植物组织可溶性糖及淀粉测定(蒽酮法)
一、材料、仪器设备及试剂
1. 材料
新鲜或烘干的植物叶片
2. 仪器设备
分光光度计、水浴锅、刻度试管、刻度吸管。
3.试剂
蒽酮乙酸乙酯试剂:取分析纯蒽酮1g,溶于50ml乙酸乙酯中,贮于棕色瓶中,在黑暗中可保存数周,如有结晶析出,可微热溶解;
9.2mol/L HCIO
浓硫酸(相对密度1.84);
l%蔗糖标准液:将分析纯蔗糖在80℃下烘至恒重,精确称取1.000g。加少量水溶解移入100ml容量瓶中,加入0.5ml浓硫酸,用蒸馏水定容至刻度;
100μg蔗糖标准液:精确吸取1%蔗糖标准液1ml加入100ml容量瓶中,加水定容。 淀粉标准溶液:准确称取100mg纯淀粉,放入100ml容量瓶中,加60-70ml热蒸馏水,放入沸水浴中煮沸,冷却后加蒸馏水稀释至刻度,则每ml含淀粉1mg,吸取此液5.0ml,加蒸馏水稀释至50ml,却为每ml含淀粉100 g的标准液。
二、实验步骤
1. 标准曲线的制作
取20ml刻度试管11支,从0~10分别编号,按表加人溶液和水,然后按顺序向试管内加入0.5ml蒽酮乙酸乙酯试剂和5ml浓硫酸,充分振荡,,立即将试管放入沸水浴中,逐管准确保温1min,取出后自然冷却至室温,以空白为对照,在630nm波长下测其吸光度。比色液总体积为8ml.以糖含量为横坐标;光密度为纵坐标,绘制标准曲线,求出标准直线方程。
表
试剂 管号
0 1,2
0.2
20 2.0 1.8 0 3,4 0.4 12.6 40 5,6 0.6 1.4 60 7,8 0.8 1.2 80 9,10 1.0 1.0 100 100μg·L-1蔗糖液/ml 0 水/ ml 蔗糖量/μg
2.可溶性糖的提取新鲜植物叶片或干材料,擦净表面污物,剪碎混匀,称取0.10~0.30g ,共3份,分别放入3支刻度试管中,加人5-10ml蒸馏水,塑料薄膜封口,于沸水中提取30min(提取2次),提取液过滤入25ml容量瓶中,反复冲洗试管及残渣,定容至20ml。
3.显色测定:吸取样品提取液0.5ml于20ml刻度试管中,加蒸馏水1.5ml,然后向试管内加入0.5ml蒽酮乙酸乙酯试剂和5ml浓硫酸,充分振荡,立即将试管放入沸水浴中,准确保温1min,取出后自然冷却至室温,以空白为对照,在630nm波长下测其吸光度。 可溶%)=(C*V/a*n)/(W*106)
式中C:标准方程求得糖量(g)
a:吸取样品液体积(ml);
V:提取液量hal);
n:稀释倍数;
W:组织重量(g)。
附注:该法的特点是几乎可以测定所有的碳水化合物,不但可以测定戊糖与已糖,而且可以测所有寡糖类和多糖类,其中包括淀粉、纤维素等,所以用蒽酮法测出的碳水化合物含量,实际上是溶液中全部可溶性碳水化合物总量。在没有必要细致划分各种碳水化合物的精况下,用惠酮法可以一次测出总量。但在测定水溶性碳水化合物时,则应注意切勿将样品的未溶解残渣加人反应液中,不然会因为细胞壁中的纤维素、半纤维素等与蒽酮试剂发生反应而增加了测定误差。
淀粉测定
植物组织可溶性糖及淀粉测定(蒽酮法)
一、材料、仪器设备及试剂
1. 材料
新鲜或烘干的植物叶片
2. 仪器设备
分光光度计、水浴锅、刻度试管、刻度吸管。
3.试剂
蒽酮乙酸乙酯试剂:取分析纯蒽酮1g,溶于50ml乙酸乙酯中,贮于棕色瓶中,在黑暗中可保存数周,如有结晶析出,可微热溶解;
9.2mol/L HCIO
浓硫酸(相对密度1.84);
l%蔗糖标准液:将分析纯蔗糖在80℃下烘至恒重,精确称取1.000g。加少量水溶解移入100ml容量瓶中,加入0.5ml浓硫酸,用蒸馏水定容至刻度;
100μg蔗糖标准液:精确吸取1%蔗糖标准液1ml加入100ml容量瓶中,加水定容。 淀粉标准溶液:准确称取100mg纯淀粉,放入100ml容量瓶中,加60-70ml热蒸馏水,放入沸水浴中煮沸,冷却后加蒸馏水稀释至刻度,则每ml含淀粉1mg,吸取此液5.0ml,加蒸馏水稀释至50ml,却为每ml含淀粉100 g的标准液。
二、实验步骤
1. 标准曲线的制作
取20ml刻度试管11支,从0~10分别编号,按表加人溶液和水,然后按顺序向试管内加入0.5ml蒽酮乙酸乙酯试剂和5ml浓硫酸,充分振荡,,立即将试管放入沸水浴中,逐管准确保温1min,取出后自然冷却至室温,以空白为对照,在630nm波长下测其吸光度。比色液总体积为8ml.以糖含量为横坐标;光密度为纵坐标,绘制标准曲线,求出标准直线方程。
表
试剂 管号
0 1,2
0.2
20 2.0 1.8 0 3,4 0.4 12.6 40 5,6 0.6 1.4 60 7,8 0.8 1.2 80 9,10 1.0 1.0 100 100μg·L-1蔗糖液/ml 0 水/ ml 蔗糖量/μg
2.可溶性糖的提取新鲜植物叶片或干材料,擦净表面污物,剪碎混匀,称取0.10~0.30g ,共3份,分别放入3支刻度试管中,加人5-10ml蒸馏水,塑料薄膜封口,于沸水中提取30min(提取2次),提取液过滤入25ml容量瓶中,反复冲洗试管及残渣,定容至20ml。
3.显色测定:吸取样品提取液0.5ml于20ml刻度试管中,加蒸馏水1.5ml,然后向试管内加入0.5ml蒽酮乙酸乙酯试剂和5ml浓硫酸,充分振荡,立即将试管放入沸水浴中,准确保温1min,取出后自然冷却至室温,以空白为对照,在630nm波长下测其吸光度。 可溶%)=(C*V/a*n)/(W*106)
式中C:标准方程求得糖量(g)
a:吸取样品液体积(ml);
V:提取液量hal);
n:稀释倍数;
W:组织重量(g)。
附注:该法的特点是几乎可以测定所有的碳水化合物,不但可以测定戊糖与已糖,而且可以测所有寡糖类和多糖类,其中包括淀粉、纤维素等,所以用蒽酮法测出的碳水化合物含量,实际上是溶液中全部可溶性碳水化合物总量。在没有必要细致划分各种碳水化合物的精况下,用惠酮法可以一次测出总量。但在测定水溶性碳水化合物时,则应注意切勿将样品的未溶解残渣加人反应液中,不然会因为细胞壁中的纤维素、半纤维素等与蒽酮试剂发生反应而增加了测定误差。
淀粉测定