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：／ｄｏｉ１０．３９６９２２５７．２０１１．０３．０１６．ｉｓｓｎ．１６７４－ｊ
成都医学院学报，（）２０１１Ｓｅ６３ｐＪｏｕｒｎａｌｏｆＣｈｅｎｄｕＭｅｄｉｃａｌＣｏｌｌｅｅ ｇｇ
·论 著·
阴沟肠杆菌耐药性及氨基糖苷类
抗生素耐药基因分析
罗必蓉，刘蓉，刘继芬，唐玲，蒋宏
（）成都中医药大学医学技术学院微生物学及免疫学检验教研室，四川 成都 ６１００４１
摘要】 【 目的 调查临床分离的阴沟肠杆菌耐药性及氨基糖苷类抗菌药物耐药基因的携带状况。方法 采用Ａ对３聚合酶链反应（ＴＢ药敏试验板微量肉汤法，３株临床分离的阴沟肠杆菌进行抗菌药物敏感性试验，ＰＣＲ）（）（）（）（）（）（）（）（）（）法检测ａａｃ３ａａｃ３ａａｃ３ａａｃ３ａａｃ６′ａａｃ６′ａｎｔ３″ａｎｔ２″ａｈ３′－Ⅰ、－Ⅱ、－Ⅲ、－Ⅳ、－Ⅰ、－Ⅱ、－Ⅰ、－Ⅰ、Ⅵ９种氨ｐ亚胺培南和厄它培南均敏感，对头孢唑啉全部耐基糖苷类修饰酶基因。结果 ３３株阴沟肠杆菌株呈现多重耐药，药，氨苄西林、氨苄西林／舒巴坦、头孢替坦耐药率均在９庆大霉素、妥布霉素３类氨基糖苷０％以上。对阿米卡星、（）类抗生素的耐药率分别为３３．３％、６３．６％、８１．８％。氨基糖苷类修饰酶基因的阳性率分别为ａａｃ６′７．８％－Ⅰ８（／）、（）／）、（）／）、（）／）／及ａ２９３３ａｎｔ３″３．６％（２１３３ａａｃ３ＩＩ５４．５％（１８３３ａｎｔ２″５．４％（１５３３）ｈ（３′４．２％（８－Ⅰ６－ －Ⅰ４－Ⅵ２ｐ）。ａ（）（）（）（）。结论３３ａｃ３ａａｃ３ａａｃ３ＩＶ、ａａｃ６′ＩＩ未检出。携带１种或１种以上基因的菌株有３２株（９７％）－Ⅰ、－Ⅲ、－－氨基糖苷类修饰酶基因携带率非常高。 临床分离的阴沟肠杆菌多重耐药严重，
【关键词】 阴沟肠杆菌；氨基糖苷类；耐药性
【（）中图分类号】文献标志码】文章编号】９７８．１ 【６７４２２５７２０１１０３０２４８０３ Ｒ Ａ 【 １－－－ｅｎｏｔｅｓＡｎａｌｓｉｓｏｆｄｒｕｒｅｓｉｓｔａｎｃｅａｎｄｏｆａｍｉｎｏｌｃｏｓｉｄｅｍｏｄｉｆｉｎｅｎｚｍｅｓｉｎＥｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒｃｌｏａｃａｅ ｇｙｐｙｇｇｙｙｇｙ
ＬＵＯ ＢｉｒｏｎＬＩＵ ＲｏｎＬＩＵ Ｊｉｅｎ，ＴＡＮＧ ＬｉｎＪＩＡＮＧ Ｈｏｎ－－ｆｇ，ｇ，ｇ，ｇ
（ＤｅａｒｔｍｅｎｔｏＭｉｃｒｏｂｉｏｌｏａｎｄＩｍｍｕｎｏｌｏＬａｂｏｒａｔｏｒＳｃｈｏｏｌｏＭｅｄｉｃａｌＴｅｃｈｎｉｕｅｓ，Ｃｈｅｎｄｕ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔ ｐｆ ｇｙｇｙ ｙ，ｆ ｑｇｙ
ｏＴｒａｄｉｔｉｏｎａｌＣｈｉｎｅｓｅ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，Ｃｈｅｎｄｕ６１００４１，Ｃｈｉｎａ） ｆ ｇ
【】ｅｎｏｔｅｓＡｂｓｔｒａｃｔｂｅｃｔｉｖｅＴｏｉｎｖｅｓｔｉａｔｅｔｈｅｄｒｕｒｅｓｉｓｔａｎｃｅａｎｄｏｆａｍｉｎｏｌｃｏｓｉｄｅｍｏｄｉｆｉｎｅｎｚｍｅｓ Ｏ ｇｙｐｇｇｇｙｙｇｙｊ （）（）ｗＡＭＥＳｉｎＥｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒｃｌｏａｃａｅＥ．ｃｌｏａｃａｅｈｉｃｈｉｓｏｌａｔｅｄｆｒｏｍｃｌｉｎｉｃａｌｓａｍｌｅｓ．Ｍｅｔｈｏｄｓｉｃｒｏｄｉｌｕｔｅｔｅｓｔｓｕｓｉｎ Ｍ ｐｇＡＴＢｄｒｕｓｕｓｃｅｔｉｂｉｌｉｔｔｅｓｔｉｎｌａｔｅｗｅｒｅｅｒｆｏｒｍｅｄｔｏｄｅｔｅｃｔｔｈｅａｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉａｌｓｕｓｃｅｔｉｂｉｌｉｔｏｆ３３ｓｔｒａｉｎｓｏｆＥ． ｇｐｙｇｐｐｐｙ ｃｌｏａｃａｅ．９ＡＭＥｓｅｎｅｓｗｅｒｅｄｅｔｅｃｔｅｄｂＰＣＲ．Ｒｅｓｕｌｔｓｈｅ３３ｓｔｒａｉｎｓｗｅｒｅｍｕｌｔｉｌｅｄｒｕｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ．Ａｌｌｓｔｒａｉｎｓ Ｔ －－ ｇｙｐｇ ｓｕｓｃｅｔｉｂｌｅｔｏｉｍｉｅｎａｍａｎｄｍｅｒｏｅｎｅｍ．