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CHINA TROPICAL M EDICINE Vol.9No.5M ay 2009中国热带医学2009年第9卷第5期
［卫生学］
椰子多肽提取工艺研究
Technology in extraction of coconut polypeptide. WU Zeng-li ，WU Jia-qiang ，WANG Qiong-yao. （1. Hainan Yetai Bioengineering C. Ltd. ，Haikou 572100，Hainan ，P. R. China ）
伍曾利1，吴家强1，王琼瑶2
摘要：目的
探讨椰子多肽提取液的分离提取方法，找出椰子多肽提取液最佳的提取方法。方法
取椰肉，进行
双酶水解，分离出清液，清液进行吸附分离纯化，再用滤膜进行超滤，即得椰子提取物浓缩液。结果椰子多肽提取液
最佳提取参数为：酶解温度为45℃、胃蛋白酶的酶解时间为8h 、胰酶的酶解时间为3h ，胃蛋白酶的酶解pH 值为1.5～1.7，胰酶的酶解pH 值为7.5～7.7，两种酶的用量都为椰肉重量的1.5%，料液比1：10，提取所得的椰子多肽提取液经测定其多肽含量为15.8mg/mL。结论试验结果表明，椰子多肽的分离提取工艺是可行的。
关键词：椰子；分离提取；椰子多肽中图分类号：R151.3
文献标识码：B
文章编号：1009-9727（2009）5-958-02
至500mL ；牛血清白蛋白对照品溶液：取牛血清白蛋白对照品15.4mg ，加水溶解并定容至50mL ，得浓度为0.308mg/mL；供试品溶液的配制：分别取样品溶液1.0mL ，加水稀释并定容至100mL ，得多肽含量大约为0.15mg/mL的供试品溶液，待测。
标准曲线的制备：精密移取对照液0.0mL ，0.1mL ，0.3mL ，0.5mL ，0.7mL ，0.9mL ，分别置于试管中，各加水至1.0mL ，再分别加入碱性铜液1.0mL ，摇匀后各加入福林酚试剂4.0mL ，立即混匀，置55℃水浴中准确反应5min 后于冷水浴中10min ，然后在650nm 波长处测定吸收值，同时以0号管作为空白。
样品的测定：精密量取供试品溶液1.0mL ，照标准曲线的制备方法，自“加入碱性铜试液”起，至“在650nm 波长处测定吸收值”止。
根据对照品溶液含量及吸收值，可得一直线方程Y=aX+b，其中相关系数为R 。1.3.2
椰子多肽提取液的提取工艺
取椰肉和椰子水，加热椰
子水将椰肉磨碎成浆。加入纯净水，加热至80℃10min 。降温至45℃，用盐酸调pH 至1.5～1.7，加入椰肉重量的1.5%胃蛋白酶酶解；用氢氧化钠调pH 至7.5～7.7，加入椰肉重量的1.5%胰酶酶解，酶解结束后加热至100℃、10min 灭活，降温至室温。用盐酸调pH 至2.8～3.0，过滤，收集滤过液，4℃静置过夜；用油水分。用氢氧化离型高速管式离心机除去油脂，收集重液相（水相）钠将水相调pH 至6.0～7.0，过滤，收集滤出液。用水将羟基磷灰石调成糊状，装柱，装柱后用酸性磷酸盐缓冲液清洗，再用酸性磷酸盐缓冲液平衡，将上述滤出液上羟基磷灰石层析柱进行吸附，用酸性磷酸盐缓冲液洗脱；收集目标物，用滤膜进行超滤，收集滤出液，即得椰子提取物浓缩液。
盐酸（AR ），氢氧化钠（AR ），胃蛋白酶，胰
全世界椰子栽培面积达1100万m 2，年产椰子约536亿个[1]。椰子全身是宝，椰汁、椰肉不仅味道甘美，还有一定的药用价值，就连椰油、椰子壳也可入药。椰子水对增强肾脏血液循环和利尿均有良好的作用，临床上可用于辅助治疗肝炎和肠胃炎：微生物学上可作为微生物培养基；在食品工业上可利用研制多种食品，如椰果、椰子酒、椰子水饮料等[2]。
