十七 常用培养基配方
17.1 营养琼脂培养基
成分
蛋白胨 10g
牛肉膏 3g
氯化钠 5g
琼脂 15~20g
蒸馏水 1000mL
制法：
将除琼脂以外的各成分溶解于蒸馏水内，加入15%氢氧化钠溶液约2ML，校正PH7.2—7.4，加入琼脂，加热煮沸，使琼脂溶化。分装在三角锥瓶中，在121℃下高压灭菌15分钟。 17.2 乳糖胆盐发酵管培养基（单料）
成分
蛋白胨 20g
猪胆盐 5g
乳糖 10g
0.04%溴甲酚紫水溶液 25mL
蒸馏水 1000ml
PH7.4
制法
将蛋白胨，胆盐及乳糖溶于水中，校正PH值，加入指示剂分装，每支管10ml，并放入一个小倒管（产气管），在115℃下高压灭菌15分钟。
注：双料乳糖胆盐发酵管培养基除蒸馏水外，其他成分加倍。
17.3 乳糖发酵管培养基（单料）
成分
蛋白胨 20g
乳糖 10g
0.04%溴甲酚紫水溶液 25ml
蒸馏水 1000ml
PH7.4
制法
将蛋白胨及乳糖溶于水中，校正PH，加入指示剂分装，每支管3ml，并放入一个小倒管（产生气），在115℃下高压灭菌15分钟。
注：双料乳糖发酵管培养基除蒸馏水外，其他成分加倍。
17.4 伊红美琼脂（EMB）培养基
成分
蛋白胨 10g
乳糖 10g
磷酸氢二钾 2g
琼脂 2g
2%伊红溶液 20ml
0.65%美兰溶液 10 ml
蒸馏水 1000ml
PH7.1
制法
将蛋白胨，磷酸盐和琼脂溶解于蒸馏水中，校正PH，分装于三角锥瓶内，在121℃下高压灭菌15分钟后备用。临用时加入乳糖并加热熔化琼脂，冷却至50—60℃，加入伊红和美蓝溶液摇匀，浇注平板。 17.5 远藤氏培养基
配方：
蛋白栋 10.0g
乳糖 10.0g
磷酸氯二钾 3.5g
亚硫酸氢钠 2.5g
碱性品红 0.4g
琼脂 10.0g
蒸馏水 100ml
制备：
配料放入蒸馏水中，搅拌15分钟，使其溶解，分装到三角瓶或试管，121℃灭菌20分钟， 冷却后贮于暗处，最佳温度为4—8℃以保持浅粉红色。
17.6 UBA培养基
酵母浸膏 6.1g
蛋白胨 15g
番茄汁（244ml） 12.2g
葡萄糖 16g
K2HPO4 0.31g
KH2PO4 03.1g
MgSO²7H2O 0.12g
NaCl 0.006g
FeSO4²7H2O 0.006g
MnSO4²H2O 0.006g
琼脂12g蒸馏水 750ml
啤酒 250g
将上述配料加入水中，加热至沸，搅拌至完全溶解，趁热加入未脱气的啤酒，轻轻搅拌混合，用HCI或NaOH调pH为6.0+0.1，分装于三角瓶中，，121℃蒸汽灭菌20min。待冷却后，放置在36±℃培养24h小时备用。
17.7 乳酸杆菌培养基
UBA+ABP抑制剂溶液（UBA见前）
ABP抑制剂溶液
配料
放线菌酮 0.1g
溴甲酚绿 0.15g
无离子水 80ml
2-苯乙醇 20ml
配制
把溴甲酚绿放入50毫升水中，煮沸至完全溶解，把放线菌酮溶于30毫升水中，将两种溶液混合，分装于带螺旋盖的瓶中，每瓶20毫升，在121℃蒸汽灭菌10分钟，冷却后，每个瓶内加5毫升2-苯乙醇，并拧紧瓶盖。该溶液会分成两层，使用前须用力摇匀。
17.8 KOT培养基
配方
胰朊酶蛋白胨 5.0g
麦汁浸出生 2.5g
酵母浸出物 2.5g
肝浓缩物 1.0g
麦芽糖 5.0g
葡萄糖 5.0g
L-苹果酸 0.5g
吐温-80 1ml
K2HPO4 0.5g
MgSO4²7H2O 0.125g
MnSO4²5H2O 0.025g
盐酸半光氨酸 0.5g
胞苷 0.2g
胸苷 0.2g
啤酒 800ml
放线菌酮 100ml
NaN3 50mg
琼脂 20g
蒸馏水至 100ml
PH25.4
17.9 日本KL-2B培养基
配方：
