山苍子油对花生酱的防霉保鲜效果

1998年8月第13卷第4期

中国粮油学报

JournaloftheChineseCerealsandOilsAssociation

Vol.13,No.4

Aug.1998

山苍子油对花生酱的防霉保鲜效果

余伯良　吴仕业

(四川轻化工学院,　)

摘　要　。

结果表明:在培养基pH5.5时,1.77mg/ml,而山梨酸钾为2.21mg/ml,苯甲酸钠为3.10mg/ml。,山苍子油对黄曲霉产生黄曲霉毒素有较强的抑制作用,添加0.10%的山苍子油能改变其生长曲线,使调整期延长,并减少了55%的细胞总数。

关键词　花生酱　霉菌　黄曲霉毒素

ThePreservativeEffectoftheSeed-Oilof

LitseacubebaonPeanutButter

YuBoliang　WuShiye

(SichuanInstituteofLightIndustryandChemicalTechnology,Zigong　643033)

Abstract　Theantibioticactivityoftheseed-oilofLitseacubebaonfivekindsofmouldsinfectioustopeanutbutterwascomparedwiththoseofchemicalpreservativebytheplatingmethod.ThedataindicatedtheminimumantibioticconcentrationofLitseacubebaoilonmostofmouldswas1.77mg/mlinmediumatapH5.5;incontrast,sodiumbenzoateandpotassiumsorbatewere3.10mg/mland2.21mg/ml,respectively.TheeffectofLitseacubebaoilonaflatoxinproductionwasalsostudied.ThedataindicatedaratherstronginhibitoryeffectofLitseacubebaoilonaflatoxinproductionofAspergillsflavus.Saccharomycesrouxiishowedashortlogarith2micgrowthp

haseandstationaryphaseafteralonglagphaseinthewortfluidmediumcontaining0.10%Litsea

cubebaoil,anditstotalcellnumberreduced55%.

Keywords　Litseacubebaoil,peanutbutter,moulds,aflatoxin

0　前言

花生酱是人们喜爱的调味品,营养丰富,味美可口。用生花生仁磨浆制成的花生酱,营养成分保存很

好,具有花生清香;用焙炒的花生仁磨制的花生酱质地细腻,香味浓郁。但是,花生酱易受霉菌和黄曲霉毒素污染,这是应当引起警惕的。70年代Fonseca等

收稿日期:1998-05-25

余伯良:男,57岁,副教授,微生物专业

测定了20个巴西花生酱样品和10个美国花生酱样品,发现只有3个美国花生酱样品没有黄曲霉毒素,其余27个样品中都有黄曲霉毒素;坎贝尔测定了菲律宾多种食品中黄曲霉毒素的含量,在所测定的29个菲律宾生产的花生酱样品中,黄曲霉毒素含量都在30ppb以上,其中最高达8600ppb〔1〕。

防止花生酱的霉菌和黄曲霉毒素污染,除了挑选优质、新鲜的花生做原料外,在成品中添加有效的防霉保鲜剂及真空包装是重要环节。而真空包装,在中低

50

中国粮油学报　　　　　　　　　　　　1998年第4期

麦芽汁培养基(菌种活化用麦芽汁琼脂;摇床培养

4〕

用麦芽汁液体培养基)〔。

花生蔗糖培养基(其配方、制法与用生花生仁做的花生酱基本相同):挑选新鲜、无霉花生仁300g,浸泡4～8h以后加适量水(总用水量控制在900ml左右),用磨浆机研磨,多层纱布过滤(边用水洗,边过滤出浆汁,直到花生渣再挤不出浆汁为止),取浆汁1000ml(若不足,加水补充到40g、琼脂15g,NaCl,,。1.25〕

1(MIC)〔用丙三醇稀释成如下浓度(V/:7.0,6.0,5.0,4.0,3.0,2.0,1.0。把作对比的苯甲酸钠、山梨酸钾先用70℃无菌水溶解成88.5g/100ml的溶液,并以此作为“原液”,再用无菌水分别稀释成如下浓度(V/V,%):7.0,6.0,5.0,4.0,3.0,2.0,1.0。预先将5种霉菌、2种酵母分别在PDA琼脂

