.92
100
118
0.17
91.4
97.6
-1.22
88
116
0.03
71
110
-0.38
048
473420049
433556050
553438051
433462052
464509053
52599.4054
102305055
371385056
355.5395057
388371058
390
100
475
-0.43
10474.8
93.3
457
-0.89
75.9121
97.35
570
1.99
112133
100
436
-1.43
135119
92
503
0.28
121102
100
517
0.64
95.8162
72.1
139
-8.98
164115
65
520
0.71
116125.5
72.3
512
0.51
121.580.5
86
455
-0.94
78.1104
76.2
499
0.18
107
74.3
142
1.81
79
100
-1.06
98.3
126
0.72
86.7
133
1.20
70.1
230
7.82
100
98.9
-1.13
81
148
2.22
100
134
1.26
92.52
126
0.72
85.6
88.1
-1.87
100
114
-0.10
059
422.8464060
454503.1061
501.5353062
359513063
488423064
425472065
516373.6066
355.2601.2067
646.2574068
612361069
358
93
462
-0.76
86.1105
87.8
523
0.79
97.9131.1
100
502
0.25
130.383.2
80.8
441
-1.30
80114
90
556
1.63
11495.3
86.1
492
0.00
96.5114
94.9
521
0.74
12191.7
90
405
-2.21
86.5539.9
105.6
590
2.49
45134
115
516
0.61
10076
77.6
464
-0.71
72.3
70.6
105
-0.72
99.7
117
0.10
46.8
90.7
-1.69
87.5
102
-0.92
93.5
126
0.72
81.4
118
0.17
96.5
118
0.17
69.9
117
0.10
100
131
1.06
75.5
121
0.38
89
98
-1.20
466070
485375071
379
80.8
467
-0.64
100
476
-0.41
121
100
123.589.9
79.1
93.9
116
0.03
122
0.44
实验室Z比分数柱状图
21
22
附录B样品制备及样品的稳定性和均匀性检验（依据CNAS-GL03）
B-1样品制备报告一、样品来源
本次能力验证样品为1个，样品通过养殖添加得到,购买适量的活体鲤鱼,先通过监控检测确认是否含有恩诺沙星和环丙沙星,根据预先设计的含量值,添加适当浓度的恩诺沙星、环丙沙星进行养殖，并间隔适当的时间对鱼体内目标物浓度进行监控检测，当目标检测物浓度适合并相对稳定时，将鱼捕捞，取肌肉部分。二、样品制备
把鱼肉搅碎、混匀制成鱼糜（20kg），冻干粉碎混匀制成肉粉（约4kg），每份8g分装，进行均匀性稳定性试验。三、实验样品编号规则
样品共分装397份，按从小到大的顺序编号，均检和稳检以及发放样品时均随机抽取。样品均匀性和稳定性检测使用115份，发放样品71份，还剩余211份。B-2均匀性检验
一、依据CNAS-GL-03：2006《能力验证样品均匀性和稳定性评价指南》，采用F检验法对样品进行均匀性检验。
二、从分装好的样品随机抽取10个样品，称取0.50克，加2.5克水还原，依据GB/T20366-2006《动物源产品中喹诺酮类残留量的测定》进行检测，每个样品在同样的条件下测试2次。样品的均匀性检验采用单因子方差统计分析进行评定。
样品均匀性检验结果（μg/Kg）如下：环丙沙星
样本号
测定1
[1**********]总平均值
106.7110.7115.6104.1112.3114.8113.1142.6115.6137.7114
测定2111.5104.1105.8107.4104.9109.0113.1122.1119.7116.4
