・３９２・
文章编号：１０００－１３３６（２００６）０５－０３９２－０４
生命的化学》《２００６年２６卷５期
ＣＨＥＭＩＳＴＲＹＯＦＬＩＦＥ２００６，２６（５）
●ＲｅｃｅｎｔＰｒｏｇｒｅｓｓｅｓ
哺乳动物精卵黏附和融合的分子基础
段晓刚张红国刘睿智
（东北师范大学遗传与细胞研究所，
长春１３００２４；
１
１
李晓影鲁郎芳
长春１３００２１）
吉林大学基础医学院细胞生物学教研室，
摘要：哺乳动物受精是一个多分子参与的多级过程，在精卵融合形成一个受精卵时达到顶点。新的研究已表
明：精卵黏附后，精子膜从赤道区开始与卵膜融合；有精子膜上的去整合蛋白金属蛋白酶蛋白家族（ＡＤＡＭ）、
Ｉｚｕｍｏ、附睾蛋白ＤＥ、卵膜上的整合蛋白、四次跨膜蛋白ＣＤ９、ＣＤ８１、糖基磷脂酰肌醇锚定蛋白等多种分子参
与精卵黏附和融合过程。关键词：
精卵黏附和融合；
受精蛋白；
Ｉｚｕｍｏ；四次跨膜蛋白ＣＤ９；糖基磷脂酰肌醇锚定蛋白
中图分类号：Ｒ３２１，Ｑ４９２
哺乳动物受精是一个由多个分子参与的多级过程，在精卵黏附、膜融合形成受精卵时达到顶点。精子与卵母细胞融合首先要穿透卵母细胞外基质的两层结构：卵丘颗粒细胞层和透明带
面———顶体内膜（ｉｎｎｅｒａｃｒｏｓｏｍａｌｍｅｍｂｒａｎｅ），改变
了精子形态［１］。后顶体膜保留下来，在后顶体膜和顶体内膜之间是赤道区（ｅｑｕａｔｏｒｉａｌｒｅｇｉｏｎ），赤道区细胞膜结构也发生相应变化，以适应即将发生的膜融合。当精子接触到卵母细胞膜上的微绒毛的顶端时，周围的微绒毛会快速地伸长和聚集到精子上，把精子牢牢抓住，以促进与卵母细胞的融合。随后，精卵膜融合首先从赤道区的细胞膜开始，精子膜结合到卵母细胞膜上，最后精子核进入卵母细胞质中，二者融合为一体［２］（图１）。
（ＺＰ）。正常情况下，只有一个精子能穿透这两层
与卵母细胞质膜相互作用，使膜融合形成受精卵。获能过程的超激活使精子足够穿越卵丘颗粒细胞层，接受ＺＰ信号的精子发生顶体反应，最终形成受精卵［１］。新的研究揭示了精卵黏附和膜融合的分子基础。
１．精卵黏附和膜融合
精子头部顶体前方的细胞膜称为前顶体区，
其上的蛋白质与精子识别卵母细胞引起顶体反应有关。精子头部非顶体区的细胞膜称为后顶体区，在前顶体区和后顶体区之间的部分称为赤道区，赤道区的细胞膜上有与卵膜融合的融合蛋白。
卵子有一个独特的结构，最外层围绕着数千个颗粒细胞，其内是透明带。透明带的内层，即卵母细胞膜可以分为两种表面区域：一是无微绒毛的区域，专指减数分裂纺锤体外侧区域；一是富含微绒毛的区域，除减数分裂纺锤体外侧区的其他全部区域，现已知精卵融合主要发生在该区域，在缺少微绒毛的区域精卵很少融合。
精子借助顶体反应穿过卵母细胞透明带，同时，顶体反应导致精子膜发生重大的改变。精子头部前顶体区细胞膜脱落，暴露出一层新的膜表
———————————
收稿日期：２００６－０５－２２
吉林省科技厅基金资助项目（Ｎｏ．２００５０５１４０）作者简介：
段晓刚（１６５１—），男，硕士，副教授，硕士生导
师，联系作者，Ｅ－ｍａｉｌ：ｄｕａｎｘｉａｏｇａｎｇ＠ｙａｈｏｏ．ｃｏｍ．ｃｎ
图１精子膜与卵母细胞膜融合［２］
Ｃ，精子进入微绒毛区；ｄ，精子在赤道区开始与卵母细胞膜融合；ｅ，精子核被释放进入卵母细胞质中。
ｉｎｎｅｒａｃｒｏｓｏｍａｌｍｅｍｂｒａｎｅ，顶体内膜；ｅｑｕａｔｏｒｉａｌｓｅｇｍｅｎｔ，赤道区；ｏｏｃｙｔｅｍｉｃｒｏｖｉｌｌｉ，卵母细胞微绒毛。
２．
精子膜上相关蛋白质分子
●新进展
生命的化学》《２００６年２６卷５期
ＣＨＥＭＩＳＴＲＹＯＦＬＩＦＥ２００６，２６（５）
・３９３・
２．１去整合蛋白金属蛋白酶蛋白家族（ＡＤＡＭ）
精子膜上的去整合蛋白金属蛋白酶结构域蛋白家族
（ｆａｍｉｌｙｏｆｐｒｏｔｅｉｎｗｉｔｈａｄｉｓｉｎｔｅｇｒｉｎａｎｄｍｅｔａｌｌｏｐｒｏ－ｔｅａｓｅｄｏｍａｉｎ，ＡＤＡＭ），包含α受精蛋白（ｆｅｒｔｉｌｉｎα），β受精蛋白（ｆｅｒｔｉｌｉｎβ）和富半胱氨酸睾蛋白（ｃｙｒｉｔｅｓｔｉｎ），分别被称为ＡＤＡＭ１、ＡＤＡＭ２和ＡＤＡＭ３，它们都含有一个去整合蛋白和金属蛋白酶结构域。β受精蛋白最初被称为ＰＨ－３０；而富半胱氨酸睾蛋白作为一种单独的蛋白质起作用；α
受精蛋白有一个氨基酸序列称为融合肽，与去整合蛋白结构域一起能够与卵母细胞上的整合蛋白相结合，该融合肽具有以下特征：（１）具有膜结合亚基；（２）具有强的疏水性等。因此，精子上的
ＡＤＡＭ可能在精卵黏附和融合中起重要的作用［２］。
受精蛋白，由ＡＤＡＭ１和ＡＤＡＭ２两个亚基组成的蛋白质复合体（图２），具有一般细胞分泌的黏着蛋白的特性，富含精氨酸（Ｒ）－甘氨酸（Ｇ）－天冬氨酸（Ｄ）相连，这种特性能使其蛋白质嵌入与之结