Ｔｈｅｒｅｓｉｓｔａｎｔｒａｔｅｓｔｏｃｅｆａｚｏｌｉｎｗａｓ１００％．Ｍｏｒｅｔｈａｎ９０％ｏｆｔｈｅｗｅｒｅ ｐｐｐ，ａ／，ｉｓｏｌａｔｅｓｗｅｒｅｒｅｓｉｓｔａｎｔｔｏａｍｉｃｉｌｌｉｎｍｉｃｉｌｌｉｎｓｕｌｂａｃｔａｍ，ａｎｄｃｅｆｏｔｅｔａｎ．Ｔｈｅｒｅｓｉｓｔａｎｔｒａｔｅｓｔｏａｍｉｋａｃｉｎ ｐｐｅｎｔａｍｉｃｉｎｏｓｉｔｉｖｅｅｎｅｓａｎｄｔｏｂｒａｍｃｉｎｗｅｒｅ３３．３％，６３．６％ａｎｄ８１．８％，ｒｅｓｅｃｔｉｖｅｌ．ＴｈｅｒａｔｅｓｏｆＡＭＥｓｏｆａａｃ ｇｙｐｙｐｇ（））），））６′ａｎｔ（３″ａａｃ（３ＩＩａｎｔ（２″ｎｄａｈ（３′ｅｒｅ８７．８％，６３．６％，５４．５％，４５．４％ａｎｄ２４．２％，－Ⅰ，－Ⅰ，－－Ⅰａ －Ⅵｗ ｐ）ｅｎｅｓｒｅｓｅｃｔｉｖｅｌ．ＢｕｔｔｈｅＡＭＥｓｏｆａａｃ（３）ａａｃ（３）ａａｃ（３）ＩＶ、ａａｃ（６′ＩＩｗｅｒｅｎｏｔｆｏｕｎｄ．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ －Ⅰ、－Ⅲ、－－ ｇｐｙｏｓｉｔｉｖｅｅｎｅｓＴｈｅｒｅａｒｅｍｕｌｔｉｌｅｄｒｕｒｅｓｉｓｔａｎｃｅａｎｄｈｉｈｒａｔｅｏｆＡＭＥｓｉｎＥ．ｃｌｏａｃａｅｉｓｏｌａｔｅｄｆｒｏｍｃｌｉｎｉｃａｌｓａｍｌｅｓ． － ｐｇｐｇｇｐ
【】；Ｋｅｗｏｒｄｓｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒｃｌｏａｃａｅ；ＡｍｉｎｏｌｃｏｓｉｄｅｓＤｒｕｒｅｓｉｓｔａｎｃ Ｅ ｇｙｇｙ
已成Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒｃｌｏａｃａｅ） 近年来阴沟肠杆菌（ 为医院感染的重要病原菌，该菌对包括氨基糖苷类在内的常用抗生素常呈现多重耐药性，令抗菌感染治疗相当困难。为了解成都地区阴沟肠杆菌耐药性及氨基糖苷类修饰酶（Ａｍｉｎｏｌｃｏｓｉｄｅｍｏｄｉｆｉｎ ｇｙｙｇ，）基因存在情况，我们对临床分离的ｅｎｚｍｅｓＡＭＥｓｙ
并检测了９种３３株阴沟肠杆菌进行了药敏实验，
ＡＭＥｓ基因：ａａｃ（３）ａａｃ（３）ａａｃ（３）ａａｃ－Ⅰ、－Ⅱ、－Ⅲ、（）（）（）（）（）３ａａｃ６′ａａｃ６′ａｎｔ３″ａｎｔ２″－Ⅳ、－Ⅰ、－Ⅱ、－Ⅰ、－
（）现将结果报道如下。ａｈ３′Ⅰ、－Ⅵ，ｐ
１ 材料与方法
１．１ 菌株来源及鉴定
３３株试验菌株分离自成都地区３家医院２００９
）基金项目 成都中医药大学校基金（项目编号Ｚ资助ＲＹＢ２００８１８
罗必蓉，等．阴沟肠杆菌耐药性及氨基糖苷类抗生素耐药基因分析
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表１ 氨基糖苷类修饰酶基因ＰＣＲ引物序列及产物长度
Ｔａｂ．１ Ｐｒｉｍｅｒｓｓｅｕｅｎｃｅｓａｎｄｒｏｄｕｃｔｓｌｅｎｔｈｏｆ ｑｐｇ
ａｍｉｎｏｌｃｏｓｉｄｅｓｍｏｄｉｆｉｎｅｎｚｍｅｓ ｇｙｙｇｙ
靶基因（ａａｃ３）－Ⅰ
）引物序列（５′３′－
Ｐ１：ＡＣＣＴＡＣＴＣＣＣＡＡＣＡＴＣＡＧＣＣ Ｐ２：ＡＴＡＴＡＧＡＴＣＴＣＡＣＴＡＣＧＣＧＣ
（３）ａａｃ－Ⅱ
Ｐ１：ＡＣＴＧＴＧＡＴＧＧＧＡＴＡＣＧＣＧＴＣ Ｐ２：ＣＴＣＣＧＴＣＡＧＣＧＴＴＴＣＡＧＣＴＡ
（３）ａａｃ－Ⅲ
Ｐ１：ＣＡＣＡＡＧＡＡＣＧＴＧＧＴＣＣＧＣＴＡ Ｐ２：ＡＡＣＡＧＧＴＡＡＧＣＡＴＣＣＧＣＡＴＣ
（３）ａａｃ－Ⅵ
Ｐ１：ＣＴＴＣＡＧＧＡＴＧＧＣＡＡＧＴＴＧＧＴ ＴＣＡＴＣＴＣＧＴＴＣＴＣＣＧＣＴＣＡＴＰ２：
（）６′ａａｃ－Ⅰ
Ｐ１：ＴＡＴＧＡＧＴＧＧＣＴＡＡＡＴＣＧＡ Ｐ２：ＣＣＣＧＣＴＴＴＣＴＣＧＴＡＧＣＡ
（）６′ａａｃ－Ⅱ
Ｐ１：ＴＴＣＡＴＧＴＣＣＧＣＧＡＧＣＡＣＣＣＣ Ｐ２：ＧＡＣＴＣＴＴＣＣＧＣＣＡＴＣＧＣＴＣＴ
（）ａｈ３′－Ⅵｐ
Ｐ１：ＡＴＡＣＡＧＡＧＡＣＣＡＣＡＴＡＣＡＧＴ ＧＧＡＣＡＡＴＣＡＡＴＡＡＴＡＧＣＡＡＴＰ２：
（）ａｎｔ３″－Ⅰ
Ｐ１：ＴＧＡＴＴＴＧＣＴＧＧＴＴＡＣＧＧＴＧＡＣ ＣＧＣＴＡＴＧＴＴＣＴＣＴＴＧＣＴＴＴＴＧＰ２：
（）ａｎｔ２″－Ⅰ
Ｐ１：ＧＡＧＣＧＡＡＡＴＣＴＧＣＣＧＣＴＣＴＧＧ ＣＴＧＴＴＡＣＡＡＣＧＧＡＣＴＧＧＣＣＧＣＰ２：
３２０ｂｐ２８４ｂｐ２３４ｂｐ１７８ｂｐ３９４ｂｐ２８６ｂｐ１８５ｂｐ２３７ｂｐ产物长度１６９ｂｐ
