选修一：生物技术实践15分
39．（2010）下列是与芳香油提取相关的问题，请回答：
（1）玫瑰精油适合用水蒸气蒸馏法提取，其理由是玫瑰精油具有 的性质。蒸馏时收集的蒸馏液 (是、不是)纯的玫瑰精油，原因是 。
（2）当蒸馏瓶中的水和原料量一定时，蒸馏过程中，影响精油提取量的主要因素有蒸馏时间和 。当原料量等其他条件一定时，提取量随蒸馏时间的变化趋势是 。
（3）如果蒸馏过程中不进行冷却，则精油提取量会 ，原因是 。
（4）密封不严的瓶装玫瑰精油保存时最好存放在温度 的地方，目的是 。
（5）某植物花中精油的相对含量随花的不同生长发育时期的变化趋势如图所示。提取精油时采摘花的最合适时间为
天左右。
(6)从薄荷叶中提取薄荷油时 (能、不能)采用从玫瑰花中提取玫瑰精油的方法，理由是 。
答案：（1）易挥发、难溶于水、化学性质稳定 不是
玫瑰精油随水蒸气一起蒸馏出来，所得到的是油水混合物
（2）蒸馏温度 一定的时间内提取量随蒸馏时间的延长而增加，一定时间后提取量不再增加
（3）下降 部分精油会随水蒸气挥发而流失
（4）较低 减少挥发
（5）a
（6）能 薄荷油与玫瑰精油的化学性质相似
（2011）有些细菌可分解原油，从而消除由原油泄漏造成的土壤污染。某同学欲从受原油污染的土壤中筛选出高效降解原油的菌株。回答问题：
（1）在筛选过程中，应将土壤样品稀释液接种于以 为唯一碳源的固体培养基上，从功能上讲，该培养基属于 培养基。
（2）纯化菌种时，为了得到单菌落，常采用的接种方法有两种，即 和 。
（3）为了筛选出高效菌株，可比较单菌落周围分解圈的大小，分解圈说明该菌株的降解
能力 。
（4）通常情况下，在微生物培养过程中实验室常用的灭菌方法有灼烧灭菌、 和
附近进行，以避免周围环境中微生物的污染。
39. 【答案】（1）原油 选择 （2）平板划线法 稀释涂布平板法 （3）强 （4）
干热灭菌 高压蒸汽灭菌 火焰
39．（2012）为了探究6-BA和IAA对某菊花品种茎尖外植体再生丛芽的影响，某研究小组在ＭＳ培养基中加入6-BA和IAA，配制成四种培养基（见下表），灭菌后分别接种数量相同、生长状态一致、消毒后的茎尖外植体，在适宜条件下培养一段时间后，统计再生丛芽外植体的比率（m），以及再生丛芽外植体上的丛芽平均数（n），结果如下表。
回答下列问题：
（１）按照植物的需求量，培养基中无机盐的元素可分为 和 两类。上述培养基中，6-BA属于 类生长调节剂。
（２）在该实验中，自变量是 ，因变量是 ，自变量的取值范围是 。 （３）从实验结果可知，诱导丛芽总数最少的培养基是 号培养基。
（４）为了诱导该菊花试管苗生根，培养基中一般不加入 （填“6-BA”或“IAA”）。
（1）大量元素 微量元素 细胞分裂素
（2）IAA的浓度 菊花再生丛芽外植体的比率和外植体上的丛芽平均数 0—0.5mg.L-1
（3）1 （4）6-BA
（2013）临床使用抗生素前，有时需要做细菌耐药实验。实验时，首先要从病人身上获取少量样本，然后按照一定的实验步骤操作，以确定某致病菌对不抗生素的敏感性。
回答下列问题：
（1）为了从样本中获取致病菌单菌落，可用 法或 法将样本接种于固体培养基表面，经过选择培养、鉴别等步骤获得。
（2）取该单菌落适当稀释，用 法接种于固体培养基表面，在37℃培养箱中培养24h，使其均匀生长，布满平板。
（3）为了检验该致病菌对于抗生素的敏感性，将分别含有A、B、C、D四种抗生素的滤纸片均匀置于该平板上的不同位置，培养一段时间后，含A的滤纸片周围出现透明圈，说明该致病菌对抗生素A ；含B的滤纸片周围没有出现透明圈，说明该致病菌对抗生素B ；含C的滤纸片周围透明圈比含A的小，说明 ；含D的滤纸片周围的透明圈也比含A的小，且透明圈中出现一个菌落，在排除杂菌污染的情况下，此菌落很可能是抗生素D的 。
（4）根据上述实验结果，为达到抗菌目的，最好应选用抗生素 。
答案：（1）划线 稀释涂布（或涂布） （每空2分，共4分）
（2）涂布 （1分）
（3）敏感；不敏感； 该致病菌对C的敏感性比对A的弱； 耐药菌（每空2分，共8分）
（4）A（2分）
（2014）为了调查某河流的水质状况，某研究小组测定了该河流水样中的细菌含量，并进行了细菌的分离等工作。回答下列问题：
（1）该小组采用稀释涂布平板法检测水样中的细菌含量。在涂布接种前，随机取若干
灭菌后的空平板先行培养了一段时间，这样做的目的是 ；然后，将1mL水样稀释100倍，在3个平板上用涂布法分别接入0.1mL稀释液；经适当培养后，3个平板上的菌落数分别为39、38和37。据此可得出每升水样中的活菌数为 。
（2）该小组采用平板划线法分离水样中的细菌。操作时，接种环通过 灭菌，
在第二次及以后划线时，总是从上一次的末端开始划线。这样做的目的是 。
（3）示意图A和B中， 表示的是用稀释涂布平板法接种培养后得到的结果。
（4）该小组将得到的菌株接种到液体培养基中并混匀，一部分进行静置培养，另一部
分进行振荡培养。结果发现：振荡培养的细菌比静置培养的细菌生长速度快。分析其原因是：
振荡培养能提高培养液的 的含量，同时可以使菌体与培养液充分接触，提高 的利用率。
答案：
（1）检测培养基平板灭菌是否合格 3.810
（2）灼烧 将聚集的菌体逐步稀释以便获得单个菌落
（3）B
（4）溶解氧 营养物质
（2015）回答与胡萝卜有关的问题：
（1）胡罗卜含有的胡罗卜素中，最主要的是（填“α—胡罗卜素”或“β—胡罗卜素”或“γ—胡罗卜素”），该胡罗卜素在人体内可以转变成两分子，后者缺乏会引起人在弱光下视物不清的病症，该疾病称为，胡罗卜素是（填“挥发性”或“非挥发性”）物质。
（2）工业生产上，用养殖的岩藻作为原料提取胡罗卜素时，（填“需要”或“不需要”）将新鲜的岩藻干燥。
（3）现有乙醇和乙酸乙酯两种溶剂，应选用其中的作为胡罗卜素的萃取剂，不选用另外一种的理由是。
2
【答案】（1）β—胡罗卜素 维生素A 夜盲症 非挥发性 （每空2分）
（2）需要（2分）
（3）乙酸乙酯（2分） 萃取胡罗卜素的有机溶剂应不与水混溶，而乙醇为水溶性有机溶剂（3分）
大纲卷：
34．（2010）（12分）下列是与微生物培养有关的问题，请回答：
（1）某细菌固体培养基的组成成分是KH2PO4、Na2HPO4、MgSO4、葡萄糖、尿素、琼脂和蒸馏水，其中凝固剂是＿＿＿＿＿＿＿，碳源是＿＿＿＿＿＿＿，氮源是＿＿＿＿＿＿＿。已知只有能合成脲酶的细菌才能在该培养基上生长，故该培养基属于＿＿＿＿培养基。按照化学成分分类，该培养基属于＿＿＿培养基。从同化作用类型上看，用该培养基培养的细菌属于＿＿＿＿。
（2）将少量细菌接种到一定体积的液体培养基中，适宜条件下培养，定时取样测定菌体数目，以时间为横坐标，以细菌数目的对数为纵坐标，可得到细菌的＿＿＿＿＿＿曲线。该曲线中以菌体数目的对数作为纵坐标的原因是＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿。实验室中，为了获得形态和生理特征 一致的菌体，一般应在＿＿＿期取材；在生产中，常搜集培养至＿＿＿期的细菌用于次级代谢产物的提取。
答案：
（1）琼脂 葡萄糖 尿素 选择 合成 异养型
（2）群体生长 菌体数目往往非常大，且变化率也很高，以菌体数目的对数为纵坐标有利于作图 对数 稳定
5.（2012）关于细菌的叙述中，正确的是
A.不同种类细菌的生长均需要相同碳源
B.常用液体培养基分离获得细菌单菌落
C.细菌大量培养过程中，芽孢形成于细菌生长的调整期
D.培养基中含有高浓度NaCl有利于金黄色葡萄球菌的筛选
【答案】D
4. （2014）某同学在①、②、③三种条件下培养大肠杆菌，这三种条件是：
①以葡萄糖为碳源的培养基，不断补充培养基，及时去除代谢产物
②以葡萄糖为碳源的培养基，不补充培养基，不去除代谢产物
③以葡萄糖和乳糖为碳源的培养基，不补充培养基，不去除代谢产物
根据培养结果绘制的一段时间内菌体数的对数随时间变化的趋势图如下：
假设三种培养基中初始总糖量相等，则①、②、③三种条件依次对应的趋势图是
A.甲、乙、丙 B.乙、丙、甲 C.丙、甲、乙 D.丙、乙、甲
【答案】C
新课标1：
39．（2013）（15分）回答下列有关泡菜制作的问题
（1）制作泡菜时，所用盐水需煮沸，其目的是 。为了缩短制作时间，有人还会在冷却后的盐水中加入少量陈泡菜液，加入陈泡菜液的目的是 。
（2）泡菜制作过程中，乳酸发酵的过程即为乳酸菌进行 的过程。该过程发生在乳酸菌细胞的 中。
（3）泡菜制作过程中影响亚硝酸盐含量的因素有 、 和 等。
（4）从开始制作到泡菜品质最佳这段时间内，泡菜叶逐渐变酸。这段时间内泡菜坛中乳酸菌和其他杂菌的消长规律是 ，原因是 。
答案：
（1）杀灭杂菌 增加乳酸菌数量
（2）无氧呼吸 细胞质
（3）温度、腌制时间 食盐用量
（4）乳酸菌数量增加，杂菌数量减少 乳酸菌比杂菌更为耐酸
39.（2014）植物秸秆中的纤维素可被某些微生物分解。回答下列问题:
（1）分解秸秆中纤维素的微生物能分泌纤维素酶，该酶是由3种组分组成的复合酶，其中的葡萄糖苷酶可将 分解成 。
（2）在含纤维素的培养基中加入刚果红（CR）时，CR可与纤维素形成 色复合物。用含有CR的该种培养基培养纤维素分解菌时，培养基上会出现以该菌的菌落为中心的 。
（3）为从富含纤维素的土壤中分离获得纤维素分解菌的单菌落，某同学设计了甲、乙两种
注：“+”表示有，“－”表示无。
据表判断，培养基甲 （填“能”或“不能”）用于分离和鉴别纤维素分解菌，原因是 ；培养基乙 （填“能”或“不能”）用于分离和鉴别纤维素分解菌，原因是 ；
【答案】
（1）纤维二糖 葡萄糖
（2）红色 透明圈
（3）不能 液体培养基不能分离单菌落 不能 乙培养基中没有纤维素，不会形成CR-纤维素红色复合物，即使出现单菌落也不能确定其为纤维素分解菌
39.（2015）已知微生物A可以产生油脂，微生物B可以产生脂肪酶。脂肪酶和油脂可用于生物柴油的生产。回答有关问题：
（1）显微观察时，微生物A菌体中的油脂通常可用________染色。微生物A产生的油脂不易挥发，可选用________（填“萃取法”或“水蒸气蒸馏法”）从菌体中提取。
（2）为了从自然界中获得能产生脂肪酶的微生物B的单菌落，可从含有油料作物种子腐烂物的土壤中取样，并应选用以________为碳源的固体培养基进行培养。
（3）若要测定培养液中微生物B的菌体数，可在显微镜下用________________直接计数；若要测定其活菌数量，可选用________________法进行计数。
（4）为了确定微生物B产生的脂肪酶的最适温度，某同学测得相同时间内，在35℃、40℃、45℃温度下降解10g油脂所需酶量依次为4mg、1mg、6mg，则上述三个温度中，________ ℃条件下该酶活力最小。为了进一步确定该酶的最适温度，应围绕________℃设计后续实验。
【答案】
（1）苏丹Ⅲ（或苏丹Ⅳ） 萃取法（每空2分，共4分）
（2）油脂（3分，其他合理答案也给分）
（3）血细胞计数板 稀释涂布平板（每空2分，共4分，其他合理答案也给分）
（4）45 40（每空2分，共4分）
广东卷：
4、（2014）下列叙述错误的是（ ）
A、醋酸菌在无氧条件下利用乙醇产生醋酸
B、酵母菌在无氧条件下利用葡萄糖汁产生酒精
C、泡菜腌制利用了乳酸菌的乳酸发酵
D、腐乳制作利用了毛霉等微生物的蛋白酶和脂肪酶
【答案】A
29（2014）（16分）铁皮石斛是我国名贵中药，生物碱是其有效成分之一，应用组织培养技术培养铁皮石斛拟原球茎（简称PLBs，类似愈伤组织）生产生物碱的实验流程如下：
在固体培养基上，PLBs的重量、生物碱含量随增殖培养时间的变化如图17所示，请回答下列问题：
⑴选用新生营养芽为外植体的原因是 ，诱导外植体形成PLBs的过程称 。 ⑵与黑暗条件下相比，PLBs在光照条件下生长的优势体现在 ， ， 。⑶脱落酸（ABA）能提高生物碱含量，但会抑制PLBs的生长。若采用液体培养，推测添加适量的ABA可提高生物碱产量。同学们拟开展探究实验验证该推测，在设计实验方案是探讨了以下问题：
①ABA的浓度梯度设置和添加方式：设4个ABA处理组，1个空白对照组，3次重复。因ABA受热易分解，故一定浓度的无菌ABA母液应在各组液体培养基②实验进程和取样：实验50天完成，每10天取样，将样品（PLBs）称重（g/瓶）后再测定生物碱含量。如初始（第0天）数据已知，实验过程中还需测定的样品数为 。 ③依所测定数据确定适宜的ABA浓度和培养时间：当某3个样品（重复样）的其对应的ABA浓度为适宜浓度，对应的培养时间是适宜培养时间。
答案：
（1）分裂能力强，全能性容易表达 脱分化
（2）增殖明显 有利于叶绿素的形成 进行光合作用制造有机物
（3）灭菌冷却 65 生物碱平均含量最大
29 .（2015）（16 分）泡菜是我国的传统食品之一，但制作过程中产生的亚硝酸盐对人体健康有潜在危害，某兴趣小组准备参加“科技创新大赛一”，查阅资料得到图11 .
