产品简介
本试剂盒采用碱裂解法裂解细胞，再通过离心吸附柱在高盐状态下特异性地结合溶液中的DNA 。离心吸附柱中采用的硅基质材料为本公司特有新型材料，高效、专一吸附DNA 。由于增加了过滤柱，与普通的提取方法相比，本试剂盒可最大限度去除杂质蛋白及细胞中其他有机化合物，适用于提取1-5 ml过夜培养的大肠杆菌，质粒提取得率和质量与宿主菌的种类和培养条件，细胞的裂解，质粒拷贝数，质粒的稳定性，抗生素等因素有关。
使用本试剂盒提取的质粒DNA 可适用于转染多种细胞及各种常规操作，包括酶切、PCR 、测序、连接等实验。
提取得率
质粒类型
菌液量 得率 质粒
pBR322, pACYC及其衍生载体，
低拷贝
1-5 ml 3-12 μg
pSC101及其衍生载体，SuperCos,
pWE15
高拷贝
1-5 ml
6-30 μg
pTZ, pUC, pBS, pGM-T
注意事项 请务必在使用本试剂盒之前阅读此注意事项。
1．溶
液P1在使用前先加入RNase A（将试剂盒中提供的RNase A全部加入），混匀，置于2-8℃保存。
2．使
用前先检查平衡液BL 、溶液P2和P3是否出现浑浊，如有混浊现象，可在37℃水浴中加热几分钟，即可恢复澄清。
3．注
意不要直接接触溶液P2和P3，使用后应立即盖紧盖子。4．所
有离心步骤均为使用台式离心机室温下进行离心，速度为12,000 rpm (~13,400×g ) 。5．提
取的质粒量与细菌培养浓度、质粒拷贝数等因素有关。6．实
验前使用平衡液处理吸附柱，可以最大限度激活硅基质膜，提高得率。7．用
平衡液处理过的柱子最好当天使用，放置时间过长会影响效果。操作步骤
使用前请先在漂洗液PW 中加入无水乙醇，加入体积请参照瓶上的标签。
1. 柱平衡步骤：向吸附柱CP3中（吸附柱放入收集管中）加入500 μl的平衡液BL ，12,000 rpm
(~13,400×g ) 离心1 min，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中请使用当天处理过的柱子）
2. 取1-5 ml过夜培养的菌液加入离心管中，12,000 rpm (~13,400×g )离心1 min，尽量吸除
上清（菌液较多时可以通过几次离心将菌体沉淀收集到一个离心管中）。
3. 向留有菌体沉淀的离心管中加入250 μl溶液P1 （请先检查是否已加入RNase A），使用
移液器或涡旋振荡器彻底悬浮细菌细胞沉淀。
注意：如果有未彻底混匀的菌块，会影响裂解，导致提取量和纯度偏低。4. 向离心管中加入250 μl溶液P2，温和地上下翻转6-8次使菌体充分裂解。
注意：温和地混合，不要剧烈震荡，以免污染基因组DNA 。此时菌液应变得清亮粘稠，所用时间不应超过5 min ，以免质粒受到破坏。
5. 向离心管中加入350 μl溶液P3，立即温和地上下翻转6-8次，充分混匀，此时会出现白色
絮状沉淀。 12,000 rpm (~13,400×g ) 离心10 min，用移液器小心地将上清转移到过滤柱CS （过滤柱放入收集管中），注意尽量不要吸出沉淀。
注意：P3加入后应立即混合，避免产生局部沉淀。如果上清中还有微小白色沉淀，可再次离心后取上清。
6. 12,000 rpm (~13,400×g )离心2 min，小心地将离心后收集管中得到的溶液转移到吸附柱
CP3中吸附柱放入收集管中如果过滤柱中有残余的液体说明步骤5吸取的上清中杂质过多，可以延长离心的时间； 如果离心后收集管底部有少量的沉淀，尽量的吸取上清）。
7. 12,000 rpm (~13,400×g ) 离心30-60 sec，倒掉收集管中的废液，将吸附柱CP3放入收
集管中。
8. 向吸附柱CP3中加入500 μl去蛋白液PD ，12,000 rpm (~13,400×g )离心30-60 sec，倒
掉收集管中的废液，将吸附柱CP3放入收集管中。
9. 向吸附柱CP3中加入600 μl漂洗液PW 请先检查是否已加入无水乙醇12,000 rpm
(~13,400×g ) 离心30-60 sec，倒掉收集管中的废液，将吸附柱CP3放入收集管中。10. 重复操作步骤9。
11. 将吸附柱CP3放入收集管中，12,000 rpm (~13,400×g ) 离心2 min，目的是将吸附柱中
残余的漂洗液去除。
注意：漂洗液中乙醇的残留会影响后续的酶反应（酶切、PCR 等）实验。为确保下游实验不受残留乙醇的影响，建议将吸附柱CP3开盖，置于室温放置数分钟，以彻底晾干吸附材料中残余的漂洗液。
12. 将吸附柱CP3置于一个干净的离心管中，向吸附膜的中间部位悬空滴加50-100 μl洗脱缓
冲液TB ，室温放置2 min，12,000 rpm (~13,400×g ) 离心2 min，将质粒溶液收集到离心管中。