椰肉颜色洁白，其成分为：脂肪35%～40%，水分40%～50%，碳水化合物5%～10%，蛋白质5%，粗纤维2%～4%，灰分1%～1.5%，少量V B1、V A 、V C 、V E [3]。椰肉性味甘平、无毒，可补虚益壮，和气去风，清疳杀虫：常食椰肉，有悦色泽肤之功用。
根据椰子水和椰肉的特点及工艺开发的可行度条件，我们从多肽方面入手，开发一种更易被人体吸收、效果更明显的小分子多肽，把椰子的营养成分提升到一个更高的层次，提升椰子的附加值。
1材料与方法1.11.2
材料椰肉，购于市场。试剂与仪器
酶，苯酚(AR)，硫酸（AR ），葡萄糖（AR ）。高速冷冻离心机（湘仪离心机仪器有限公司）；循环水式真空泵（巩义市子华仪器责任有限公司）；水浴锅（江苏省金坛市荣华仪器制造有限公司）；万分之一分析天平（天津市天巴仪器仪表有限公司）；分光光度计UV ，755B （上海分析仪器厂）；真空干燥箱（北京中兴伟业仪器。有限公司）1.31.3.1
椰子多肽提取液的提取方法
椰子多肽含量测定（福林酚法）试剂的配制：碱性铜试
液：取氢氧化钠10.0g ，碳酸钠50.0g ，加水400mL 溶解作为甲液；取酒石酸钾0.50g ，加水50mL 溶解，另取硫酸铜0.25g ，加水30mL 溶解，混合后作为乙液，临用前将甲，乙两液混合并加水
2试验结果2.1
提取过程中不同加水量及酶解温度对椰子多肽提取液得
在提取过程中对于加水量和酶解温度对椰子多肽
率的影响
*基金项目：2007年国家科技支撑计划项目，项目编号为：2007BAD76B00作者单位：1. 海南耶肽生物工程有限公司，海南海口
572100；2. 海南省工业研究所，海南海口
570203
中国热带医学2009年第9卷第5期CHINA TROPICAL M EDICINE Vol.9No.5M ay 2009
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提取液总体积和多肽含量的影响进行考察，找出最佳的加水量和酶解温度，加入量选择加入8、10、12倍量的水、酶解温度选45℃、50℃进行试验。择40℃、
表3胰酶在不同条件下对椰子多肽提取液得率的影响
表1不同加水量及酶解温度对椰子多肽提取液得率的影响
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从表3中可以看出胰酶加入量为1.5%是最适合加入量、最适pH 值就是7.5～7.7、胰酶的最适酶解时间为3h ，其它条件都或多或少的影响到得率和成本。2.4
对于过羟基磷灰石层析柱和超滤对椰子多肽提取液多肽
为了达到分离纯化椰子多肽提取液而除掉其
分子量的影响
从表1中可以看出每次加10倍量水最适合、45℃的酶解温度最适合，其它加水量和温度条件下的椰子多肽提取液的得率大大的降低或成本偏高。2.2
提取过程中胃蛋白酶在不同条件下对椰子多肽提取液得
在胃蛋白酶的酶解过程中椰子多肽提取液得率受
率的影响
他杂质，进行过柱试验，过羟基磷灰石层析柱能使椰子多肽提取液的多肽分子量更小更集中，过羟基磷灰石层析柱和不过羟基磷灰石层析柱对椰子多肽提取液多肽分子量的影响如表4。
到酶解时间、胃蛋白酶的加入量和pH 值的影响。试验选择的胃蛋白酶加入量为1.0%、1.5%、2.0%，酶解pH 值选择1.0～1.2、1.5～1.7、2.0～2.2进行试验，酶解时间选择7.5、8.0、8.5h 进行试验。
表4过与不过羟基灰石层析柱对椰子多肽提取液多肽分子量的影响