（ l
）制作泡菜时，泡菜坛一般用水密封，目的是＿_
．乳酸菌发酵第一阶段的产物有 ＿.
（2）据图11，与第3 天相比，第8 天后的泡菜更适于食用，因为后者＿ ；PH值呈下降趋势，原因是＿ 。
（3）该小组得到一株“优选”乳酸菌（亚硝酸盐还原酶活力比普通乳酸菌高5倍），拟参考资料的实验方案和食盐浓度（4%-10%），探究与普通乳酸菌相比用“优选”乳酸菌制作泡菜过程中亚硝酸盐含量的高低，并确定其最适条件，请你设计一个实验结果记录表，并推测实验结果。
答案：
(1)阻止外界空气进入坛内， 造成缺氧的环境，利于乳酸发酵 丙酮酸、ATP、【H】
（2）亚硝酸盐含量显著降低 乳酸菌持续发酵导致泡菜乳酸含量逐渐增多
（3）泡菜亚硝酸盐含量记录表（mg/kg）
预测结果：与普通乳酸菌发酵相比，使用优选乳酸菌发酵，泡菜中的亚硝酸盐含量显著降低；第8天以后泡菜亚硝酸盐含量比7天前明显减少；食盐浓度5%左右有利于降低泡菜中的亚硝酸盐含量且不影响泡菜质量。
山东卷：
11.（2014）玉米是重要的粮食作物，经深加工可生产酒精、玉米胚芽油和果糖等。流程如下：
（1）玉米秸秆中的纤维素经充分水解后的产物可被酵母菌利用发酵生产酒精。培养酵母菌时，该水解产物为酵母菌的生长提供________。发酵过程中检测酵母菌数量可采用_______法或稀释涂布平板法计数。
（2）玉米胚芽油不易挥发，宜选用_______法或________法从玉米胚芽中提取。
（3）玉米淀粉经酶解形成的葡萄糖可在葡萄糖异构酶的作用下转化成果糖。利用________技术可使葡萄糖异构酶重复利用，从而降低生产成本。
（4）利用PCR技术扩增葡萄糖异构酶基因时，需用耐高温的_______催化。PCR一般要经历三十次以上的循环，每次循环包括变性、_______和_______三步。
答案：
（1）碳源； 显微镜直接计数
（2）压榨；萃取（注：两空可颠倒）
（3）固定化酶
（4）（Taq）DNA聚合酶；（低温）复性（或退火）；（中温）延伸
35.（2015）（12分）【生物—生物技术实践】
乳糖酶能够催化乳糖水解为葡萄糖和半乳糖，具有重要应用价值。乳糖酶的制备及固定化步骤如下：
（1）筛选产乳糖酶的微生物L时，宜用 作为培养基中的唯一碳源。培养基中琼脂的作用是 。从功能上讲，这种培养基属于 。
（2）培养微生物L前，宜采用 方法对接种环进行灭菌。
（3）纯化后的乳糖酶可用电泳法检测其分子量大小。在相同条件下，带电荷相同的蛋白质电泳速度越快，说明其分子量 。
（4）乳糖酶宜采用化学结合法（共价键结合法）进行固定化，可通过检测固定化乳糖酶的 除化学结合法外，酶的固定化方法还包括、离子吸附法及交联法等。
【答案】（1）乳糖（2分）； 凝固剂； 选择培养基（2分）
（2）灼烧
（3）小（2分）
（4）（酶）活性[或：（酶）活力]；（2分） 包埋法；物理吸附法（注：两空可颠倒） 四川卷：
10.（2014）（11分）苯磺隆是一种除草剂，长期使用会污染环境。研究发现，苯磺隆能被土壤中某些微生物降解。分离能降解苯磺隆的菌株和探索其降解机制的实验过程如图甲、
乙
所示。
（1）微生物生长繁殖所需的主要营养物质和碳源、水、四类，该实验所用的选择培养基只能以苯磺隆作为唯一碳源，其原因是。
（2）与微生物培养基相比，植物组织培养的培养基常需添加生长素和，这些植物激素一般需要事先单独配制成保存备用。
（3）纯化菌株时，通常使用的划线工具是。划线的某个平板培养后，第一划线区域的划线上都不间断地长满了菌，第二划线区域所划的第一条线上无菌落，其它划线上有菌落。造成划线无菌落可能的操作失误有。
（4）为探究苯磺隆的降解机制，将该菌种的培养液过滤离心，取上清液做图乙所示实验。该实验假设是，该实验设计是否合理？为什么？。
答案：
(1) N源和无机盐，目的菌株能够降解苯磺隆，能以苯磺隆为碳源生存，而其他微生物不能
（2）细胞分裂素，母液
（3）接种环，接种环灼烧后未冷却即划线
（4）该菌种能产生降解苯丙隆的蛋白酶。不合理缺少对照组实验
3．（2015）下列是以酵母菌为材料进行的实验，有关叙述错误的是
A．探究酵母菌的呼吸方式，可用溴麝香草酚蓝检测产生的CO2
B．用酵母菌发酵酿制果酒，选择酸性重铬酸钾检测产生的酒精
C．探究酵母菌种群数量变化，应设空白对照排除无关变量干扰
D．用稀释涂布平板法培养计数，应选择有30～300菌落数的平板
答案：C
选修三：现代生物科技专题15分
40.（2010）请回答：
（1）植物微型繁殖技术属于植物组织培养的范畴。该技术可以保持品种的 ，繁殖种苗的速度 。离体的叶肉细胞在适宜的条件下培养，最终能够形成完整的植株，说明该叶肉细胞具有该植物的全部 。
(2)把试管苗转接到新的培养基上时，需要在超净工作台上进行，其原因是避免 的污染。
（3）微型繁殖过程中，适宜浓度的生长素单独使用可诱导试管苗 ，而与 配比适宜时可促进芽的增殖。若要抑制试管苗的生长，促使愈伤组织产生和生长，需尊使用的生长调节剂是 (脱落酸、2，4-D)。
（4）将某植物试管苗培养在含不同浓度蔗糖的培养基上一段时间后，单株鲜重和光合作用强度的变化如图。据图分析，随着培养基中蔗糖浓度的增加，光合作用强度的变化趋势是 ，单株鲜重的变化趋势是 。据图判断，培养基中不含蔗糖时，试管苗光合作用产生的有机物的量 (能、不能)满足自身最佳生长的需要。
(5)据图推测，若要在诱导试管苗生根的过程中提高其光合作用能力，应 (降低，增加)培养基中蔗糖浓度，以便提高试管苗的自养能力。
答案：（1）遗传特性 快 遗传信息
（2）微生物
（3）生根 细胞分裂素 2,4-D
（4）逐渐减小 先增加后下降 不能
（5）降低
（2011）现有一生活污水净化处理系统，处理流程为“厌氧沉淀池曝光池兼氧池植物池”，其中植物池中生活着水生植物、昆虫、鱼类、蛙类等生物。污水经净化处理后，可用于浇灌绿地。回答问题：
（1）污水流经厌氧沉淀池、曝气池和兼氧池后得到初步净化。在这个过程中，微生物通过 呼吸将有机物分解。
（2）植物池中，水生植物、昆虫、鱼类、蛙类和底泥中的微生物共同组成了 （生态系统、群落、种群）。在植物池的食物网中，植物位于第 营养级。植物池中所有蛙类获得的能量最终来源于 所固定的 能。
（3）生态工程所遵循的基本原理有整体性、协调与平衡、 和 等原理
（4）一般来说，生态工程的主要任务是对 进行修复，对造成环境污染和破坏的生产方式进行改善，并提高生态系统的生产力。
40．【答案】（1）无氧和有氧（或细胞） （2）群落 一 生产者 太阳 （3）物质循环再生 物种多样性 （4）已被破坏的生态环境（或受损的生态环境）
40．（2012）根据基因工程的有关知识，回答下列问题：
（１）限制性内切酶切割ＤＮＡ分子后产生的片段，其末端类型有 和 。 （２）投料运载体用EcoRⅠ切割后产生的片段如下：
为使运载体与目的基因相连，含有目的基因的DNA除可用EcoRⅠ切割外，还可用另一种限制性内切酶切割，该酶必须具有的特点是 。
（３）按其来源不同，基因工程中所使用的DNA连接酶有两类，即 DNA连接酶和 DNA连接酶。
（４）反转录作用的模板是 ，产物是 。若要在体外获得大量反转录产物，常采用 技术。
（５）基因工程中除质粒外， 和 也可作为运载体。
（６）若用重组质粒转化大肠杆菌，一般情况下，不能直接用未处理的大肠杆菌作为受体细胞，原因是 。
（1）黏性末端 平末端
（2）能识别EcoRI识别的核苷酸序列，并且断开与EcoRI断开相同的两个核苷酸之间的磷酸二酯键
（3）E·coli T4 （4）RNA DNA PCR
（5）λ噬菌体的衍生物 动植物病毒等
（6）需要用Ca2+处理，使大肠杆菌处于感受态才能吸收周围环境中的DNA
（2013）甲、乙是染色体数目相同的两种二倍体药用植物，甲含有效成分A，乙含有效成分B。某研究小组拟培育同时含有A和B的新型药用植物。
（1）为了培育该新型药用植物，可取甲和乙的叶片，先用 酶和 酶去除细胞壁，
获得具有活力的 ，再用化学诱导剂诱导二者融合，形成融合细胞进一步培养形成 组织，然后经过 形成完整的杂种植株，这种培育技术称为 。
（2）上述杂种植株属于多倍体，多倍体是指 。假设甲与乙有性杂交的后代是不育的，而上述杂种植株是可育的，造成这种差异的原因是 。
（3）这种杂种植株可通过制作人工种子的方法来大量繁殖，经植物组织培养得到的 等材料用人工薄膜包装后得到人工种子。
答案：（1）纤维素酶（1分）果胶酶（1分） 原生质体（2分） 愈伤（2分） 再分化（或分化）（2分） 植物体细胞杂交 （1分）
（2）体细胞中含有三个或三个以上染色体组的个体（2分） 减数分裂过程中，前者染色体联会异常，而后者染色体联会正常 （3分）
（3）胚状体、不定芽、丛芽、腋芽（1分，答对其中一个即给分）
（2014）植物甲具有极强的耐旱性，其耐旱性与某个基因有关。若从该植物中获得该耐旱基因，并将其转移到耐旱性低的植物乙中，有可能提高后者的耐旱性。
回答下列问题：
（1）理论上，基因组文库含有生物的 基因；而cDNA文库中含有生物的 基因。
（2）若要从植物甲中获得耐旱基因，可首先建立该植物的基因组文库，再从中 出所需的耐旱基因。
（3）将耐旱基因导入农杆菌，并通过农杆菌转化法将其导入植物 的体细胞中，经过一系列的过程得到再生植株。要确认该耐旱基因是否在再生植株中正确表达，应检测此再生植株中该基因的 ，如果检测结果呈阳性，再在田间试验中检测植株的 是否得到提高。
（4）假如用得到的二倍体转基因耐旱植株自交，子代中耐旱与不耐旱植株的数量比为3∶1时，则可推测该耐旱基因整合到了 （填“同源染色体的一条上”或“同源染色体的两条上”）。
答案：
（1）全部 部分
（2）筛选
（3）乙 表达产物 耐旱性
（4）同源染色体的一条上
（2015）已知生物体内有一种蛋白质（P），该蛋白质是一种转运蛋白，由305个氨基酸组成。如果将P分子中158位的丝氨酸变成亮氨酸，240位的谷氨酰胺变成苯丙氨酸，改变后的蛋白质（P1）不但保留P的功能，而且具有了酶的催化活性。回答下列问题：
（1）从上述资料可知，若要改变蛋白质的功能，可以考虑对蛋白质的进行改造。
（2）以P基因序列为基础，获得P1基因的途径有修饰基因或合成基因，所获得的基因表达时是遵循中心法则的，中心法则的全部内容包括的复制；以及遗传信息在不同分子之间的流动，即：。
（3）蛋白质工程也被称为第二代基因工程，其基本途径是从预期蛋白质功能出发，通过 和，进而确定相对应的脱氧核苷酸序列，据此获得基因，在经表达、纯化获得蛋白质，之后还需要对蛋白质的生物进行鉴定。
【答案】（1）氨基酸序列（或结构）（1分）
（2）P P1DNA和RNA
DNA→RNA、RNA→DNA、RNA→蛋白质（或转录、逆转录、翻译）
（3）设计蛋白质结构 推测氨基酸序列 功能
大纲卷：
2.（2013）关于动物细胞培养和植物组织培养的叙述，错误的是