胰蛋胨 20.0g
麦汁浸生物 10.0g
酵母浸出生 5.0g
麦芽糖 10.0g
K2HPO4 3.0g
MgSO4²7H2O 1.0g
MnSO4²5H2O 0.25g
柠檬酸 2.75g
吐温-80 100mg
NaN3 50mg
琼脂 20g
蒸馏水至 1000ml PH5.2
17.10 MRS麦芽糖琼脂培养基
没有一种单独的方法能够检测所有的乳酸细菌，这些细菌对各种糖的利用能力是有差别的，许多菌株能在好氧条件下在琼脂培养基上生长，而另一些菌株则更容易在厌氧条件下生长。
下面列出的培养基，能检测出许多种的乳酸细菌。但是，这些培养基不是绝对的，使用者可根据自己的经验进行修正后采用。
原理：液体样品培养在含有合适的不同种类琼脂培养基的培养皿中，计算活菌落数。
麦芽糖 5.0g
蛋白胨 10.0g
牛肉浸膏粉 8.0g
酵母浸出物 4.0g
葡萄糖 20.0g
吐温-80 1.0ml
K2HPO4 2.0g
醋酸钠 5.0g
柠檬酸铵 2.0g
MnSO4²5H2O 0.2g
MgSO4²7H2O 0.05g
琼脂 15g
在蒸馏水中溶解，并定容至1L。用1.0NHCl或0.1NNaOH调至4.7。蒸汽灭菌121℃，20分钟。 17.11 Ra-Ray培养基
NBB培养基是德国进行啤酒有害菌检查常用培养基，正如大家所知德国在有害菌研究领域处于领先地位，所以很多文献中提到使用NBB培养基有必要讲清楚。
NBB培养基是Prof.Back专门为检查啤酒有害菌而开发的。
NBB培养基分三种，NBB-A（琼脂型）、NBB-B（试液型）、NBB-C（浓缩型），最近又推出NBB-Am，是在NBB-A的基础上开发的。
NBB培养基是专利产品，由德国Doher公司制造销售。
NBB-A适用于刷洗水、啤酒为样品的细菌检查。
NBB-B适用于酵母（回收酵、培养酵母）的细菌检查。
NBB-C适用于有酵母的混浊啤酒（发酵液、未过滤啤酒）。
培养温度：25-28℃
培养时间：严重污染样品，1天可以检出。污染轻微或生长缓慢的菌5天左右。
培养条件：厌氧二氧化碳充气下。
注：虽然NBB有很高的检出率，但由于样品过滤或残有空气都可能使Pectinatus菌、Megashaera菌不能检出。
17.12 LMDA培养基
番茄汁固形物
蛋白胨 2%
泛酸钙 0.2%
酵母浸膏 1%
葡萄糖 1%
碳酸钙 0.5%
柠檬酸 0.11%
磷酸氢二钾 0.05%
磷酸二氢钾 0.05%
硫酸镁 0.02%
硫酸锰 0.001%
氯化钠 0.001%
硫酸铁 0.001%
溴甲酚红绿 0.0022%
吐温-80 0.05%
放线菌酮 0.0007%
琼脂 1.5%
配制
加水溶解，分装三角瓶，121℃蒸汽灭菌10分钟，冷却后，避光保存。
17.13 日本Pectinatus属菌检出培养基
配方：
蛋白胨 10.0g
麦芽浸出物 8.0g
酵母浸出物 4.0g
K2HPO4 2.0g
NaCl 5.0g
MgSO4²7H2O 0.2g
MnSO4²5H2O 0.05g
吐温-80 1ml
L-Cystine-HClCMonnhydrate 0.5g
Resazurin钠盐 1mg
Erythromycin 5mg
琼脂 20g
蒸馏水至 1000ml
PH6.0
17.14 麦汁液体培养基
取原麦汁（头滤麦汁），用单层滤纸过滤后，冷却至40℃以下。
过滤后的原麦汁800—1000ml中加一个蛋清，（加蛋清之前，往蛋清里加少许蒸馏水或麦汁充分搅匀，产沫为止，然后加入麦汁里）混匀。
加热煮沸（最好间接加热）20—30分钟，然后冷却至70℃左右后用双层滤纸过滤。
把过滤后的麦汁冷却至20℃后，测糖度，然后稀释至糖度为12°P。