年１０月至２０１０年５月住院患者送检的各种标本，其中痰液２尿液４份、伤口分泌物２份。采用７份、Ｂｉｏｅｒｉｅｕｘ公司ＡＰＩ２０Ｅ鉴定菌种。标准菌株为－Ｍ 大肠埃希菌ＡＴＣＣ２５９２２和铜绿假单胞菌ＡＴＣＣ２７８５３。１．２ 药敏试验
微量肉汤法，采用美国Ｂｉｏｅｒｉｅｕｘ公司产品－Ｍ共测试１ＡＴＢＧ５药敏试验板，８种抗菌药物的敏 －感性。１．３ 基因检测
采用聚合酶链反应（法检测ＡＭＥＰＣＲ）ｓ基因，用蛋白酶Ｋ消化法制备ＤＮＡ扩增模板。根据ＧｅｎＢａｎｋ中已发布的ＡＭＥｓ基因序列自行设计引物，上海生物工程有限公司合成引物；ＰＣＲ扩增引物序列及产物长度见表１。各种靶基因ＰＣＲ扩增／体系为：Ｐ１、Ｐ２引物各０．５μｍｏｌＬ，ＫＣｌ１０．０
／（／／ｍｍｏｌＬ，ＮＨ４）ＳＯｍｏｌＬ，ＭＣｌｍｏｌＬ，ｇ２４８ｍ２２ｍ（／Ｔｒｉｓｌ９．０）１０ｍｍｏｌＬ，ＮＰ４００．５％，ＴａＨ－ＨＣ ｑｐ
，其中模板液ＤＮＡ聚合酶１Ｕ。全部反应体积２０μｌ。热循环参数为９然后９５μｌ３℃预变性２ｍｉｎ，３℃
，共３最后１个５℃３０ｓ２℃６０ｓ５周期；３０ｓ→５→７
循环７２℃延伸至５ｍｉｎ。产物经２％琼脂糖凝胶电伊凡思蓝（染色，紫外灯下观察结果，出现与泳，ＥＢ）阳性对照分子相当的目的条带判为阳性。ＰＣＲ技术及基因检测阳性对照由本实验室筛查并经测序证纯水为阴性对照。实，
序列分析Ｐ送北京三博远志ＣＲ产物经纯化后，生物技术有限公司测序，并将测得序列与ＧｅｎＢａｎｋ中已发布序列进行比较。
表２ ３株，３株阴沟肠杆菌对１８种抗生素的敏感性（％）Ｔａｂ．２ Ｔｈｅｓｅｎｓｉｂｉｌｉｔｏｆ３３ｓｔｒａｉｎｓｏｆＥ．ｃｌｏａｃａｅ．ｆｏｒ１８ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃ ｙ 抗菌药物ＡＭＰ ＡＭＳ ＡＭＫ ＡＺＴ ＣＩＲ ＣＴＴ ＣＲＯ ＣＺＯ ＥＲＴ ＣＦＭ ＮＩＴ ＧＥＮ ＩＰＭ ＬＶＸ ＳＭＺ ＣＡＺ ＴＯＢ ＰＩＴ
（敏感ｎ％）（）１３．００（）２６．１０（）２２６６．７０（）８２４．２０（）１６４８．５０（）３９．００（）１１３３．３０（）００．００（）３１９４．００（）２２６６．７０（）１２３６．４０（）１０３０．３０（）３３１００．００（）１７５１．５０（）６１８．２０（）８２４．２０（）６１８．２０（）２７８１．８０
（中介ｎ％）（）００．００（）００．００（）００．００（）２５．８０（）００．００（）００．００（）３９．１０（）００．００（）２６．００（）００．００（）９２７．２０（）２６．１０（）００．００（）００．００（）００．００（）２５．８０（）００．００（）４１２．１０
（耐药ｎ％）（）３２９７．００（）３１９３．９０（）１１３３．３０（）２３７０．００（）１７５１．５０（）３０９１．００（）１９５７．６０（）３３１００．００
（）００．００（）１１３３．３０（）１２３６．４０（）２１６３．６０（）００．００（）１６４８．５０（）２７８１．８００（）２３７０．００（）２７８１．８０（）２６．１０
２ 结果
２．１ 药敏试验
本组菌株多重耐药性严重，仅对亚胺培南和厄它培南全部敏感。对氨苄西林、氨苄西林／舒巴坦、头孢替坦耐药率均在９０％以上。对氨基糖苷类３种抗菌药物阿米卡星、庆大霉素、妥布霉素的耐药率）。分别为３表２３．３％、６３．６％、８１．８％（
２．２ ９种ＡＭＥｓ基因ＰＣＲ检测
）（）９种ＡＭＥｓ基因阳性率：ａａｃ（６′ａｎｔ３″－Ⅰ、－（、（））及ａａａｃ３）ＩＩａｎｔ２″ｈ（３′Ⅰ、－－Ⅰ、－Ⅵ的阳性率ｐ
／、／、分别为：８７．８％（２９３３）６３．６％（２１３３）５４．５％
（／）、／）、／），（而ａ１８３３４５．４％（１５３３２４．２％（８３３ａｃ３）－（）（）（）ａａｃ３ａａｃ３ＩＶ、ａａｃ６′ＩＩ基因均未检出。Ⅰ、－Ⅲ、－－
其中２６株同时检出２种及２种以上ＡＭＥｓ基因阳性，其余１株未检出任何１种６株仅１种基因阳性，
２５０
基因。氨基糖苷类抗生素敏感性与基因检测结果相关情况：２７株对氨基糖苷类抗生素耐药菌株中至少存在１种ＡＭＥｓ基因；６株对氨基糖苷类抗生素敏感菌株中，有２株检测出ＡＭＥｓ基因阳性。本研究（）（）（、（）对ａａｃ６′ａｎｔ３″ａａｃ３）ＩＩａｎｔ２″－Ⅰ、－Ⅰ、－－Ⅰ、
（）及ａｈ３′ＣＲ阳性产物各随机抽取１株测序，－ⅥＰｐ并与Ｇ结果一致。图ｅｎＢａｎｋ中发布的序列做比较，１为部分ＡＭＥｓ基因ＰＣＲ产物电泳图