A.动物细胞培养和植物组织培养所用培养基不同
B.动物细胞培养和植物组织培养过程中都要用到胰蛋白酶
C.烟草叶片离体培养能产生新个体，小鼠杂交瘤细胞可离体培养增殖
D.动物细胞培养可用于检测有毒物质，茎尖培养可用于植物脱除病毒
答案：B
5.（2013）下列实践活动包含基因工程技术的是
A.水稻F1 花药经培养和染色体加倍，获得基因型纯合新品种
B.抗虫小麦与矮秆小麦杂交，通过基因重组获得抗虫矮秆小麦
C.将含抗病基因的重组DNA导入玉米细胞，经组织培养获得抗病植株
D.用射线照射大豆使其基因结构发生改变，获得种子性状发生变异的大豆
答案：C
新课标1：
40．（2013）（15分）阅读如下资料：
资料甲：科学家将牛生长激素基因导入小鼠受精卵中，得到了体型巨大的“超级小鼠”；科学家用农杆菌转化法培育出了转基因烟草。
资料乙：T4溶菌酶在温度较高时容易失去活性。科学家用对编码T4溶菌酶的基因进行了改造，使其表达的T4溶菌酶第3位的异亮氨酸变为半胱氨酸，在该半胱氨酸与第97位的半胱氨酸之间形成一个二硫键，提高了T4溶菌酶的耐热性。
资料丙：兔甲和兔乙是同一物种的两个雌性个体，科学家将兔甲的受精卵发育成的胚胎移植到兔乙体内，成功产出兔甲的后代，证实了同一物种的胚胎可以在不同个体的体内发育。回答下列问题：
（1）资料甲属于基因工程范畴，将基因表达载体导入小鼠的受精卵中常用的 法。构建基因表达载体常用的工具酶是 和 。在培养有些转基因植物时，常用农杆菌转化法，农杆菌的作用是 。
（2）资料乙中的技术属于 工程的范畴，该工程是以分子生物学相关理论为基础，通过基因修饰或基因合成，对 进行改造，或制造一种 的技术。在该实例中，引起T4溶菌酶空间结构改变的原因是组成该酶的肽链的 序列发生了改变。
（3）资料丙属于胚胎工程范畴。胚胎移植是指将获得的早期胚胎移植到 种的、生理状态相同的另一个雌性个体内，使之继续发育成新个体的技术。在资料丙的实例中，兔甲称为 体，兔乙称为 体。
答案：
（1）显微注射法 限制性内切酶 DNA连接酶 农杆菌可感染植物，将目的基因转入到受体细胞中
（2）蛋白质 现有蛋白质 新的蛋白质 氨基酸
（3）同 供体 受体
40.（2014）某研究者用抗原（A）分别免疫3只同种小鼠（X、Y和Z），每只小鼠免疫5次，每次免疫一周后测定各小鼠血清抗体的效价（能检测出抗原抗体反应的血清最大稀释倍数），结果如下图所示。
若要制备杂交瘤细胞，需取免疫后小鼠的B淋巴细胞（染色体数目40条），并将该细胞与体外培养的小鼠骨髓瘤细胞（染色体数目60条）按一定比例加入试管中，再加入聚乙二醇诱导细胞融合，经筛选培养及抗体检测，得到不断分泌抗A抗体的杂交瘤细胞。 回答下列问题：
（1）制备融合所需的B淋巴细胞时，所用免疫小鼠的血清抗体效价需达到16000以上，则小鼠最少需要经过 次免疫后才能有符合要求的。达到要求后的X、Y、Z这3只免疫小鼠中，最适合用于制备B淋巴细胞的是 小鼠，理由是 。
（2）细胞融合实验完成后，融合体系中除含有未融合的细胞和杂交瘤细胞外，可能还有 ，体系中出现多种类型细胞的原因是 。
（3）杂交瘤细胞中有 个细胞核，染色体数目最多是 条。
（4）未融合的B淋巴细胞经多次传代培养后都不能存活，原因是 。
【答案】
（1）四 Y Y小鼠的抗体效价最高
（2）B淋巴细胞相互融合形成的细胞，骨髓瘤细胞相互融合形成的细胞 细胞融合是随机的，且融合率达不到100%
（3）1 100
（4）不能无限增殖
40.（2015）HIV属于逆转录病毒，是艾滋病的病原体。回答下列问题：
（1）用基因工程方法制备HIV的某蛋白（目的蛋白）时，可先提取HIV中的________，以其作为模板，在________的作用下合成________，获取该目的蛋白的基因，构建重组表达载体，随后导入受体细胞。
（2）从受体细胞中分离纯化出目的蛋白，该蛋白作为抗原注入机体后，刺激机体产生的可与此蛋白结合的相应分泌蛋白是________，该分泌蛋白可用于检测受试者血清中的HIV，检测的原理是________________。
（3
）已知某种菌导致的肺炎在健康人群中罕见，但是在艾滋病患者中却多发。引起这种现
象的根本原因是HIV主要感染和破坏了患者的部分________细胞，降低了患者免疫系统的防卫功能。
（4）人的免疫系统有________癌细胞的功能。艾滋病患者由于免疫功能缺陷，易发生恶性肿瘤。
【答案】
（1）RNA 逆转录酶 cDNA（或DNA）（每空2分，共6分）
（2）抗体（2分） 抗原抗体特异性结合（3分，其他合理答案也给分）
（3）T（或T淋巴）（2分）
（4）监控和清除（2分）
安徽卷：
31.（2015）（24分）
II.（9分）科研人员采用转基因体细胞克隆技术获得转基因绵羊，以便通过乳腺生物反应器生产人凝血因子IX医用蛋白，其技术路线如图。
（1）由过程获得的A为 。
（2）在核移植前，必须先去掉卵母细胞的核。目的是 ，受体应选用 期卵母细胞。
（3）进行胚胎移植时，
代孕母羊对置入子宫的重组胚胎基本上不发生 ，这是为重组胚胎在代孕母羊体内的存活提供了可能。
（4）采用胎儿成纤维细胞进行转基因体细胞克隆，理论上可获得无限个转基因绵羊，这是因为 。
答案：
II（1）含目的基因的表达载体
（2）保证核遗传物质来自目的基因的成纤维细胞 MII中
（3）免疫排斥反应
（4）整合含有目的基因的成纤维细胞可进行传代培养
北京卷：
5 （2015）在应用农杆菌侵染植物叶片获得转基因植株的常规实验步骤中，不需要的是
A．用携带目的基因的农杆菌侵染植物细胞
B．用选择培养基筛选导入目的基因的细胞
C．用聚乙二醇诱导转基因细胞的原生质体融合
D．用适当比例的生长素和细胞分裂素诱导愈伤组织生芽
【答案】C
福建卷：
27.（2014） (12 分) 为研究汽车尾气中可吸入颗粒物对人成熟T淋巴细胞的影响,用含不同浓度颗粒物的培养液培养T淋巴细胞,48h后检测Na+－K+－ATP 酶活性及细胞活力。实验结果如下:
SDH是总有氧呼吸关键酶。细胞活力通过测定各组细胞SDH总活性来表示,用于反映颗粒物对细胞的毒性,SDH总活性由该组细胞数及每个细胞SDH酶活性共同决定
(1)根据表中相关信息将答题卡中柱状图补充完整。
(2)细胞培养时,需使用血细胞计数板进行计数。请用方框在答题卡血细胞计数室图中标出计数区域。
(3)本实验毒性评价指标所反映的颗粒物对T淋巴细胞的毒性,或表现为杀伤作用致细胞数减少,或表现为抑制了细胞的 (生理过程)。 实验数据表明,随着颗粒物浓度的增加,颗粒物对T淋巴细胞的毒性 。
(4)汽车尾气中含有的多种致癌因子会损伤DNA,使常。长期汽车尾气暴露的人群,其T淋巴细胞执行的 免疫功能障碍,导致识别、攻击癌细胞能力降低,癌症发病风险提高。
答案：
(3)有氧呼吸 增大
(4)抑癌 细胞
33. （2014）[生物-现代生物科技专题]必答题(10分) Rag2 基因缺失小鼠不能产生成熟的淋巴细胞。科研人员利用胚胎干细胞(ES细胞)对Rag2 基因缺失小鼠进
行基因治疗。其技术流程如图
:
（1）步骤①中,在核移胚植前应去除卵母细胞的
（2）步骤②中，重组胚胎培养到 期时,可从其内细胞团分离出 ES 细胞。
（3）步骤③中,需要构建含有Rag2 基因的表达载体。可以根据Rag2 基因的
设计引物,利用PCR 技术扩增 Rag2 基因片段。 用 HindⅢ和 PstⅠ 限制酶分别在片段两侧进行酶切获得 Rag2 基因片段。为将该片段直接连接到表达载体,所选择的表达载体上应具有 的酶切位点。
(4)为检测Rag2 基因的表达情况,可提取治疗后小鼠骨髓细胞的,用抗Rag2 蛋白的抗体进行杂交实验。
答案：
(1)细胞核
(2)囊胚
(3)核苷酸序列 HindⅢ和 PstⅠ 限制酶
(4)蛋白质
33．（2015）【生物-现代生物科技专题】（10分）
GDNF是一种神经营养因子。对损伤的神经细胞具有营养和保护作用。研究人员构建了含GDNF基因的表达载体（如图1所示），并导入到大鼠神经干细胞中，用于干细胞基因治疗的研究。请回答：
（1）在分离和培养大鼠神经干细胞的过程中，使用胰蛋白酶的目的是 。
（2）构建含GDNF基因的表达载体时，需选择图1中的 限制酶进行酶切。
（3）经酶切后的载体和GDNF基因进行连接，连接产物经筛选得到的载体主要有三种：单个载体自连、GDNF基因与载体正向连接、GDNF基因与载体反向连接（如图1所示）。为鉴定这3种连接方式，选择HpaI酶和BamHI酶对筛选的载体进行双酶切，并对酶切后的DNA片段进行电泳分析，结果如图2所示。图中第 泳道显示所鉴定的载体是正向连接的。
（4）将正向连接的表达载体导入神经干细胞后，为了检测GDNF基因是否成功表达，可用相应的 与提取的蛋白质杂交。当培养的神经干细胞达到一定的密度时，需进行
【答案】（1）使细胞分散开 （2）XhoI （3）② （4）抗体 传代
广东卷：
25（2014）利用基因工程技术生产羧酸酯酶（CarE）制剂的流程如图14所示，下列叙述正确的是（ ）
A、过程①需使用逆转录酶
B、过程②需使用解旋酶和PCR获取目的基因
C、过程③使用的感受态细胞可用NaCl溶液制备
D、过程④可利用DNA分子杂交鉴定目的基因是否已导入受体细胞
答案：AD
25.（2015）图9为培育转基因山羊生产人β-酪蛋白的流程图
下列叙述正确的是
A．过程①所用的人β-酪蛋白基因可从人C-DNA文库中获得
B. 过程②可选用囊胚期或原肠胚期的胚胎进行移植
C．过程③可使用胚胎分割技术扩大转基因山羊群体
D．过程④人β-酪蛋白基因在细胞质内进行转录、翻译
答案：AC
山东卷：
12.（2014）人组织纤溶酶原激活物（htPA）是一种重要的药用蛋白，可在转htPA基因母羊的羊乳中获得。流程如下：
（1）htPA基因与载体用_________切割后，通过DNA连接酶连接，以构建重组表达载体。检测目的基因是否已插入受体细胞DNA，可采用_________技术。
（2）为获取更多的卵（母）细胞，要对供体母羊注射促性腺激素，使其__________。采集的精子需要经过__________，才具备受精能力。
（3）将重组表达载体导入受精卵常用的方法是__________。为了获得母羊，移植前需对已成功转入目的基因的胚胎进行__________。利用胚胎分割和胚胎移植技术可获得多个转基因个体，这体现了早期胚胎细胞的__________。
（4）若在转ht-PA基因母羊的羊乳中检测到__________，说明目的基因成功表达。 答案：
（1）同种限制性核酸内切酶（或同种限制酶）； DNA分子杂交（或核酸探针）
（2）超数排卵； 获能（处理）
（3）显微注射法； 性别鉴定； 全能性
（4）htPA（或人组织纤溶酶原激活物）
36. （2015）（12分）【生物—现代生物科技专题】