测定1526.0533.1591.2500.6558.0580.1558.0629.8569.1585.6558
测定2558.0531.5532.0540.9529.8538.1558.0580.1569.1585.6
恩诺沙星
样品间自由度为9，样品内自由度为10，在约定的自由度水平α=0.05的显著水平下，计算临界值Fα(9、10)，计算结果与查表得到的F临界值比较；若计算值小于F临界值，则表明在α=0.05的显著水平下，样品中个组份（环丙沙星、恩诺沙星）是均匀的，反之，则不均匀。
样品中的环丙沙星单因子方差分析结果
方差来源样品间样品内
自由度
910
平方和1404.864576.4579
均方156.09657.64579
F2.7078477
F临界值F0.05(9,10)=3.02，F值计算结果为2.71，表明在0.05显著性水平时，样品中环丙沙星的含量是均匀的。
样品中的恩诺沙星单因子方差分析结果
方差来源样品间样品内
自由度
910
平方和11219.745590.183
均方1246.638559.0183
F2.2300487
F临界值F0.05(9,10)=3.02，F值计算结果为2.23，表明在0.05显著性水平时，样品中恩诺沙星的含量是均匀的。B-3稳定性检验一、稳定性检验设计
依据CNAS-GL03：2006《能力验证样品均匀性和稳定性评价指南》，采用平均值一致性检验法评价样品的稳定性检验。按下式计算t值：
t=
x2−x1
−2+−2+
式中：x1—第一次检验测量数据的平均值；
x2—第二次检验测量数据的平均值；s1—第一次检验测量数据的标准偏差；s2—第二次检验测量数据的标准偏差；n1—第一次检验测量的测量次数；n2—第二次检验测量的测量次数。
注：为了保证平均值和标准偏差的准确度，n1和n2均≥6
若t＜显著性水平α（通常α=0.05）自由度为n1+n2-2的临界值(n1+n2−2)tα，则两个平均值之间无显著性差异。
2009年8月9日均匀性结果检验完成后4天，11天，以及能力验证结果回收后分别进行了稳定性检验，同时进行了32℃连续72小时稳定性检验以及在密封干燥条件下储运，样品自本室发往新疆再由新疆发回本室稳定性测试，与均匀性检验结果相比较进行t检验，与t临界值t0.05(14)=1.761相比较，计算得到的t值均＜t临界值，这表明在0.05显著性水平时，样品中的恩诺沙星、环丙沙星是稳定的。
样品稳定性检验结果汇总表恩诺沙星
测定时间
检测结果
平均值
（ug/kg）
542.0532.3561.6520.8543.9
2009.8.9
559.1558.0605.0569.1585.6574.5557.0
2009.8.13
584.0554.0
环丙沙星检测结果
t值
（ug/kg）
109.1107.4110.7105.8108.6
558
--111.9113.1132.4117.6127.0114.5112.5
559
0.09
115.5112.0
113
0.39
114
--平均值
t值
514.0569.5555.5518.0580.5
2009.8.20
531.0525.5603.5523.0537.0546.0
2009.9.27
575.5545.5561.5564.0
32℃连续72小时
588.8544.1
566
0.7
548
0.85
552
0.38
109.5114.0117.5108.5122.0
116
111.0116.0119.0110.5111.0110.5
114
119.5113.0117.0111.7108.9109.7
110
1.370.210.34
570.9593.2536.3543506
新疆发回结果
557
540.8
540545554
1.49
105.2111.7109.7113108120
113.0
106118113
0.35
C-1被测物品接收状态确认表
被测物品接收状态确认表
编号：
能力验证计划名称
组织机构发送机构电话/传真发送日期
CNAST0458水产品中恩诺沙星、环丙沙星检测中国合格评定国家认可委员会(CNAS)威海出入境检验检疫局检验检疫技术中心[**************]-[1**********].9.11完好□不完好□
接收实验室名称：联系地址：邮编：
联系电话/传真：联系人：
接收人签名：
是
□
接收时间：否
□
