#92#
浙江预防医学2008年第20卷第6期 ZhejiangPrevMed,June2008,Vol20,No16
#实验技术#
蝙蝠蛾被毛孢虫草菌丝体粉急性
毒性和致突变作用
查捷 项华 孙建荣 章晓玲 金慧
中图分类号:R-332 文献标识码:B 文章编号:1007-0931(2008)06-0092-02
冬虫夏草是我国名贵的滋补纯化中药,被誉为中国中药三大宝之一。但由于受生长条件的限制,天然资源稀缺,现多采用人工方法分离和培育功效菌种来获得冬虫夏草的替代品。蝙蝠蛾被毛孢虫草菌丝体粉(蝙蝠蛾粉)就是以人工发酵工艺生产而取得的冬虫夏草替代品,对小鼠具有一定的改善睡眠作用[1]。为了解其毒性作用,我们依据5保健食品检验与评价技术规范62003年版进行了急性毒性和致突变性的研究。
[2]
40、8Lg/皿。在加和不加S9混合液的条件下采用平板掺入法进行试验[3],每剂量做3皿,重复2次。
413 小鼠骨髓细胞微核试验 选用体重25~30g清洁级ICR小鼠50只,随机分为5组,每组10只,雌雄各半。设1010、510、215g/kg#bw3个剂量组,并设阴性对照组(蒸馏水)、阳性对照组(环磷酰胺40mg/kg#bw)。各组均按30h给受试物法给药,2次给受试物间隔24h。第2次给受试物后6h处死动物,取股骨骨髓常规制片。每鼠镜检1000个骨髓嗜多染红细胞(PCE),并计算微核发生率,以千分率表示。每鼠计数200个嗜多染红细胞,并计算嗜多染红细胞与成熟红细胞比值(PCE/RBC)。
414 小鼠精子畸形试验 选用体重25~30g雄性ICR小鼠25只,随即分为5组,每组5只。设1010、510、215g/kg#bw3个剂量组,并设阴性对照组(蒸馏水)和阳性对照组(环磷酰胺40mg/kg#bw)。各组动物均采用经口灌胃连续5d定时给药,各组均于第一次给药后的第35d处死动物,取双侧副睾,放入盛有少量生理盐水的平皿中,将副睾剪碎,经血滤网过滤,滤液直接涂片,自然干燥后,用甲醇固定,2%伊红染色、每鼠计数1000个完整精子,记录畸变精子类型与数目,计算精子畸形率(%)。
5 统计学方法 Ames试验用方差分析,小鼠骨髓微核试验结果用x2检验,小鼠精子畸形试验用秩和检验。
要求分别对其
材料与方法
1 受试物 蝙蝠蛾被毛孢虫草菌丝体粉为微黄色粉末状(杭州赐富生物技术有限公司提供,批号20040906)。2 实验动物 清洁级ICR种小鼠、SD大鼠均由浙江省实验动物中心提供。实验动物许可证号为SCXK(浙)2003-0001。
3 试验菌株 Ames试验采用鼠伤寒沙门菌突变型菌株TA97、TA98、TA100、TA102及S9均由上海复旦大学医学院提供。4 实验方法
411 最大耐受量试验 选用ICR小鼠20只,体重18~20g;SD大鼠20只,体重180~220g;均雌雄各半。样品配制剂量为5g/10ml,2次/d灌胃,每次间隔4h。按急性毒性分级检验,无毒级试验剂量2010g/kg1bw给予后观察14d,记录中毒表现及死亡情况。
412 Ames试验 选用鼠伤寒沙门菌突变型菌株TA97、TA98、TA100、TA102作为测试菌株。阳性对照为9-AA(9-氨基口丫啶)、2,7-AF(2,7-二氨基芴)、NaN3(叠氮钠)、MMC(丝裂霉素C)、2AF(二氨基芴)、1,8-二羟基蒽醌,同时设阴性对照(蒸馏水)和空白对照。受试物蝙蝠蛾被毛孢虫草菌丝体粉设5个剂量,分别为5000、1000、200、
作者单位:杭州市疾病预防控制中心,浙江杭州 310006
结 果
1 最大耐受剂量 蝙蝠蛾被毛孢虫草菌丝体粉大、小鼠急性毒性试验结果,大、小鼠经口灌胃给予样品后,在观察期内未出现异常症状和死亡情况。得蝙蝠蛾被毛孢虫草菌丝体粉雌雄大、小鼠LD50体重均大于2010g/kg,根据5保健食品检验与评价技术规范6(2003),为无毒级。
2 Ames试验 蝙蝠蛾被毛孢虫草菌丝体粉各剂量组在加和不加S9条件下,回变菌落数均未超过阴性对照组的2倍以上,本试验结果显示该样品Ames试验结果为阴性。见表1。
浙江预防医学2008年第20卷第6期 ZhejiangPrevMed,June2008,Vol20,No16