合的蛋白质内使二者合二为一。体外研究显示，受精蛋白的Ｎ末端是推定的整合蛋白结合域，会结合到卵母细胞膜内的整合蛋白上，以帮助精子黏附于卵母细胞膜上，准备融合。
Ｋｉｍ等［３］报道：缺乏ＡＤＡＭ１ｂ的突变雄性小
鼠是能生育的；ＡＤＡＭ１ｂ丢失的结果对精子功能
没有太大影响，如不影响精子从子宫向输卵管的运动、结合透明带、和无透明带卵母细胞的融合。尽管睾丸精子细胞的ＡＤＡＭ２正常出现，
但
ＡＤＡＭ１ｂ缺陷的附睾精子表现出细胞表面ＡＤＡＭ２严重减少。ＡＤＡＭ１ｂ和ＡＤＡＭ２在精子表面的出现依赖于在睾丸精子上ＡＤＡＭ１ｂ／ＡＤＡＭ２受精蛋白的
大量形成。另外，有体外实验显示缺乏受精蛋白的精子能使卵母细胞受精，但效率极差，提示其可能与其他蛋白质共同调节精卵的黏附和融合。
２．２ＩｚｕｍｏＩｚｕｍｏ是第一个被发现的精子相关精卵融合因子（图２），该分子是免疫球蛋白超家族
的一个成员。存在与人精子中，抗Ｉｚｕｍｏ的抗体能阻止精卵融合。
Ｉｎｏｕｅ等［４］报道：Ｉｚｕｍｏ－／－小鼠是健康的但雄性
不育，能产生表面正常的精子，能结合和穿透透明带，但不能与卵融合。实验表明：完成顶体反应的Ｉｚｕｍｏ－／－精子不能与卵母细胞融合，而通过单精子胞质内注射（ｉｎｔｒａｃｙｔｏｐｌａｓｍｉｃｓｐｅｒｍｉｎｊｅｃｔｉｏｎ，
ＩＣＳＩ），使Ｉｚｕｍｏ－／－精子绕过融合过程直接进入胞质
中，此时卵母细胞能被成功激活，受精卵正常移
植，胚胎能正常发育，结果与野生型的精子受精结果基本一致。
图２引发受精的事件及精卵融合相关候选分子［１２］
Ａｃｒｏｓｏｍｅ－ｉｎｔａｃｔｓｐｅｒｍ，顶体反应精子；Ｃｕｍｕｌｕｓｃｅｌｌ，卵丘细胞；Ａｃｒｏｓｏｍｅｒｅａｃｔｉｏｎ，顶体反应；Ｚｏｎａｐｅｌｌｕｃｉｄａ，透明带；
Ｐｅｒｉｖｉｔｅｌｌｉｎｅｓｐａｃｅ，卵周隙；Ｅｇｇｐｌａｓｍａ
ｍｅｍｂｒａｎｅ，卵膜；Ｆｅｒｔｉｌｉｎα
β，αβ受精蛋白；Ｓｐｅｒｍｐｌａｓｍａｍｅｍｂｒａｎｅ，精子质膜；Ｃｙｒｉｔｅｓｔｉｎ，富半胱氨酸睾蛋白；ＧＰＩ－ａｎｃｈｏｒｅｄｐｒｏｔｅｉｎ，糖基磷脂酰肌醇锚定蛋白；
Ｉｎｔｅｇｒｉｎ，整合蛋白。
２．３附睾蛋白Ｄｅ
精子在附睾中成熟期间，附睾蛋白Ｄｅ（ｅｐｉｄｉｄｙｍａｌｐｒｏｔｅｉｎＤｅ）与精子表面相结合。附睾蛋白Ｄｅ因为在精子表面也表达，因此成为一个参与融合的候选分子。附睾蛋白Ｄｅ是一个３７ｋＤ的糖蛋白，由附睾上皮细胞合成并分泌，又称为富含半胱氨酸的分泌蛋白１（ｃｙｓｔｅｉｎｅ－
ｒｉｃｈｓｅｃｒｅｔｏｒｙｐｒｏｔｅｉｎ１，ＣＲＩＳＰ１）。Ｃｏｈｅｎ等［５］报道：在附睾蛋白Ｄｅ上缺少去整合蛋白结构域表明，附睾蛋白Ｄｅ不包含在去整合蛋白–整合蛋
白相互作用的机制中，可能与卵母细胞上相关结合位点相互作用。
３．卵母细胞膜上相关蛋白质分子
３．１整合蛋白
整合蛋白（Ｉｎｔｅｇｒｉｎ）是目前公认的精子ＡＤＡＭ在卵母细胞膜上的受体。有关整合蛋白的研究较多，是精卵相互结合主要的候选蛋白。整合蛋白家族的第一个受到重视的成员是
α６β１，ＧｏＨ３作为抗α６整合蛋白亚基的功能性抗
体，能阻断精卵黏附和膜融合。来自于受精蛋白
β去整合蛋白结构域的部分或全部的序列的多个
肽能与α６β１整合蛋白相结合。目前，有关α６β１
整合蛋白对精卵黏附的作用还没有确切定论，由于不同条件下用ＧｏＨ３ｍＡｂ进行的一些试验表明
，
・３９４・
生命的化学》《２００６年２６卷５期
ＣＨＥＭＩＳＴＲＹＯＦＬＩＦＥ２００６，２６（５）
●ＲｅｃｅｎｔＰｒｏｇｒｅｓｓｅｓ
精卵膜结合没有被阻断，但是整合蛋白在精卵黏附和融合中的作用并非是多余的［２］。整合蛋白作为受体与去整合蛋白相互作用，是精卵相互作用的执行者［６］。
３．２四次跨膜蛋白ＣＤ９
卵母细胞膜上的ＣＤ９是广泛存在的四次跨膜蛋白家族（ｔｅｔｒａｓｐａｎｏｒｔｒａｎｓ－
ｍｅｍｂｒａｎｅｆｏｕｒｓｕｐｅｒｆａｍｉｌｙｐｒｏｔｅｉｎ）的一种，其分子有４个跨膜区、大小２个胞外环。尽管四次跨膜
蛋白的功能域还不清楚，但一些报道显示它能与其他蛋白质相互作用，如整合蛋白、免疫球蛋白、蛋白聚糖、补体调节蛋白（ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔｒｅｇｕｌａ－
ｔｏｒｙｐｒｏｔｅｉｎ）、生长因子受体等。因此，ＣＤ９被认