档产品(占花生酱的大多数)中难以做到,添加防霉保鲜剂成了唯一措施。一般多用苯甲酸类或山梨酸类防

腐剂。生花酱的pH值多在4.5以上,用苯甲酸类防腐剂效果是很差的,但因价格比效果较好的山梨酸类防腐剂低,而被盲目地广泛应用。而且,随着生物化学及对物质分子结构研究的不断发展,人们逐步认识到一些人工合成物质(包括合成防腐剂)对人体的危害,因此迫切需要寻找出高效、低毒的天然食品防腐保鲜剂。笔者在指导调味品生产中意外发现,添加了天然增香剂山苍子油的香辣酱、辣椒油,与同类产品相比具有非常突出的防霉保鲜效果,于是将山苍子油添加在花生酱中进行抗菌性等试验研究。

山苍子油(Litseacubebaoil)果、,-蒎烯、80%)、甲基庚烯酮(2.5)1.0)宁烯及α-,-86规定为允许使用的食用香料〔21　试验材料与方法

1.1　试验材料1.1.1　菌种

和麦芽汁琼脂上活化培养,然后各自挑取霉菌孢子,用

无菌生理盐水制成孢子悬浮液(1×106个孢子/ml),并洗下酵母菌菌苔制备酵母混悬液(3×105个/ml)。均须在24h内使用。

调节花生蔗糖培养基和麦芽汁琼脂培养基,使最终pH为5.5,并分装于若干只试管中(每只19ml),经0.55×105Pa,灭菌30min。待降温至60℃左右

,分别吸取3种试剂7种浓度的稀释液1ml加入各自试管中,使各试剂浓度梯度为(ppm):3500,3000,2500,2000,1500,1000,500。每种试剂浓度相同的试管3只,充分

黄曲霉　　(AspergillusflavusLink)

(Asp.nigervanTieghem)黑曲霉

总状毛霉(MucorracemosusFres.)

(PenicilliumcitrinumThom)桔青霉

(RhizopusnigricansEhrenberg)米根霉

酿酒酵母(SaccharomycescerevisiaeHansen)鲁氏酵母(Sacch.rouxiiBoutr.)菌种中的黄曲霉、总状毛霉系自制花生酱(生花生仁磨浆加庶糖制成)在28℃～32℃下敞开放置7d,从表层霉菌中分离、鉴定确认的主要两株霉菌,其中黄曲霉为产毒菌株(该试样用层析法〔3〕检测,其黄曲霉毒素B1含量为1.47mg/kg)。其它菌种来源于上海工业微生物研究所菌种站,由本院微生物实验室提供。1.1.2　主要试剂

山苍子油:购自秀山外贸公司,质量符合ISO3214-1974E标准,相对密度0.885。

苯甲酸钠与山梨钾:均为AR级。丙三醇与硅藻土:均为CP级。

脂肪酸蔗糖酯(简称蔗糖酯):重庆长江化工厂出品,食品级。1.1.3　培养基

马铃薯葡萄糖琼脂(PDA琼脂)培养基。

摇匀,于45℃～50℃倒置直径9cm的平皿;另外3只花生蔗糖培养基和3只麦芽汁琼脂培养基各加入1ml丙三醇摇匀,倒平皿作对照。

分别在花生蔗糖及麦芽汁培养基平皿底部外面用记号笔画“大”字和“一”字,并编号。各试剂浓度相同的花生蔗糖培养基平皿各接种5种霉菌,麦芽汁平皿各接种2种酵母菌。28℃培养48h,肉眼观察结果,以完全没有霉菌菌丝、没有酵母菌菌落生长的最低浓度为该试剂的最低抑菌浓度(此为3套设置。3次平行试验以2次或3次相同结果的为准)。1.2.2　山苍子油对酵母菌的生长影响试验