#93#
表1 蝙蝠蛾被毛孢虫草菌丝体粉Ames试验结果
回变菌落数(?SD)
剂量(Lg/皿)
-S9
50001000
蝙蝠蛾粉
TA97
+S915017?41614613?41814613?61014110?71513913?910
-S93113?2113117?2113310?2163113?2113313?1123117?115
12813?71513817?131212913?151413517?111613113?910224010?9910
TA98
+S93910?2123717?01473813?2143513?1133417?1193417?117
-S9
TA100
+S915810?31615613?61716010?51215613?71415510?517
-S9
15410?61615715?131415317?141315213?161314712?1215
TA102
+S927010?161126317?51926410?111826510?51126513?813
26313?71425210?61525810?91825610?91225410?1510
24917?121526413?1213
200408
13413?151913817?1710
14713?161315210?1218
阴性(H2O)9-AA(50)2,7-AF(20)NaN3(115)MMC(015)2AF(10)
1,8-二羟基蒽醌(50)
99910?2917
215510?7718
235010?8010
254510?25510
248010?7010
244010?12010
221010?11010
3 小鼠骨髓微核试验 各剂量组微核发生率与阴性对照组比较,差异无统计学意义(P>0105),阳性对照组明显高于阴性对照组(P
讨 论
冬虫夏草的药用价值早已为世人所公认,它还具有抗肿瘤抗辐射作用[4]。近年来,随着人们逐渐发现和认识虫草的药补疗效和提高免疫功能,虫草的开发受到了众人极大的关注。人们相继开发了各种虫草替代品,蝙蝠蛾被毛
表2 小鼠骨髓微核试验结果
性别
雄性 蝙蝠蛾粉
剂量(g/kg)
PCE
MN/PCE
[**************]
MN(j)[**************]8*[**************]6*
PCE/NCE[***********][***********]0189
孢虫草菌丝体粉就是经人工发酵工艺生产的一种冬虫夏草替代品。
从上个世纪80年代起,我国研究人员就冬虫夏草的菌种分离、人工培养和发酵制药等方面开展了大量的研究工作。蝙蝠蛾被毛孢就是由青海畜牧兽医科学院有关人员于1983年自冬虫夏草中分离而得到的。本研究采用大、小鼠急性毒性试验、Ames试验、骨髓微核试验和小鼠精子畸形试验4种方法,分别从急性毒性、基因突变、体细胞和生殖细胞、体内和体外、真核和原核细胞方面对以人工发酵工艺生产的蝙蝠蛾被毛孢虫草菌丝体粉的急性毒性和致突变性进行了评价。结果表明该产品对大、小鼠急性毒性属无毒级,对原核生物未显示出致突变性,对哺乳动物体细胞和生殖细胞亦无致突变性。
雌性
[***********]5000
阴性(H2O)5000环磷酰胺(40mg/kg)5000蝙蝠蛾粉2155000
[**************]
阴性(H2O)5000环磷酰胺(40mg/kg)5000
*与阴性组比较,P
4 小鼠精子畸形试验 各个剂量组精子畸形率与阴性对照组比较,差异无统计学意义(P>0105),而阳性对照组明显高于阴性对照组(P
参考文献
[1]俞萍,徐德洲.蝙蝠蛾被毛孢菌丝体改善小鼠睡眠的作用
[J].中国医院药学杂志.2006,26(9):1179~1180.[2]卫生部.5保健食品检验与评价技术规范6[S].2003.
[3]黄幸纾,陈星若.环境化学物致突变、致畸、致癌试验方法
[M].杭州:浙江科学技术出版社,1985.13~41.
[4]李连德,李增智,樊美珍,等.虫草多糖研究进展[J].安徽
农业大学学报,2000,27(4):413~416.
