慢病毒载体构建及包装流程慢病毒载体构建及包装流程
（一）实验流程（1和2为并列步骤）
1.慢病毒过表达质粒载体的构建设计上下游特异性扩增引物，同时引
入酶切位点，PCR(采用高保
真KOD酶，3K内突变率为0%)从模板中（CDNA质粒或者文库）调取目的基因CDS区（codingsequence）连入T载体。将CDS区从T载体上切下，装入慢病毒过表达质粒载体。2.慢病毒干扰质粒载体的构建
合成siRNA对应的DNA颈环结构，退火后连入慢病毒干扰质粒载体
3.慢病毒载体的包装与浓缩纯化制备慢病毒穿梭质粒及其辅助包装
原件载体质粒，三种质粒载体
分别进行高纯度无内毒素抽提，共转染293T细胞，转染后6h更换为完全培养基，培养48和72h后，分别收集富含慢病毒颗粒的细胞上清液，病毒上清液通过超离心浓缩病毒。
4.想要了解更多详细信息，可进入www.hanbio.net，获取更多技术文档。
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汉恒生物公司地址：上海市徐汇区斜土路E-mail:[email protected]号15楼http://www.hanbio.netTel：021-51296258实验室地址：上海市张江高科技园区蔡伦路781号张江药谷503
慢病毒载体构建及包装流程(二)流程图
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汉恒生物公司地址：
上海市徐汇区斜土路
E-mail:[email protected]号15楼http://www.hanbio.netTel：021-51296258实验室地址：上海市张江高科技园区蔡伦路781号张江药谷
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慢病毒载体构建及包装流程慢病毒载体构建及包装流程
（一）实验流程（1和2为并列步骤）
1.慢病毒过表达质粒载体的构建设计上下游特异性扩增引物，同时引
入酶切位点，PCR(采用高保
真KOD酶，3K内突变率为0%)从模板中（CDNA质粒或者文库）调取目的基因CDS区（codingsequence）连入T载体。将CDS区从T载体上切下，装入慢病毒过表达质粒载体。2.慢病毒干扰质粒载体的构建
合成siRNA对应的DNA颈环结构，退火后连入慢病毒干扰质粒载体
3.慢病毒载体的包装与浓缩纯化制备慢病毒穿梭质粒及其辅助包装
原件载体质粒，三种质粒载体
分别进行高纯度无内毒素抽提，共转染293T细胞，转染后6h更换为完全培养基，培养48和72h后，分别收集富含慢病毒颗粒的细胞上清液，病毒上清液通过超离心浓缩病毒。
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慢病毒载体构建及包装流程(二)流程图
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