注意：为了增加质粒的回收效率，可将得到的溶液重新加入离心吸附柱中，重复步骤12。洗脱液的pH 值对于洗脱效率有很大影响。若用ddH 2O 做洗脱液，应保证其pH 值在7.0-8.5范围内，pH 值低于7.0会降低洗脱效率。洗脱缓冲液体积不应少于50 μl，体积过小影响回收效率。且DNA 产物应保存在-20℃，以防DNA 降解。
低拷贝或大质粒（>10 kb）提取
如果所提质粒为低拷贝质粒或大于10 kb的大质粒，应加大菌体使用量，使用5-10 ml过夜培养物，同时按照比例增加P1、P2、P3的用量，洗脱缓冲液TB 应在65-70℃水浴预热，在吸附和洗脱时可以适当的延长时间，以增加提取效率。其它步骤相同。
Order: 010-59822688
Toll-free: 800-990-6057 /400-810-6057TIANGEN BIOTECH (BEIJING) CO., LTD
版本号: DP121221
TIANpure Mini Plasmid Kit高纯度质粒小提试剂盒
（离心柱型）目录号：DP104
产品内容
产品组成
DP104-02
(50 preps) 平衡液BL (Buffer BL) 30 ml 溶液P1 (Buffer P1) 15 ml 溶液P2 (Buffer P2) 15 ml 溶液P3 (Buffer P3) 20 ml 去蛋白液PD (Buffer PD) 30 ml 漂洗液PW (Buffer PW) 15 ml 洗脱缓冲液TB (Buffer TB) 15 ml RNase A (10 mg /ml)
150 μl 过滤柱CS (Filtration Columns CS) 50个 吸附柱CP3 (Spin Columns CP3) 50个
收集管(2 ml) (Collection Tubes 2 ml)
100个
储存条件
该试剂盒置于室温(15-25℃) 干燥条件下，可保存12个月，更长时间的保存可置于2-8℃。2-8℃保存条件下，若溶液产生沉淀，使用前应将试剂盒内的溶液在室温放置一段时间，必要时可在37℃水浴中预热10 min，以溶解沉淀。第一次使用前将RNase A加入溶液P1中，混匀后置于2-8℃保存，可稳定保存12个月以上。单独包装的RNase A 在室温可稳定保存12个月以上。
本产品仅供科研使用。请勿用于医药、临床治疗、食品及化妆品等用途。
产品简介
本试剂盒采用碱裂解法裂解细胞，再通过离心吸附柱在高盐状态下特异性地结合溶液中的DNA 。离心吸附柱中采用的硅基质材料为本公司特有新型材料，高效、专一吸附DNA 。由于增加了过滤柱，与普通的提取方法相比，本试剂盒可最大限度去除杂质蛋白及细胞中其他有机化合物，适用于提取1-5 ml过夜培养的大肠杆菌，质粒提取得率和质量与宿主菌的种类和培养条件，细胞的裂解，质粒拷贝数，质粒的稳定性，抗生素等因素有关。
使用本试剂盒提取的质粒DNA 可适用于转染多种细胞及各种常规操作，包括酶切、PCR 、测序、连接等实验。
提取得率
质粒类型
菌液量 得率 质粒
pBR322, pACYC及其衍生载体，
低拷贝
1-5 ml 3-12 μg
pSC101及其衍生载体，SuperCos,
pWE15
高拷贝
1-5 ml
6-30 μg
pTZ, pUC, pBS, pGM-T
注意事项 请务必在使用本试剂盒之前阅读此注意事项。
1．溶
液P1在使用前先加入RNase A（将试剂盒中提供的RNase A全部加入），混匀，置于2-8℃保存。
2．使
用前先检查平衡液BL 、溶液P2和P3是否出现浑浊，如有混浊现象，可在37℃水浴中加热几分钟，即可恢复澄清。
3．注
意不要直接接触溶液P2和P3，使用后应立即盖紧盖子。4．所
有离心步骤均为使用台式离心机室温下进行离心，速度为12,000 rpm (~13,400×g ) 。5．提
取的质粒量与细菌培养浓度、质粒拷贝数等因素有关。6．实
验前使用平衡液处理吸附柱，可以最大限度激活硅基质膜，提高得率。7．用
平衡液处理过的柱子最好当天使用，放置时间过长会影响效果。操作步骤
使用前请先在漂洗液PW 中加入无水乙醇，加入体积请参照瓶上的标签。
1. 柱平衡步骤：向吸附柱CP3中（吸附柱放入收集管中）加入500 μl的平衡液BL ，12,000 rpm
(~13,400×g ) 离心1 min，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中请使用当天处理过的柱子）
2. 取1-5 ml过夜培养的菌液加入离心管中，12,000 rpm (~13,400×g )离心1 min，尽量吸除
上清（菌液较多时可以通过几次离心将菌体沉淀收集到一个离心管中）。
3. 向留有菌体沉淀的离心管中加入250 μl溶液P1 （请先检查是否已加入RNase A），使用