(收稿日期:2007-08-20)
表3 小鼠精子畸形试验结果
剂量(g/kg)
蝙蝠蛾粉 215 510 1010
阴性(H2O)011ml/10g环磷酰胺(40mg/kg)
*与阴性组比较,P
观察精子数
5000
[**************]0
畸形数畸形率(%)[1**********]
[***********]74*
#92#
浙江预防医学2008年第20卷第6期 ZhejiangPrevMed,June2008,Vol20,No16
#实验技术#
蝙蝠蛾被毛孢虫草菌丝体粉急性
毒性和致突变作用
查捷 项华 孙建荣 章晓玲 金慧
中图分类号:R-332 文献标识码:B 文章编号:1007-0931(2008)06-0092-02
冬虫夏草是我国名贵的滋补纯化中药,被誉为中国中药三大宝之一。但由于受生长条件的限制,天然资源稀缺,现多采用人工方法分离和培育功效菌种来获得冬虫夏草的替代品。蝙蝠蛾被毛孢虫草菌丝体粉(蝙蝠蛾粉)就是以人工发酵工艺生产而取得的冬虫夏草替代品,对小鼠具有一定的改善睡眠作用[1]。为了解其毒性作用,我们依据5保健食品检验与评价技术规范62003年版进行了急性毒性和致突变性的研究。
[2]
40、8Lg/皿。在加和不加S9混合液的条件下采用平板掺入法进行试验[3],每剂量做3皿,重复2次。
413 小鼠骨髓细胞微核试验 选用体重25~30g清洁级ICR小鼠50只,随机分为5组,每组10只,雌雄各半。设1010、510、215g/kg#bw3个剂量组,并设阴性对照组(蒸馏水)、阳性对照组(环磷酰胺40mg/kg#bw)。各组均按30h给受试物法给药,2次给受试物间隔24h。第2次给受试物后6h处死动物,取股骨骨髓常规制片。每鼠镜检1000个骨髓嗜多染红细胞(PCE),并计算微核发生率,以千分率表示。每鼠计数200个嗜多染红细胞,并计算嗜多染红细胞与成熟红细胞比值(PCE/RBC)。
414 小鼠精子畸形试验 选用体重25~30g雄性ICR小鼠25只,随即分为5组,每组5只。设1010、510、215g/kg#bw3个剂量组,并设阴性对照组(蒸馏水)和阳性对照组(环磷酰胺40mg/kg#bw)。各组动物均采用经口灌胃连续5d定时给药,各组均于第一次给药后的第35d处死动物,取双侧副睾,放入盛有少量生理盐水的平皿中,将副睾剪碎,经血滤网过滤,滤液直接涂片,自然干燥后,用甲醇固定,2%伊红染色、每鼠计数1000个完整精子,记录畸变精子类型与数目,计算精子畸形率(%)。
5 统计学方法 Ames试验用方差分析,小鼠骨髓微核试验结果用x2检验,小鼠精子畸形试验用秩和检验。
要求分别对其
材料与方法
1 受试物 蝙蝠蛾被毛孢虫草菌丝体粉为微黄色粉末状(杭州赐富生物技术有限公司提供,批号20040906)。2 实验动物 清洁级ICR种小鼠、SD大鼠均由浙江省实验动物中心提供。实验动物许可证号为SCXK(浙)2003-0001。
3 试验菌株 Ames试验采用鼠伤寒沙门菌突变型菌株TA97、TA98、TA100、TA102及S9均由上海复旦大学医学院提供。4 实验方法
411 最大耐受量试验 选用ICR小鼠20只,体重18~20g;SD大鼠20只,体重180~220g;均雌雄各半。样品配制剂量为5g/10ml,2次/d灌胃,每次间隔4h。按急性毒性分级检验,无毒级试验剂量2010g/kg1bw给予后观察14d,记录中毒表现及死亡情况。
412 Ames试验 选用鼠伤寒沙门菌突变型菌株TA97、TA98、TA100、TA102作为测试菌株。阳性对照为9-AA(9-氨基口丫啶)、2,7-AF(2,7-二氨基芴)、NaN3(叠氮钠)、MMC(丝裂霉素C)、2AF(二氨基芴)、1,8-二羟基蒽醌,同时设阴性对照(蒸馏水)和空白对照。受试物蝙蝠蛾被毛孢虫草菌丝体粉设5个剂量,分别为5000、1000、200、
作者单位:杭州市疾病预防控制中心,浙江杭州 310006
结 果
1 最大耐受剂量 蝙蝠蛾被毛孢虫草菌丝体粉大、小鼠急性毒性试验结果,大、小鼠经口灌胃给予样品后,在观察期内未出现异常症状和死亡情况。得蝙蝠蛾被毛孢虫草菌丝体粉雌雄大、小鼠LD50体重均大于2010g/kg,根据5保健食品检验与评价技术规范6(2003),为无毒级。
2 Ames试验 蝙蝠蛾被毛孢虫草菌丝体粉各剂量组在加和不加S9条件下,回变菌落数均未超过阴性对照组的2倍以上,本试验结果显示该样品Ames试验结果为阴性。见表1。
浙江预防医学2008年第20卷第6期 ZhejiangPrevMed,June2008,Vol20,No16