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表2胃蛋白酶在不同条件下对椰子多肽提取液得率的影响
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用HPLC 法测定椰子多肽的分子量，测得椰子多肽提取液多肽分子量为3673。用5000的超滤膜超滤，不会对椰子多肽的分子量产生很大的影响。
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3结论
从上面的试验结果可以得出椰子多肽提取液最佳提取参数为：酶解温度为45℃、胃蛋白酶的酶解时间为8h 、胰酶的酶胃蛋白酶的酶解pH 值为1.5～1.7，胰酶的酶解pH 解时间为3h ，
值为7.5～7.7，两种酶的用量都为椰肉重量的1.5%，料液比1：10。
通过对椰子多肽提取工艺的研究，可以解决目前椰子产品生产方法存在的生产工序繁琐、生产效率低、生产成本高、品种单一、需加大量添加剂等的问题，椰子多肽提取含有各种小分子多肽、氨基酸、纤维素、小分子多糖、微量元素等活性物质，其营养丰富、附加值高。
从表2中可以看出胃蛋白酶加入量为1.5%是最适合加入量、最适pH 值就是1.5～1.7、最适酶解时间为8h ，其它条件都或多或少的影响到得率和成本。2.3影响
提取过程中胰酶在不同条件下对椰子多肽提取液得率的胰酶在酶解过程中不仅受到时间、酶的加入量的影响，
试验选择的胰酶加入量为1.0%、1.5%、同时受到pH 值的影响。
2.0%，试验选择的酶解pH 值为7.5～7.7、8.0～8.2、8.5～8.7，酶解时间选择2.5、3.0、3.5h 进行试验。
参考文献：
［1］唐仕华. 1996年世界椰子种植面积、产量［J ］. 世界热带农业信息，
2001（1）：24.
［2］刘敏. 椰子水营养成分的分析［J ］. 云南热作科技，2001，24（4）：38～40. ［3］李秀娟，李小慧. 新鲜椰子的综合加工［J ］. 食品科技，1999（1）：47～49.
收稿日期：2009－02－05
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［卫生学］
椰子多肽提取工艺研究
Technology in extraction of coconut polypeptide. WU Zeng-li ，WU Jia-qiang ，WANG Qiong-yao. （1. Hainan Yetai Bioengineering C. Ltd. ，Haikou 572100，Hainan ，P. R. China ）
伍曾利1，吴家强1，王琼瑶2
摘要：目的
探讨椰子多肽提取液的分离提取方法，找出椰子多肽提取液最佳的提取方法。方法
取椰肉，进行
双酶水解，分离出清液，清液进行吸附分离纯化，再用滤膜进行超滤，即得椰子提取物浓缩液。结果椰子多肽提取液
最佳提取参数为：酶解温度为45℃、胃蛋白酶的酶解时间为8h 、胰酶的酶解时间为3h ，胃蛋白酶的酶解pH 值为1.5～1.7，胰酶的酶解pH 值为7.5～7.7，两种酶的用量都为椰肉重量的1.5%，料液比1：10，提取所得的椰子多肽提取液经测定其多肽含量为15.8mg/mL。结论试验结果表明，椰子多肽的分离提取工艺是可行的。
关键词：椰子；分离提取；椰子多肽中图分类号：R151.3
文献标识码：B
文章编号：1009-9727（2009）5-958-02
