鎏婴鲤窒
垦旦型兰
：必坚丝丝：翌坐
银耳凝集素红细胞凝集性能的研究
侣国涵，马爱民・，
吴尧，谈佳玉
４３００７０）
（华中农业大学食品科技学院，湖北武汉
擅要；银耳的生长发育主要经过孢子、菌丝体、子实体三个阶段。银耳孢子、菌丝体、子实体中凝集素的
粗提方法主要包括磷酸盐缓冲液抽提，硫酸铵分级沉淀等。这三种凝集素的耐热性都较差，经６０℃处理１０ｍｉｎ后，凝集活性明显降低．它们的耐酸碱性差异较大，孢子凝集素只在中性环境下活性稳定，而卣丝体和子实体分别在偏碱性和偏酸性的条件下稳定．Ｍ９２．、Ａ１¨、Ｆｃ¨对三种凝集素的活性均有恢复和增强的作用。在供试的八种测
试糖中，只有菌丝体凝集素的凝集活性受到乳糖的抑制．关键词：银耳；凝集素；红细胞凝集
Ｓｔｕｄｙ
ｏｎ
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ＳＩ
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Ａｂ酣ｒ础：Ｔｂｅｄｅ饨１０Ｐ哪即“正ｎ伽Ｐ如如扣砌ｏ∞ｔａｊ船ｄ岫８ｂｇ嘲ｏｆ孽ｏｗ血疵Ｉｙ叩ｏｍ，ｍｙ∞Ｕ吼ａｌＩｄ向】ｍｎｇｂｏｄｙ．
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ＧｕＯ＿ｈ柚，ＭＡＡｉ・ｍｉ矿，ＷＵＹ∞，ＴＡＮ
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中图分类号：Ｔｓ２０１．２ｌ
文献标识码：Ａ
文章编号：１００２．６６３０（２００∞０９＿０１０３．０４
凝集素是一类非免疫原的，与糖专一结合的，能够凝集细胞或沉淀含糖大分子的蛋白质或糖蛋白…．在生命科学各个领域的研究中，其用途已越来越广泛，已成为生物化学、细胞学、免疫学及医学等领域中有用的科研材料，并被应用于临床诊断、治疗和某些工业生产Ⅷ．自１８８８年俄国学者首次在蓖麻耔中发现凝集素后，凝集素的研究全面展开。许多大型真菌含有大量的凝集素，据Ｐｅｍｂｃｒｔｏｎ报道，在其研究的４０３种大型真菌中，５０％具有很强的凝集素活性，而且目前双孢蘑菇凝集素已经成为一种商品…。
银耳（丁ｈ＂＂妇Ａｃ扣—ｎ妇Ｂｅｒｂ．又名白木耳，雪耳，在分类上隶属于真菌门（Ｅ
ｕｍｙ
ｃ
补脑强心的功效外。还有提神益气、滋润皮肤、恢复肌肉疲劳、抵抗肿瘤等作用，具有极高的经济价值和研究价值。
迄今对银耳中的凝集素研究未见报道。本实验将对银耳在不同发育阶段，即孢子、菌丝体、子实体中所含的凝集素进行抽提，并对其细胞凝集活性、糖专一性、热稳定性等性能进行测定，在此基础上分析不同生长期凝集素的差异，为其进一步的研究提供理论依据。
１
材料与方法材料和试剂
银耳子实体、银耳菌丝体、银耳孢子：由本实验
１．１
ｏｔ
ａ），担子菌纲
（Ｂａｓｉｄｉｏｍｙｃｅｔｅｓ），银耳日（ＴｒｅｍｅＩＪａｌｃｓ），银耳科
室提供。新鲜鸡血市售。Ｎ．乙酰氨基葡萄糖
１．２１．２．１
ｓｉｇｍａ
ｏｈｍｅｎａｃｅ壮），银耳属（１协ｅｎａ），属中温、好气性真菌．
主要分布于亚热带，也分布于热带、温带和寒带…。银耳甘平无毒，除具有润肺生律、滋阴养胃、益气和血、
收稿日期：２００６－０９－１５
公司．其它糖为国产分析纯，其余试剂均为分析纯。
方法
银耳凝集素的提取
’通讯作者
作者简介：侣国涵（１９８ｌ－），男，硕士研究生，研究方向为食品微生物。
鲞茔堡！｜婴壅垦旦型兰
２．５
：翌二翌：；翌竺：！：：篮