在霉变的花生酱中也发现一种酵母菌,类似鲁氏酵母,但未能鉴定确认。现用鲁氏酵母进行麦芽汁液体摇床培养,以考察山苍子油对其生长繁殖的影响。主要步骤如下:

首先将澄清的麦芽汁加水稀释成10°Bx麦芽汁

第13卷第4期　　　　　　余伯良等　山苍子油对花生酱的防霉保鲜效果液体培养基,调节pH至5.5,分装于5个300ml具有侧臂试管的三角烧瓶中

〔4〕

51

2　结果与讨论

2.1　山苍子油与合成食品防腐剂的MIC值比较

MIC值越低,表明相应试剂抗菌效力越强。从表1可知,山苍子油对5种霉菌中的4种其MIC值等于

或小于2000ppm(相对密度0.885,2000ppm即为1.77mg/ml),而山梨酸钾对多数霉菌的MIC值等于和

,每瓶装38ml,常规灭菌。

其中3瓶为试组,分别添加山苍子油等3种试剂对鲁氏酵母的MIC低一个浓度梯度的试剂2ml(山苍子油预先用蔗糖酯乳化;此试剂浓度为1000ppm,在麦芽汁培养基中的含量为0.10%);另外1瓶只添加2ml蔗糖酯入培养基作对照试验,剩下的1瓶作为测定

光密度(OD值)时的空白对照。

然后将28℃培养30h的鲁氏酵母麦芽汁培养液于3000r/min离心10min,倾去上清液,加入无菌生理盐水,

使成均匀酵母菌液,含细胞约1×106个/ml。

菌液4ml,置于台式万能摇床中,28始时,,置(用波长560nm)值),此为“0”时读数值(即

大于2500ppm(2.21mg/ml),MIC值等于和大于(ml),山苍子油,,苯甲酸钠最差2,多种食用香料植物均有抑菌抗用〔6〕。特别是在香辛料精油的抗菌性研究(Knobloch等,1989)及后来Gocho(1992)针对源于植物的26种芳香族化合物的抗菌效果研究中,

均有所发7〕现〔,1980年,湖南省粮科所用山苍子精油进行贮粮薰蒸防霉治虫试验成功〔8〕。关于山苍子油的抗菌机理有待进一步研究。2.2　山苍子油对酵母菌生长繁殖的抑制

根据预试验的经验,从鲁氏酵母麦芽汁摇床培养30h开始(即进入稳定期后),每隔5h对4个烧瓶中的培养液采样进行酵母细胞美兰染色,血球计数板计数,分别计算出死活细胞数量,并与光电比浊法结合,绘出鲁氏酵母在3种试剂是和空白条件下各自的生长曲线。

接种量)。之后,,每隔5h用相同方法测OD值,共测14次,至培养70h为止。比色时均用无菌的相同培养液(38ml麦芽汁加2ml蔗糖酯)作空白对照,予以校正。

1.2.3　山苍子油与黄曲霉产毒关系的试验

〔1〕

参照“培养皿中荧光反应法”,首先做山苍子油

是否抑制黄曲霉产毒的试验。将花生蔗糖培养基熔化,分装于18只试验管中(每只19ml)。灭菌后待降温至60℃左右,各自加入1ml用丙三醇稀释的不同浓度的山苍子油(V/V,%):5.0,4.0,3.0,2.0,1.0,同一浓度加3只,共15只;另3只培养基中各加1ml丙三醇作对照。各试管摇匀,缓缓倾入预先做好的硅藻土薄层皿中。接种黄曲霉,30℃培养7d后将双碟平皿置于125瓦紫外灯下观察(滤光片波长365nm),如果菌丝体上显现亮蓝紫色荧光则表明有黄曲霉毒素产生。然后选取试验组中具有代表性的一个平皿和对照组样本,用薄层层析法分别测定培养基中的黄曲霉毒素B1含量。