治疗性克隆对解决供体器官缺乏和器官移植后免疫排斥反应具有重要意义。流程如下：
（1）过程①采用的是细胞工程中的 技术，过程②采用的是胚胎工程中的 技术。
（2）体细胞进行体外培养时，所需气体主要有O2和CO2，其中CO2的作用是维持培养液（基）的 。
（3）如果克隆过程中需要进行基因改造，在构建基因表达载体（重组载体）时必须使用 两种工具酶。基因表达载体上除目的基因外，还需要有基因，以便选出成功导入基因表达载体的细胞。
（4）胚胎干细胞可以来自囊胚中的 。在一定条件下，胚胎干细胞可以分化形成不同的组织器官。若将图中获得的组织器官移植给个体 （填“A”或“B”），则不会发生免疫排斥反应。
【答案】（1）（体细胞）核移植 （早期）胚胎培养 （2）PH （3）限制性（核酸）内切酶（或：限制酶） 标记 （4）内细胞团 B
四川卷：
9.（2015）（11分）将是苏云金杆菌Bt
蛋白的基因导入棉花细胞中，可获得抗棉铃虫的转基
因棉，其过程如下图所示（注：农杆菌中Ti质粒上只有T-DNA片段能转移到植物细胞中）。
(1)过程①需用同种Bt基因的DNA和Ti质粒进行酶切。为将过程②获得的含重组质粒的农杆菌筛选出来，应使用 培养基。
(2)过程③中将棉花细胞与农杆菌混合后共同培养，旨在让进入棉花细胞；除尽农杆菌后，还须转接到含卡那霉素的培养基上继续培养，目的是 。
(3)若过程④仅获得大量的根，则应在培养基中增加以获得芽；部分接种在无激素培养基上的芽也能长根，原因是 。
(4)检验转基因棉的抗虫性状，常用方法是的使用，以减轻环境污染。
答案：
（1）限制酶 选择
（2）T-DNA 筛选获得T-DNA片段的棉花细胞
（3）细胞分裂素 芽本身合成的生长素向基部运输，促进根的分化
（4）投放棉铃虫 农药
天津卷：
4.（2014）为达到相应目的，必须通过分子检测的是
A.携带链霉素抗性基因受体菌的筛选
B.产生抗人白细胞介素－8抗体的杂交瘤细胞的筛选
C.转基因抗虫棉植株抗虫效果的鉴定
D.21三体综合征的诊断
【答案】B
8.（2014）（12分）嗜热土壤芽胞杆菌产生的β-葡萄糖苷酶（BglB）是一种耐热纤维素酶，为使其在工业生产中更好地应用，开展了以下试验：
Ⅰ.利用大肠杆菌表达BglB酶
（1）PCR扩增bglB基因时，选用 基因组DNA作模
板。
（2）右图为质粒限制酶酶切图谱。bglB基因不含图中限制酶
识别序列。为使PCR扩增的bglB基因重组进该质粒，扩增的bglB
基因两端需分别引入 和 不同限制酶的识
别序列。
（3）大肠杆菌不能降解纤维素，但转入上述建构好的表达载
体后则获得了降解纤维素的能力，这是因为 。
Ⅱ.温度对BglB酶活性的影响
（4）据图1、2可知，80℃保温30分钟后，BglB酶会 ；为高效利用BglB酶降解纤维素，反应温度最好控制在 （单选）。
A.50℃ B.60℃ C.70℃ D.80℃
Ⅲ.利用分子育种技术提高BglB酶的热稳定性
在PCR扩增bglB基因的过程中，加入诱变剂可提高bglB基因的突变率。经过筛选，可获得能表达出热稳定性高的BglB酶的基因。
（5）与用诱变剂直接处理嗜热土壤芽胞杆菌相比，上述育种技术获得热稳定性高的BglB酶基因的效率更高，其原因是在PCR过程中（多选）。
A.仅针对bglB基因进行诱变 B.bglB基因产生了定向突变
C.bglB基因可快速累积突变 D.bglB基因突变不会导致酶的氨基酸数目改变
【答案】
（1）嗜热土壤芽孢杆菌
（2）NdeⅠ BamHⅠ
（3）转基因的大肠杆菌分泌出有活性的BglB酶
（4）失活 B
（5）A、C
7.（2015） DHA对脑神经发育至关重要。以A、B两种单细胞真核藻为亲本，利用细胞融合
据表回答：
（1）选育的融合藻应具有A藻
与B藻 的优点。
（2）诱导融合前需用纤维素酶处理两种藻，其目的是获得 。
（3）通过以下三步筛选融合藻，步骤 可淘汰B藻，步骤 可淘汰生长速成率较慢的藻落，再通过步骤 获取生产所需的融合藻。
步骤a：观察藻落的大小
步骤b:用不含有机碳源（碳源——生物生长的碳素来源）的培养基进行光照培养 步骤c：测定DHA含量
（4）以获得的融合藻为材料进行甲、乙、丙三组试验，结果如下图。
①甲组条件下，融合藻产生[H]的细胞器是 ；丙组条件下产生ATP的细胞器是 。 ②与甲、丙两组相比，乙组融合藻生长速率较快，原因是在该培养条件下 。甲、乙两组DHA产量均较高，但实际生产中往往采用甲组的培养条件，其原因是 。
【答案】
（1）产生DHA、自养特性 快速生长
（2）原生质体
（3）b a c
（4）①线粒体、叶绿体 线粒体
②融合藻既能光能自养又能异养
融合藻利用光能和简单的无机物即能生长，不需要添加葡萄糖，可降低成本，也可防止杂菌生长
8.（2015）纤维素分子不能进入酵母细胞，为了使酵母菌能够利用环境中的纤维素为原料生产酒精，构建了含3种不同基因片段的重组质粒，下面是酵母菌转化及纤维素酶在工程菌内合成与运输的示意图。
据图回答：
（1）本研究构建重组质粒时看选用四种限制酶，其识别序列如下图，为防止酶切片段的自身环接，可选用的限制酶组合是______或__________
(2)设置菌株Ⅰ为对照，是为了验证__________不携带纤维素酶基因。
(3)纤维素酶基因的表达包括__________和__________过程，与菌株Ⅱ相比，在菌株Ⅲ、Ⅳ中参与纤维素酶合成和分泌的细胞器还有______________________________。
（4）在以纤维素为唯一C源的培养基上分别培养菌株Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ，菌株___________不能存活，原因是_________________________________。
(5)酵母菌生产酒精的细胞部位是___________，产生酒精时细胞的呼吸方式是___________，在利用纤维素生产酒精时，菌株Ⅳ更具有优势，因为导入的中重组质粒含有____________。使分泌的纤维素酶固定于细胞壁，减少因培养液更新二造成的酶的流失，提高酶的利用率。
【答案】
（1）B (或C) C (或B)
(2)质粒DNA和酵母菌基因组
（3）转录 翻译 内质网、高尔基体
（4）II
缺少信号肽编码序列，合成的纤维素酶不能分泌到胞外，细胞无可利用的碳源
（5）细胞质基质 无氧呼吸 A基因片段
浙江卷：
3.（2014）下列关于动物细胞培养的叙述，正确的是
A.连续细胞系的细胞大多具有二倍体核型
B.某些癌细胞在合适条件下能逆转为正常细胞
C.由多个祖细胞培养形成的细胞群为一个克隆
D.未经克隆化培养的细胞系细胞具有相同的性状
【答案】B
重庆卷：
2.（2014）生物技术安全性和伦理问题是社会关注的热点。下列叙述，错误的是
A. 应严格选择转基因植物的目的基因，避免产生对人类有害的物质
B. 当今社会的普遍观点是禁止克隆人的实验，但不反对治疗性克隆
C. 反对设计试管婴儿的原因之一是有人滥用次技术选择性设计婴儿
D. 生物武器是用微生物、毒素、干扰素及重组致病菌等来形成杀伤力
答案：D
1. （2014）题4图利用基因工程培育抗虫植物的示意图。以下相关叙述，正确的是
题4图
A．②的构建需要限制性核酸内切酶和DNA聚合酶参与
B．③侵染植物细胞后，重组Ti质粒整合到④的染色体上
C. ④的染色体上若含抗虫基因，则⑤就表现出抗虫性状
D. ⑤只要表现出抗虫性状就表明植株发生了可遗传变异
答案：D
8．（2015）（20分）某课题组为解决本地种奶牛产奶量低的问题，引进了含高产奶基因但对本地适应性差的纯种公牛。
（1）拟进行如下杂交：
♂A（具高产奶基因的纯种）×♀B（具适宜本地生长基因的纯种）→C
选择B作为母本，原因之一是胚胎能在母体内正常＿＿＿＿＿＿。若C中的母牛表现为适宜本地生长，但产奶量并未提高，说明高产奶是＿＿＿性状。为获得产奶量高且适宜本地生长的母牛，根据现有类型，最佳杂交组合是＿＿＿＿＿，后代中出现这种母牛的概率是＿＿＿（假设两对基因分别位于不同对常染色体上）。
（2）用以上最佳组合，按以下流程可加速获得优良个体。
精子要具有受精能力，需对其进行＿＿＿处理；卵子的成熟在过程＿＿＿中完成。在过程④的培养基中含有葡萄糖，其作用是＿＿＿＿＿＿＿＿＿。为筛选出具有优良性状的母牛，过程⑤前应鉴定胚胎的＿＿＿＿＿＿。子代母牛的优良性状与过程＿＿＿的基因重组有关。
（3）为了提高已有胚胎的利用率，可采用＿＿＿＿＿＿技术。
【答案】
（1）生长发育或胚胎发育 隐性 ♂A×♀C 1/8
（2）获能或增强活力 ③ 供能 性别、高产奶和适应生长的基因 ②
（3）胚胎分割
选修一：生物技术实践15分
39．（2010）下列是与芳香油提取相关的问题，请回答：
（1）玫瑰精油适合用水蒸气蒸馏法提取，其理由是玫瑰精油具有 的性质。蒸馏时收集的蒸馏液 (是、不是)纯的玫瑰精油，原因是 。
（2）当蒸馏瓶中的水和原料量一定时，蒸馏过程中，影响精油提取量的主要因素有蒸馏时间和 。当原料量等其他条件一定时，提取量随蒸馏时间的变化趋势是 。
（3）如果蒸馏过程中不进行冷却，则精油提取量会 ，原因是 。
（4）密封不严的瓶装玫瑰精油保存时最好存放在温度 的地方，目的是 。
（5）某植物花中精油的相对含量随花的不同生长发育时期的变化趋势如图所示。提取精油时采摘花的最合适时间为
天左右。
(6)从薄荷叶中提取薄荷油时 (能、不能)采用从玫瑰花中提取玫瑰精油的方法，理由是 。
答案：（1）易挥发、难溶于水、化学性质稳定 不是
玫瑰精油随水蒸气一起蒸馏出来，所得到的是油水混合物
（2）蒸馏温度 一定的时间内提取量随蒸馏时间的延长而增加，一定时间后提取量不再增加
（3）下降 部分精油会随水蒸气挥发而流失
（4）较低 减少挥发
（5）a
（6）能 薄荷油与玫瑰精油的化学性质相似
（2011）有些细菌可分解原油，从而消除由原油泄漏造成的土壤污染。某同学欲从受原油污染的土壤中筛选出高效降解原油的菌株。回答问题：
（1）在筛选过程中，应将土壤样品稀释液接种于以 为唯一碳源的固体培养基上，从功能上讲，该培养基属于 培养基。
（2）纯化菌种时，为了得到单菌落，常采用的接种方法有两种，即 和 。
（3）为了筛选出高效菌株，可比较单菌落周围分解圈的大小，分解圈说明该菌株的降解
能力 。
（4）通常情况下，在微生物培养过程中实验室常用的灭菌方法有灼烧灭菌、 和
附近进行，以避免周围环境中微生物的污染。
39. 【答案】（1）原油 选择 （2）平板划线法 稀释涂布平板法 （3）强 （4）
干热灭菌 高压蒸汽灭菌 火焰
39．（2012）为了探究6-BA和IAA对某菊花品种茎尖外植体再生丛芽的影响，某研究小组在ＭＳ培养基中加入6-BA和IAA，配制成四种培养基（见下表），灭菌后分别接种数量相同、生长状态一致、消毒后的茎尖外植体，在适宜条件下培养一段时间后，统计再生丛芽外植体的比率（m），以及再生丛芽外植体上的丛芽平均数（n），结果如下表。
