培养基适用性标准操作规程
1 目的
规范培养基适应性检查的标准操作。
2 范围
本规程适用于《中华人民共和国药典》2010年版二部规定微生物限度检查中成品培养
基、 由脱水培养基或按处方配制的培养基均应进行培养基适用性检査。 3
责任
3.1 本规程由质量保证中心主任指定人员起草。
3.2 与本文件相关的部门负责人参与审阅，企业质量负责人批准本文件。 3.3 质量控制中心负责具体实施本规程。 4
内容
4.1 依据
4.1.1 《药品生产质量管理规范》（2010年修订） 4.1.2 《中华人民共和国药典》2010年版二部 4.2 试验用菌株及培养基
4.3 试验用仪器设备
4.3.1 恒温培养箱（30～35℃）、霉菌培养箱（23～28℃）、蒸汽压力灭菌器、净化工作台、电热干燥箱、恒温水浴锅、振荡器、电冰箱、天平
4.3.2 锥形瓶、培养皿（9cm ）、量筒、试管及塞、吸管（1ml 分度0.01，10ml 分度0.1）
4.3.3 接种环、乙醇灯、乙醇棉球或碘伏棉球、火柴、记号笔、灭菌镊子、不锈钢药匙、白瓷盘。 4.4 操作步骤 4.4.1 菌液的制备
4.5.1.1 接种大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌的新鲜培养物至营养肉汤培养基中，于30～35℃培养18～24h 。取30～35℃培养18～24h 的大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌营养肉汤新鲜培养物1ml ，用 0.9%无菌氯化钠溶液10倍递增稀释制成每1ml 含菌数50～100cfu 的菌悬液，备用。
4.5.1.2 接种白色念珠菌的新鲜培养物至改良马丁培养基上，于23～28℃培养24～48h 。取于23～28℃培养24～48h 的白色念珠菌新鲜培养物1ml ，用0.9%无菌氯化钠溶液10倍递增稀释每1ml 含菌数50～100cfu 的菌悬液备用。
4.5.1.3 接种黑曲霉菌的新鲜培养物至改良马丁琼脂斜面培养基上，于23～28℃培养5～7天，加入3～5ml0.05%（ml/ml)聚山梨酸酯80的0.9%无菌氯化钠溶液，将孢子洗脱，然后，用适宜的方法吸出孢子悬液至无菌试管内，用含0.05%（ml/ml)聚山梨酸酯80的0.9%无菌氯化钠溶液10倍递增稀释制成每1ml 含孢子数50～100cfu 的孢子悬液备用。 4.4.2 菌液的计数（每种菌液制备2个平皿）
大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌的菌液1ml （含菌数50～100cfu ）接种至营养琼脂培养基上，30～35℃培养48h ，白色念珠菌和黑曲霉菌1ml （含菌数50～100cfu ）接种至改良马丁琼脂培养基上，23～28℃培养72h ，计数。 4.4.3 适用性检查实验操作
4.5.3.1 培养基的配制：按规定程序新鲜配制营养琼脂（被检培养基和对照培养基）、玫瑰红钠琼脂（被检培养基和对照培养基）以及酵母浸出粉胨葡萄糖琼脂（被检培养基和对照培养基），灭菌后备用。
4.5.3.2 营养琼脂培养基的适用性检查
取7个无菌平皿，分别接种大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌各2皿，每皿接种1ml 菌液（含菌50～100cfu ），另一平皿不接种菌做空白对照，倾注对照营养琼脂培养基，混匀，凝固后于30～35℃倒置培养48h ，计数。
被检培养基同法操作。
4.5.3.3 玫瑰红钠琼脂培养基的适用性检查
取5个无菌平皿，分别接种白色念珠菌、黑曲霉菌各2皿，每皿接种1ml 菌液（含菌50～100cfu ），另一平皿不接种菌做空白对照，倾注对照玫瑰红钠琼脂培养基，混匀，凝固后于23～28℃倒置培养72h ，计数。
被检培养基同法操作。
4.5.3.4 酵母浸出粉胨葡萄糖琼脂培养基的适用性检查
取3个无菌平皿，分别接种白色念珠菌2皿，每皿接种1ml 菌液（含菌50～100cfu ），另一平皿不接种菌做空白对照，倾注对照酵母浸出粉胨葡萄糖琼脂培养基，混匀，凝固后于23～28℃倒置培养72h ，计数。
被检培养基同法操作。
4.5 结果判断：若被检培养基上的菌落平均数不小于对照培养基上的菌落平均数的 70%，且菌落形态、大小应与对照培养基上的菌落一致，则判断该培养基的适用性检查符合规定。