调整PH值为5.4—5.7，然后分装（试管加6ml，小三角锥瓶加50ml，中三解瓶加200ml），用牛皮纸包扎。
在高压灭菌锅里110℃压力下，灭菌20分钟。
17.15 麦汁固体培养基
步骤同上
调整PH值为5.4—5.7后，加1.5—2.0%的琼脂粉，加热（最好间接加热）溶化琼脂，分装，包扎。 在高压灭菌锅里110℃下，灭菌20分钟，冷却至60℃左右后，摆斜面或倒平板。
17.16 WLN琼脂培养基
酵母浸膏 4.0g
干酷素酮 5.0g
葡萄糖 50.0g
磷酸二氢钾 0.55g
氯化钾 0.425 g
氯化钙 0.124g
氯化铁 0.0025g
硫酸镁 0.125g
硫酸锰 0.0025g
琼脂 20.0g
溴甲酚绿 0.022g
蒸馏水 1.0L
上述组分除琼脂外溶解于蒸馏水中，调整溶液PH为5.5，加琼脂，很好混合，加热，使琼脂溶解，高压斧121℃蒸汽灭菌不少于15min，冷却至40—45℃，分装于无菌培养皿中。
17.17 YPD培养基
配方：
酵母浸出物 10g
蛋白胨 20g
葡萄糖 20g
琼脂 20g
蒸馏水 1000ml
溶解后121℃灭菌15分钟，冷却，制成平皿固体培养基。
17.18 TTC琼脂培养基
溶液A：
三苯基四唑氯2.0g
磷酸缓冲液100.0ml
（磷酸缓冲液浓度为0.134mol/L，PH7.2）（无水NaH2PO41.26g，无水Na2HPO41.16g加水溶解至100ml）
溶液B：
琼脂20.0g
蒸馏水100.00ml
制备溶液A和B。制备溶液B时要加热使琼脂溶解。两溶液混合，冷却至45℃。
17.19 MYGP培养基
配方
酵母浸膏 3.0g
麦牙浸出物 3.0g
蛋白胨 5.0g
葡萄糖 10.0g
琼脂 15.0g
吐温-80 10ml
冷蒸馏水 1000ml
配制：
把配料放入水中，边搅拌边加热至沸，然后分装到带螺旋盖的瓶内，121℃蒸汽灭菌10分钟。
十七 常用培养基配方
17.1 营养琼脂培养基
成分
蛋白胨 10g
牛肉膏 3g
氯化钠 5g
琼脂 15~20g
蒸馏水 1000mL
制法：
将除琼脂以外的各成分溶解于蒸馏水内，加入15%氢氧化钠溶液约2ML，校正PH7.2—7.4，加入琼脂，加热煮沸，使琼脂溶化。分装在三角锥瓶中，在121℃下高压灭菌15分钟。 17.2 乳糖胆盐发酵管培养基（单料）
成分
蛋白胨 20g
猪胆盐 5g
乳糖 10g
0.04%溴甲酚紫水溶液 25mL
蒸馏水 1000ml
PH7.4
制法
将蛋白胨，胆盐及乳糖溶于水中，校正PH值，加入指示剂分装，每支管10ml，并放入一个小倒管（产气管），在115℃下高压灭菌15分钟。
注：双料乳糖胆盐发酵管培养基除蒸馏水外，其他成分加倍。
17.3 乳糖发酵管培养基（单料）
成分
蛋白胨 20g
乳糖 10g
0.04%溴甲酚紫水溶液 25ml
蒸馏水 1000ml
PH7.4
制法
将蛋白胨及乳糖溶于水中，校正PH，加入指示剂分装，每支管3ml，并放入一个小倒管（产生气），在115℃下高压灭菌15分钟。
注：双料乳糖发酵管培养基除蒸馏水外，其他成分加倍。
17.4 伊红美琼脂（EMB）培养基
成分
蛋白胨 10g
乳糖 10g
磷酸氢二钾 2g
琼脂 2g
2%伊红溶液 20ml
0.65%美兰溶液 10 ml
蒸馏水 1000ml
PH7.1
制法
将蛋白胨，磷酸盐和琼脂溶解于蒸馏水中，校正PH，分装于三角锥瓶内，在121℃下高压灭菌15分钟后备用。临用时加入乳糖并加热熔化琼脂，冷却至50—60℃，加入伊红和美蓝溶液摇匀，浇注平板。 17.5 远藤氏培养基
配方：
蛋白栋 10.0g
乳糖 10.0g
磷酸氯二钾 3.5g
亚硫酸氢钠 2.5g
碱性品红 0.4g
琼脂 10.0g
蒸馏水 100ml
制备：