至500mL ；牛血清白蛋白对照品溶液：取牛血清白蛋白对照品15.4mg ，加水溶解并定容至50mL ，得浓度为0.308mg/mL；供试品溶液的配制：分别取样品溶液1.0mL ，加水稀释并定容至100mL ，得多肽含量大约为0.15mg/mL的供试品溶液，待测。
标准曲线的制备：精密移取对照液0.0mL ，0.1mL ，0.3mL ，0.5mL ，0.7mL ，0.9mL ，分别置于试管中，各加水至1.0mL ，再分别加入碱性铜液1.0mL ，摇匀后各加入福林酚试剂4.0mL ，立即混匀，置55℃水浴中准确反应5min 后于冷水浴中10min ，然后在650nm 波长处测定吸收值，同时以0号管作为空白。
样品的测定：精密量取供试品溶液1.0mL ，照标准曲线的制备方法，自“加入碱性铜试液”起，至“在650nm 波长处测定吸收值”止。
根据对照品溶液含量及吸收值，可得一直线方程Y=aX+b，其中相关系数为R 。1.3.2
椰子多肽提取液的提取工艺
取椰肉和椰子水，加热椰
子水将椰肉磨碎成浆。加入纯净水，加热至80℃10min 。降温至45℃，用盐酸调pH 至1.5～1.7，加入椰肉重量的1.5%胃蛋白酶酶解；用氢氧化钠调pH 至7.5～7.7，加入椰肉重量的1.5%胰酶酶解，酶解结束后加热至100℃、10min 灭活，降温至室温。用盐酸调pH 至2.8～3.0，过滤，收集滤过液，4℃静置过夜；用油水分。用氢氧化离型高速管式离心机除去油脂，收集重液相（水相）钠将水相调pH 至6.0～7.0，过滤，收集滤出液。用水将羟基磷灰石调成糊状，装柱，装柱后用酸性磷酸盐缓冲液清洗，再用酸性磷酸盐缓冲液平衡，将上述滤出液上羟基磷灰石层析柱进行吸附，用酸性磷酸盐缓冲液洗脱；收集目标物，用滤膜进行超滤，收集滤出液，即得椰子提取物浓缩液。
盐酸（AR ），氢氧化钠（AR ），胃蛋白酶，胰
全世界椰子栽培面积达1100万m 2，年产椰子约536亿个[1]。椰子全身是宝，椰汁、椰肉不仅味道甘美，还有一定的药用价值，就连椰油、椰子壳也可入药。椰子水对增强肾脏血液循环和利尿均有良好的作用，临床上可用于辅助治疗肝炎和肠胃炎：微生物学上可作为微生物培养基；在食品工业上可利用研制多种食品，如椰果、椰子酒、椰子水饮料等[2]。
椰肉颜色洁白，其成分为：脂肪35%～40%，水分40%～50%，碳水化合物5%～10%，蛋白质5%，粗纤维2%～4%，灰分1%～1.5%，少量V B1、V A 、V C 、V E [3]。椰肉性味甘平、无毒，可补虚益壮，和气去风，清疳杀虫：常食椰肉，有悦色泽肤之功用。
根据椰子水和椰肉的特点及工艺开发的可行度条件，我们从多肽方面入手，开发一种更易被人体吸收、效果更明显的小分子多肽，把椰子的营养成分提升到一个更高的层次，提升椰子的附加值。
1材料与方法1.11.2
材料椰肉，购于市场。试剂与仪器
酶，苯酚(AR)，硫酸（AR ），葡萄糖（AR ）。高速冷冻离心机（湘仪离心机仪器有限公司）；循环水式真空泵（巩义市子华仪器责任有限公司）；水浴锅（江苏省金坛市荣华仪器制造有限公司）；万分之一分析天平（天津市天巴仪器仪表有限公司）；分光光度计UV ，755B （上海分析仪器厂）；真空干燥箱（北京中兴伟业仪器。有限公司）1.31.3.1
椰子多肽提取液的提取方法
椰子多肽含量测定（福林酚法）试剂的配制：碱性铜试
液：取氢氧化钠10.0g ，碳酸钠50.0g ，加水400mL 溶解作为甲液；取酒石酸钾0.50g ，加水50mL 溶解，另取硫酸铜0.25g ，加水30mL 溶解，混合后作为乙液，临用前将甲，乙两液混合并加水
2试验结果2.1
提取过程中不同加水量及酶解温度对椰子多肽提取液得
在提取过程中对于加水量和酶解温度对椰子多肽