培养基适用性标准操作规程
1 目的
规范培养基适应性检查的标准操作。
2 范围
本规程适用于《中华人民共和国药典》2010年版二部规定微生物限度检查中成品培养
基、 由脱水培养基或按处方配制的培养基均应进行培养基适用性检査。 3
责任
3.1 本规程由质量保证中心主任指定人员起草。
3.2 与本文件相关的部门负责人参与审阅，企业质量负责人批准本文件。 3.3 质量控制中心负责具体实施本规程。 4
内容
4.1 依据
4.1.1 《药品生产质量管理规范》（2010年修订） 4.1.2 《中华人民共和国药典》2010年版二部 4.2 试验用菌株及培养基
4.3 试验用仪器设备
4.3.1 恒温培养箱（30～35℃）、霉菌培养箱（23～28℃）、蒸汽压力灭菌器、净化工作台、电热干燥箱、恒温水浴锅、振荡器、电冰箱、天平
4.3.2 锥形瓶、培养皿（9cm ）、量筒、试管及塞、吸管（1ml 分度0.01，10ml 分度0.1）
4.3.3 接种环、乙醇灯、乙醇棉球或碘伏棉球、火柴、记号笔、灭菌镊子、不锈钢药匙、白瓷盘。 4.4 操作步骤 4.4.1 菌液的制备
4.5.1.1 接种大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌的新鲜培养物至营养肉汤培养基中，于30～35℃培养18～24h 。取30～35℃培养18～24h 的大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌营养肉汤新鲜培养物1ml ，用 0.9%无菌氯化钠溶液10倍递增稀释制成每1ml 含菌数50～100cfu 的菌悬液，备用。
4.5.1.2 接种白色念珠菌的新鲜培养物至改良马丁培养基上，于23～28℃培养24～48h 。取于23～28℃培养24～48h 的白色念珠菌新鲜培养物1ml ，用0.9%无菌氯化钠溶液10倍递增稀释每1ml 含菌数50～100cfu 的菌悬液备用。
4.5.1.3 接种黑曲霉菌的新鲜培养物至改良马丁琼脂斜面培养基上，于23～28℃培养5～7天，加入3～5ml0.05%（ml/ml)聚山梨酸酯80的0.9%无菌氯化钠溶液，将孢子洗脱，然后，用适宜的方法吸出孢子悬液至无菌试管内，用含0.05%（ml/ml)聚山梨酸酯80的0.9%无菌氯化钠溶液10倍递增稀释制成每1ml 含孢子数50～100cfu 的孢子悬液备用。 4.4.2 菌液的计数（每种菌液制备2个平皿）
大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌的菌液1ml （含菌数50～100cfu ）接种至营养琼脂培养基上，30～35℃培养48h ，白色念珠菌和黑曲霉菌1ml （含菌数50～100cfu ）接种至改良马丁琼脂培养基上，23～28℃培养72h ，计数。 4.4.3 适用性检查实验操作
4.5.3.1 培养基的配制：按规定程序新鲜配制营养琼脂（被检培养基和对照培养基）、玫瑰红钠琼脂（被检培养基和对照培养基）以及酵母浸出粉胨葡萄糖琼脂（被检培养基和对照培养基），灭菌后备用。
4.5.3.2 营养琼脂培养基的适用性检查
取7个无菌平皿，分别接种大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌各2皿，每皿接种1ml 菌液（含菌50～100cfu ），另一平皿不接种菌做空白对照，倾注对照营养琼脂培养基，混匀，凝固后于30～35℃倒置培养48h ，计数。
被检培养基同法操作。
4.5.3.3 玫瑰红钠琼脂培养基的适用性检查
取5个无菌平皿，分别接种白色念珠菌、黑曲霉菌各2皿，每皿接种1ml 菌液（含菌50～100cfu ），另一平皿不接种菌做空白对照，倾注对照玫瑰红钠琼脂培养基，混匀，凝固后于23～28℃倒置培养72h ，计数。
被检培养基同法操作。
4.5.3.4 酵母浸出粉胨葡萄糖琼脂培养基的适用性检查
取3个无菌平皿，分别接种白色念珠菌2皿，每皿接种1ml 菌液（含菌50～100cfu ），另一平皿不接种菌做空白对照，倾注对照酵母浸出粉胨葡萄糖琼脂培养基，混匀，凝固后于23～28℃倒置培养72h ，计数。
被检培养基同法操作。
4.5 结果判断：若被检培养基上的菌落平均数不小于对照培养基上的菌落平均数的 70%，且菌落形态、大小应与对照培养基上的菌落一致，则判断该培养基的适用性检查符合规定。