孢子、菌丝体、子实体凝集素在ｐＨ３．６～１０．０的条件下对鸡红细胞的凝集活性。从表３中可见银耳孢子、苗丝体、子实体凝集素的耐酸碱性具有显著差异．孢子凝集素在ｐＨ６．０～７．０之间凝集活性较高，当ｐＨ＜５．０和ｐＨ＞７．Ｏ时，其活性明显下降。菌丝体凝集素在ｐＨ６．Ｏ～１０．０之间凝集活性较高，在ｐＨ４．０时凝集活性大部分丧失，ｐＨ３．６时，活性则完全丧失。子实体凝集素在ｐＨ３．６～７．Ｏ之间凝集活性较高，当ｐＨ＞７．２时，活性逐渐下降，在口Ｈ１０．０时，活性大部分消失。比较三者可得，孢子凝集素的耐酸碱性比其它两种凝集素弱，但菌丝体凝集素不耐强酸，而子实体凝集素不耐强碱。
裹３
ｐＨ僵对镊耳凝集素活性的影响
实体凝集素活性的恢复无任何作用。
银耳孢子、菌丝体、子实体凝集素的糖抑制实验在“Ｖ”型血凝板上测得孢子、菌丝体、子实体凝集素的糖抑制结果如表５所示。从表中看出．Ｄ．葡萄糖、Ｄ．甘露糖、麦芽糖，蔗糖、木糖、乳糖、Ｄ．半乳糖、Ｎ－乙酰氨基葡萄糖这八种糖对孢子、子实体凝集素的凝集活性无抑制作用，而菌丝体凝集素的凝集作用可被乳糖抑制。
囊５
１ａｂｌｅ５
ｌｎｈｉｂⅢＯｎ
糖对银耳凝集蠢活性的抑制作用
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注：ｕ：无抑制作用；“＋”：有抑制作用．
３
注；供试样品活性：袍子ｓｕ；菌丝件１６ｕ；子实体３２ｕ．
３．１
２．４
讨论
凝集素的细胞凝集作用是凝集分子的一个亚基与一
金属离子对银耳孢子、菌丝体、子实体凝集素细金属离子对孢子、菌丝体、子实体凝集素的影
个细胞表面的凝集素专一识别的糖基结合，另一个亚基与另一个细胞上的糖基结合，从而通过凝集素的“架桥”作用而导致的。本实验中银耳孢子、菌丝体、子实体的提取物都能使鸡红细胞凝集。热稳定性实验表明银耳孢子、菌丝体，子实体凝集素对热均较为敏感，因此在进一步的分离纯化过程中，应控制好温度以保证其生物活性。
３．２
胞凝集活性的影响
响，由表４表明：三种凝集素经ＥＤＴＡ处理后凝集活性消失，即孢子、菌丝体、子实体凝集素对鸡红细胞的凝集活性都与金属离子有关。Ｚｎ“、Ｍｇ２＋、Ａ１３＋等离
子在浓度为１．５６衄０１，Ｌ时，即可使银耳菌丝体和子实体
凝集素具有凝集细胞的活性，而孢子凝集素凝集所需的最低浓度为６．２５ｍｍｏｌ几．而Ｃａ２＋在很高的浓度下，才使各凝集素出现凝集活性。Ｍｇｚ＋对孢子、菌丝体、子
表４
全属离子对镊耳凝集寰的细胞凝集活性的影响
Ｅ忏ｅｃｔｓ
酸碱稳定性实验表明银耳孢子、菌丝体、子实体
凝集素对酸碱的敏感度存在较大的差异。孢子凝集素在中性环境中稳定，在酸性和碱性环境中凝集活性都下降；菌丝体凝集素对碱具有一定的稳定性，但对酸不稳定；而子实体凝集素与菌丝体凝集素相反．凝集素与糖基的结合是一种非共价的相互作用，氢键、疏水键和静电力都是可能的因素州，在碱性条件下（ｐＨ７．２～１０．０），子实体凝集素的细胞凝集活性下降，说明子实体凝集素与糖基的结合部位可能有带正电性基团的参与．菌丝体凝集素与糖基的结合部位可能有带负电性基团的参与，而孢子凝集素与糖基的结合部位可能有无极性的基团参与。这也表明银耳孢子、菌丝体、子实体凝集素活性
Ｔ曲ｂ４
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ｌｅｃｔｍ
金属离子——瓦耳ｉ；童量壁里墨ｉ：；ｉ；堡堕壁生彘
注：供试样品活性：抱子８ｕ；菌蛙体１
不凝集。
６ｕｌ子实体３２ｕ．…
基团组成可能是不同的。其具体的结构差异还待于进一步研究。
鎏婴鲤窒
垦旦型兰
：必坚丝丝：翌坐
银耳凝集素红细胞凝集性能的研究
侣国涵，马爱民・，