为是一种多蛋白复合体，能在多种细胞和生理过程中起作用，如病毒感染、细胞支持和运动和肌细胞融合等。１９９９年，Ｃｈｅｎ等首次发现抗ＣＤ９抗体能抑制体外精卵黏附和融合，发现了ＣＤ９在受精中的作用。与这些结果相一致的是，ＣＤ９在小鼠卵母细胞表面大量表达，除了减数分裂纺锤体的区域（整个卵母细胞唯一没有微绒毛的区域，此处精卵融合几乎无效）外，分布于几乎整个卵子的表面。研究发现，ＣＤ９的分布区域与α６整合蛋白的区域一致，整合蛋白作为受精蛋白的受体，也可能与精子表面的ＣＤ９相互作用［２］。
Ｚｈｕ等［７］发现：从缺乏ＣＤ９的小鼠体内取出
卵母细胞，此卵母细胞与精子融合的能力严重损害，但如果将野生型ＣＤ９ｍＲＮＡ注射到卵母细胞中，则精卵融合能力可以得到恢复。ＣＤ９功能区包括大的胞外环（第二个环），该区域特定的氨基酸序列ＳＦＱ被认为是ＣＤ９在精卵融合中的激活位点。研究发现：若１７４氨基酸残基（Ｆ－Ａ）发生点突变或者１７３－１７５（ＳＦＱ－ＡＡＡ）发生突变，将严重降低精卵黏附的能力。
Ｈｉｇｇｉｎｂｏｔｔｏｍ等［８］发现：小鼠ＣＤ９的大胞外环仅抑制融合，但来自ＣＤ９的大胞外环既能抑制精卵黏附又能抑制融合。Ｚｉｙｙａｔ等［９］研究表明：ＣＤ９
控制一些膜蛋白的重新分配，包括四次跨膜蛋白和α６β１整合蛋白聚集形成簇（ｃｌｕｓｔｅｒ）等，而这些簇对精卵融合是必需的。
３．３ＣＤ８１Ｒｕｂｉｎｓｔｅｉｎ等［１０］等报道：ＣＤ８１在卵母细胞表面表达，与富含四次跨膜结构相联系。另
外，一个主要的ＣＤ９和ＣＤ８１合作者ＣＤ９Ｐ－１也在卵母细胞上表达。ＣＤ８１基因缺失导致雌性生育
４０％的减少，体外受精表明这种不育确实是由精卵不能融合所致。ＣＤ９－／－小鼠的生育严重削弱但不
完全，而ＣＤ９－／－和ＣＤ８１－／－双基因剔除小鼠是完全不育的，提示ＣＤ９和ＣＤ８１在精卵融合过程中执行相互补充的作用。研究发现：ＣＤ９的一个片段从ＣＤ８１－／－卵子上转移到出现在卵母细胞微绒毛区域的精子上，表明ＣＤ８１－／－卵子融合的缺失不是因为早期精卵相互作用的削弱。
３．４糖基磷脂酰肌醇锚定蛋白
基因剔除研究表明：卵母细胞膜上的糖基磷脂酰肌醇锚定蛋白
（ｇｌｙｃｏｓｙｌｐｈｏｓｐｈａｔｉｄｙｌｉ－ｎｏｓｉｔｏｌ－ａｎｃｈｏｒｅｄｐｒｏｔｅｉｎ，ＧＰＩ－ＡＰ）对受精卵是必需的。ＧＰＩ－ＡＰ是一个不同
功能亚基组成的蛋白质聚集体，包括支持分子、受体、补体调节物（ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔｒｅｇｕｌａｔｏｒ）、酶和信号分子。除了Ｃ末端连接脂质外，它们都有一个富含胆固醇和鞘脂类的微结构域定位在质膜中。用磷脂酰肌醇－磷脂酶Ｃ（ｐｈｏｓｐｈａｔｉｄｙｌｉｎｏｓｉｔｏｌ－ｓｐｅ－
ｃｉｆｉｃｐｈｏｓｐｈｏｌｉｐａｓｅＣ，ＰＩ－ＰＬＣ）处理小鼠卵母细胞
会释放两个ＧＰＩ－ＡＰ，导致精卵黏附减弱，融合
被严重地阻止。
Ａｌｆｉｅｒｉ等［１１］报道：体外实验显示基因剔除的卵母细胞与精子融合的能力严重缺陷，表明ＧＰＩ－ＡＰ对精卵黏附是必需的。质膜蛋白中ＧＰＩ锚定补体（ＧＰＩ－ａｎｃｈｏｒｅｄｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔ）的丢失，能通过改变ＧＰＩ－ＡＰ包含的脂质结构和功能来阻止精卵融合。研究发现，ＣＤ５５是一个ＧＰＩ－ＡＰ补体调节蛋白，ＣＤ５５基因剔除小鼠是能生育的，结果表明：对精卵黏附而言，并不需要全部的ＧＰＩ－ＡＰ补体调节
蛋白都存在。
４．展望
精卵黏附与融合是一个多种分子参与的复杂过程，目前所知的相关分子还难以说明其具体的
分子机制。Ｓｃｈｕｌｔｚ等［１２］报道了新的精卵融合的分子概况（图２），更多的精卵黏附和膜融合相关分子的鉴定和描述，将会有助于更好地理解哺乳动物精卵融合的分子机制。近来，β受精蛋白和富含半胱氨酸睾蛋白的研究颇受关注，有研究显示，在它们缺乏的情况下，精卵融合能够发生。精子膜上缺少Ｉｚｕｍｏ，精卵不能融合；ＧＰＩ－ＡＰ在精卵黏附和融合中起重要作用；在小鼠中缺少ＣＤ９和
ＣＤ８１，受精会完全被阻止。
受精过程包括精卵识别、支持、黏附、融合和卵母细胞被激活，其中的任何一步被阻止都会导致受精不能完成，结果致使不育。当前，临床上对精液常规检测技术已基本成熟，对诱导顶体反应的研究也不少；体外受精（ＩＶＦ）、胞质内精子
●新进展
文章编号：１０００－１３３６（２００６）０５－０３９５－０４
生命的化学》《２００６年２６卷５期
ＣＨＥＭＩＳＴＲＹＯＦＬＩＦＥ２００６，２６（５）
・３９５・
病毒诱导Ｉ型干扰素产生的机制
李军
（
１
１，２
曾芸
２
广西兽医研究所，南宁５３０００１；
２
广西大学动物科学技术学院，南宁５３０００５）
摘要：病毒的病原体相关分子模式被细胞的相关受体识别后，分别经过Ｔｏｌｌ样受体途径和核酸结合蛋白途径进