联系人运输单据号码发送人签名
时文春时文春
接收时，被测物品状态是否良好：如需要，对接收状态的详细说明：
注(此栏适用于传递被测物品的方式)：1.请于
年
月
日前完成测试，并将被测物品于
年
月
日前传送至
（详细信息见CNAS“能力验证样品发送表”）；
2.传送被测物品时，请注意填写随附的能力验证样品发送表，并传真至指定机构和上述实验室；
3.注意计划的保密性，请勿向下一实验室通告本实验室的测试结果。
备注：请各实验室将填好的表格传真至指定机构。
附录C-2作业指导书
CNAST0458水产品中恩诺沙星、环丙沙星检测能力验证作业指导书各实验室：
欢迎参加CNAST0458《水产品中恩诺沙星、环丙沙星检测》能力验证。本次能力验证计划由中国合格评定国家认可委员会（CNAS）组织，威海出入境检验检疫局检验检疫技术中心负责实施。在本次能力验证计划中，贵实验室的代码为
，
在以后的联系单、结果报告等均使用该代码。本次能力验证计划发放样品1份，贵实验室的样品编号为：
随样同时发放如下文本：
（1）CNAST0458《能力验证计划作业指导书》（2）CNAST0458《被测物品接收状态确认表》
（3）CNAST0458《水产品中恩诺沙星、环丙沙星检测结果报告单》为保证本次能力验证工作顺利进行，特作如下说明：1、样品描述及检查要求
本次测试样品为冻干鲤鱼肉粉一份，样品净重约8g，密封包装，各实验室的样品编号见外包装标签。
各实验室在收到样品后，应先对样品是否完好进行确认。同时将确认信息填写在《被测物品接收状态确认表》中,以传真方式于收到样品之日返回实施机构。
如收到的样品编号不符或样品存在破损、污染等无法测试的情况，请及时联系更换事宜。样品应干燥保存，防止吸潮。
2、测试方法
本次能力验证计划要求实验室按照日常检测程序检测恩诺沙星、环丙沙星的含量。但在《水产品中恩诺沙星、环丙沙星检测结果报告单》中需注明样品前处理方法、测定方法、所使用仪器信息，详细要求见报告单。
注：本次能力验证均匀性实验称样量为0.5g，加2.5g水还原后检测,未检出显著性差异。
3、结果报告
测试结果保留3位有效数字，单位为μg/kg；每份样品平行测试2次，取平均值的回收率校正结果作为报告结果，并依此结果进行统计分析,禁止使用“”填报结果。
本次计划的检测结果等相关信息请填写在《水产品中恩诺沙星、环丙沙星检测结果报告单》中，各实验室务必于2009年9月25日前传真或邮寄至联系人；同时将报告单正本和检测原始记录单（包括谱图）寄送联系人。无故未按期提交结果单的实验室，其结果将不列入本次计划统计。
在本次能力验证计划实施过程中，严禁参加实验室相互串通结果，一经发现CNAS将撤销相关项目的认可资格。
4、联系方式
威海出入境检验检疫局检验检疫技术中心联系人：时文春徐成钢
联系电话：0631-5900158-6510，[1**********]，[1**********]传真：0631-5961661
通讯地址：威海市经济技术开发区大庆路威海检验检疫局技术中心邮编：264205
E－mail:[email protected]
3结果报告单附录C-C-3
CNAST0458《水产品中恩诺沙星、环丙沙星检测结果报告单》实验室代码:样品编号检测项目恩诺沙星
检测结果(μg/kg)
回收率
报告结果(μg/kg)
方法名称:主要前处理过程:
所用仪器仪器名称/型号:
1结果以恩诺沙星、环丙沙星单体计。
2测试结果保留3位有效数字，单位为μg/kg；每份样品平
备注
行测试2次，取平均值的回收率校正结果作为报告结果。3.检测过程中如有异常情况可添加附页说明。
请务必于2009年9月25日前将结果报告单传真或邮寄至联系人:0631-5961661测试人员（签字）：实验室负责人（签字）：签发日期：
年
月
日
实验室名称（盖章）：
4能力验证计划结果通知单C-C-4
能力验证计划结果通知单
计划编号及名称：CNAST0458水产品中恩诺沙星、环丙沙星检测实验室名称：样品名称
测试项目
实验室结果（ug/kg）
恩诺沙星
冻干鲤鱼肉粉
实验室代码：中位值
标准化IQR（ug/kg）
Z值
注：1、|Z|≤2为满意结果；2
2、本结果通知单应与能力验证计划结果报告结合使用。
附录D参考文献
1、CNASRL02:2007能力验证规则
2、CNASGL02:2006能力验证结果的统计处理和能力评价指南3、CNASGL03:2006能力验证样品均匀性