胞浆胞核蛋白提取
1 细胞密度80%-90%时,取出细胞置于冰上。
2 使用预冷的PBS缓冲液冲洗3遍,去除残留液体。
3 向培养瓶中加入300ul的胞质溶胶提取缓冲液A(cytosol extraction buffer A, CEB-
A), 刮取细胞至1.5ml进口离心管中。
4 在涡旋震荡混匀器上震荡30s, 冰上静置10min,每5min震荡一次。
5 加入30ul的胞质溶胶提取缓冲液B(cytosol extraction buffer B, CEB-B), 涡旋震荡混匀10s,冰上放置1min.
6 4℃离心,1000g,5min。
7 吸取上清,既得到胞浆蛋白。
8 加入100ul的CEB-A,清洗核沉淀,4℃离心,1000g,5min。
9 弃上清,加入40ul的核提取缓冲液(nuclear extraction buffer,NEB)
涡旋震荡混匀10s,冰上放置30min,每5min涡旋震荡10s。
10 4℃离心,1000g,5min。
11 吸取上清,既得到核蛋白。
12 分装至0.2进口EP管中,-80℃保存。
胞浆胞核蛋白提取
1 细胞密度80%-90%时,取出细胞置于冰上。
2 使用预冷的PBS缓冲液冲洗3遍,去除残留液体。
3 向培养瓶中加入300ul的胞质溶胶提取缓冲液A(cytosol extraction buffer A, CEB-
A), 刮取细胞至1.5ml进口离心管中。
4 在涡旋震荡混匀器上震荡30s, 冰上静置10min,每5min震荡一次。
5 加入30ul的胞质溶胶提取缓冲液B(cytosol extraction buffer B, CEB-B), 涡旋震荡混匀10s,冰上放置1min.
6 4℃离心,1000g,5min。
7 吸取上清,既得到胞浆蛋白。
8 加入100ul的CEB-A,清洗核沉淀,4℃离心,1000g,5min。
9 弃上清,加入40ul的核提取缓冲液(nuclear extraction buffer,NEB)
涡旋震荡混匀10s,冰上放置30min,每5min涡旋震荡10s。
10 4℃离心,1000g,5min。
11 吸取上清,既得到核蛋白。
12 分装至0.2进口EP管中,-80℃保存。