。
（）成都医学院学报２０１１年９月，６３
率在５其中对头孢唑啉耐药率高达０％～９０％以上，对阿米卡星、庆大霉素、妥布霉素３类氨基糖１００％，
苷类抗生素的耐药率分别为３３．３％、６３．６％、可见８１．８％。只对亚胺培南和厄它培南全部敏感，对于阴沟肠杆菌，体外活性最好的为碳青酶烯类抗生素。
阴沟肠杆菌对氨基糖苷类抗生素耐药是通过产细菌１和氨氨基糖苷类修饰酶、６ＳｒＲＮＡ甲基化酶、基糖苷类作用靶位１６ＳｒＲＮＡ基因突变及核糖体蛋
２］
。产氨基糖苷类修饰酶是其白编码基因突变所致［
耐药的主要原因。目前，国内外有关阴沟肠杆菌产ＡｍＣ酶、ＴＥＭ、ＳＨＶ和ＣＴＸ－Ｍ等类型内酰胺酶ｐ
３，４］
，但产氨基糖苷类修饰的研究方面有较多报道［
５］
，酶的研究报道甚少［编码ＡＭＥｓ的基因有３０多
种，但在革兰阴性菌中常见的为９种，不同种类的
图１ 部分ＡＭＥｓ基因ＰＣＲ产物电泳图
ｒｏｄｕｃｔＦｉ．１ ＰＣＲｅｌｅｃｔｒｏｈｏｒｅｔｏｒａｍｏｆｓｏｍｅＡＭＥｓ ｐｇｐｇ
分子量标记，由上而下分别为６Ｍ：００、５００、４００、３００、２００、１００ｂ；１５－ｐ）））））分别为ａｎｔ（３″ａａｃ（３ａａｃ（６′ａｈ（３′ａｎｔ（２″－Ⅰ、－Ⅱ、－Ⅰ、－Ⅵ、－Ⅰｐ）基因阳性对照；依次为ａ６１０为２３号菌株电泳图（ｎｔ（３″－－Ⅰ阳性、）））ａａｃ（３）ａａｃ（６′ａｈ（３′ａｎｔ（２″－Ⅱ阴性、－Ⅰ阴性、－Ⅵ阴性、－Ⅰ阳ｐ；）性）依次为ａ１１１５为３０号菌株电泳图（ｎｔ（３″ａａｃ（３）－－Ⅰ阴性、－Ⅱ）））阳性、ａａｃ（６′ａｈ（３′ａｎｔ（２″－Ⅰ阳性、－Ⅵ阳性、－Ⅰ阴性）ｐ
，Ｍ：Ｍｏｌｅｃｕｌａｒｍａｒｋｅｒｓｆｒｏｍｔｏｔｏｂｏｔｔｏｍａｒｅ６００、５００、４００、３００、 ｐ ；）ｏｓｉｔｉｖｅ２００、１００ｂ１５ａｒｅｃｏｎｔｒｏｌｏｆａｎｔ（３″ａａｃ（３）ａａｃ－ －Ⅰ、－Ⅱ、ｐｐ（））６′ａｈ（３′１０ａｒｅｔｈｅｅｌｅｃｔｒｏｈｏｒｅｔｏｒａｍｏｆＮＯ．２３－Ⅰ、－Ⅵ；６－ ｐｐｇ（）、、）ｓｔｒａｉｎｆｏｌｌｏｗｅｄｂａｎｔ（３″ｏｓｉｔｉｖｅａａｃ（３）ｅａｔｉｖｅａａｃ（６′ －Ⅰｐ－Ⅱｎ－ｙｇ 、）、））；ｅａｔｉｖｅａｈ（３′ｅａｔｉｖｅａｎｔ（２″１１１５ａｒｅｔｈｅｏｓｉｔｉｖｅⅠｎ－Ⅵｎ－Ⅰｐ－ ｇｐｇ）ｏｆＮＯ．３０ｓｔｒａｉｎ（ｆｏｌｌｏｗｅｄｂａｎｔ（３″ｅｌｅｃｔｒｏｈｏｒｅｔｏｒａｍ －Ⅰｙｐｇ 、、）、）ｎｅａｔｉｖｅａａｃ（３）ａａｃ（６′ａｈ（３′ｏｓｉｔｉｖｅｏｓｉｔｉｖｅ－Ⅱｐ－Ⅰｐ－Ⅵｇｐ、））ｏｓｉｔｉｖｅａｎｔ（２″ｅａｔｉｖｅ－Ⅰｎｐｇ
一种ＡＭＥＡＭＥｓ可使细菌对同一种抗生素耐药，ｓ可使数种氨基糖苷抗生素活性下降，形成交叉
５］
。耐药［
本研究中ＡＭＥｓ基因阳性率较高的分别是ａａｃ（）／、ａ）／６′７．８％（２９３３）ｎｔ（３″３．６％（２１－Ⅰ８－Ⅰ６）、（）／），３３ａａｃ３ＩＩ５４．５％（１８３３９７％菌株有１种或１－ 种以上基因。多数基因型与耐药表型结果相符，但如６株对氨基糖苷类抗生素敏也有少数不相符的，
感菌株中，有２株检测出ＡＭＥ可能与ｓ基因阳性，
有待于进一步研究。基因不表达或表达不完全有关，
本研究表明，阴沟肠杆菌多重耐药严重，应进一步加强其耐药性监测和耐药相关基因的分子流行病以利于科学制定抗感染治疗方案，控制多重学研究，
耐药菌株的播散。
参考文献
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［］糜祖煌，秦玲，等．５２０株阴沟肠杆菌耐药性及氨基糖苷 黄支密，
］类修饰酶基因型分析［中华微生物学和免疫学杂志，Ｊ．２００５，（）：２５５４２８．
（２０１１０２２５２０１１０３１８－－ 收稿，－－ 修回）
３ 讨论
阴沟肠杆菌是肠杆菌科中具有代表性的细菌，可从尿液、痰液、脓液、血液和脑脊液中分离出来。中国医院内病原菌耐药监测网资料显示，阴沟肠杆
１］
。该菌的菌已成为近年来医院感染的重要病原菌［
临床检出率仅次于大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌而位居第３位，且有逐年上升的趋势。本研究中从痰液分离的阴沟肠杆菌占被检菌株总数的８１．８％。