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（华中农业大学食品科技学院，湖北武汉
擅要；银耳的生长发育主要经过孢子、菌丝体、子实体三个阶段。银耳孢子、菌丝体、子实体中凝集素的
粗提方法主要包括磷酸盐缓冲液抽提，硫酸铵分级沉淀等。这三种凝集素的耐热性都较差，经６０℃处理１０ｍｉｎ后，凝集活性明显降低．它们的耐酸碱性差异较大，孢子凝集素只在中性环境下活性稳定，而卣丝体和子实体分别在偏碱性和偏酸性的条件下稳定．Ｍ９２．、Ａ１¨、Ｆｃ¨对三种凝集素的活性均有恢复和增强的作用。在供试的八种测
试糖中，只有菌丝体凝集素的凝集活性受到乳糖的抑制．关键词：银耳；凝集素；红细胞凝集
Ｓｔｕｄｙ
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Ｋｅ了ｗｏｒｄｓ：ｍ＂Ｍ妇加扣瑚括Ｂｃｒｋ｛Ｌ∞血；ｈｃｍａｇｇｌｕ血撕ｏｎ
中图分类号：Ｔｓ２０１．２ｌ
文献标识码：Ａ
文章编号：１００２．６６３０（２００∞０９＿０１０３．０４
凝集素是一类非免疫原的，与糖专一结合的，能够凝集细胞或沉淀含糖大分子的蛋白质或糖蛋白…．在生命科学各个领域的研究中，其用途已越来越广泛，已成为生物化学、细胞学、免疫学及医学等领域中有用的科研材料，并被应用于临床诊断、治疗和某些工业生产Ⅷ．自１８８８年俄国学者首次在蓖麻耔中发现凝集素后，凝集素的研究全面展开。许多大型真菌含有大量的凝集素，据Ｐｅｍｂｃｒｔｏｎ报道，在其研究的４０３种大型真菌中，５０％具有很强的凝集素活性，而且目前双孢蘑菇凝集素已经成为一种商品…。
银耳（丁ｈ＂＂妇Ａｃ扣—ｎ妇Ｂｅｒｂ．又名白木耳，雪耳，在分类上隶属于真菌门（Ｅ
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补脑强心的功效外。还有提神益气、滋润皮肤、恢复肌肉疲劳、抵抗肿瘤等作用，具有极高的经济价值和研究价值。
迄今对银耳中的凝集素研究未见报道。本实验将对银耳在不同发育阶段，即孢子、菌丝体、子实体中所含的凝集素进行抽提，并对其细胞凝集活性、糖专一性、热稳定性等性能进行测定，在此基础上分析不同生长期凝集素的差异，为其进一步的研究提供理论依据。
１
材料与方法材料和试剂
银耳子实体、银耳菌丝体、银耳孢子：由本实验
１．１
ｏｔ
ａ），担子菌纲
（Ｂａｓｉｄｉｏｍｙｃｅｔｅｓ），银耳日（ＴｒｅｍｅＩＪａｌｃｓ），银耳科
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１．２１．２．１
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ｏｈｍｅｎａｃｅ壮），银耳属（１协ｅｎａ），属中温、好气性真菌．
主要分布于亚热带，也分布于热带、温带和寒带…。银耳甘平无毒，除具有润肺生律、滋阴养胃、益气和血、
收稿日期：２００６－０９－１５
公司．其它糖为国产分析纯，其余试剂均为分析纯。
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银耳凝集素的提取
’通讯作者
作者简介：侣国涵（１９８ｌ－），男，硕士研究生，研究方向为食品微生物。
鲞茔堡！｜婴壅垦旦型兰
２．５
：翌二翌：；翌竺：！：：篮