　　　表1　3种试剂最低抑菌浓度(MIC)　　　　　　ppm

菌　　种黄曲霉黑曲霉

总状毛霉桔青霉米根霉酿酒酵母鲁氏酵母

　　注:培养基pH5.5。

山苍子油

20002500

[***********]00

苯甲酸钠

>3500>[***********]003000

山梨酸钾

[***********]0020001500

图　鲁氏酵母在不同条件下的生长曲线

注:L

、P、S分别为含有山苍子油、山梨酸钾、苯甲酸钠培养基的酵母细胞总数曲线;L′、P′、S′为相应的活细胞数曲线(即生长曲线);O、O′为空白样细胞总数及活细胞数曲线。C、C′分别为空白样、山苍子油的酵母菌细胞总数的对数期末测定点。

从图中可以看出,空白对照鲁氏酵母的调整期是

9h,而含有山苍子油的培养基酵母菌的调整期是

52

中国粮油学报　　　　　　　　　　　　1998年第4期

显低于对照组,说明黄曲霉毒素的产生受到较强抑制。选取此培养基与对照组培养基分别用层析法测定其黄

曲霉毒素B1含量,取3次平行试验平均值,试验组黄曲霉毒素B1为0.089mg/kg,而对照组为1.517mg/kg,表明山苍子油具有较强的抑制黄曲霉产生黄曲霉毒素的作用。

,且,。因此,山苍子油参　考　文　献

1　居乃琥.黄曲霉毒素.北京:轻工业出版社,1980,

黄曲霉毒素

B(mg/kg)

//0.089//0.517

22h,超过空白样的1倍以上;含山梨酸钾、苯甲酸钠的

调整期也有延长,只是延长的幅度比山苍子油的为

小。空白对照的对数生长期是21h,山苍子油的是8h,缩短了1.6倍;含山梨酸钾、苯甲酸钠的,其对数生长期也有缩短。空白对照的稳定期大约是30h,而含山苍子油的,稳定期只有17h,缩短了43%;含山梨酸钾、苯甲酸钠的,稳定期也有缩短。再从对数期末看,空白对照的C点OD值是0.47,而含山苍山油的C′点OD值仅0.21,细胞总数仅相当于空白对照的45%。由此可见,山苍子油对易引起多种食品腐败变质的鲁氏酵母生长繁殖的影响是显著的:生长适应的调整期延长,对数生长期和稳定期缩短,55%。可以推测,可能有类似的情况。2.3　表2山苍子油浓度

()

[***********]0

情况

-++++++++++++

荧光强弱

00+++++++++

25;39;142

2　凌关庭,王亦芸,唐述潮编.食品添加剂手册(上

册).北京:化学工业出版社,1989,1043　刘福岭,

戴行钧编著.食品物理与化学分析方法.北京:轻工业出版社,1987,443～4504　周德庆主编.微生物学实验手册.上海:上海科学技

对照组

　　注:菌丝生长情况“:-”表示肉眼看不到菌丝,无霉斑“;+”表示能

看到稀少的菌丝或发芽孢子,无霉斑;“++”表示能看到较多的菌丝或出现霉斑“;+++”则指试样表面几乎全部被菌丝及孢子覆盖或出现霉斑。

荧光强弱“:0”为无荧光“;+,++,+++”为强度依次递增。

　　　黄曲霉毒素B1值为3次平行试验平均值。

术出版社,1986,277;86～885　周邦靖编著.常用中药的抗菌作用及其测定方法.

重庆:科学技术出版社重庆分社,19876　林进能,等编著.天然食用香料生产与应用.北京:轻工业出版社,1991,28～347　宁正祥,王若峰,谭龙飞.食品防腐剂的研究进展述评.食品与发酵工业,1995,6,72～758　刘萼华,肖恒成,陈淑贞,等.风油精对几种储粮害虫的毒性试验.粮油仓储科技通讯,1995(2):27～30

从表2可见,加入山苍子油浓度为1500ppm、1000ppm的培养基,其菌丝生长情况与对照组的相近,而荧光反应却较对照组的为弱,说明山苍子油有抑制黄曲霉产毒的作用。其中添加山苍子油1500ppm的培养基,菌丝生长情况比对照组的稍弱,而荧光反应明