回答下列问题：
（１）按照植物的需求量，培养基中无机盐的元素可分为 和 两类。上述培养基中，6-BA属于 类生长调节剂。
（２）在该实验中，自变量是 ，因变量是 ，自变量的取值范围是 。 （３）从实验结果可知，诱导丛芽总数最少的培养基是 号培养基。
（４）为了诱导该菊花试管苗生根，培养基中一般不加入 （填“6-BA”或“IAA”）。
（1）大量元素 微量元素 细胞分裂素
（2）IAA的浓度 菊花再生丛芽外植体的比率和外植体上的丛芽平均数 0—0.5mg.L-1
（3）1 （4）6-BA
（2013）临床使用抗生素前，有时需要做细菌耐药实验。实验时，首先要从病人身上获取少量样本，然后按照一定的实验步骤操作，以确定某致病菌对不抗生素的敏感性。
回答下列问题：
（1）为了从样本中获取致病菌单菌落，可用 法或 法将样本接种于固体培养基表面，经过选择培养、鉴别等步骤获得。
（2）取该单菌落适当稀释，用 法接种于固体培养基表面，在37℃培养箱中培养24h，使其均匀生长，布满平板。
（3）为了检验该致病菌对于抗生素的敏感性，将分别含有A、B、C、D四种抗生素的滤纸片均匀置于该平板上的不同位置，培养一段时间后，含A的滤纸片周围出现透明圈，说明该致病菌对抗生素A ；含B的滤纸片周围没有出现透明圈，说明该致病菌对抗生素B ；含C的滤纸片周围透明圈比含A的小，说明 ；含D的滤纸片周围的透明圈也比含A的小，且透明圈中出现一个菌落，在排除杂菌污染的情况下，此菌落很可能是抗生素D的 。
（4）根据上述实验结果，为达到抗菌目的，最好应选用抗生素 。
答案：（1）划线 稀释涂布（或涂布） （每空2分，共4分）
（2）涂布 （1分）
（3）敏感；不敏感； 该致病菌对C的敏感性比对A的弱； 耐药菌（每空2分，共8分）
（4）A（2分）
（2014）为了调查某河流的水质状况，某研究小组测定了该河流水样中的细菌含量，并进行了细菌的分离等工作。回答下列问题：
（1）该小组采用稀释涂布平板法检测水样中的细菌含量。在涂布接种前，随机取若干
灭菌后的空平板先行培养了一段时间，这样做的目的是 ；然后，将1mL水样稀释100倍，在3个平板上用涂布法分别接入0.1mL稀释液；经适当培养后，3个平板上的菌落数分别为39、38和37。据此可得出每升水样中的活菌数为 。
（2）该小组采用平板划线法分离水样中的细菌。操作时，接种环通过 灭菌，
在第二次及以后划线时，总是从上一次的末端开始划线。这样做的目的是 。
（3）示意图A和B中， 表示的是用稀释涂布平板法接种培养后得到的结果。
（4）该小组将得到的菌株接种到液体培养基中并混匀，一部分进行静置培养，另一部
分进行振荡培养。结果发现：振荡培养的细菌比静置培养的细菌生长速度快。分析其原因是：
振荡培养能提高培养液的 的含量，同时可以使菌体与培养液充分接触，提高 的利用率。
答案：
（1）检测培养基平板灭菌是否合格 3.810
（2）灼烧 将聚集的菌体逐步稀释以便获得单个菌落
（3）B
（4）溶解氧 营养物质
（2015）回答与胡萝卜有关的问题：
（1）胡罗卜含有的胡罗卜素中，最主要的是（填“α—胡罗卜素”或“β—胡罗卜素”或“γ—胡罗卜素”），该胡罗卜素在人体内可以转变成两分子，后者缺乏会引起人在弱光下视物不清的病症，该疾病称为，胡罗卜素是（填“挥发性”或“非挥发性”）物质。
（2）工业生产上，用养殖的岩藻作为原料提取胡罗卜素时，（填“需要”或“不需要”）将新鲜的岩藻干燥。
（3）现有乙醇和乙酸乙酯两种溶剂，应选用其中的作为胡罗卜素的萃取剂，不选用另外一种的理由是。
2
【答案】（1）β—胡罗卜素 维生素A 夜盲症 非挥发性 （每空2分）
（2）需要（2分）
（3）乙酸乙酯（2分） 萃取胡罗卜素的有机溶剂应不与水混溶，而乙醇为水溶性有机溶剂（3分）
大纲卷：
34．（2010）（12分）下列是与微生物培养有关的问题，请回答：
（1）某细菌固体培养基的组成成分是KH2PO4、Na2HPO4、MgSO4、葡萄糖、尿素、琼脂和蒸馏水，其中凝固剂是＿＿＿＿＿＿＿，碳源是＿＿＿＿＿＿＿，氮源是＿＿＿＿＿＿＿。已知只有能合成脲酶的细菌才能在该培养基上生长，故该培养基属于＿＿＿＿培养基。按照化学成分分类，该培养基属于＿＿＿培养基。从同化作用类型上看，用该培养基培养的细菌属于＿＿＿＿。
（2）将少量细菌接种到一定体积的液体培养基中，适宜条件下培养，定时取样测定菌体数目，以时间为横坐标，以细菌数目的对数为纵坐标，可得到细菌的＿＿＿＿＿＿曲线。该曲线中以菌体数目的对数作为纵坐标的原因是＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿。实验室中，为了获得形态和生理特征 一致的菌体，一般应在＿＿＿期取材；在生产中，常搜集培养至＿＿＿期的细菌用于次级代谢产物的提取。
答案：
（1）琼脂 葡萄糖 尿素 选择 合成 异养型
（2）群体生长 菌体数目往往非常大，且变化率也很高，以菌体数目的对数为纵坐标有利于作图 对数 稳定
5.（2012）关于细菌的叙述中，正确的是
A.不同种类细菌的生长均需要相同碳源
B.常用液体培养基分离获得细菌单菌落
C.细菌大量培养过程中，芽孢形成于细菌生长的调整期
D.培养基中含有高浓度NaCl有利于金黄色葡萄球菌的筛选
【答案】D
4. （2014）某同学在①、②、③三种条件下培养大肠杆菌，这三种条件是：
①以葡萄糖为碳源的培养基，不断补充培养基，及时去除代谢产物
②以葡萄糖为碳源的培养基，不补充培养基，不去除代谢产物
③以葡萄糖和乳糖为碳源的培养基，不补充培养基，不去除代谢产物
根据培养结果绘制的一段时间内菌体数的对数随时间变化的趋势图如下：
假设三种培养基中初始总糖量相等，则①、②、③三种条件依次对应的趋势图是
A.甲、乙、丙 B.乙、丙、甲 C.丙、甲、乙 D.丙、乙、甲
【答案】C
新课标1：
39．（2013）（15分）回答下列有关泡菜制作的问题
（1）制作泡菜时，所用盐水需煮沸，其目的是 。为了缩短制作时间，有人还会在冷却后的盐水中加入少量陈泡菜液，加入陈泡菜液的目的是 。
（2）泡菜制作过程中，乳酸发酵的过程即为乳酸菌进行 的过程。该过程发生在乳酸菌细胞的 中。
（3）泡菜制作过程中影响亚硝酸盐含量的因素有 、 和 等。
（4）从开始制作到泡菜品质最佳这段时间内，泡菜叶逐渐变酸。这段时间内泡菜坛中乳酸菌和其他杂菌的消长规律是 ，原因是 。
答案：
（1）杀灭杂菌 增加乳酸菌数量
（2）无氧呼吸 细胞质
（3）温度、腌制时间 食盐用量
（4）乳酸菌数量增加，杂菌数量减少 乳酸菌比杂菌更为耐酸
39.（2014）植物秸秆中的纤维素可被某些微生物分解。回答下列问题:
（1）分解秸秆中纤维素的微生物能分泌纤维素酶，该酶是由3种组分组成的复合酶，其中的葡萄糖苷酶可将 分解成 。
（2）在含纤维素的培养基中加入刚果红（CR）时，CR可与纤维素形成 色复合物。用含有CR的该种培养基培养纤维素分解菌时，培养基上会出现以该菌的菌落为中心的 。
（3）为从富含纤维素的土壤中分离获得纤维素分解菌的单菌落，某同学设计了甲、乙两种
注：“+”表示有，“－”表示无。
据表判断，培养基甲 （填“能”或“不能”）用于分离和鉴别纤维素分解菌，原因是 ；培养基乙 （填“能”或“不能”）用于分离和鉴别纤维素分解菌，原因是 ；
【答案】
（1）纤维二糖 葡萄糖
（2）红色 透明圈
（3）不能 液体培养基不能分离单菌落 不能 乙培养基中没有纤维素，不会形成CR-纤维素红色复合物，即使出现单菌落也不能确定其为纤维素分解菌
39.（2015）已知微生物A可以产生油脂，微生物B可以产生脂肪酶。脂肪酶和油脂可用于生物柴油的生产。回答有关问题：
（1）显微观察时，微生物A菌体中的油脂通常可用________染色。微生物A产生的油脂不易挥发，可选用________（填“萃取法”或“水蒸气蒸馏法”）从菌体中提取。
（2）为了从自然界中获得能产生脂肪酶的微生物B的单菌落，可从含有油料作物种子腐烂物的土壤中取样，并应选用以________为碳源的固体培养基进行培养。
（3）若要测定培养液中微生物B的菌体数，可在显微镜下用________________直接计数；若要测定其活菌数量，可选用________________法进行计数。
（4）为了确定微生物B产生的脂肪酶的最适温度，某同学测得相同时间内，在35℃、40℃、45℃温度下降解10g油脂所需酶量依次为4mg、1mg、6mg，则上述三个温度中，________ ℃条件下该酶活力最小。为了进一步确定该酶的最适温度，应围绕________℃设计后续实验。
【答案】
（1）苏丹Ⅲ（或苏丹Ⅳ） 萃取法（每空2分，共4分）
（2）油脂（3分，其他合理答案也给分）
（3）血细胞计数板 稀释涂布平板（每空2分，共4分，其他合理答案也给分）
（4）45 40（每空2分，共4分）
广东卷：
4、（2014）下列叙述错误的是（ ）
A、醋酸菌在无氧条件下利用乙醇产生醋酸
B、酵母菌在无氧条件下利用葡萄糖汁产生酒精
C、泡菜腌制利用了乳酸菌的乳酸发酵
D、腐乳制作利用了毛霉等微生物的蛋白酶和脂肪酶
【答案】A
29（2014）（16分）铁皮石斛是我国名贵中药，生物碱是其有效成分之一，应用组织培养技术培养铁皮石斛拟原球茎（简称PLBs，类似愈伤组织）生产生物碱的实验流程如下：
在固体培养基上，PLBs的重量、生物碱含量随增殖培养时间的变化如图17所示，请回答下列问题：
⑴选用新生营养芽为外植体的原因是 ，诱导外植体形成PLBs的过程称 。 ⑵与黑暗条件下相比，PLBs在光照条件下生长的优势体现在 ， ， 。⑶脱落酸（ABA）能提高生物碱含量，但会抑制PLBs的生长。若采用液体培养，推测添加适量的ABA可提高生物碱产量。同学们拟开展探究实验验证该推测，在设计实验方案是探讨了以下问题：
①ABA的浓度梯度设置和添加方式：设4个ABA处理组，1个空白对照组，3次重复。因ABA受热易分解，故一定浓度的无菌ABA母液应在各组液体培养基②实验进程和取样：实验50天完成，每10天取样，将样品（PLBs）称重（g/瓶）后再测定生物碱含量。如初始（第0天）数据已知，实验过程中还需测定的样品数为 。 ③依所测定数据确定适宜的ABA浓度和培养时间：当某3个样品（重复样）的其对应的ABA浓度为适宜浓度，对应的培养时间是适宜培养时间。
答案：
（1）分裂能力强，全能性容易表达 脱分化
（2）增殖明显 有利于叶绿素的形成 进行光合作用制造有机物
（3）灭菌冷却 65 生物碱平均含量最大
29 .（2015）（16 分）泡菜是我国的传统食品之一，但制作过程中产生的亚硝酸盐对人体健康有潜在危害，某兴趣小组准备参加“科技创新大赛一”，查阅资料得到图11 .