行信号转导，启动β－干扰素的转录和合成。从感染细胞分泌的β－干扰素与细胞膜上Ｉ型干扰素共有的受体结合后，经Ｊａｋ／ＳＴＡＴ信号途径刺激细胞产生一系列具有抗病毒效应的的干扰素刺激因子。干扰素调节因子７作为一种干扰素刺激因子在启动随后的α、β－干扰素转录中起着重要作用。α－干扰素的产生进一步放大了产生干扰素刺激基因的信号，形成一个正反馈回路，加强了免疫应答的强度和延长免疫应答的时间。关键词：
病毒；
Ｔｏｌｌ样受体；ＲＩＧ－Ｉ；Ｍｄａ－５；Ｉ型干扰素
中图分类号：Ｑ５１
病毒作为一种只具有核酸（ＤＮＡ或ＲＮＡ）和蛋
白质的简单生物体，决定了它只能通过感染的形式，依赖细胞进行复制和生存。机体的天然免疫应答是机体对抗病毒入侵的第一道防线，阻止病毒从感染细胞向邻近的未感染细胞扩散。天然免疫应答的一个重要方面是Ｉ型干扰素（ＩＦＮ－Ｉ）的合成和分泌。ＩＦＮ－Ｉ是一类具有抗病毒活性、抗细胞增殖和免疫调节作用的蛋白质，包括ＩＦＮ－β、
引发各种生理反应。目前对病毒诱导Ｉ型干扰素
产生的机制研究较为深入，本文将对其最新的进展作一综述。
１．ＰＡＭＰ与细胞受体的结合
病原体在漫长的进化过程中，一直保留着一
部分被称为病原体相关分子模式（ｐａｔｈｏｇｅｎ－
ａｓｓｏｃｉａｔｅｄｍｏｌｅｃｕｌａｒｐａｔｔｅｒｎ，ＰＡＭＰ）的结构成分。ＰＡＭＰ为某一大组或几大组病原体共有，故其所
代表的是一种分子模式而非某一特定结构，它完全不同于宿主机体自身成分。机体的天然免疫系统，通过在进化过程中产生的一套模式识别受体来识别这些非己的ＰＡＭＰ，并采取相应对策清除入侵的病原体。病毒感染宿主细胞时，细胞表达的
ＩＦＮ－ω和多个ＩＦＮ－α亚型。Ｉ型干扰素可与细胞
膜上的特异性受体结合，引发级联性的信号放大过程，将信号最后传递到细胞核内，对一系列干扰素刺激基因（ＩＳＧ）的表达进行调控，诱导靶细胞产生特异性抗病毒蛋白，如双链ＲＮＡ依赖的蛋白激酶Ｒ（ＰＫＲ）、２′，５′－寡聚腺苷酸合成酶等，并
———————————
收稿日期：
ＰＡＭＰ受体识别和递呈病毒的ＰＡＭＰ，经一系列的
信号转导最终导致抗病毒效应基因的表达。病毒蛋白和富含尿嘧啶的核酸或者病毒，在复制过程产生的双链ＲＮＡ都可以作为ＰＡＭＰ，而细胞的
２００６－０８－０３
李军（１９７１—），男，博士生，助理研究员，Ｅ－
曾芸（１９７２—），女，硕士，讲师，
广西大学科研基金项目（Ｎｏ．Ｘ０６１０３２）作者简介：
ｍａｉｌ：ｊｌｅｅ９９８１＠１６３．ｃｏｍ；Ｅ－ｍａｉｌ：ｙｚｅｎｇ３２３＠１６３．ｃｏｍ
Ｔｏｌｌ样受体或核酸结合蛋白都可以识别ＰＡＭＰ［１，２］，
并经下列途径进行信号转导。
""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""
注射（ＩＣＳＩ）等辅助生殖技术的发展也很快。但是，对精卵结合的检测却很少。更多相关分子的鉴定将会更好地理解生育调控，发展更多的检测精卵结合的测定方法，这对进一步探索人类不育的诊断和治疗方法将会打开更宽阔的前景。
参
［１］［２］
［３］［４］［５］［６］［７］［８］［９］
ＫｉｍＥｅｔａｌ．ＪＢｉｏｌＣｈｅｍ，２００６，２８１（９）：５６３４—５６３９ＩｎｏｕｅＮｅｔａｌ．Ｎａｔｕｒｅ，２００５，４３４（７０３０）：２３４—２３８ＣｏｈｅｎＤＪｅｔａｌ．ＢｉｏｌＲｅｐｒｏｄ，２０００，６３（２）：４６２—４６８ＳｈｒｉｍａｌｉＲＫｅｔａｌ．ＩｎｄｉａｎＪＥｘｐＢｉｏｌ，２０００，３８（５）：４１５—４２４ＺｈｕＧＺｅｔａｌ．Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ，２００２，１２９（８）：１９９５—２００２ＨｉｇｇｉｎｂｏｔｔｏｍＡｅｔａｌ．ＢｉｏｃｈｅｍＢｉｏｐｈｙｓＲｅｓＣｏｍｍｕｎ，２００３，３１１（１）：２０８—２１４
ＺｉｙｙａｔＡｅｔａｌ．ＪＣｅｌｌＳｃｉ，２００６，１１９（Ｐｔ３）：４１６—４２４［１０］ＲｕｂｉｎｓｔｅｉｎＥｅｔａｌ．ＤｅｖＢｉｏｌ，２００６，２９０（２）：３５１—３５８
ＳｔｅｉｎＫＫｅｔａｌ．ＪＣｅｌｌＳｃｉ，２００４，１１７（Ｐｔ２６）：６２６９—６２７４ＫａｊｉＫｅｔａｌ．Ｒｅｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ，２００４，１２７（４）：４２３—４２９
［１１］ＡｌｆｉｅｒｉＪＡｅｔａｌ．ＪＣｅｌｌＳｃｉ，２００３，１１６（Ｐｔ１１）：２１４９—２１５５［１２］ＳｃｈｕｌｔｚＲｅｔａｌ．Ｎａｔｕｒｅ，２００５，４３４（７０３０）：１５２—１５３
考文献
・３９２・
文章编号：１０００－１３３６（２００６）０５－０３９２－０４