1998年8月第13卷第4期

中国粮油学报

JournaloftheChineseCerealsandOilsAssociation

Vol.13,No.4

Aug.1998

山苍子油对花生酱的防霉保鲜效果

余伯良　吴仕业

(四川轻化工学院,　)

摘　要　。

结果表明:在培养基pH5.5时,1.77mg/ml,而山梨酸钾为2.21mg/ml,苯甲酸钠为3.10mg/ml。,山苍子油对黄曲霉产生黄曲霉毒素有较强的抑制作用,添加0.10%的山苍子油能改变其生长曲线,使调整期延长,并减少了55%的细胞总数。

关键词　花生酱　霉菌　黄曲霉毒素

ThePreservativeEffectoftheSeed-Oilof

LitseacubebaonPeanutButter

YuBoliang　WuShiye

(SichuanInstituteofLightIndustryandChemicalTechnology,Zigong　643033)

Abstract　Theantibioticactivityoftheseed-oilofLitseacubebaonfivekindsofmouldsinfectioustopeanutbutterwascomparedwiththoseofchemicalpreservativebytheplatingmethod.ThedataindicatedtheminimumantibioticconcentrationofLitseacubebaoilonmostofmouldswas1.77mg/mlinmediumatapH5.5;incontrast,sodiumbenzoateandpotassiumsorbatewere3.10mg/mland2.21mg/ml,respectively.TheeffectofLitseacubebaoilonaflatoxinproductionwasalsostudied.ThedataindicatedaratherstronginhibitoryeffectofLitseacubebaoilonaflatoxinproductionofAspergillsflavus.Saccharomycesrouxiishowedashortlogarith2micgrowthp

haseandstationaryphaseafteralonglagphaseinthewortfluidmediumcontaining0.10%Litsea

cubebaoil,anditstotalcellnumberreduced55%.

Keywords　Litseacubebaoil,peanutbutter,moulds,aflatoxin

0　前言

花生酱是人们喜爱的调味品,营养丰富,味美可口。用生花生仁磨浆制成的花生酱,营养成分保存很

好,具有花生清香;用焙炒的花生仁磨制的花生酱质地细腻,香味浓郁。但是,花生酱易受霉菌和黄曲霉毒素污染,这是应当引起警惕的。70年代Fonseca等

收稿日期:1998-05-25

余伯良:男,57岁,副教授,微生物专业

测定了20个巴西花生酱样品和10个美国花生酱样品,发现只有3个美国花生酱样品没有黄曲霉毒素,其余27个样品中都有黄曲霉毒素;坎贝尔测定了菲律宾多种食品中黄曲霉毒素的含量,在所测定的29个菲律宾生产的花生酱样品中,黄曲霉毒素含量都在30ppb以上,其中最高达8600ppb〔1〕。

防止花生酱的霉菌和黄曲霉毒素污染,除了挑选优质、新鲜的花生做原料外,在成品中添加有效的防霉保鲜剂及真空包装是重要环节。而真空包装,在中低

50

中国粮油学报　　　　　　　　　　　　1998年第4期

麦芽汁培养基(菌种活化用麦芽汁琼脂;摇床培养

4〕

用麦芽汁液体培养基)〔。

花生蔗糖培养基(其配方、制法与用生花生仁做的花生酱基本相同):挑选新鲜、无霉花生仁300g,浸泡4～8h以后加适量水(总用水量控制在900ml左右),用磨浆机研磨,多层纱布过滤(边用水洗,边过滤出浆汁,直到花生渣再挤不出浆汁为止),取浆汁1000ml(若不足,加水补充到40g、琼脂15g,NaCl,,。1.25〕

1(MIC)〔用丙三醇稀释成如下浓度(V/:7.0,6.0,5.0,4.0,3.0,2.0,1.0。把作对比的苯甲酸钠、山梨酸钾先用70℃无菌水溶解成88.5g/100ml的溶液,并以此作为“原液”,再用无菌水分别稀释成如下浓度(V/V,%):7.0,6.0,5.0,4.0,3.0,2.0,1.0。预先将5种霉菌、2种酵母分别在PDA琼脂