率的影响
*基金项目：2007年国家科技支撑计划项目，项目编号为：2007BAD76B00作者单位：1. 海南耶肽生物工程有限公司，海南海口
572100；2. 海南省工业研究所，海南海口
570203
中国热带医学2009年第9卷第5期CHINA TROPICAL M EDICINE Vol.9No.5M ay 2009
959
提取液总体积和多肽含量的影响进行考察，找出最佳的加水量和酶解温度，加入量选择加入8、10、12倍量的水、酶解温度选45℃、50℃进行试验。择40℃、
表3胰酶在不同条件下对椰子多肽提取液得率的影响
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对于过羟基磷灰石层析柱和超滤对椰子多肽提取液多肽
为了达到分离纯化椰子多肽提取液而除掉其
分子量的影响
从表1中可以看出每次加10倍量水最适合、45℃的酶解温度最适合，其它加水量和温度条件下的椰子多肽提取液的得率大大的降低或成本偏高。2.2
提取过程中胃蛋白酶在不同条件下对椰子多肽提取液得
在胃蛋白酶的酶解过程中椰子多肽提取液得率受
率的影响
他杂质，进行过柱试验，过羟基磷灰石层析柱能使椰子多肽提取液的多肽分子量更小更集中，过羟基磷灰石层析柱和不过羟基磷灰石层析柱对椰子多肽提取液多肽分子量的影响如表4。
到酶解时间、胃蛋白酶的加入量和pH 值的影响。试验选择的胃蛋白酶加入量为1.0%、1.5%、2.0%，酶解pH 值选择1.0～1.2、1.5～1.7、2.0～2.2进行试验，酶解时间选择7.5、8.0、8.5h 进行试验。
表4过与不过羟基灰石层析柱对椰子多肽提取液多肽分子量的影响
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用HPLC 法测定椰子多肽的分子量，测得椰子多肽提取液多肽分子量为3673。用5000的超滤膜超滤，不会对椰子多肽的分子量产生很大的影响。
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3结论
从上面的试验结果可以得出椰子多肽提取液最佳提取参数为：酶解温度为45℃、胃蛋白酶的酶解时间为8h 、胰酶的酶胃蛋白酶的酶解pH 值为1.5～1.7，胰酶的酶解pH 解时间为3h ，
值为7.5～7.7，两种酶的用量都为椰肉重量的1.5%，料液比1：10。
通过对椰子多肽提取工艺的研究，可以解决目前椰子产品生产方法存在的生产工序繁琐、生产效率低、生产成本高、品种单一、需加大量添加剂等的问题，椰子多肽提取含有各种小分子多肽、氨基酸、纤维素、小分子多糖、微量元素等活性物质，其营养丰富、附加值高。
从表2中可以看出胃蛋白酶加入量为1.5%是最适合加入量、最适pH 值就是1.5～1.7、最适酶解时间为8h ，其它条件都或多或少的影响到得率和成本。2.3影响
提取过程中胰酶在不同条件下对椰子多肽提取液得率的胰酶在酶解过程中不仅受到时间、酶的加入量的影响，
试验选择的胰酶加入量为1.0%、1.5%、同时受到pH 值的影响。
2.0%，试验选择的酶解pH 值为7.5～7.7、8.0～8.2、8.5～8.7，酶解时间选择2.5、3.0、3.5h 进行试验。
参考文献：
［1］唐仕华. 1996年世界椰子种植面积、产量［J ］. 世界热带农业信息，
2001（1）：24.
［2］刘敏. 椰子水营养成分的分析［J ］. 云南热作科技，2001，24（4）：38～40. ［3］李秀娟，李小慧. 新鲜椰子的综合加工［J ］. 食品科技，1999（1）：47～49.
收稿日期：2009－02－05