生命的化学》《２００６年２６卷５期
ＣＨＥＭＩＳＴＲＹＯＦＬＩＦＥ２００６，２６（５）
●ＲｅｃｅｎｔＰｒｏｇｒｅｓｓｅｓ
哺乳动物精卵黏附和融合的分子基础
段晓刚张红国刘睿智
（东北师范大学遗传与细胞研究所，
长春１３００２４；
１
１
李晓影鲁郎芳
长春１３００２１）
吉林大学基础医学院细胞生物学教研室，
摘要：哺乳动物受精是一个多分子参与的多级过程，在精卵融合形成一个受精卵时达到顶点。新的研究已表
明：精卵黏附后，精子膜从赤道区开始与卵膜融合；有精子膜上的去整合蛋白金属蛋白酶蛋白家族（ＡＤＡＭ）、
Ｉｚｕｍｏ、附睾蛋白ＤＥ、卵膜上的整合蛋白、四次跨膜蛋白ＣＤ９、ＣＤ８１、糖基磷脂酰肌醇锚定蛋白等多种分子参
与精卵黏附和融合过程。关键词：
精卵黏附和融合；
受精蛋白；
Ｉｚｕｍｏ；四次跨膜蛋白ＣＤ９；糖基磷脂酰肌醇锚定蛋白
中图分类号：Ｒ３２１，Ｑ４９２
哺乳动物受精是一个由多个分子参与的多级过程，在精卵黏附、膜融合形成受精卵时达到顶点。精子与卵母细胞融合首先要穿透卵母细胞外基质的两层结构：卵丘颗粒细胞层和透明带
面———顶体内膜（ｉｎｎｅｒａｃｒｏｓｏｍａｌｍｅｍｂｒａｎｅ），改变
了精子形态［１］。后顶体膜保留下来，在后顶体膜和顶体内膜之间是赤道区（ｅｑｕａｔｏｒｉａｌｒｅｇｉｏｎ），赤道区细胞膜结构也发生相应变化，以适应即将发生的膜融合。当精子接触到卵母细胞膜上的微绒毛的顶端时，周围的微绒毛会快速地伸长和聚集到精子上，把精子牢牢抓住，以促进与卵母细胞的融合。随后，精卵膜融合首先从赤道区的细胞膜开始，精子膜结合到卵母细胞膜上，最后精子核进入卵母细胞质中，二者融合为一体［２］（图１）。
（ＺＰ）。正常情况下，只有一个精子能穿透这两层
与卵母细胞质膜相互作用，使膜融合形成受精卵。获能过程的超激活使精子足够穿越卵丘颗粒细胞层，接受ＺＰ信号的精子发生顶体反应，最终形成受精卵［１］。新的研究揭示了精卵黏附和膜融合的分子基础。
１．精卵黏附和膜融合
精子头部顶体前方的细胞膜称为前顶体区，
其上的蛋白质与精子识别卵母细胞引起顶体反应有关。精子头部非顶体区的细胞膜称为后顶体区，在前顶体区和后顶体区之间的部分称为赤道区，赤道区的细胞膜上有与卵膜融合的融合蛋白。
卵子有一个独特的结构，最外层围绕着数千个颗粒细胞，其内是透明带。透明带的内层，即卵母细胞膜可以分为两种表面区域：一是无微绒毛的区域，专指减数分裂纺锤体外侧区域；一是富含微绒毛的区域，除减数分裂纺锤体外侧区的其他全部区域，现已知精卵融合主要发生在该区域，在缺少微绒毛的区域精卵很少融合。
精子借助顶体反应穿过卵母细胞透明带，同时，顶体反应导致精子膜发生重大的改变。精子头部前顶体区细胞膜脱落，暴露出一层新的膜表
———————————
收稿日期：２００６－０５－２２
吉林省科技厅基金资助项目（Ｎｏ．２００５０５１４０）作者简介：
段晓刚（１６５１—），男，硕士，副教授，硕士生导
师，联系作者，Ｅ－ｍａｉｌ：ｄｕａｎｘｉａｏｇａｎｇ＠ｙａｈｏｏ．ｃｏｍ．ｃｎ
图１精子膜与卵母细胞膜融合［２］
Ｃ，精子进入微绒毛区；ｄ，精子在赤道区开始与卵母细胞膜融合；ｅ，精子核被释放进入卵母细胞质中。
ｉｎｎｅｒａｃｒｏｓｏｍａｌｍｅｍｂｒａｎｅ，顶体内膜；ｅｑｕａｔｏｒｉａｌｓｅｇｍｅｎｔ，赤道区；ｏｏｃｙｔｅｍｉｃｒｏｖｉｌｌｉ，卵母细胞微绒毛。
２．
精子膜上相关蛋白质分子
●新进展
生命的化学》《２００６年２６卷５期
ＣＨＥＭＩＳＴＲＹＯＦＬＩＦＥ２００６，２６（５）
・３９３・
２．１去整合蛋白金属蛋白酶蛋白家族（ＡＤＡＭ）
精子膜上的去整合蛋白金属蛋白酶结构域蛋白家族
（ｆａｍｉｌｙｏｆｐｒｏｔｅｉｎｗｉｔｈａｄｉｓｉｎｔｅｇｒｉｎａｎｄｍｅｔａｌｌｏｐｒｏ－ｔｅａｓｅｄｏｍａｉｎ，ＡＤＡＭ），包含α受精蛋白（ｆｅｒｔｉｌｉｎα），β受精蛋白（ｆｅｒｔｉｌｉｎβ）和富半胱氨酸睾蛋白（ｃｙｒｉｔｅｓｔｉｎ），分别被称为ＡＤＡＭ１、ＡＤＡＭ２和ＡＤＡＭ３，它们都含有一个去整合蛋白和金属蛋白酶结构域。β受精蛋白最初被称为ＰＨ－３０；而富半胱氨酸睾蛋白作为一种单独的蛋白质起作用；α
受精蛋白有一个氨基酸序列称为融合肽，与去整合蛋白结构域一起能够与卵母细胞上的整合蛋白相结合，该融合肽具有以下特征：（１）具有膜结合亚基；（２）具有强的疏水性等。因此，精子上的
ＡＤＡＭ可能在精卵黏附和融合中起重要的作用［２］。
受精蛋白，由ＡＤＡＭ１和ＡＤＡＭ２两个亚基组成的蛋白质复合体（图２），具有一般细胞分泌的黏着蛋白的特性，富含精氨酸（Ｒ）－甘氨酸（Ｇ）－天冬氨酸（Ｄ）相连，这种特性能使其蛋白质嵌入与之结