配料放入蒸馏水中，搅拌15分钟，使其溶解，分装到三角瓶或试管，121℃灭菌20分钟， 冷却后贮于暗处，最佳温度为4—8℃以保持浅粉红色。
17.6 UBA培养基
酵母浸膏 6.1g
蛋白胨 15g
番茄汁（244ml） 12.2g
葡萄糖 16g
K2HPO4 0.31g
KH2PO4 03.1g
MgSO²7H2O 0.12g
NaCl 0.006g
FeSO4²7H2O 0.006g
MnSO4²H2O 0.006g
琼脂12g蒸馏水 750ml
啤酒 250g
将上述配料加入水中，加热至沸，搅拌至完全溶解，趁热加入未脱气的啤酒，轻轻搅拌混合，用HCI或NaOH调pH为6.0+0.1，分装于三角瓶中，，121℃蒸汽灭菌20min。待冷却后，放置在36±℃培养24h小时备用。
17.7 乳酸杆菌培养基
UBA+ABP抑制剂溶液（UBA见前）
ABP抑制剂溶液
配料
放线菌酮 0.1g
溴甲酚绿 0.15g
无离子水 80ml
2-苯乙醇 20ml
配制
把溴甲酚绿放入50毫升水中，煮沸至完全溶解，把放线菌酮溶于30毫升水中，将两种溶液混合，分装于带螺旋盖的瓶中，每瓶20毫升，在121℃蒸汽灭菌10分钟，冷却后，每个瓶内加5毫升2-苯乙醇，并拧紧瓶盖。该溶液会分成两层，使用前须用力摇匀。
17.8 KOT培养基
配方
胰朊酶蛋白胨 5.0g
麦汁浸出生 2.5g
酵母浸出物 2.5g
肝浓缩物 1.0g
麦芽糖 5.0g
葡萄糖 5.0g
L-苹果酸 0.5g
吐温-80 1ml
K2HPO4 0.5g
MgSO4²7H2O 0.125g
MnSO4²5H2O 0.025g
盐酸半光氨酸 0.5g
胞苷 0.2g
胸苷 0.2g
啤酒 800ml
放线菌酮 100ml
NaN3 50mg
琼脂 20g
蒸馏水至 100ml
PH25.4
17.9 日本KL-2B培养基
配方：
胰蛋胨 20.0g
麦汁浸生物 10.0g
酵母浸出生 5.0g
麦芽糖 10.0g
K2HPO4 3.0g
MgSO4²7H2O 1.0g
MnSO4²5H2O 0.25g
柠檬酸 2.75g
吐温-80 100mg
NaN3 50mg
琼脂 20g
蒸馏水至 1000ml PH5.2
17.10 MRS麦芽糖琼脂培养基
没有一种单独的方法能够检测所有的乳酸细菌，这些细菌对各种糖的利用能力是有差别的，许多菌株能在好氧条件下在琼脂培养基上生长，而另一些菌株则更容易在厌氧条件下生长。
下面列出的培养基，能检测出许多种的乳酸细菌。但是，这些培养基不是绝对的，使用者可根据自己的经验进行修正后采用。
原理：液体样品培养在含有合适的不同种类琼脂培养基的培养皿中，计算活菌落数。
麦芽糖 5.0g
蛋白胨 10.0g
牛肉浸膏粉 8.0g
酵母浸出物 4.0g
葡萄糖 20.0g
吐温-80 1.0ml
K2HPO4 2.0g
醋酸钠 5.0g
柠檬酸铵 2.0g
MnSO4²5H2O 0.2g
MgSO4²7H2O 0.05g
琼脂 15g
在蒸馏水中溶解，并定容至1L。用1.0NHCl或0.1NNaOH调至4.7。蒸汽灭菌121℃，20分钟。 17.11 Ra-Ray培养基
NBB培养基是德国进行啤酒有害菌检查常用培养基，正如大家所知德国在有害菌研究领域处于领先地位，所以很多文献中提到使用NBB培养基有必要讲清楚。
NBB培养基是Prof.Back专门为检查啤酒有害菌而开发的。
NBB培养基分三种，NBB-A（琼脂型）、NBB-B（试液型）、NBB-C（浓缩型），最近又推出NBB-Am，是在NBB-A的基础上开发的。
NBB培养基是专利产品，由德国Doher公司制造销售。
NBB-A适用于刷洗水、啤酒为样品的细菌检查。
NBB-B适用于酵母（回收酵、培养酵母）的细菌检查。