#93#
表1 蝙蝠蛾被毛孢虫草菌丝体粉Ames试验结果
回变菌落数(?SD)
剂量(Lg/皿)
-S9
50001000
蝙蝠蛾粉
TA97
+S915017?41614613?41814613?61014110?71513913?910
-S93113?2113117?2113310?2163113?2113313?1123117?115
12813?71513817?131212913?151413517?111613113?910224010?9910
TA98
+S93910?2123717?01473813?2143513?1133417?1193417?117
-S9
TA100
+S915810?31615613?61716010?51215613?71415510?517
-S9
15410?61615715?131415317?141315213?161314712?1215
TA102
+S927010?161126317?51926410?111826510?51126513?813
26313?71425210?61525810?91825610?91225410?1510
24917?121526413?1213
200408
13413?151913817?1710
14713?161315210?1218
阴性(H2O)9-AA(50)2,7-AF(20)NaN3(115)MMC(015)2AF(10)
1,8-二羟基蒽醌(50)
99910?2917
215510?7718
235010?8010
254510?25510
248010?7010
244010?12010
221010?11010
3 小鼠骨髓微核试验 各剂量组微核发生率与阴性对照组比较,差异无统计学意义(P>0105),阳性对照组明显高于阴性对照组(P
讨 论
冬虫夏草的药用价值早已为世人所公认,它还具有抗肿瘤抗辐射作用[4]。近年来,随着人们逐渐发现和认识虫草的药补疗效和提高免疫功能,虫草的开发受到了众人极大的关注。人们相继开发了各种虫草替代品,蝙蝠蛾被毛
表2 小鼠骨髓微核试验结果
性别
雄性 蝙蝠蛾粉
剂量(g/kg)
PCE
MN/PCE
[**************]
MN(j)[**************]8*[**************]6*
PCE/NCE[***********][***********]0189
孢虫草菌丝体粉就是经人工发酵工艺生产的一种冬虫夏草替代品。
从上个世纪80年代起,我国研究人员就冬虫夏草的菌种分离、人工培养和发酵制药等方面开展了大量的研究工作。蝙蝠蛾被毛孢就是由青海畜牧兽医科学院有关人员于1983年自冬虫夏草中分离而得到的。本研究采用大、小鼠急性毒性试验、Ames试验、骨髓微核试验和小鼠精子畸形试验4种方法,分别从急性毒性、基因突变、体细胞和生殖细胞、体内和体外、真核和原核细胞方面对以人工发酵工艺生产的蝙蝠蛾被毛孢虫草菌丝体粉的急性毒性和致突变性进行了评价。结果表明该产品对大、小鼠急性毒性属无毒级,对原核生物未显示出致突变性,对哺乳动物体细胞和生殖细胞亦无致突变性。
雌性
[***********]5000
阴性(H2O)5000环磷酰胺(40mg/kg)5000蝙蝠蛾粉2155000
[**************]
阴性(H2O)5000环磷酰胺(40mg/kg)5000
*与阴性组比较,P
4 小鼠精子畸形试验 各个剂量组精子畸形率与阴性对照组比较,差异无统计学意义(P>0105),而阳性对照组明显高于阴性对照组(P
参考文献
[1]俞萍,徐德洲.蝙蝠蛾被毛孢菌丝体改善小鼠睡眠的作用
[J].中国医院药学杂志.2006,26(9):1179~1180.[2]卫生部.5保健食品检验与评价技术规范6[S].2003.
[3]黄幸纾,陈星若.环境化学物致突变、致畸、致癌试验方法
[M].杭州:浙江科学技术出版社,1985.13~41.
[4]李连德,李增智,樊美珍,等.虫草多糖研究进展[J].安徽
农业大学学报,2000,27(4):413~416.
(收稿日期:2007-08-20)
表3 小鼠精子畸形试验结果
剂量(g/kg)
蝙蝠蛾粉 215 510 1010
阴性(H2O)011ml/10g环磷酰胺(40mg/kg)
*与阴性组比较,P
观察精子数
5000
[**************]0
畸形数畸形率(%)[1**********]
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