（ l
）制作泡菜时，泡菜坛一般用水密封，目的是＿_
．乳酸菌发酵第一阶段的产物有 ＿.
（2）据图11，与第3 天相比，第8 天后的泡菜更适于食用，因为后者＿ ；PH值呈下降趋势，原因是＿ 。
（3）该小组得到一株“优选”乳酸菌（亚硝酸盐还原酶活力比普通乳酸菌高5倍），拟参考资料的实验方案和食盐浓度（4%-10%），探究与普通乳酸菌相比用“优选”乳酸菌制作泡菜过程中亚硝酸盐含量的高低，并确定其最适条件，请你设计一个实验结果记录表，并推测实验结果。
答案：
(1)阻止外界空气进入坛内， 造成缺氧的环境，利于乳酸发酵 丙酮酸、ATP、【H】
（2）亚硝酸盐含量显著降低 乳酸菌持续发酵导致泡菜乳酸含量逐渐增多
（3）泡菜亚硝酸盐含量记录表（mg/kg）
预测结果：与普通乳酸菌发酵相比，使用优选乳酸菌发酵，泡菜中的亚硝酸盐含量显著降低；第8天以后泡菜亚硝酸盐含量比7天前明显减少；食盐浓度5%左右有利于降低泡菜中的亚硝酸盐含量且不影响泡菜质量。
山东卷：
11.（2014）玉米是重要的粮食作物，经深加工可生产酒精、玉米胚芽油和果糖等。流程如下：
（1）玉米秸秆中的纤维素经充分水解后的产物可被酵母菌利用发酵生产酒精。培养酵母菌时，该水解产物为酵母菌的生长提供________。发酵过程中检测酵母菌数量可采用_______法或稀释涂布平板法计数。
（2）玉米胚芽油不易挥发，宜选用_______法或________法从玉米胚芽中提取。
（3）玉米淀粉经酶解形成的葡萄糖可在葡萄糖异构酶的作用下转化成果糖。利用________技术可使葡萄糖异构酶重复利用，从而降低生产成本。
（4）利用PCR技术扩增葡萄糖异构酶基因时，需用耐高温的_______催化。PCR一般要经历三十次以上的循环，每次循环包括变性、_______和_______三步。
答案：
（1）碳源； 显微镜直接计数
（2）压榨；萃取（注：两空可颠倒）
（3）固定化酶
（4）（Taq）DNA聚合酶；（低温）复性（或退火）；（中温）延伸
35.（2015）（12分）【生物—生物技术实践】
乳糖酶能够催化乳糖水解为葡萄糖和半乳糖，具有重要应用价值。乳糖酶的制备及固定化步骤如下：
（1）筛选产乳糖酶的微生物L时，宜用 作为培养基中的唯一碳源。培养基中琼脂的作用是 。从功能上讲，这种培养基属于 。
（2）培养微生物L前，宜采用 方法对接种环进行灭菌。
（3）纯化后的乳糖酶可用电泳法检测其分子量大小。在相同条件下，带电荷相同的蛋白质电泳速度越快，说明其分子量 。
（4）乳糖酶宜采用化学结合法（共价键结合法）进行固定化，可通过检测固定化乳糖酶的 除化学结合法外，酶的固定化方法还包括、离子吸附法及交联法等。
【答案】（1）乳糖（2分）； 凝固剂； 选择培养基（2分）
（2）灼烧
（3）小（2分）
（4）（酶）活性[或：（酶）活力]；（2分） 包埋法；物理吸附法（注：两空可颠倒） 四川卷：
10.（2014）（11分）苯磺隆是一种除草剂，长期使用会污染环境。研究发现，苯磺隆能被土壤中某些微生物降解。分离能降解苯磺隆的菌株和探索其降解机制的实验过程如图甲、
乙
所示。
（1）微生物生长繁殖所需的主要营养物质和碳源、水、四类，该实验所用的选择培养基只能以苯磺隆作为唯一碳源，其原因是。
（2）与微生物培养基相比，植物组织培养的培养基常需添加生长素和，这些植物激素一般需要事先单独配制成保存备用。
（3）纯化菌株时，通常使用的划线工具是。划线的某个平板培养后，第一划线区域的划线上都不间断地长满了菌，第二划线区域所划的第一条线上无菌落，其它划线上有菌落。造成划线无菌落可能的操作失误有。
（4）为探究苯磺隆的降解机制，将该菌种的培养液过滤离心，取上清液做图乙所示实验。该实验假设是，该实验设计是否合理？为什么？。
答案：
(1) N源和无机盐，目的菌株能够降解苯磺隆，能以苯磺隆为碳源生存，而其他微生物不能
（2）细胞分裂素，母液
（3）接种环，接种环灼烧后未冷却即划线
（4）该菌种能产生降解苯丙隆的蛋白酶。不合理缺少对照组实验
3．（2015）下列是以酵母菌为材料进行的实验，有关叙述错误的是
A．探究酵母菌的呼吸方式，可用溴麝香草酚蓝检测产生的CO2
B．用酵母菌发酵酿制果酒，选择酸性重铬酸钾检测产生的酒精
C．探究酵母菌种群数量变化，应设空白对照排除无关变量干扰
D．用稀释涂布平板法培养计数，应选择有30～300菌落数的平板
答案：C
选修三：现代生物科技专题15分
40.（2010）请回答：
（1）植物微型繁殖技术属于植物组织培养的范畴。该技术可以保持品种的 ，繁殖种苗的速度 。离体的叶肉细胞在适宜的条件下培养，最终能够形成完整的植株，说明该叶肉细胞具有该植物的全部 。
(2)把试管苗转接到新的培养基上时，需要在超净工作台上进行，其原因是避免 的污染。
（3）微型繁殖过程中，适宜浓度的生长素单独使用可诱导试管苗 ，而与 配比适宜时可促进芽的增殖。若要抑制试管苗的生长，促使愈伤组织产生和生长，需尊使用的生长调节剂是 (脱落酸、2，4-D)。
（4）将某植物试管苗培养在含不同浓度蔗糖的培养基上一段时间后，单株鲜重和光合作用强度的变化如图。据图分析，随着培养基中蔗糖浓度的增加，光合作用强度的变化趋势是 ，单株鲜重的变化趋势是 。据图判断，培养基中不含蔗糖时，试管苗光合作用产生的有机物的量 (能、不能)满足自身最佳生长的需要。
(5)据图推测，若要在诱导试管苗生根的过程中提高其光合作用能力，应 (降低，增加)培养基中蔗糖浓度，以便提高试管苗的自养能力。
答案：（1）遗传特性 快 遗传信息
（2）微生物
（3）生根 细胞分裂素 2,4-D
（4）逐渐减小 先增加后下降 不能
（5）降低
（2011）现有一生活污水净化处理系统，处理流程为“厌氧沉淀池曝光池兼氧池植物池”，其中植物池中生活着水生植物、昆虫、鱼类、蛙类等生物。污水经净化处理后，可用于浇灌绿地。回答问题：
（1）污水流经厌氧沉淀池、曝气池和兼氧池后得到初步净化。在这个过程中，微生物通过 呼吸将有机物分解。
（2）植物池中，水生植物、昆虫、鱼类、蛙类和底泥中的微生物共同组成了 （生态系统、群落、种群）。在植物池的食物网中，植物位于第 营养级。植物池中所有蛙类获得的能量最终来源于 所固定的 能。
（3）生态工程所遵循的基本原理有整体性、协调与平衡、 和 等原理
（4）一般来说，生态工程的主要任务是对 进行修复，对造成环境污染和破坏的生产方式进行改善，并提高生态系统的生产力。
40．【答案】（1）无氧和有氧（或细胞） （2）群落 一 生产者 太阳 （3）物质循环再生 物种多样性 （4）已被破坏的生态环境（或受损的生态环境）
40．（2012）根据基因工程的有关知识，回答下列问题：
（１）限制性内切酶切割ＤＮＡ分子后产生的片段，其末端类型有 和 。 （２）投料运载体用EcoRⅠ切割后产生的片段如下：
为使运载体与目的基因相连，含有目的基因的DNA除可用EcoRⅠ切割外，还可用另一种限制性内切酶切割，该酶必须具有的特点是 。
（３）按其来源不同，基因工程中所使用的DNA连接酶有两类，即 DNA连接酶和 DNA连接酶。
（４）反转录作用的模板是 ，产物是 。若要在体外获得大量反转录产物，常采用 技术。
（５）基因工程中除质粒外， 和 也可作为运载体。
（６）若用重组质粒转化大肠杆菌，一般情况下，不能直接用未处理的大肠杆菌作为受体细胞，原因是 。
（1）黏性末端 平末端
（2）能识别EcoRI识别的核苷酸序列，并且断开与EcoRI断开相同的两个核苷酸之间的磷酸二酯键
（3）E·coli T4 （4）RNA DNA PCR
（5）λ噬菌体的衍生物 动植物病毒等
（6）需要用Ca2+处理，使大肠杆菌处于感受态才能吸收周围环境中的DNA
（2013）甲、乙是染色体数目相同的两种二倍体药用植物，甲含有效成分A，乙含有效成分B。某研究小组拟培育同时含有A和B的新型药用植物。
（1）为了培育该新型药用植物，可取甲和乙的叶片，先用 酶和 酶去除细胞壁，
获得具有活力的 ，再用化学诱导剂诱导二者融合，形成融合细胞进一步培养形成 组织，然后经过 形成完整的杂种植株，这种培育技术称为 。
（2）上述杂种植株属于多倍体，多倍体是指 。假设甲与乙有性杂交的后代是不育的，而上述杂种植株是可育的，造成这种差异的原因是 。
（3）这种杂种植株可通过制作人工种子的方法来大量繁殖，经植物组织培养得到的 等材料用人工薄膜包装后得到人工种子。
答案：（1）纤维素酶（1分）果胶酶（1分） 原生质体（2分） 愈伤（2分） 再分化（或分化）（2分） 植物体细胞杂交 （1分）
（2）体细胞中含有三个或三个以上染色体组的个体（2分） 减数分裂过程中，前者染色体联会异常，而后者染色体联会正常 （3分）
（3）胚状体、不定芽、丛芽、腋芽（1分，答对其中一个即给分）
（2014）植物甲具有极强的耐旱性，其耐旱性与某个基因有关。若从该植物中获得该耐旱基因，并将其转移到耐旱性低的植物乙中，有可能提高后者的耐旱性。
回答下列问题：
（1）理论上，基因组文库含有生物的 基因；而cDNA文库中含有生物的 基因。
（2）若要从植物甲中获得耐旱基因，可首先建立该植物的基因组文库，再从中 出所需的耐旱基因。
（3）将耐旱基因导入农杆菌，并通过农杆菌转化法将其导入植物 的体细胞中，经过一系列的过程得到再生植株。要确认该耐旱基因是否在再生植株中正确表达，应检测此再生植株中该基因的 ，如果检测结果呈阳性，再在田间试验中检测植株的 是否得到提高。
（4）假如用得到的二倍体转基因耐旱植株自交，子代中耐旱与不耐旱植株的数量比为3∶1时，则可推测该耐旱基因整合到了 （填“同源染色体的一条上”或“同源染色体的两条上”）。
答案：
（1）全部 部分
（2）筛选
（3）乙 表达产物 耐旱性
（4）同源染色体的一条上
（2015）已知生物体内有一种蛋白质（P），该蛋白质是一种转运蛋白，由305个氨基酸组成。如果将P分子中158位的丝氨酸变成亮氨酸，240位的谷氨酰胺变成苯丙氨酸，改变后的蛋白质（P1）不但保留P的功能，而且具有了酶的催化活性。回答下列问题：
（1）从上述资料可知，若要改变蛋白质的功能，可以考虑对蛋白质的进行改造。