移液器或涡旋振荡器彻底悬浮细菌细胞沉淀。
注意：如果有未彻底混匀的菌块，会影响裂解，导致提取量和纯度偏低。4. 向离心管中加入250 μl溶液P2，温和地上下翻转6-8次使菌体充分裂解。
注意：温和地混合，不要剧烈震荡，以免污染基因组DNA 。此时菌液应变得清亮粘稠，所用时间不应超过5 min ，以免质粒受到破坏。
5. 向离心管中加入350 μl溶液P3，立即温和地上下翻转6-8次，充分混匀，此时会出现白色
絮状沉淀。 12,000 rpm (~13,400×g ) 离心10 min，用移液器小心地将上清转移到过滤柱CS （过滤柱放入收集管中），注意尽量不要吸出沉淀。
注意：P3加入后应立即混合，避免产生局部沉淀。如果上清中还有微小白色沉淀，可再次离心后取上清。
6. 12,000 rpm (~13,400×g )离心2 min，小心地将离心后收集管中得到的溶液转移到吸附柱
CP3中吸附柱放入收集管中如果过滤柱中有残余的液体说明步骤5吸取的上清中杂质过多，可以延长离心的时间； 如果离心后收集管底部有少量的沉淀，尽量的吸取上清）。
7. 12,000 rpm (~13,400×g ) 离心30-60 sec，倒掉收集管中的废液，将吸附柱CP3放入收
集管中。
8. 向吸附柱CP3中加入500 μl去蛋白液PD ，12,000 rpm (~13,400×g )离心30-60 sec，倒
掉收集管中的废液，将吸附柱CP3放入收集管中。
9. 向吸附柱CP3中加入600 μl漂洗液PW 请先检查是否已加入无水乙醇12,000 rpm
(~13,400×g ) 离心30-60 sec，倒掉收集管中的废液，将吸附柱CP3放入收集管中。10. 重复操作步骤9。
11. 将吸附柱CP3放入收集管中，12,000 rpm (~13,400×g ) 离心2 min，目的是将吸附柱中
残余的漂洗液去除。
注意：漂洗液中乙醇的残留会影响后续的酶反应（酶切、PCR 等）实验。为确保下游实验不受残留乙醇的影响，建议将吸附柱CP3开盖，置于室温放置数分钟，以彻底晾干吸附材料中残余的漂洗液。
12. 将吸附柱CP3置于一个干净的离心管中，向吸附膜的中间部位悬空滴加50-100 μl洗脱缓
冲液TB ，室温放置2 min，12,000 rpm (~13,400×g ) 离心2 min，将质粒溶液收集到离心管中。
注意：为了增加质粒的回收效率，可将得到的溶液重新加入离心吸附柱中，重复步骤12。洗脱液的pH 值对于洗脱效率有很大影响。若用ddH 2O 做洗脱液，应保证其pH 值在7.0-8.5范围内，pH 值低于7.0会降低洗脱效率。洗脱缓冲液体积不应少于50 μl，体积过小影响回收效率。且DNA 产物应保存在-20℃，以防DNA 降解。
低拷贝或大质粒（>10 kb）提取
如果所提质粒为低拷贝质粒或大于10 kb的大质粒，应加大菌体使用量，使用5-10 ml过夜培养物，同时按照比例增加P1、P2、P3的用量，洗脱缓冲液TB 应在65-70℃水浴预热，在吸附和洗脱时可以适当的延长时间，以增加提取效率。其它步骤相同。
Order: 010-59822688
Toll-free: 800-990-6057 /400-810-6057TIANGEN BIOTECH (BEIJING) CO., LTD
版本号: DP121221
TIANpure Mini Plasmid Kit高纯度质粒小提试剂盒
（离心柱型）目录号：DP104
产品内容
产品组成
DP104-02
(50 preps) 平衡液BL (Buffer BL) 30 ml 溶液P1 (Buffer P1) 15 ml 溶液P2 (Buffer P2) 15 ml 溶液P3 (Buffer P3) 20 ml 去蛋白液PD (Buffer PD) 30 ml 漂洗液PW (Buffer PW) 15 ml 洗脱缓冲液TB (Buffer TB) 15 ml RNase A (10 mg /ml)
150 μl 过滤柱CS (Filtration Columns CS) 50个 吸附柱CP3 (Spin Columns CP3) 50个
收集管(2 ml) (Collection Tubes 2 ml)
100个
储存条件
该试剂盒置于室温(15-25℃) 干燥条件下，可保存12个月，更长时间的保存可置于2-8℃。2-8℃保存条件下，若溶液产生沉淀，使用前应将试剂盒内的溶液在室温放置一段时间，必要时可在37℃水浴中预热10 min，以溶解沉淀。第一次使用前将RNase A加入溶液P1中，混匀后置于2-8℃保存，可稳定保存12个月以上。单独包装的RNase A 在室温可稳定保存12个月以上。
本产品仅供科研使用。请勿用于医药、临床治疗、食品及化妆品等用途。