合的蛋白质内使二者合二为一。体外研究显示，受精蛋白的Ｎ末端是推定的整合蛋白结合域，会结合到卵母细胞膜内的整合蛋白上，以帮助精子黏附于卵母细胞膜上，准备融合。
Ｋｉｍ等［３］报道：缺乏ＡＤＡＭ１ｂ的突变雄性小
鼠是能生育的；ＡＤＡＭ１ｂ丢失的结果对精子功能
没有太大影响，如不影响精子从子宫向输卵管的运动、结合透明带、和无透明带卵母细胞的融合。尽管睾丸精子细胞的ＡＤＡＭ２正常出现，
但
ＡＤＡＭ１ｂ缺陷的附睾精子表现出细胞表面ＡＤＡＭ２严重减少。ＡＤＡＭ１ｂ和ＡＤＡＭ２在精子表面的出现依赖于在睾丸精子上ＡＤＡＭ１ｂ／ＡＤＡＭ２受精蛋白的
大量形成。另外，有体外实验显示缺乏受精蛋白的精子能使卵母细胞受精，但效率极差，提示其可能与其他蛋白质共同调节精卵的黏附和融合。
２．２ＩｚｕｍｏＩｚｕｍｏ是第一个被发现的精子相关精卵融合因子（图２），该分子是免疫球蛋白超家族
的一个成员。存在与人精子中，抗Ｉｚｕｍｏ的抗体能阻止精卵融合。
Ｉｎｏｕｅ等［４］报道：Ｉｚｕｍｏ－／－小鼠是健康的但雄性
不育，能产生表面正常的精子，能结合和穿透透明带，但不能与卵融合。实验表明：完成顶体反应的Ｉｚｕｍｏ－／－精子不能与卵母细胞融合，而通过单精子胞质内注射（ｉｎｔｒａｃｙｔｏｐｌａｓｍｉｃｓｐｅｒｍｉｎｊｅｃｔｉｏｎ，
ＩＣＳＩ），使Ｉｚｕｍｏ－／－精子绕过融合过程直接进入胞质
中，此时卵母细胞能被成功激活，受精卵正常移
植，胚胎能正常发育，结果与野生型的精子受精结果基本一致。
图２引发受精的事件及精卵融合相关候选分子［１２］
Ａｃｒｏｓｏｍｅ－ｉｎｔａｃｔｓｐｅｒｍ，顶体反应精子；Ｃｕｍｕｌｕｓｃｅｌｌ，卵丘细胞；Ａｃｒｏｓｏｍｅｒｅａｃｔｉｏｎ，顶体反应；Ｚｏｎａｐｅｌｌｕｃｉｄａ，透明带；
Ｐｅｒｉｖｉｔｅｌｌｉｎｅｓｐａｃｅ，卵周隙；Ｅｇｇｐｌａｓｍａ
ｍｅｍｂｒａｎｅ，卵膜；Ｆｅｒｔｉｌｉｎα
β，αβ受精蛋白；Ｓｐｅｒｍｐｌａｓｍａｍｅｍｂｒａｎｅ，精子质膜；Ｃｙｒｉｔｅｓｔｉｎ，富半胱氨酸睾蛋白；ＧＰＩ－ａｎｃｈｏｒｅｄｐｒｏｔｅｉｎ，糖基磷脂酰肌醇锚定蛋白；
Ｉｎｔｅｇｒｉｎ，整合蛋白。
２．３附睾蛋白Ｄｅ
精子在附睾中成熟期间，附睾蛋白Ｄｅ（ｅｐｉｄｉｄｙｍａｌｐｒｏｔｅｉｎＤｅ）与精子表面相结合。附睾蛋白Ｄｅ因为在精子表面也表达，因此成为一个参与融合的候选分子。附睾蛋白Ｄｅ是一个３７ｋＤ的糖蛋白，由附睾上皮细胞合成并分泌，又称为富含半胱氨酸的分泌蛋白１（ｃｙｓｔｅｉｎｅ－
ｒｉｃｈｓｅｃｒｅｔｏｒｙｐｒｏｔｅｉｎ１，ＣＲＩＳＰ１）。Ｃｏｈｅｎ等［５］报道：在附睾蛋白Ｄｅ上缺少去整合蛋白结构域表明，附睾蛋白Ｄｅ不包含在去整合蛋白–整合蛋
白相互作用的机制中，可能与卵母细胞上相关结合位点相互作用。
３．卵母细胞膜上相关蛋白质分子
３．１整合蛋白
整合蛋白（Ｉｎｔｅｇｒｉｎ）是目前公认的精子ＡＤＡＭ在卵母细胞膜上的受体。有关整合蛋白的研究较多，是精卵相互结合主要的候选蛋白。整合蛋白家族的第一个受到重视的成员是
α６β１，ＧｏＨ３作为抗α６整合蛋白亚基的功能性抗
体，能阻断精卵黏附和膜融合。来自于受精蛋白
β去整合蛋白结构域的部分或全部的序列的多个
肽能与α６β１整合蛋白相结合。目前，有关α６β１
整合蛋白对精卵黏附的作用还没有确切定论，由于不同条件下用ＧｏＨ３ｍＡｂ进行的一些试验表明
，
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生命的化学》《２００６年２６卷５期
ＣＨＥＭＩＳＴＲＹＯＦＬＩＦＥ２００６，２６（５）
●ＲｅｃｅｎｔＰｒｏｇｒｅｓｓｅｓ
精卵膜结合没有被阻断，但是整合蛋白在精卵黏附和融合中的作用并非是多余的［２］。整合蛋白作为受体与去整合蛋白相互作用，是精卵相互作用的执行者［６］。
３．２四次跨膜蛋白ＣＤ９
卵母细胞膜上的ＣＤ９是广泛存在的四次跨膜蛋白家族（ｔｅｔｒａｓｐａｎｏｒｔｒａｎｓ－
ｍｅｍｂｒａｎｅｆｏｕｒｓｕｐｅｒｆａｍｉｌｙｐｒｏｔｅｉｎ）的一种，其分子有４个跨膜区、大小２个胞外环。尽管四次跨膜
蛋白的功能域还不清楚，但一些报道显示它能与其他蛋白质相互作用，如整合蛋白、免疫球蛋白、蛋白聚糖、补体调节蛋白（ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔｒｅｇｕｌａ－
ｔｏｒｙｐｒｏｔｅｉｎ）、生长因子受体等。因此，ＣＤ９被认