（2）以P基因序列为基础，获得P1基因的途径有修饰基因或合成基因，所获得的基因表达时是遵循中心法则的，中心法则的全部内容包括的复制；以及遗传信息在不同分子之间的流动，即：。
（3）蛋白质工程也被称为第二代基因工程，其基本途径是从预期蛋白质功能出发，通过 和，进而确定相对应的脱氧核苷酸序列，据此获得基因，在经表达、纯化获得蛋白质，之后还需要对蛋白质的生物进行鉴定。
【答案】（1）氨基酸序列（或结构）（1分）
（2）P P1DNA和RNA
DNA→RNA、RNA→DNA、RNA→蛋白质（或转录、逆转录、翻译）
（3）设计蛋白质结构 推测氨基酸序列 功能
大纲卷：
2.（2013）关于动物细胞培养和植物组织培养的叙述，错误的是
A.动物细胞培养和植物组织培养所用培养基不同
B.动物细胞培养和植物组织培养过程中都要用到胰蛋白酶
C.烟草叶片离体培养能产生新个体，小鼠杂交瘤细胞可离体培养增殖
D.动物细胞培养可用于检测有毒物质，茎尖培养可用于植物脱除病毒
答案：B
5.（2013）下列实践活动包含基因工程技术的是
A.水稻F1 花药经培养和染色体加倍，获得基因型纯合新品种
B.抗虫小麦与矮秆小麦杂交，通过基因重组获得抗虫矮秆小麦
C.将含抗病基因的重组DNA导入玉米细胞，经组织培养获得抗病植株
D.用射线照射大豆使其基因结构发生改变，获得种子性状发生变异的大豆
答案：C
新课标1：
40．（2013）（15分）阅读如下资料：
资料甲：科学家将牛生长激素基因导入小鼠受精卵中，得到了体型巨大的“超级小鼠”；科学家用农杆菌转化法培育出了转基因烟草。
资料乙：T4溶菌酶在温度较高时容易失去活性。科学家用对编码T4溶菌酶的基因进行了改造，使其表达的T4溶菌酶第3位的异亮氨酸变为半胱氨酸，在该半胱氨酸与第97位的半胱氨酸之间形成一个二硫键，提高了T4溶菌酶的耐热性。
资料丙：兔甲和兔乙是同一物种的两个雌性个体，科学家将兔甲的受精卵发育成的胚胎移植到兔乙体内，成功产出兔甲的后代，证实了同一物种的胚胎可以在不同个体的体内发育。回答下列问题：
（1）资料甲属于基因工程范畴，将基因表达载体导入小鼠的受精卵中常用的 法。构建基因表达载体常用的工具酶是 和 。在培养有些转基因植物时，常用农杆菌转化法，农杆菌的作用是 。
（2）资料乙中的技术属于 工程的范畴，该工程是以分子生物学相关理论为基础，通过基因修饰或基因合成，对 进行改造，或制造一种 的技术。在该实例中，引起T4溶菌酶空间结构改变的原因是组成该酶的肽链的 序列发生了改变。
（3）资料丙属于胚胎工程范畴。胚胎移植是指将获得的早期胚胎移植到 种的、生理状态相同的另一个雌性个体内，使之继续发育成新个体的技术。在资料丙的实例中，兔甲称为 体，兔乙称为 体。
答案：
（1）显微注射法 限制性内切酶 DNA连接酶 农杆菌可感染植物，将目的基因转入到受体细胞中
（2）蛋白质 现有蛋白质 新的蛋白质 氨基酸
（3）同 供体 受体
40.（2014）某研究者用抗原（A）分别免疫3只同种小鼠（X、Y和Z），每只小鼠免疫5次，每次免疫一周后测定各小鼠血清抗体的效价（能检测出抗原抗体反应的血清最大稀释倍数），结果如下图所示。
若要制备杂交瘤细胞，需取免疫后小鼠的B淋巴细胞（染色体数目40条），并将该细胞与体外培养的小鼠骨髓瘤细胞（染色体数目60条）按一定比例加入试管中，再加入聚乙二醇诱导细胞融合，经筛选培养及抗体检测，得到不断分泌抗A抗体的杂交瘤细胞。 回答下列问题：
（1）制备融合所需的B淋巴细胞时，所用免疫小鼠的血清抗体效价需达到16000以上，则小鼠最少需要经过 次免疫后才能有符合要求的。达到要求后的X、Y、Z这3只免疫小鼠中，最适合用于制备B淋巴细胞的是 小鼠，理由是 。
（2）细胞融合实验完成后，融合体系中除含有未融合的细胞和杂交瘤细胞外，可能还有 ，体系中出现多种类型细胞的原因是 。
（3）杂交瘤细胞中有 个细胞核，染色体数目最多是 条。
（4）未融合的B淋巴细胞经多次传代培养后都不能存活，原因是 。
【答案】
（1）四 Y Y小鼠的抗体效价最高
（2）B淋巴细胞相互融合形成的细胞，骨髓瘤细胞相互融合形成的细胞 细胞融合是随机的，且融合率达不到100%
（3）1 100
（4）不能无限增殖
40.（2015）HIV属于逆转录病毒，是艾滋病的病原体。回答下列问题：
（1）用基因工程方法制备HIV的某蛋白（目的蛋白）时，可先提取HIV中的________，以其作为模板，在________的作用下合成________，获取该目的蛋白的基因，构建重组表达载体，随后导入受体细胞。
（2）从受体细胞中分离纯化出目的蛋白，该蛋白作为抗原注入机体后，刺激机体产生的可与此蛋白结合的相应分泌蛋白是________，该分泌蛋白可用于检测受试者血清中的HIV，检测的原理是________________。
（3
）已知某种菌导致的肺炎在健康人群中罕见，但是在艾滋病患者中却多发。引起这种现
象的根本原因是HIV主要感染和破坏了患者的部分________细胞，降低了患者免疫系统的防卫功能。
（4）人的免疫系统有________癌细胞的功能。艾滋病患者由于免疫功能缺陷，易发生恶性肿瘤。
【答案】
（1）RNA 逆转录酶 cDNA（或DNA）（每空2分，共6分）
（2）抗体（2分） 抗原抗体特异性结合（3分，其他合理答案也给分）
（3）T（或T淋巴）（2分）
（4）监控和清除（2分）
安徽卷：
31.（2015）（24分）
II.（9分）科研人员采用转基因体细胞克隆技术获得转基因绵羊，以便通过乳腺生物反应器生产人凝血因子IX医用蛋白，其技术路线如图。
（1）由过程获得的A为 。
（2）在核移植前，必须先去掉卵母细胞的核。目的是 ，受体应选用 期卵母细胞。
（3）进行胚胎移植时，
代孕母羊对置入子宫的重组胚胎基本上不发生 ，这是为重组胚胎在代孕母羊体内的存活提供了可能。
（4）采用胎儿成纤维细胞进行转基因体细胞克隆，理论上可获得无限个转基因绵羊，这是因为 。
答案：
II（1）含目的基因的表达载体
（2）保证核遗传物质来自目的基因的成纤维细胞 MII中
（3）免疫排斥反应
（4）整合含有目的基因的成纤维细胞可进行传代培养
北京卷：
5 （2015）在应用农杆菌侵染植物叶片获得转基因植株的常规实验步骤中，不需要的是
A．用携带目的基因的农杆菌侵染植物细胞
B．用选择培养基筛选导入目的基因的细胞
C．用聚乙二醇诱导转基因细胞的原生质体融合
D．用适当比例的生长素和细胞分裂素诱导愈伤组织生芽
【答案】C
福建卷：
27.（2014） (12 分) 为研究汽车尾气中可吸入颗粒物对人成熟T淋巴细胞的影响,用含不同浓度颗粒物的培养液培养T淋巴细胞,48h后检测Na+－K+－ATP 酶活性及细胞活力。实验结果如下:
SDH是总有氧呼吸关键酶。细胞活力通过测定各组细胞SDH总活性来表示,用于反映颗粒物对细胞的毒性,SDH总活性由该组细胞数及每个细胞SDH酶活性共同决定
(1)根据表中相关信息将答题卡中柱状图补充完整。
(2)细胞培养时,需使用血细胞计数板进行计数。请用方框在答题卡血细胞计数室图中标出计数区域。
(3)本实验毒性评价指标所反映的颗粒物对T淋巴细胞的毒性,或表现为杀伤作用致细胞数减少,或表现为抑制了细胞的 (生理过程)。 实验数据表明,随着颗粒物浓度的增加,颗粒物对T淋巴细胞的毒性 。
(4)汽车尾气中含有的多种致癌因子会损伤DNA,使常。长期汽车尾气暴露的人群,其T淋巴细胞执行的 免疫功能障碍,导致识别、攻击癌细胞能力降低,癌症发病风险提高。
答案：
(3)有氧呼吸 增大
(4)抑癌 细胞
33. （2014）[生物-现代生物科技专题]必答题(10分) Rag2 基因缺失小鼠不能产生成熟的淋巴细胞。科研人员利用胚胎干细胞(ES细胞)对Rag2 基因缺失小鼠进
行基因治疗。其技术流程如图
:
（1）步骤①中,在核移胚植前应去除卵母细胞的
（2）步骤②中，重组胚胎培养到 期时,可从其内细胞团分离出 ES 细胞。
（3）步骤③中,需要构建含有Rag2 基因的表达载体。可以根据Rag2 基因的
设计引物,利用PCR 技术扩增 Rag2 基因片段。 用 HindⅢ和 PstⅠ 限制酶分别在片段两侧进行酶切获得 Rag2 基因片段。为将该片段直接连接到表达载体,所选择的表达载体上应具有 的酶切位点。
(4)为检测Rag2 基因的表达情况,可提取治疗后小鼠骨髓细胞的,用抗Rag2 蛋白的抗体进行杂交实验。
答案：
(1)细胞核
(2)囊胚
(3)核苷酸序列 HindⅢ和 PstⅠ 限制酶
(4)蛋白质
33．（2015）【生物-现代生物科技专题】（10分）
GDNF是一种神经营养因子。对损伤的神经细胞具有营养和保护作用。研究人员构建了含GDNF基因的表达载体（如图1所示），并导入到大鼠神经干细胞中，用于干细胞基因治疗的研究。请回答：
（1）在分离和培养大鼠神经干细胞的过程中，使用胰蛋白酶的目的是 。
（2）构建含GDNF基因的表达载体时，需选择图1中的 限制酶进行酶切。
（3）经酶切后的载体和GDNF基因进行连接，连接产物经筛选得到的载体主要有三种：单个载体自连、GDNF基因与载体正向连接、GDNF基因与载体反向连接（如图1所示）。为鉴定这3种连接方式，选择HpaI酶和BamHI酶对筛选的载体进行双酶切，并对酶切后的DNA片段进行电泳分析，结果如图2所示。图中第 泳道显示所鉴定的载体是正向连接的。
（4）将正向连接的表达载体导入神经干细胞后，为了检测GDNF基因是否成功表达，可用相应的 与提取的蛋白质杂交。当培养的神经干细胞达到一定的密度时，需进行
【答案】（1）使细胞分散开 （2）XhoI （3）② （4）抗体 传代
广东卷：
25（2014）利用基因工程技术生产羧酸酯酶（CarE）制剂的流程如图14所示，下列叙述正确的是（ ）
A、过程①需使用逆转录酶
B、过程②需使用解旋酶和PCR获取目的基因
C、过程③使用的感受态细胞可用NaCl溶液制备
D、过程④可利用DNA分子杂交鉴定目的基因是否已导入受体细胞
答案：AD
25.（2015）图9为培育转基因山羊生产人β-酪蛋白的流程图
下列叙述正确的是