阴沟肠杆菌耐药株的增多及其耐药率的攀升日趋严重，使抗感染治疗十分困难，甚至导致临床治疗失败。本研究菌株药敏结果表明，阴沟肠杆菌具有较高的耐药率，并且多重耐药情况严重。对青霉素类、复方新诺明的耐药１～３代头孢菌素环丙沙星、
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：／ｄｏｉ１０．３９６９２２５７．２０１１．０３．０１６．ｉｓｓｎ．１６７４－ｊ
成都医学院学报，（）２０１１Ｓｅ６３ｐＪｏｕｒｎａｌｏｆＣｈｅｎｄｕＭｅｄｉｃａｌＣｏｌｌｅｅ ｇｇ
·论 著·
阴沟肠杆菌耐药性及氨基糖苷类
抗生素耐药基因分析
罗必蓉，刘蓉，刘继芬，唐玲，蒋宏
（）成都中医药大学医学技术学院微生物学及免疫学检验教研室，四川 成都 ６１００４１
摘要】 【 目的 调查临床分离的阴沟肠杆菌耐药性及氨基糖苷类抗菌药物耐药基因的携带状况。方法 采用Ａ对３聚合酶链反应（ＴＢ药敏试验板微量肉汤法，３株临床分离的阴沟肠杆菌进行抗菌药物敏感性试验，ＰＣＲ）（）（）（）（）（）（）（）（）（）法检测ａａｃ３ａａｃ３ａａｃ３ａａｃ３ａａｃ６′ａａｃ６′ａｎｔ３″ａｎｔ２″ａｈ３′－Ⅰ、－Ⅱ、－Ⅲ、－Ⅳ、－Ⅰ、－Ⅱ、－Ⅰ、－Ⅰ、Ⅵ９种氨ｐ亚胺培南和厄它培南均敏感，对头孢唑啉全部耐基糖苷类修饰酶基因。结果 ３３株阴沟肠杆菌株呈现多重耐药，药，氨苄西林、氨苄西林／舒巴坦、头孢替坦耐药率均在９庆大霉素、妥布霉素３类氨基糖苷０％以上。对阿米卡星、（）类抗生素的耐药率分别为３３．３％、６３．６％、８１．８％。氨基糖苷类修饰酶基因的阳性率分别为ａａｃ６′７．８％－Ⅰ８（／）、（）／）、（）／）、（）／）／及ａ２９３３ａｎｔ３″３．６％（２１３３ａａｃ３ＩＩ５４．５％（１８３３ａｎｔ２″５．４％（１５３３）ｈ（３′４．２％（８－Ⅰ６－ －Ⅰ４－Ⅵ２ｐ）。ａ（）（）（）（）。结论３３ａｃ３ａａｃ３ａａｃ３ＩＶ、ａａｃ６′ＩＩ未检出。携带１种或１种以上基因的菌株有３２株（９７％）－Ⅰ、－Ⅲ、－－氨基糖苷类修饰酶基因携带率非常高。 临床分离的阴沟肠杆菌多重耐药严重，
【关键词】 阴沟肠杆菌；氨基糖苷类；耐药性
【（）中图分类号】文献标志码】文章编号】９７８．１ 【６７４２２５７２０１１０３０２４８０３ Ｒ Ａ 【 １－－－ｅｎｏｔｅｓＡｎａｌｓｉｓｏｆｄｒｕｒｅｓｉｓｔａｎｃｅａｎｄｏｆａｍｉｎｏｌｃｏｓｉｄｅｍｏｄｉｆｉｎｅｎｚｍｅｓｉｎＥｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒｃｌｏａｃａｅ ｇｙｐｙｇｇｙｙｇｙ
ＬＵＯ ＢｉｒｏｎＬＩＵ ＲｏｎＬＩＵ Ｊｉｅｎ，ＴＡＮＧ ＬｉｎＪＩＡＮＧ Ｈｏｎ－－ｆｇ，ｇ，ｇ，ｇ
（ＤｅａｒｔｍｅｎｔｏＭｉｃｒｏｂｉｏｌｏａｎｄＩｍｍｕｎｏｌｏＬａｂｏｒａｔｏｒＳｃｈｏｏｌｏＭｅｄｉｃａｌＴｅｃｈｎｉｕｅｓ，Ｃｈｅｎｄｕ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔ ｐｆ ｇｙｇｙ ｙ，ｆ ｑｇｙ
ｏＴｒａｄｉｔｉｏｎａｌＣｈｉｎｅｓｅ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，Ｃｈｅｎｄｕ６１００４１，Ｃｈｉｎａ） ｆ ｇ
【】ｅｎｏｔｅｓＡｂｓｔｒａｃｔｂｅｃｔｉｖｅＴｏｉｎｖｅｓｔｉａｔｅｔｈｅｄｒｕｒｅｓｉｓｔａｎｃｅａｎｄｏｆａｍｉｎｏｌｃｏｓｉｄｅｍｏｄｉｆｉｎｅｎｚｍｅｓ Ｏ ｇｙｐｇｇｇｙｙｇｙｊ （）（）ｗＡＭＥＳｉｎＥｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒｃｌｏａｃａｅＥ．ｃｌｏａｃａｅｈｉｃｈｉｓｏｌａｔｅｄｆｒｏｍｃｌｉｎｉｃａｌｓａｍｌｅｓ．Ｍｅｔｈｏｄｓｉｃｒｏｄｉｌｕｔｅｔｅｓｔｓｕｓｉｎ Ｍ ｐｇＡＴＢｄｒｕｓｕｓｃｅｔｉｂｉｌｉｔｔｅｓｔｉｎｌａｔｅｗｅｒｅｅｒｆｏｒｍｅｄｔｏｄｅｔｅｃｔｔｈｅａｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉａｌｓｕｓｃｅｔｉｂｉｌｉｔｏｆ３３ｓｔｒａｉｎｓｏｆＥ． ｇｐｙｇｐｐｐｙ ｃｌｏａｃａｅ．９ＡＭＥｓｅｎｅｓｗｅｒｅｄｅｔｅｃｔｅｄｂＰＣＲ．Ｒｅｓｕｌｔｓｈｅ３３ｓｔｒａｉｎｓｗｅｒｅｍｕｌｔｉｌｅｄｒｕｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ．Ａｌｌｓｔｒａｉｎｓ Ｔ －－ ｇｙｐｇ ｓｕｓｃｅｔｉｂｌｅｔｏｉｍｉｅｎａｍａｎｄｍｅｒｏｅｎｅｍ．Ｔｈｅｒｅｓｉｓｔａｎｔｒａｔｅｓｔｏｃｅｆａｚｏｌｉｎｗａｓ１００％．Ｍｏｒｅｔｈａｎ９０％ｏｆｔｈｅｗｅｒｅ ｐｐｐ，ａ／，ｉｓｏｌａｔｅｓｗｅｒｅｒｅｓｉｓｔａｎｔｔｏａｍｉｃｉｌｌｉｎｍｉｃｉｌｌｉｎｓｕｌｂａｃｔａｍ，ａｎｄｃｅｆｏｔｅｔａｎ．Ｔｈｅｒｅｓｉｓｔａｎｔｒａｔｅｓｔｏａｍｉｋａｃｉｎ ｐｐｅｎｔａｍｉｃｉｎｏｓｉｔｉｖｅｅｎｅｓａｎｄｔｏｂｒａｍｃｉｎｗｅｒｅ３３．３％，６３．６％ａｎｄ８１．８％，ｒｅｓｅｃｔｉｖｅｌ．ＴｈｅｒａｔｅｓｏｆＡＭＥｓｏｆａａｃ ｇｙｐｙｐｇ（））），））６′ａｎｔ（３″ａａｃ（３ＩＩａｎｔ（２″ｎｄａｈ（３′ｅｒｅ８７．８％，６３．６％，５４．５％，４５．４％ａｎｄ２４．２％，－Ⅰ，－Ⅰ，－－Ⅰａ －Ⅵｗ ｐ）ｅｎｅｓｒｅｓｅｃｔｉｖｅｌ．ＢｕｔｔｈｅＡＭＥｓｏｆａａｃ（３）ａａｃ（３）ａａｃ（３）ＩＶ、ａａｃ（６′ＩＩｗｅｒｅｎｏｔｆｏｕｎｄ．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ －Ⅰ、－Ⅲ、－－ ｇｐｙｏｓｉｔｉｖｅｅｎｅｓＴｈｅｒｅａｒｅｍｕｌｔｉｌｅｄｒｕｒｅｓｉｓｔａｎｃｅａｎｄｈｉｈｒａｔｅｏｆＡＭＥｓｉｎＥ．ｃｌｏａｃａｅｉｓｏｌａｔｅｄｆｒｏｍｃｌｉｎｉｃａｌｓａｍｌｅｓ． － ｐｇｐｇｇｐ
【】；Ｋｅｗｏｒｄｓｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒｃｌｏａｃａｅ；ＡｍｉｎｏｌｃｏｓｉｄｅｓＤｒｕｒｅｓｉｓｔａｎｃ Ｅ ｇｙｇｙ
已成Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒｃｌｏａｃａｅ） 近年来阴沟肠杆菌（ 为医院感染的重要病原菌，该菌对包括氨基糖苷类在内的常用抗生素常呈现多重耐药性，令抗菌感染治疗相当困难。为了解成都地区阴沟肠杆菌耐药性及氨基糖苷类修饰酶（Ａｍｉｎｏｌｃｏｓｉｄｅｍｏｄｉｆｉｎ ｇｙｙｇ，）基因存在情况，我们对临床分离的ｅｎｚｍｅｓＡＭＥｓｙ
并检测了９种３３株阴沟肠杆菌进行了药敏实验，
ＡＭＥｓ基因：ａａｃ（３）ａａｃ（３）ａａｃ（３）ａａｃ－Ⅰ、－Ⅱ、－Ⅲ、（）（）（）（）（）３ａａｃ６′ａａｃ６′ａｎｔ３″ａｎｔ２″－Ⅳ、－Ⅰ、－Ⅱ、－Ⅰ、－
（）现将结果报道如下。ａｈ３′Ⅰ、－Ⅵ，ｐ
１ 材料与方法
１．１ 菌株来源及鉴定
３３株试验菌株分离自成都地区３家医院２００９
）基金项目 成都中医药大学校基金（项目编号Ｚ资助ＲＹＢ２００８１８
罗必蓉，等．阴沟肠杆菌耐药性及氨基糖苷类抗生素耐药基因分析
２４９
表１ 氨基糖苷类修饰酶基因ＰＣＲ引物序列及产物长度
Ｔａｂ．１ Ｐｒｉｍｅｒｓｓｅｕｅｎｃｅｓａｎｄｒｏｄｕｃｔｓｌｅｎｔｈｏｆ ｑｐｇ
ａｍｉｎｏｌｃｏｓｉｄｅｓｍｏｄｉｆｉｎｅｎｚｍｅｓ ｇｙｙｇｙ
靶基因（ａａｃ３）－Ⅰ
）引物序列（５′３′－
Ｐ１：ＡＣＣＴＡＣＴＣＣＣＡＡＣＡＴＣＡＧＣＣ Ｐ２：ＡＴＡＴＡＧＡＴＣＴＣＡＣＴＡＣＧＣＧＣ
（３）ａａｃ－Ⅱ
Ｐ１：ＡＣＴＧＴＧＡＴＧＧＧＡＴＡＣＧＣＧＴＣ Ｐ２：ＣＴＣＣＧＴＣＡＧＣＧＴＴＴＣＡＧＣＴＡ
（３）ａａｃ－Ⅲ
Ｐ１：ＣＡＣＡＡＧＡＡＣＧＴＧＧＴＣＣＧＣＴＡ Ｐ２：ＡＡＣＡＧＧＴＡＡＧＣＡＴＣＣＧＣＡＴＣ
（３）ａａｃ－Ⅵ
Ｐ１：ＣＴＴＣＡＧＧＡＴＧＧＣＡＡＧＴＴＧＧＴ ＴＣＡＴＣＴＣＧＴＴＣＴＣＣＧＣＴＣＡＴＰ２：
（）６′ａａｃ－Ⅰ
Ｐ１：ＴＡＴＧＡＧＴＧＧＣＴＡＡＡＴＣＧＡ Ｐ２：ＣＣＣＧＣＴＴＴＣＴＣＧＴＡＧＣＡ
（）６′ａａｃ－Ⅱ
Ｐ１：ＴＴＣＡＴＧＴＣＣＧＣＧＡＧＣＡＣＣＣＣ Ｐ２：ＧＡＣＴＣＴＴＣＣＧＣＣＡＴＣＧＣＴＣＴ
（）ａｈ３′－Ⅵｐ
Ｐ１：ＡＴＡＣＡＧＡＧＡＣＣＡＣＡＴＡＣＡＧＴ ＧＧＡＣＡＡＴＣＡＡＴＡＡＴＡＧＣＡＡＴＰ２：
（）ａｎｔ３″－Ⅰ
Ｐ１：ＴＧＡＴＴＴＧＣＴＧＧＴＴＡＣＧＧＴＧＡＣ ＣＧＣＴＡＴＧＴＴＣＴＣＴＴＧＣＴＴＴＴＧＰ２：
（）ａｎｔ２″－Ⅰ
Ｐ１：ＧＡＧＣＧＡＡＡＴＣＴＧＣＣＧＣＴＣＴＧＧ ＣＴＧＴＴＡＣＡＡＣＧＧＡＣＴＧＧＣＣＧＣＰ２：
３２０ｂｐ２８４ｂｐ２３４ｂｐ１７８ｂｐ３９４ｂｐ２８６ｂｐ１８５ｂｐ２３７ｂｐ产物长度１６９ｂｐ