NBB-C适用于有酵母的混浊啤酒（发酵液、未过滤啤酒）。
培养温度：25-28℃
培养时间：严重污染样品，1天可以检出。污染轻微或生长缓慢的菌5天左右。
培养条件：厌氧二氧化碳充气下。
注：虽然NBB有很高的检出率，但由于样品过滤或残有空气都可能使Pectinatus菌、Megashaera菌不能检出。
17.12 LMDA培养基
番茄汁固形物
蛋白胨 2%
泛酸钙 0.2%
酵母浸膏 1%
葡萄糖 1%
碳酸钙 0.5%
柠檬酸 0.11%
磷酸氢二钾 0.05%
磷酸二氢钾 0.05%
硫酸镁 0.02%
硫酸锰 0.001%
氯化钠 0.001%
硫酸铁 0.001%
溴甲酚红绿 0.0022%
吐温-80 0.05%
放线菌酮 0.0007%
琼脂 1.5%
配制
加水溶解，分装三角瓶，121℃蒸汽灭菌10分钟，冷却后，避光保存。
17.13 日本Pectinatus属菌检出培养基
配方：
蛋白胨 10.0g
麦芽浸出物 8.0g
酵母浸出物 4.0g
K2HPO4 2.0g
NaCl 5.0g
MgSO4²7H2O 0.2g
MnSO4²5H2O 0.05g
吐温-80 1ml
L-Cystine-HClCMonnhydrate 0.5g
Resazurin钠盐 1mg
Erythromycin 5mg
琼脂 20g
蒸馏水至 1000ml
PH6.0
17.14 麦汁液体培养基
取原麦汁（头滤麦汁），用单层滤纸过滤后，冷却至40℃以下。
过滤后的原麦汁800—1000ml中加一个蛋清，（加蛋清之前，往蛋清里加少许蒸馏水或麦汁充分搅匀，产沫为止，然后加入麦汁里）混匀。
加热煮沸（最好间接加热）20—30分钟，然后冷却至70℃左右后用双层滤纸过滤。
把过滤后的麦汁冷却至20℃后，测糖度，然后稀释至糖度为12°P。
调整PH值为5.4—5.7，然后分装（试管加6ml，小三角锥瓶加50ml，中三解瓶加200ml），用牛皮纸包扎。
在高压灭菌锅里110℃压力下，灭菌20分钟。
17.15 麦汁固体培养基
步骤同上
调整PH值为5.4—5.7后，加1.5—2.0%的琼脂粉，加热（最好间接加热）溶化琼脂，分装，包扎。 在高压灭菌锅里110℃下，灭菌20分钟，冷却至60℃左右后，摆斜面或倒平板。
17.16 WLN琼脂培养基
酵母浸膏 4.0g
干酷素酮 5.0g
葡萄糖 50.0g
磷酸二氢钾 0.55g
氯化钾 0.425 g
氯化钙 0.124g
氯化铁 0.0025g
硫酸镁 0.125g
硫酸锰 0.0025g
琼脂 20.0g
溴甲酚绿 0.022g
蒸馏水 1.0L
上述组分除琼脂外溶解于蒸馏水中，调整溶液PH为5.5，加琼脂，很好混合，加热，使琼脂溶解，高压斧121℃蒸汽灭菌不少于15min，冷却至40—45℃，分装于无菌培养皿中。
17.17 YPD培养基
配方：
酵母浸出物 10g
蛋白胨 20g
葡萄糖 20g
琼脂 20g
蒸馏水 1000ml
溶解后121℃灭菌15分钟，冷却，制成平皿固体培养基。
17.18 TTC琼脂培养基
溶液A：
三苯基四唑氯2.0g
磷酸缓冲液100.0ml
（磷酸缓冲液浓度为0.134mol/L，PH7.2）（无水NaH2PO41.26g，无水Na2HPO41.16g加水溶解至100ml）
溶液B：
琼脂20.0g
蒸馏水100.00ml
制备溶液A和B。制备溶液B时要加热使琼脂溶解。两溶液混合，冷却至45℃。
17.19 MYGP培养基
配方
酵母浸膏 3.0g
麦牙浸出物 3.0g
蛋白胨 5.0g
葡萄糖 10.0g
琼脂 15.0g
吐温-80 10ml
冷蒸馏水 1000ml
配制：
把配料放入水中，边搅拌边加热至沸，然后分装到带螺旋盖的瓶内，121℃蒸汽灭菌10分钟。