为是一种多蛋白复合体，能在多种细胞和生理过程中起作用，如病毒感染、细胞支持和运动和肌细胞融合等。１９９９年，Ｃｈｅｎ等首次发现抗ＣＤ９抗体能抑制体外精卵黏附和融合，发现了ＣＤ９在受精中的作用。与这些结果相一致的是，ＣＤ９在小鼠卵母细胞表面大量表达，除了减数分裂纺锤体的区域（整个卵母细胞唯一没有微绒毛的区域，此处精卵融合几乎无效）外，分布于几乎整个卵子的表面。研究发现，ＣＤ９的分布区域与α６整合蛋白的区域一致，整合蛋白作为受精蛋白的受体，也可能与精子表面的ＣＤ９相互作用［２］。
Ｚｈｕ等［７］发现：从缺乏ＣＤ９的小鼠体内取出
卵母细胞，此卵母细胞与精子融合的能力严重损害，但如果将野生型ＣＤ９ｍＲＮＡ注射到卵母细胞中，则精卵融合能力可以得到恢复。ＣＤ９功能区包括大的胞外环（第二个环），该区域特定的氨基酸序列ＳＦＱ被认为是ＣＤ９在精卵融合中的激活位点。研究发现：若１７４氨基酸残基（Ｆ－Ａ）发生点突变或者１７３－１７５（ＳＦＱ－ＡＡＡ）发生突变，将严重降低精卵黏附的能力。
Ｈｉｇｇｉｎｂｏｔｔｏｍ等［８］发现：小鼠ＣＤ９的大胞外环仅抑制融合，但来自ＣＤ９的大胞外环既能抑制精卵黏附又能抑制融合。Ｚｉｙｙａｔ等［９］研究表明：ＣＤ９
控制一些膜蛋白的重新分配，包括四次跨膜蛋白和α６β１整合蛋白聚集形成簇（ｃｌｕｓｔｅｒ）等，而这些簇对精卵融合是必需的。
３．３ＣＤ８１Ｒｕｂｉｎｓｔｅｉｎ等［１０］等报道：ＣＤ８１在卵母细胞表面表达，与富含四次跨膜结构相联系。另
外，一个主要的ＣＤ９和ＣＤ８１合作者ＣＤ９Ｐ－１也在卵母细胞上表达。ＣＤ８１基因缺失导致雌性生育
４０％的减少，体外受精表明这种不育确实是由精卵不能融合所致。ＣＤ９－／－小鼠的生育严重削弱但不
完全，而ＣＤ９－／－和ＣＤ８１－／－双基因剔除小鼠是完全不育的，提示ＣＤ９和ＣＤ８１在精卵融合过程中执行相互补充的作用。研究发现：ＣＤ９的一个片段从ＣＤ８１－／－卵子上转移到出现在卵母细胞微绒毛区域的精子上，表明ＣＤ８１－／－卵子融合的缺失不是因为早期精卵相互作用的削弱。
３．４糖基磷脂酰肌醇锚定蛋白
基因剔除研究表明：卵母细胞膜上的糖基磷脂酰肌醇锚定蛋白
（ｇｌｙｃｏｓｙｌｐｈｏｓｐｈａｔｉｄｙｌｉ－ｎｏｓｉｔｏｌ－ａｎｃｈｏｒｅｄｐｒｏｔｅｉｎ，ＧＰＩ－ＡＰ）对受精卵是必需的。ＧＰＩ－ＡＰ是一个不同
功能亚基组成的蛋白质聚集体，包括支持分子、受体、补体调节物（ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔｒｅｇｕｌａｔｏｒ）、酶和信号分子。除了Ｃ末端连接脂质外，它们都有一个富含胆固醇和鞘脂类的微结构域定位在质膜中。用磷脂酰肌醇－磷脂酶Ｃ（ｐｈｏｓｐｈａｔｉｄｙｌｉｎｏｓｉｔｏｌ－ｓｐｅ－
ｃｉｆｉｃｐｈｏｓｐｈｏｌｉｐａｓｅＣ，ＰＩ－ＰＬＣ）处理小鼠卵母细胞
会释放两个ＧＰＩ－ＡＰ，导致精卵黏附减弱，融合
被严重地阻止。
Ａｌｆｉｅｒｉ等［１１］报道：体外实验显示基因剔除的卵母细胞与精子融合的能力严重缺陷，表明ＧＰＩ－ＡＰ对精卵黏附是必需的。质膜蛋白中ＧＰＩ锚定补体（ＧＰＩ－ａｎｃｈｏｒｅｄｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔ）的丢失，能通过改变ＧＰＩ－ＡＰ包含的脂质结构和功能来阻止精卵融合。研究发现，ＣＤ５５是一个ＧＰＩ－ＡＰ补体调节蛋白，ＣＤ５５基因剔除小鼠是能生育的，结果表明：对精卵黏附而言，并不需要全部的ＧＰＩ－ＡＰ补体调节
蛋白都存在。
４．展望
精卵黏附与融合是一个多种分子参与的复杂过程，目前所知的相关分子还难以说明其具体的
分子机制。Ｓｃｈｕｌｔｚ等［１２］报道了新的精卵融合的分子概况（图２），更多的精卵黏附和膜融合相关分子的鉴定和描述，将会有助于更好地理解哺乳动物精卵融合的分子机制。近来，β受精蛋白和富含半胱氨酸睾蛋白的研究颇受关注，有研究显示，在它们缺乏的情况下，精卵融合能够发生。精子膜上缺少Ｉｚｕｍｏ，精卵不能融合；ＧＰＩ－ＡＰ在精卵黏附和融合中起重要作用；在小鼠中缺少ＣＤ９和
ＣＤ８１，受精会完全被阻止。
受精过程包括精卵识别、支持、黏附、融合和卵母细胞被激活，其中的任何一步被阻止都会导致受精不能完成，结果致使不育。当前，临床上对精液常规检测技术已基本成熟，对诱导顶体反应的研究也不少；体外受精（ＩＶＦ）、胞质内精子
●新进展
文章编号：１０００－１３３６（２００６）０５－０３９５－０４
生命的化学》《２００６年２６卷５期
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病毒诱导Ｉ型干扰素产生的机制
李军
（
１
１，２
曾芸
２
广西兽医研究所，南宁５３０００１；
２
广西大学动物科学技术学院，南宁５３０００５）
摘要：病毒的病原体相关分子模式被细胞的相关受体识别后，分别经过Ｔｏｌｌ样受体途径和核酸结合蛋白途径进