档产品(占花生酱的大多数)中难以做到,添加防霉保鲜剂成了唯一措施。一般多用苯甲酸类或山梨酸类防

腐剂。生花酱的pH值多在4.5以上,用苯甲酸类防腐剂效果是很差的,但因价格比效果较好的山梨酸类防腐剂低,而被盲目地广泛应用。而且,随着生物化学及对物质分子结构研究的不断发展,人们逐步认识到一些人工合成物质(包括合成防腐剂)对人体的危害,因此迫切需要寻找出高效、低毒的天然食品防腐保鲜剂。笔者在指导调味品生产中意外发现,添加了天然增香剂山苍子油的香辣酱、辣椒油,与同类产品相比具有非常突出的防霉保鲜效果,于是将山苍子油添加在花生酱中进行抗菌性等试验研究。

山苍子油(Litseacubebaoil)果、,-蒎烯、80%)、甲基庚烯酮(2.5)1.0)宁烯及α-,-86规定为允许使用的食用香料〔21　试验材料与方法

1.1　试验材料1.1.1　菌种

和麦芽汁琼脂上活化培养,然后各自挑取霉菌孢子,用

无菌生理盐水制成孢子悬浮液(1×106个孢子/ml),并洗下酵母菌菌苔制备酵母混悬液(3×105个/ml)。均须在24h内使用。

调节花生蔗糖培养基和麦芽汁琼脂培养基,使最终pH为5.5,并分装于若干只试管中(每只19ml),经0.55×105Pa,灭菌30min。待降温至60℃左右

,分别吸取3种试剂7种浓度的稀释液1ml加入各自试管中,使各试剂浓度梯度为(ppm):3500,3000,2500,2000,1500,1000,500。每种试剂浓度相同的试管3只,充分

黄曲霉　　(AspergillusflavusLink)

(Asp.nigervanTieghem)黑曲霉

总状毛霉(MucorracemosusFres.)

(PenicilliumcitrinumThom)桔青霉

(RhizopusnigricansEhrenberg)米根霉

酿酒酵母(SaccharomycescerevisiaeHansen)鲁氏酵母(Sacch.rouxiiBoutr.)菌种中的黄曲霉、总状毛霉系自制花生酱(生花生仁磨浆加庶糖制成)在28℃～32℃下敞开放置7d,从表层霉菌中分离、鉴定确认的主要两株霉菌,其中黄曲霉为产毒菌株(该试样用层析法〔3〕检测,其黄曲霉毒素B1含量为1.47mg/kg)。其它菌种来源于上海工业微生物研究所菌种站,由本院微生物实验室提供。1.1.2　主要试剂

山苍子油:购自秀山外贸公司,质量符合ISO3214-1974E标准,相对密度0.885。

苯甲酸钠与山梨钾:均为AR级。丙三醇与硅藻土:均为CP级。

脂肪酸蔗糖酯(简称蔗糖酯):重庆长江化工厂出品,食品级。1.1.3　培养基

马铃薯葡萄糖琼脂(PDA琼脂)培养基。

摇匀,于45℃～50℃倒置直径9cm的平皿;另外3只花生蔗糖培养基和3只麦芽汁琼脂培养基各加入1ml丙三醇摇匀,倒平皿作对照。

分别在花生蔗糖及麦芽汁培养基平皿底部外面用记号笔画“大”字和“一”字,并编号。各试剂浓度相同的花生蔗糖培养基平皿各接种5种霉菌,麦芽汁平皿各接种2种酵母菌。28℃培养48h,肉眼观察结果,以完全没有霉菌菌丝、没有酵母菌菌落生长的最低浓度为该试剂的最低抑菌浓度(此为3套设置。3次平行试验以2次或3次相同结果的为准)。1.2.2　山苍子油对酵母菌的生长影响试验