年１０月至２０１０年５月住院患者送检的各种标本，其中痰液２尿液４份、伤口分泌物２份。采用７份、Ｂｉｏｅｒｉｅｕｘ公司ＡＰＩ２０Ｅ鉴定菌种。标准菌株为－Ｍ 大肠埃希菌ＡＴＣＣ２５９２２和铜绿假单胞菌ＡＴＣＣ２７８５３。１．２ 药敏试验
微量肉汤法，采用美国Ｂｉｏｅｒｉｅｕｘ公司产品－Ｍ共测试１ＡＴＢＧ５药敏试验板，８种抗菌药物的敏 －感性。１．３ 基因检测
采用聚合酶链反应（法检测ＡＭＥＰＣＲ）ｓ基因，用蛋白酶Ｋ消化法制备ＤＮＡ扩增模板。根据ＧｅｎＢａｎｋ中已发布的ＡＭＥｓ基因序列自行设计引物，上海生物工程有限公司合成引物；ＰＣＲ扩增引物序列及产物长度见表１。各种靶基因ＰＣＲ扩增／体系为：Ｐ１、Ｐ２引物各０．５μｍｏｌＬ，ＫＣｌ１０．０
／（／／ｍｍｏｌＬ，ＮＨ４）ＳＯｍｏｌＬ，ＭＣｌｍｏｌＬ，ｇ２４８ｍ２２ｍ（／Ｔｒｉｓｌ９．０）１０ｍｍｏｌＬ，ＮＰ４００．５％，ＴａＨ－ＨＣ ｑｐ
，其中模板液ＤＮＡ聚合酶１Ｕ。全部反应体积２０μｌ。热循环参数为９然后９５μｌ３℃预变性２ｍｉｎ，３℃
，共３最后１个５℃３０ｓ２℃６０ｓ５周期；３０ｓ→５→７
循环７２℃延伸至５ｍｉｎ。产物经２％琼脂糖凝胶电伊凡思蓝（染色，紫外灯下观察结果，出现与泳，ＥＢ）阳性对照分子相当的目的条带判为阳性。ＰＣＲ技术及基因检测阳性对照由本实验室筛查并经测序证纯水为阴性对照。实，
序列分析Ｐ送北京三博远志ＣＲ产物经纯化后，生物技术有限公司测序，并将测得序列与ＧｅｎＢａｎｋ中已发布序列进行比较。
表２ ３株，３株阴沟肠杆菌对１８种抗生素的敏感性（％）Ｔａｂ．２ Ｔｈｅｓｅｎｓｉｂｉｌｉｔｏｆ３３ｓｔｒａｉｎｓｏｆＥ．ｃｌｏａｃａｅ．ｆｏｒ１８ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃ ｙ 抗菌药物ＡＭＰ ＡＭＳ ＡＭＫ ＡＺＴ ＣＩＲ ＣＴＴ ＣＲＯ ＣＺＯ ＥＲＴ ＣＦＭ ＮＩＴ ＧＥＮ ＩＰＭ ＬＶＸ ＳＭＺ ＣＡＺ ＴＯＢ ＰＩＴ
（敏感ｎ％）（）１３．００（）２６．１０（）２２６６．７０（）８２４．２０（）１６４８．５０（）３９．００（）１１３３．３０（）００．００（）３１９４．００（）２２６６．７０（）１２３６．４０（）１０３０．３０（）３３１００．００（）１７５１．５０（）６１８．２０（）８２４．２０（）６１８．２０（）２７８１．８０
（中介ｎ％）（）００．００（）００．００（）００．００（）２５．８０（）００．００（）００．００（）３９．１０（）００．００（）２６．００（）００．００（）９２７．２０（）２６．１０（）００．００（）００．００（）００．００（）２５．８０（）００．００（）４１２．１０
（耐药ｎ％）（）３２９７．００（）３１９３．９０（）１１３３．３０（）２３７０．００（）１７５１．５０（）３０９１．００（）１９５７．６０（）３３１００．００
（）００．００（）１１３３．３０（）１２３６．４０（）２１６３．６０（）００．００（）１６４８．５０（）２７８１．８００（）２３７０．００（）２７８１．８０（）２６．１０
２ 结果
２．１ 药敏试验
本组菌株多重耐药性严重，仅对亚胺培南和厄它培南全部敏感。对氨苄西林、氨苄西林／舒巴坦、头孢替坦耐药率均在９０％以上。对氨基糖苷类３种抗菌药物阿米卡星、庆大霉素、妥布霉素的耐药率）。分别为３表２３．３％、６３．６％、８１．８％（
２．２ ９种ＡＭＥｓ基因ＰＣＲ检测
）（）９种ＡＭＥｓ基因阳性率：ａａｃ（６′ａｎｔ３″－Ⅰ、－（、（））及ａａａｃ３）ＩＩａｎｔ２″ｈ（３′Ⅰ、－－Ⅰ、－Ⅵ的阳性率ｐ
／、／、分别为：８７．８％（２９３３）６３．６％（２１３３）５４．５％
（／）、／）、／），（而ａ１８３３４５．４％（１５３３２４．２％（８３３ａｃ３）－（）（）（）ａａｃ３ａａｃ３ＩＶ、ａａｃ６′ＩＩ基因均未检出。Ⅰ、－Ⅲ、－－
其中２６株同时检出２种及２种以上ＡＭＥｓ基因阳性，其余１株未检出任何１种６株仅１种基因阳性，
２５０
基因。氨基糖苷类抗生素敏感性与基因检测结果相关情况：２７株对氨基糖苷类抗生素耐药菌株中至少存在１种ＡＭＥｓ基因；６株对氨基糖苷类抗生素敏感菌株中，有２株检测出ＡＭＥｓ基因阳性。本研究（）（）（、（）对ａａｃ６′ａｎｔ３″ａａｃ３）ＩＩａｎｔ２″－Ⅰ、－Ⅰ、－－Ⅰ、
（）及ａｈ３′ＣＲ阳性产物各随机抽取１株测序，－ⅥＰｐ并与Ｇ结果一致。图ｅｎＢａｎｋ中发布的序列做比较，１为部分ＡＭＥｓ基因ＰＣＲ产物电泳图