A．过程①所用的人β-酪蛋白基因可从人C-DNA文库中获得
B. 过程②可选用囊胚期或原肠胚期的胚胎进行移植
C．过程③可使用胚胎分割技术扩大转基因山羊群体
D．过程④人β-酪蛋白基因在细胞质内进行转录、翻译
答案：AC
山东卷：
12.（2014）人组织纤溶酶原激活物（htPA）是一种重要的药用蛋白，可在转htPA基因母羊的羊乳中获得。流程如下：
（1）htPA基因与载体用_________切割后，通过DNA连接酶连接，以构建重组表达载体。检测目的基因是否已插入受体细胞DNA，可采用_________技术。
（2）为获取更多的卵（母）细胞，要对供体母羊注射促性腺激素，使其__________。采集的精子需要经过__________，才具备受精能力。
（3）将重组表达载体导入受精卵常用的方法是__________。为了获得母羊，移植前需对已成功转入目的基因的胚胎进行__________。利用胚胎分割和胚胎移植技术可获得多个转基因个体，这体现了早期胚胎细胞的__________。
（4）若在转ht-PA基因母羊的羊乳中检测到__________，说明目的基因成功表达。 答案：
（1）同种限制性核酸内切酶（或同种限制酶）； DNA分子杂交（或核酸探针）
（2）超数排卵； 获能（处理）
（3）显微注射法； 性别鉴定； 全能性
（4）htPA（或人组织纤溶酶原激活物）
36. （2015）（12分）【生物—现代生物科技专题】
治疗性克隆对解决供体器官缺乏和器官移植后免疫排斥反应具有重要意义。流程如下：
（1）过程①采用的是细胞工程中的 技术，过程②采用的是胚胎工程中的 技术。
（2）体细胞进行体外培养时，所需气体主要有O2和CO2，其中CO2的作用是维持培养液（基）的 。
（3）如果克隆过程中需要进行基因改造，在构建基因表达载体（重组载体）时必须使用 两种工具酶。基因表达载体上除目的基因外，还需要有基因，以便选出成功导入基因表达载体的细胞。
（4）胚胎干细胞可以来自囊胚中的 。在一定条件下，胚胎干细胞可以分化形成不同的组织器官。若将图中获得的组织器官移植给个体 （填“A”或“B”），则不会发生免疫排斥反应。
【答案】（1）（体细胞）核移植 （早期）胚胎培养 （2）PH （3）限制性（核酸）内切酶（或：限制酶） 标记 （4）内细胞团 B
四川卷：
9.（2015）（11分）将是苏云金杆菌Bt
蛋白的基因导入棉花细胞中，可获得抗棉铃虫的转基
因棉，其过程如下图所示（注：农杆菌中Ti质粒上只有T-DNA片段能转移到植物细胞中）。
(1)过程①需用同种Bt基因的DNA和Ti质粒进行酶切。为将过程②获得的含重组质粒的农杆菌筛选出来，应使用 培养基。
(2)过程③中将棉花细胞与农杆菌混合后共同培养，旨在让进入棉花细胞；除尽农杆菌后，还须转接到含卡那霉素的培养基上继续培养，目的是 。
(3)若过程④仅获得大量的根，则应在培养基中增加以获得芽；部分接种在无激素培养基上的芽也能长根，原因是 。
(4)检验转基因棉的抗虫性状，常用方法是的使用，以减轻环境污染。
答案：
（1）限制酶 选择
（2）T-DNA 筛选获得T-DNA片段的棉花细胞
（3）细胞分裂素 芽本身合成的生长素向基部运输，促进根的分化
（4）投放棉铃虫 农药
天津卷：
4.（2014）为达到相应目的，必须通过分子检测的是
A.携带链霉素抗性基因受体菌的筛选
B.产生抗人白细胞介素－8抗体的杂交瘤细胞的筛选
C.转基因抗虫棉植株抗虫效果的鉴定
D.21三体综合征的诊断
【答案】B
8.（2014）（12分）嗜热土壤芽胞杆菌产生的β-葡萄糖苷酶（BglB）是一种耐热纤维素酶，为使其在工业生产中更好地应用，开展了以下试验：
Ⅰ.利用大肠杆菌表达BglB酶
（1）PCR扩增bglB基因时，选用 基因组DNA作模
板。
（2）右图为质粒限制酶酶切图谱。bglB基因不含图中限制酶
识别序列。为使PCR扩增的bglB基因重组进该质粒，扩增的bglB
基因两端需分别引入 和 不同限制酶的识
别序列。
（3）大肠杆菌不能降解纤维素，但转入上述建构好的表达载
体后则获得了降解纤维素的能力，这是因为 。
Ⅱ.温度对BglB酶活性的影响
（4）据图1、2可知，80℃保温30分钟后，BglB酶会 ；为高效利用BglB酶降解纤维素，反应温度最好控制在 （单选）。
A.50℃ B.60℃ C.70℃ D.80℃
Ⅲ.利用分子育种技术提高BglB酶的热稳定性
在PCR扩增bglB基因的过程中，加入诱变剂可提高bglB基因的突变率。经过筛选，可获得能表达出热稳定性高的BglB酶的基因。
（5）与用诱变剂直接处理嗜热土壤芽胞杆菌相比，上述育种技术获得热稳定性高的BglB酶基因的效率更高，其原因是在PCR过程中（多选）。
A.仅针对bglB基因进行诱变 B.bglB基因产生了定向突变
C.bglB基因可快速累积突变 D.bglB基因突变不会导致酶的氨基酸数目改变
【答案】
（1）嗜热土壤芽孢杆菌
（2）NdeⅠ BamHⅠ
（3）转基因的大肠杆菌分泌出有活性的BglB酶
（4）失活 B
（5）A、C
7.（2015） DHA对脑神经发育至关重要。以A、B两种单细胞真核藻为亲本，利用细胞融合
据表回答：
（1）选育的融合藻应具有A藻
与B藻 的优点。
（2）诱导融合前需用纤维素酶处理两种藻，其目的是获得 。
（3）通过以下三步筛选融合藻，步骤 可淘汰B藻，步骤 可淘汰生长速成率较慢的藻落，再通过步骤 获取生产所需的融合藻。
步骤a：观察藻落的大小
步骤b:用不含有机碳源（碳源——生物生长的碳素来源）的培养基进行光照培养 步骤c：测定DHA含量
（4）以获得的融合藻为材料进行甲、乙、丙三组试验，结果如下图。
①甲组条件下，融合藻产生[H]的细胞器是 ；丙组条件下产生ATP的细胞器是 。 ②与甲、丙两组相比，乙组融合藻生长速率较快，原因是在该培养条件下 。甲、乙两组DHA产量均较高，但实际生产中往往采用甲组的培养条件，其原因是 。
【答案】
（1）产生DHA、自养特性 快速生长
（2）原生质体
（3）b a c
（4）①线粒体、叶绿体 线粒体
②融合藻既能光能自养又能异养
融合藻利用光能和简单的无机物即能生长，不需要添加葡萄糖，可降低成本，也可防止杂菌生长
8.（2015）纤维素分子不能进入酵母细胞，为了使酵母菌能够利用环境中的纤维素为原料生产酒精，构建了含3种不同基因片段的重组质粒，下面是酵母菌转化及纤维素酶在工程菌内合成与运输的示意图。
据图回答：
（1）本研究构建重组质粒时看选用四种限制酶，其识别序列如下图，为防止酶切片段的自身环接，可选用的限制酶组合是______或__________
(2)设置菌株Ⅰ为对照，是为了验证__________不携带纤维素酶基因。
(3)纤维素酶基因的表达包括__________和__________过程，与菌株Ⅱ相比，在菌株Ⅲ、Ⅳ中参与纤维素酶合成和分泌的细胞器还有______________________________。
（4）在以纤维素为唯一C源的培养基上分别培养菌株Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ，菌株___________不能存活，原因是_________________________________。
(5)酵母菌生产酒精的细胞部位是___________，产生酒精时细胞的呼吸方式是___________，在利用纤维素生产酒精时，菌株Ⅳ更具有优势，因为导入的中重组质粒含有____________。使分泌的纤维素酶固定于细胞壁，减少因培养液更新二造成的酶的流失，提高酶的利用率。
【答案】
（1）B (或C) C (或B)
(2)质粒DNA和酵母菌基因组
（3）转录 翻译 内质网、高尔基体
（4）II
缺少信号肽编码序列，合成的纤维素酶不能分泌到胞外，细胞无可利用的碳源
（5）细胞质基质 无氧呼吸 A基因片段
浙江卷：
3.（2014）下列关于动物细胞培养的叙述，正确的是
A.连续细胞系的细胞大多具有二倍体核型
B.某些癌细胞在合适条件下能逆转为正常细胞
C.由多个祖细胞培养形成的细胞群为一个克隆
D.未经克隆化培养的细胞系细胞具有相同的性状
【答案】B
重庆卷：
2.（2014）生物技术安全性和伦理问题是社会关注的热点。下列叙述，错误的是
A. 应严格选择转基因植物的目的基因，避免产生对人类有害的物质
B. 当今社会的普遍观点是禁止克隆人的实验，但不反对治疗性克隆
C. 反对设计试管婴儿的原因之一是有人滥用次技术选择性设计婴儿
D. 生物武器是用微生物、毒素、干扰素及重组致病菌等来形成杀伤力
答案：D
1. （2014）题4图利用基因工程培育抗虫植物的示意图。以下相关叙述，正确的是
题4图
A．②的构建需要限制性核酸内切酶和DNA聚合酶参与
B．③侵染植物细胞后，重组Ti质粒整合到④的染色体上
C. ④的染色体上若含抗虫基因，则⑤就表现出抗虫性状
D. ⑤只要表现出抗虫性状就表明植株发生了可遗传变异
答案：D
8．（2015）（20分）某课题组为解决本地种奶牛产奶量低的问题，引进了含高产奶基因但对本地适应性差的纯种公牛。
（1）拟进行如下杂交：
♂A（具高产奶基因的纯种）×♀B（具适宜本地生长基因的纯种）→C
选择B作为母本，原因之一是胚胎能在母体内正常＿＿＿＿＿＿。若C中的母牛表现为适宜本地生长，但产奶量并未提高，说明高产奶是＿＿＿性状。为获得产奶量高且适宜本地生长的母牛，根据现有类型，最佳杂交组合是＿＿＿＿＿，后代中出现这种母牛的概率是＿＿＿（假设两对基因分别位于不同对常染色体上）。
（2）用以上最佳组合，按以下流程可加速获得优良个体。
精子要具有受精能力，需对其进行＿＿＿处理；卵子的成熟在过程＿＿＿中完成。在过程④的培养基中含有葡萄糖，其作用是＿＿＿＿＿＿＿＿＿。为筛选出具有优良性状的母牛，过程⑤前应鉴定胚胎的＿＿＿＿＿＿。子代母牛的优良性状与过程＿＿＿的基因重组有关。
（3）为了提高已有胚胎的利用率，可采用＿＿＿＿＿＿技术。
【答案】
（1）生长发育或胚胎发育 隐性 ♂A×♀C 1/8
（2）获能或增强活力 ③ 供能 性别、高产奶和适应生长的基因 ②
（3）胚胎分割