实验三 酵母菌的形态观察及死活细胞的鉴别
实验时间：2012-9-19 星期三
一、目的要求
⑴. 观察酵母菌的形态及出芽生殖方式, 学习区分酵母菌死活细胞的实验方法
⑵. 掌握酵母菌一般形态特征及其与细菌的区别
二、基本原理
酵母菌是不运动的单细胞真核微生物，其大小通常比常见细菌大几倍甚至几十倍，大多数酵母以出芽方式进行无性繁殖，有的分裂繁殖；有性繁殖是通过接合产生子囊孢子。本实验是通过美蓝染液水浸片来观察酵母的形态和出芽生殖方式。
美蓝是一种无毒性的染料，它的氧化型呈蓝色，还原型无色，用美蓝对酵母的活细胞进行染色时，由于细胞的新陈代谢作用，细胞内具有较强的还原能力，能使美蓝由蓝色的氧化型变为无色的还原型，因此具有还原能力的酵母活细胞是无色的而死细胞或代谢作用微弱的衰老细胞则呈蓝色或淡蓝色，借此即可对酵母菌的死细胞或活细胞进行鉴别，并可计算其成活率。
三、实验器材
⑴. 菌种：酿酒酵母培养约2d 的麦芽汁斜面培养物
⑵溶液或试剂 ：0.05%和0.1%吕氏碱性美蓝染色液, 革兰染色用碘液
⑶仪器或其他用具： 显微镜，载玻片，盖玻片接种环、洒精灯等
四、操作步骤
美蓝浸片观察 酵母培养→制片→染色→镜检→30分钟后再镜检 水-碘浸片观察
1. 美蓝浸片的观察
⑴在载玻片中央加一滴0.1%吕氏碱性美蓝染色液, 然后按无菌操作用接种环挑取少量酵母菌苔放在染液中, 混合均匀。
⑵用镊子取一块盖玻片，先将一边与菌液接触，然后慢慢将盖玻片放下使其盖在菌液上。
⑶将制片放置约3分钟后镜检，先用低倍镜然后用高倍镜观察酵母的形态和出芽情况，并根据颜色来区别死活细胞。
⑷染色约0.5小时后再次进行观察，注意死细胞数量是否增加。
⑸用0.05%吕氏碱性美蓝染液重复上述操作。
2. 水-碘液浸片的观察
在载玻片中央加一小滴革兰染色用碘液, 然后在其上加3小滴水, 取少许酵母菌苔放在水-碘液中混匀, 盖上盖玻片后镜检。
五、关键步骤及注意事项
⑴染液不宜过多或过少，否则，在盖上盖玻片时，菌液溢出或出现大量气泡。 ⑵用镊子取一块盖玻片，先将一侧与菌液接触，然后慢慢将盖玻片放下，使其盖在菌液上，盖玻片不宜平着放下，避免气泡产生。
六、思考题
⑴吕氏碱性美蓝染液浓度和作用时间的不同，对酵母菌死细胞数量有何影响? 试分析其原因。
⑵. 在显微镜下，酵母菌有哪些突出的特征区别于一般细菌? 实验七 酵母菌的形态观察及死活细胞的鉴定
实验三 酵母菌的形态观察及死活细胞的鉴别
实验时间：2012-9-19 星期三
一、目的要求
⑴. 观察酵母菌的形态及出芽生殖方式, 学习区分酵母菌死活细胞的实验方法
⑵. 掌握酵母菌一般形态特征及其与细菌的区别
二、基本原理
酵母菌是不运动的单细胞真核微生物，其大小通常比常见细菌大几倍甚至几十倍，大多数酵母以出芽方式进行无性繁殖，有的分裂繁殖；有性繁殖是通过接合产生子囊孢子。本实验是通过美蓝染液水浸片来观察酵母的形态和出芽生殖方式。
美蓝是一种无毒性的染料，它的氧化型呈蓝色，还原型无色，用美蓝对酵母的活细胞进行染色时，由于细胞的新陈代谢作用，细胞内具有较强的还原能力，能使美蓝由蓝色的氧化型变为无色的还原型，因此具有还原能力的酵母活细胞是无色的而死细胞或代谢作用微弱的衰老细胞则呈蓝色或淡蓝色，借此即可对酵母菌的死细胞或活细胞进行鉴别，并可计算其成活率。
三、实验器材
⑴. 菌种：酿酒酵母培养约2d 的麦芽汁斜面培养物
⑵溶液或试剂 ：0.05%和0.1%吕氏碱性美蓝染色液, 革兰染色用碘液
⑶仪器或其他用具： 显微镜，载玻片，盖玻片接种环、洒精灯等
四、操作步骤
美蓝浸片观察 酵母培养→制片→染色→镜检→30分钟后再镜检 水-碘浸片观察
1. 美蓝浸片的观察
⑴在载玻片中央加一滴0.1%吕氏碱性美蓝染色液, 然后按无菌操作用接种环挑取少量酵母菌苔放在染液中, 混合均匀。
⑵用镊子取一块盖玻片，先将一边与菌液接触，然后慢慢将盖玻片放下使其盖在菌液上。
⑶将制片放置约3分钟后镜检，先用低倍镜然后用高倍镜观察酵母的形态和出芽情况，并根据颜色来区别死活细胞。
⑷染色约0.5小时后再次进行观察，注意死细胞数量是否增加。
⑸用0.05%吕氏碱性美蓝染液重复上述操作。
2. 水-碘液浸片的观察
在载玻片中央加一小滴革兰染色用碘液, 然后在其上加3小滴水, 取少许酵母菌苔放在水-碘液中混匀, 盖上盖玻片后镜检。
五、关键步骤及注意事项
⑴染液不宜过多或过少，否则，在盖上盖玻片时，菌液溢出或出现大量气泡。 ⑵用镊子取一块盖玻片，先将一侧与菌液接触，然后慢慢将盖玻片放下，使其盖在菌液上，盖玻片不宜平着放下，避免气泡产生。
六、思考题
⑴吕氏碱性美蓝染液浓度和作用时间的不同，对酵母菌死细胞数量有何影响? 试分析其原因。
⑵. 在显微镜下，酵母菌有哪些突出的特征区别于一般细菌? 实验七 酵母菌的形态观察及死活细胞的鉴定