孢子、菌丝体、子实体凝集素在ｐＨ３．６～１０．０的条件下对鸡红细胞的凝集活性。从表３中可见银耳孢子、苗丝体、子实体凝集素的耐酸碱性具有显著差异．孢子凝集素在ｐＨ６．０～７．０之间凝集活性较高，当ｐＨ＜５．０和ｐＨ＞７．Ｏ时，其活性明显下降。菌丝体凝集素在ｐＨ６．Ｏ～１０．０之间凝集活性较高，在ｐＨ４．０时凝集活性大部分丧失，ｐＨ３．６时，活性则完全丧失。子实体凝集素在ｐＨ３．６～７．Ｏ之间凝集活性较高，当ｐＨ＞７．２时，活性逐渐下降，在口Ｈ１０．０时，活性大部分消失。比较三者可得，孢子凝集素的耐酸碱性比其它两种凝集素弱，但菌丝体凝集素不耐强酸，而子实体凝集素不耐强碱。
裹３
ｐＨ僵对镊耳凝集素活性的影响
实体凝集素活性的恢复无任何作用。
银耳孢子、菌丝体、子实体凝集素的糖抑制实验在“Ｖ”型血凝板上测得孢子、菌丝体、子实体凝集素的糖抑制结果如表５所示。从表中看出．Ｄ．葡萄糖、Ｄ．甘露糖、麦芽糖，蔗糖、木糖、乳糖、Ｄ．半乳糖、Ｎ－乙酰氨基葡萄糖这八种糖对孢子、子实体凝集素的凝集活性无抑制作用，而菌丝体凝集素的凝集作用可被乳糖抑制。
囊５
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３
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注：ｕ：无抑制作用；“＋”：有抑制作用．
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注；供试样品活性：袍子ｓｕ；菌丝件１６ｕ；子实体３２ｕ．
３．１
２．４
讨论
凝集素的细胞凝集作用是凝集分子的一个亚基与一
金属离子对银耳孢子、菌丝体、子实体凝集素细金属离子对孢子、菌丝体、子实体凝集素的影
个细胞表面的凝集素专一识别的糖基结合，另一个亚基与另一个细胞上的糖基结合，从而通过凝集素的“架桥”作用而导致的。本实验中银耳孢子、菌丝体、子实体的提取物都能使鸡红细胞凝集。热稳定性实验表明银耳孢子、菌丝体，子实体凝集素对热均较为敏感，因此在进一步的分离纯化过程中，应控制好温度以保证其生物活性。
３．２
胞凝集活性的影响
响，由表４表明：三种凝集素经ＥＤＴＡ处理后凝集活性消失，即孢子、菌丝体、子实体凝集素对鸡红细胞的凝集活性都与金属离子有关。Ｚｎ“、Ｍｇ２＋、Ａ１３＋等离
子在浓度为１．５６衄０１，Ｌ时，即可使银耳菌丝体和子实体
凝集素具有凝集细胞的活性，而孢子凝集素凝集所需的最低浓度为６．２５ｍｍｏｌ几．而Ｃａ２＋在很高的浓度下，才使各凝集素出现凝集活性。Ｍｇｚ＋对孢子、菌丝体、子
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全属离子对镊耳凝集寰的细胞凝集活性的影响
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酸碱稳定性实验表明银耳孢子、菌丝体、子实体
凝集素对酸碱的敏感度存在较大的差异。孢子凝集素在中性环境中稳定，在酸性和碱性环境中凝集活性都下降；菌丝体凝集素对碱具有一定的稳定性，但对酸不稳定；而子实体凝集素与菌丝体凝集素相反．凝集素与糖基的结合是一种非共价的相互作用，氢键、疏水键和静电力都是可能的因素州，在碱性条件下（ｐＨ７．２～１０．０），子实体凝集素的细胞凝集活性下降，说明子实体凝集素与糖基的结合部位可能有带正电性基团的参与．菌丝体凝集素与糖基的结合部位可能有带负电性基团的参与，而孢子凝集素与糖基的结合部位可能有无极性的基团参与。这也表明银耳孢子、菌丝体、子实体凝集素活性
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金属离子——瓦耳ｉ；童量壁里墨ｉ：；ｉ；堡堕壁生彘
注：供试样品活性：抱子８ｕ；菌蛙体１
不凝集。
６ｕｌ子实体３２ｕ．…
基团组成可能是不同的。其具体的结构差异还待于进一步研究。