在霉变的花生酱中也发现一种酵母菌,类似鲁氏酵母,但未能鉴定确认。现用鲁氏酵母进行麦芽汁液体摇床培养,以考察山苍子油对其生长繁殖的影响。主要步骤如下:

首先将澄清的麦芽汁加水稀释成10°Bx麦芽汁

第13卷第4期　　　　　　余伯良等　山苍子油对花生酱的防霉保鲜效果液体培养基,调节pH至5.5,分装于5个300ml具有侧臂试管的三角烧瓶中

〔4〕

51

2　结果与讨论

2.1　山苍子油与合成食品防腐剂的MIC值比较

MIC值越低,表明相应试剂抗菌效力越强。从表1可知,山苍子油对5种霉菌中的4种其MIC值等于

或小于2000ppm(相对密度0.885,2000ppm即为1.77mg/ml),而山梨酸钾对多数霉菌的MIC值等于和

,每瓶装38ml,常规灭菌。

其中3瓶为试组,分别添加山苍子油等3种试剂对鲁氏酵母的MIC低一个浓度梯度的试剂2ml(山苍子油预先用蔗糖酯乳化;此试剂浓度为1000ppm,在麦芽汁培养基中的含量为0.10%);另外1瓶只添加2ml蔗糖酯入培养基作对照试验,剩下的1瓶作为测定

光密度(OD值)时的空白对照。

然后将28℃培养30h的鲁氏酵母麦芽汁培养液于3000r/min离心10min,倾去上清液,加入无菌生理盐水,

使成均匀酵母菌液,含细胞约1×106个/ml。

菌液4ml,置于台式万能摇床中,28始时,,置(用波长560nm)值),此为“0”时读数值(即

大于2500ppm(2.21mg/ml),MIC值等于和大于(ml),山苍子油,,苯甲酸钠最差2,多种食用香料植物均有抑菌抗用〔6〕。特别是在香辛料精油的抗菌性研究(Knobloch等,1989)及后来Gocho(1992)针对源于植物的26种芳香族化合物的抗菌效果研究中,

均有所发7〕现〔,1980年,湖南省粮科所用山苍子精油进行贮粮薰蒸防霉治虫试验成功〔8〕。关于山苍子油的抗菌机理有待进一步研究。2.2　山苍子油对酵母菌生长繁殖的抑制

根据预试验的经验,从鲁氏酵母麦芽汁摇床培养30h开始(即进入稳定期后),每隔5h对4个烧瓶中的培养液采样进行酵母细胞美兰染色,血球计数板计数,分别计算出死活细胞数量,并与光电比浊法结合,绘出鲁氏酵母在3种试剂是和空白条件下各自的生长曲线。

接种量)。之后,,每隔5h用相同方法测OD值,共测14次,至培养70h为止。比色时均用无菌的相同培养液(38ml麦芽汁加2ml蔗糖酯)作空白对照,予以校正。

1.2.3　山苍子油与黄曲霉产毒关系的试验

〔1〕

参照“培养皿中荧光反应法”,首先做山苍子油

是否抑制黄曲霉产毒的试验。将花生蔗糖培养基熔化,分装于18只试验管中(每只19ml)。灭菌后待降温至60℃左右,各自加入1ml用丙三醇稀释的不同浓度的山苍子油(V/V,%):5.0,4.0,3.0,2.0,1.0,同一浓度加3只,共15只;另3只培养基中各加1ml丙三醇作对照。各试管摇匀,缓缓倾入预先做好的硅藻土薄层皿中。接种黄曲霉,30℃培养7d后将双碟平皿置于125瓦紫外灯下观察(滤光片波长365nm),如果菌丝体上显现亮蓝紫色荧光则表明有黄曲霉毒素产生。然后选取试验组中具有代表性的一个平皿和对照组样本,用薄层层析法分别测定培养基中的黄曲霉毒素B1含量。