。
（）成都医学院学报２０１１年９月，６３
率在５其中对头孢唑啉耐药率高达０％～９０％以上，对阿米卡星、庆大霉素、妥布霉素３类氨基糖１００％，
苷类抗生素的耐药率分别为３３．３％、６３．６％、可见８１．８％。只对亚胺培南和厄它培南全部敏感，对于阴沟肠杆菌，体外活性最好的为碳青酶烯类抗生素。
阴沟肠杆菌对氨基糖苷类抗生素耐药是通过产细菌１和氨氨基糖苷类修饰酶、６ＳｒＲＮＡ甲基化酶、基糖苷类作用靶位１６ＳｒＲＮＡ基因突变及核糖体蛋
２］
。产氨基糖苷类修饰酶是其白编码基因突变所致［
耐药的主要原因。目前，国内外有关阴沟肠杆菌产ＡｍＣ酶、ＴＥＭ、ＳＨＶ和ＣＴＸ－Ｍ等类型内酰胺酶ｐ
３，４］
，但产氨基糖苷类修饰的研究方面有较多报道［
５］
，酶的研究报道甚少［编码ＡＭＥｓ的基因有３０多
种，但在革兰阴性菌中常见的为９种，不同种类的
图１ 部分ＡＭＥｓ基因ＰＣＲ产物电泳图
ｒｏｄｕｃｔＦｉ．１ ＰＣＲｅｌｅｃｔｒｏｈｏｒｅｔｏｒａｍｏｆｓｏｍｅＡＭＥｓ ｐｇｐｇ
分子量标记，由上而下分别为６Ｍ：００、５００、４００、３００、２００、１００ｂ；１５－ｐ）））））分别为ａｎｔ（３″ａａｃ（３ａａｃ（６′ａｈ（３′ａｎｔ（２″－Ⅰ、－Ⅱ、－Ⅰ、－Ⅵ、－Ⅰｐ）基因阳性对照；依次为ａ６１０为２３号菌株电泳图（ｎｔ（３″－－Ⅰ阳性、）））ａａｃ（３）ａａｃ（６′ａｈ（３′ａｎｔ（２″－Ⅱ阴性、－Ⅰ阴性、－Ⅵ阴性、－Ⅰ阳ｐ；）性）依次为ａ１１１５为３０号菌株电泳图（ｎｔ（３″ａａｃ（３）－－Ⅰ阴性、－Ⅱ）））阳性、ａａｃ（６′ａｈ（３′ａｎｔ（２″－Ⅰ阳性、－Ⅵ阳性、－Ⅰ阴性）ｐ
，Ｍ：Ｍｏｌｅｃｕｌａｒｍａｒｋｅｒｓｆｒｏｍｔｏｔｏｂｏｔｔｏｍａｒｅ６００、５００、４００、３００、 ｐ ；）ｏｓｉｔｉｖｅ２００、１００ｂ１５ａｒｅｃｏｎｔｒｏｌｏｆａｎｔ（３″ａａｃ（３）ａａｃ－ －Ⅰ、－Ⅱ、ｐｐ（））６′ａｈ（３′１０ａｒｅｔｈｅｅｌｅｃｔｒｏｈｏｒｅｔｏｒａｍｏｆＮＯ．２３－Ⅰ、－Ⅵ；６－ ｐｐｇ（）、、）ｓｔｒａｉｎｆｏｌｌｏｗｅｄｂａｎｔ（３″ｏｓｉｔｉｖｅａａｃ（３）ｅａｔｉｖｅａａｃ（６′ －Ⅰｐ－Ⅱｎ－ｙｇ 、）、））；ｅａｔｉｖｅａｈ（３′ｅａｔｉｖｅａｎｔ（２″１１１５ａｒｅｔｈｅｏｓｉｔｉｖｅⅠｎ－Ⅵｎ－Ⅰｐ－ ｇｐｇ）ｏｆＮＯ．３０ｓｔｒａｉｎ（ｆｏｌｌｏｗｅｄｂａｎｔ（３″ｅｌｅｃｔｒｏｈｏｒｅｔｏｒａｍ －Ⅰｙｐｇ 、、）、）ｎｅａｔｉｖｅａａｃ（３）ａａｃ（６′ａｈ（３′ｏｓｉｔｉｖｅｏｓｉｔｉｖｅ－Ⅱｐ－Ⅰｐ－Ⅵｇｐ、））ｏｓｉｔｉｖｅａｎｔ（２″ｅａｔｉｖｅ－Ⅰｎｐｇ
一种ＡＭＥＡＭＥｓ可使细菌对同一种抗生素耐药，ｓ可使数种氨基糖苷抗生素活性下降，形成交叉
５］
。耐药［
本研究中ＡＭＥｓ基因阳性率较高的分别是ａａｃ（）／、ａ）／６′７．８％（２９３３）ｎｔ（３″３．６％（２１－Ⅰ８－Ⅰ６）、（）／），３３ａａｃ３ＩＩ５４．５％（１８３３９７％菌株有１种或１－ 种以上基因。多数基因型与耐药表型结果相符，但如６株对氨基糖苷类抗生素敏也有少数不相符的，
感菌株中，有２株检测出ＡＭＥ可能与ｓ基因阳性，
有待于进一步研究。基因不表达或表达不完全有关，
本研究表明，阴沟肠杆菌多重耐药严重，应进一步加强其耐药性监测和耐药相关基因的分子流行病以利于科学制定抗感染治疗方案，控制多重学研究，
耐药菌株的播散。
参考文献
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（２０１１０２２５２０１１０３１８－－ 收稿，－－ 修回）
３ 讨论
阴沟肠杆菌是肠杆菌科中具有代表性的细菌，可从尿液、痰液、脓液、血液和脑脊液中分离出来。中国医院内病原菌耐药监测网资料显示，阴沟肠杆
１］
。该菌的菌已成为近年来医院感染的重要病原菌［
临床检出率仅次于大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌而位居第３位，且有逐年上升的趋势。本研究中从痰液分离的阴沟肠杆菌占被检菌株总数的８１．８％。
阴沟肠杆菌耐药株的增多及其耐药率的攀升日趋严重，使抗感染治疗十分困难，甚至导致临床治疗失败。本研究菌株药敏结果表明，阴沟肠杆菌具有较高的耐药率，并且多重耐药情况严重。对青霉素类、复方新诺明的耐药１～３代头孢菌素环丙沙星、