行信号转导，启动β－干扰素的转录和合成。从感染细胞分泌的β－干扰素与细胞膜上Ｉ型干扰素共有的受体结合后，经Ｊａｋ／ＳＴＡＴ信号途径刺激细胞产生一系列具有抗病毒效应的的干扰素刺激因子。干扰素调节因子７作为一种干扰素刺激因子在启动随后的α、β－干扰素转录中起着重要作用。α－干扰素的产生进一步放大了产生干扰素刺激基因的信号，形成一个正反馈回路，加强了免疫应答的强度和延长免疫应答的时间。关键词：
病毒；
Ｔｏｌｌ样受体；ＲＩＧ－Ｉ；Ｍｄａ－５；Ｉ型干扰素
中图分类号：Ｑ５１
病毒作为一种只具有核酸（ＤＮＡ或ＲＮＡ）和蛋
白质的简单生物体，决定了它只能通过感染的形式，依赖细胞进行复制和生存。机体的天然免疫应答是机体对抗病毒入侵的第一道防线，阻止病毒从感染细胞向邻近的未感染细胞扩散。天然免疫应答的一个重要方面是Ｉ型干扰素（ＩＦＮ－Ｉ）的合成和分泌。ＩＦＮ－Ｉ是一类具有抗病毒活性、抗细胞增殖和免疫调节作用的蛋白质，包括ＩＦＮ－β、
引发各种生理反应。目前对病毒诱导Ｉ型干扰素
产生的机制研究较为深入，本文将对其最新的进展作一综述。
１．ＰＡＭＰ与细胞受体的结合
病原体在漫长的进化过程中，一直保留着一
部分被称为病原体相关分子模式（ｐａｔｈｏｇｅｎ－
ａｓｓｏｃｉａｔｅｄｍｏｌｅｃｕｌａｒｐａｔｔｅｒｎ，ＰＡＭＰ）的结构成分。ＰＡＭＰ为某一大组或几大组病原体共有，故其所
代表的是一种分子模式而非某一特定结构，它完全不同于宿主机体自身成分。机体的天然免疫系统，通过在进化过程中产生的一套模式识别受体来识别这些非己的ＰＡＭＰ，并采取相应对策清除入侵的病原体。病毒感染宿主细胞时，细胞表达的
ＩＦＮ－ω和多个ＩＦＮ－α亚型。Ｉ型干扰素可与细胞
膜上的特异性受体结合，引发级联性的信号放大过程，将信号最后传递到细胞核内，对一系列干扰素刺激基因（ＩＳＧ）的表达进行调控，诱导靶细胞产生特异性抗病毒蛋白，如双链ＲＮＡ依赖的蛋白激酶Ｒ（ＰＫＲ）、２′，５′－寡聚腺苷酸合成酶等，并
———————————
收稿日期：
ＰＡＭＰ受体识别和递呈病毒的ＰＡＭＰ，经一系列的
信号转导最终导致抗病毒效应基因的表达。病毒蛋白和富含尿嘧啶的核酸或者病毒，在复制过程产生的双链ＲＮＡ都可以作为ＰＡＭＰ，而细胞的
２００６－０８－０３
李军（１９７１—），男，博士生，助理研究员，Ｅ－
曾芸（１９７２—），女，硕士，讲师，
广西大学科研基金项目（Ｎｏ．Ｘ０６１０３２）作者简介：
ｍａｉｌ：ｊｌｅｅ９９８１＠１６３．ｃｏｍ；Ｅ－ｍａｉｌ：ｙｚｅｎｇ３２３＠１６３．ｃｏｍ
Ｔｏｌｌ样受体或核酸结合蛋白都可以识别ＰＡＭＰ［１，２］，
并经下列途径进行信号转导。
""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""
注射（ＩＣＳＩ）等辅助生殖技术的发展也很快。但是，对精卵结合的检测却很少。更多相关分子的鉴定将会更好地理解生育调控，发展更多的检测精卵结合的测定方法，这对进一步探索人类不育的诊断和治疗方法将会打开更宽阔的前景。
参
［１］［２］
［３］［４］［５］［６］［７］［８］［９］
ＫｉｍＥｅｔａｌ．ＪＢｉｏｌＣｈｅｍ，２００６，２８１（９）：５６３４—５６３９ＩｎｏｕｅＮｅｔａｌ．Ｎａｔｕｒｅ，２００５，４３４（７０３０）：２３４—２３８ＣｏｈｅｎＤＪｅｔａｌ．ＢｉｏｌＲｅｐｒｏｄ，２０００，６３（２）：４６２—４６８ＳｈｒｉｍａｌｉＲＫｅｔａｌ．ＩｎｄｉａｎＪＥｘｐＢｉｏｌ，２０００，３８（５）：４１５—４２４ＺｈｕＧＺｅｔａｌ．Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ，２００２，１２９（８）：１９９５—２００２ＨｉｇｇｉｎｂｏｔｔｏｍＡｅｔａｌ．ＢｉｏｃｈｅｍＢｉｏｐｈｙｓＲｅｓＣｏｍｍｕｎ，２００３，３１１（１）：２０８—２１４
ＺｉｙｙａｔＡｅｔａｌ．ＪＣｅｌｌＳｃｉ，２００６，１１９（Ｐｔ３）：４１６—４２４［１０］ＲｕｂｉｎｓｔｅｉｎＥｅｔａｌ．ＤｅｖＢｉｏｌ，２００６，２９０（２）：３５１—３５８
ＳｔｅｉｎＫＫｅｔａｌ．ＪＣｅｌｌＳｃｉ，２００４，１１７（Ｐｔ２６）：６２６９—６２７４ＫａｊｉＫｅｔａｌ．Ｒｅｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ，２００４，１２７（４）：４２３—４２９
［１１］ＡｌｆｉｅｒｉＪＡｅｔａｌ．ＪＣｅｌｌＳｃｉ，２００３，１１６（Ｐｔ１１）：２１４９—２１５５［１２］ＳｃｈｕｌｔｚＲｅｔａｌ．Ｎａｔｕｒｅ，２００５，４３４（７０３０）：１５２—１５３
考文献