　　　表1　3种试剂最低抑菌浓度(MIC)　　　　　　ppm

菌　　种黄曲霉黑曲霉

总状毛霉桔青霉米根霉酿酒酵母鲁氏酵母

　　注:培养基pH5.5。

山苍子油

20002500

[***********]00

苯甲酸钠

>3500>[***********]003000

山梨酸钾

[***********]0020001500

图　鲁氏酵母在不同条件下的生长曲线

注:L

、P、S分别为含有山苍子油、山梨酸钾、苯甲酸钠培养基的酵母细胞总数曲线;L′、P′、S′为相应的活细胞数曲线(即生长曲线);O、O′为空白样细胞总数及活细胞数曲线。C、C′分别为空白样、山苍子油的酵母菌细胞总数的对数期末测定点。

从图中可以看出,空白对照鲁氏酵母的调整期是

9h,而含有山苍子油的培养基酵母菌的调整期是

52

中国粮油学报　　　　　　　　　　　　1998年第4期

显低于对照组,说明黄曲霉毒素的产生受到较强抑制。选取此培养基与对照组培养基分别用层析法测定其黄

曲霉毒素B1含量,取3次平行试验平均值,试验组黄曲霉毒素B1为0.089mg/kg,而对照组为1.517mg/kg,表明山苍子油具有较强的抑制黄曲霉产生黄曲霉毒素的作用。

,且,。因此,山苍子油参　考　文　献

1　居乃琥.黄曲霉毒素.北京:轻工业出版社,1980,

黄曲霉毒素

B(mg/kg)

//0.089//0.517

22h,超过空白样的1倍以上;含山梨酸钾、苯甲酸钠的

调整期也有延长,只是延长的幅度比山苍子油的为

小。空白对照的对数生长期是21h,山苍子油的是8h,缩短了1.6倍;含山梨酸钾、苯甲酸钠的,其对数生长期也有缩短。空白对照的稳定期大约是30h,而含山苍子油的,稳定期只有17h,缩短了43%;含山梨酸钾、苯甲酸钠的,稳定期也有缩短。再从对数期末看,空白对照的C点OD值是0.47,而含山苍山油的C′点OD值仅0.21,细胞总数仅相当于空白对照的45%。由此可见,山苍子油对易引起多种食品腐败变质的鲁氏酵母生长繁殖的影响是显著的:生长适应的调整期延长,对数生长期和稳定期缩短,55%。可以推测,可能有类似的情况。2.3　表2山苍子油浓度

()

[***********]0

情况

-++++++++++++

荧光强弱

00+++++++++

25;39;142

2　凌关庭,王亦芸,唐述潮编.食品添加剂手册(上

册).北京:化学工业出版社,1989,1043　刘福岭,

戴行钧编著.食品物理与化学分析方法.北京:轻工业出版社,1987,443～4504　周德庆主编.微生物学实验手册.上海:上海科学技

对照组

　　注:菌丝生长情况“:-”表示肉眼看不到菌丝,无霉斑“;+”表示能

看到稀少的菌丝或发芽孢子,无霉斑;“++”表示能看到较多的菌丝或出现霉斑“;+++”则指试样表面几乎全部被菌丝及孢子覆盖或出现霉斑。

荧光强弱“:0”为无荧光“;+,++,+++”为强度依次递增。

　　　黄曲霉毒素B1值为3次平行试验平均值。

术出版社,1986,277;86～885　周邦靖编著.常用中药的抗菌作用及其测定方法.

重庆:科学技术出版社重庆分社,19876　林进能,等编著.天然食用香料生产与应用.北京:轻工业出版社,1991,28～347　宁正祥,王若峰,谭龙飞.食品防腐剂的研究进展述评.食品与发酵工业,1995,6,72～758　刘萼华,肖恒成,陈淑贞,等.风油精对几种储粮害虫的毒性试验.粮油仓储科技通讯,1995(2):27～30

从表2可见,加入山苍子油浓度为1500ppm、1000ppm的培养基,其菌丝生长情况与对照组的相近,而荧光反应却较对照组的为弱,说明山苍子油有抑制黄曲霉产毒的作用。其中添加山苍子油1500ppm的培养基,菌丝生长情况比对照组的稍弱,而荧光反应明