实验五 液泡系的超活染色与观察
实验目的
一、观察动、植物活细胞内液泡系的形态、数量与分布。
二、学习液泡系的超活染色技术。
实验原理
中性红为弱碱性染料，对液泡系(即高尔基体) 的染色有专一性，只将活细胞中的液泡系染成红色，细胞核与细胞质完全不着色，这可能是与液泡中某些蛋白质有关。
实验用品
一、器材
显微镜、恒温水浴锅、解剖盘、剪刀、镊子、双面刀片、解剖盘．载玻片、凹面载玻片、盖玻片、表面皿、吸管、牙签、吸水纸。
二、试剂
1．Ringer 溶液：
氯化钠 0.65g ；氯化钾 0.25g ；氯化钙 0.03g ；蒸馏水 100 ml
2. 1%、1/3000中性红溶液
称取0.5g 中性红溶于50ml Ringer 溶液，稍加热（30~40 ºC ）使之很快溶解，用滤纸过滤，装入棕色瓶于暗处保存，否则易氧化沉淀，失去染色能力。（即为1%中性红原液）
临用前，取已配置的1%中性红溶液1ml ，加入29ml Ringer溶液混匀，装入棕色瓶备用。
三、材料
青蛙（或蟾蜍）胸骨剑突软骨、绿豆根尖
实验方法
一、青蛙胸骨剑突软骨细胞的液泡系中性红染色观察
软骨细胞能分泌软骨粘蛋白和胶原纤维等，因而粗面内质网和高尔基体都发达，用中性红超活染色后，可明显地显示出液泡系。
1．将青蛙处死，剪取胸骨剑突最薄的部分一小块，放入载玻片上的1/3000中性红染液滴中，染色8~10min。
2．用吸管吸去染液，滴加Ringer 液，盖上盖玻片进行观察。
3．在高倍镜下，可见软骨细胞为椭圆形，细胞核及核仁清楚易见，在细胞核的上方胞质中，有许多被染成玫瑰红色大小不一的泡状体，这一特定区域叫“高尔基区”，即液泡系。
二、绿豆根尖细胞液泡系的中性红染色观察
1．实验前，把绿豆种子培养在培养皿内潮湿的滤纸上，使其发芽，胚根长到1cm 以上。
2．用双面刀片把初生的绿豆根尖（约1~2cm长）小心切一纵切面，放入载玻片上的1/3000中性红染液滴中，染色8~10min。
3．吸去染液，滴一滴Ringer 液，盖上盖玻片，并用镊子轻轻地下压盖玻片，使根尖压扁，利于观察。
4．在高倍镜下，先观察根尖部分的生长点的细胞，可见细胞质中散在很多大小不等的染成玫瑰红色的圆形小炮，这是初生的幼小液泡。然后，由生长点向延长区观察，在一些已分化生长的细胞内，液泡的染色较浅，体积增大，数目变少。在成熟区细胞中，一般只有一个淡红色的巨大液泡，占据细胞的绝大部分，将细胞核挤到细胞一侧贴近细胞壁处。
从以上的观察结果，想想植物细胞液泡系的形态演进情况。
作业
1．绘青蛙胸骨剑突软骨细胞示液泡系的形态与分布
2．高等动物和高等植物细胞中的液泡系(高尔基体) 分布上有何不同?
实验五 液泡系的超活染色与观察
实验目的
一、观察动、植物活细胞内液泡系的形态、数量与分布。
二、学习液泡系的超活染色技术。
实验原理
中性红为弱碱性染料，对液泡系(即高尔基体) 的染色有专一性，只将活细胞中的液泡系染成红色，细胞核与细胞质完全不着色，这可能是与液泡中某些蛋白质有关。
实验用品
一、器材
显微镜、恒温水浴锅、解剖盘、剪刀、镊子、双面刀片、解剖盘．载玻片、凹面载玻片、盖玻片、表面皿、吸管、牙签、吸水纸。
二、试剂
1．Ringer 溶液：
氯化钠 0.65g ；氯化钾 0.25g ；氯化钙 0.03g ；蒸馏水 100 ml
2. 1%、1/3000中性红溶液
称取0.5g 中性红溶于50ml Ringer 溶液，稍加热（30~40 ºC ）使之很快溶解，用滤纸过滤，装入棕色瓶于暗处保存，否则易氧化沉淀，失去染色能力。（即为1%中性红原液）
临用前，取已配置的1%中性红溶液1ml ，加入29ml Ringer溶液混匀，装入棕色瓶备用。
三、材料
青蛙（或蟾蜍）胸骨剑突软骨、绿豆根尖
实验方法
一、青蛙胸骨剑突软骨细胞的液泡系中性红染色观察
软骨细胞能分泌软骨粘蛋白和胶原纤维等，因而粗面内质网和高尔基体都发达，用中性红超活染色后，可明显地显示出液泡系。
1．将青蛙处死，剪取胸骨剑突最薄的部分一小块，放入载玻片上的1/3000中性红染液滴中，染色8~10min。
2．用吸管吸去染液，滴加Ringer 液，盖上盖玻片进行观察。
3．在高倍镜下，可见软骨细胞为椭圆形，细胞核及核仁清楚易见，在细胞核的上方胞质中，有许多被染成玫瑰红色大小不一的泡状体，这一特定区域叫“高尔基区”，即液泡系。
二、绿豆根尖细胞液泡系的中性红染色观察
1．实验前，把绿豆种子培养在培养皿内潮湿的滤纸上，使其发芽，胚根长到1cm 以上。
2．用双面刀片把初生的绿豆根尖（约1~2cm长）小心切一纵切面，放入载玻片上的1/3000中性红染液滴中，染色8~10min。
3．吸去染液，滴一滴Ringer 液，盖上盖玻片，并用镊子轻轻地下压盖玻片，使根尖压扁，利于观察。
4．在高倍镜下，先观察根尖部分的生长点的细胞，可见细胞质中散在很多大小不等的染成玫瑰红色的圆形小炮，这是初生的幼小液泡。然后，由生长点向延长区观察，在一些已分化生长的细胞内，液泡的染色较浅，体积增大，数目变少。在成熟区细胞中，一般只有一个淡红色的巨大液泡，占据细胞的绝大部分，将细胞核挤到细胞一侧贴近细胞壁处。
从以上的观察结果，想想植物细胞液泡系的形态演进情况。
作业
1．绘青蛙胸骨剑突软骨细胞示液泡系的形态与分布
2．高等动物和高等植物细胞中的液泡系(高尔基体) 分布上有何不同?