威远县畜牧食品局关于印发《威远县动物疫病免疫抗体监测 技术规范（试行）》的通知
威畜食发[2012]23号
各镇畜牧兽医站：
为了进一步加强动物疫病抗体监测，搞好免疫质量评估，规范我县动物疫病监测技术工作，及时做好动物疫情预警预报，确保无疫区和保障人民身体健康安全。现将《威远县动物疫病免疫抗体监测技术规范（试行）》印发给你们，请遵照执行。
附件：威远县动物疫病免疫抗体监测技术规范（试行）
威远县畜牧食品局
二0一二年三月六日
主题词：动物 抗体 检测 规范 通知
抄送：内江市畜牧食品局，市动监所，市动物疫病中心，县纪委派出第一纪工委。
威远县畜牧食品局 2012年3月7日印发
附件
威远县动物疫病免疫抗体监测技术规范（试行）
1范围
本规范规定了动物疫病免疫抗体监测的病种、采血（采血器材、采血时间、采血方法、采血数量、全血保存、血清分离与保存）、检测方法、检测结果记录与汇总、血清留样等技术。
本规范适用于威远县行政区域内动物疫病免疫抗体的监测活动。
2 规范性引用文件
下列文件中的条款通过本规范的引用而成为本规范的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本规范。
引用标准有：
中华人民共和国动物防疫法；
NY/T 541-2002，动物疫病实验室检验采样方法；
NY/SY 150-2000，口蹄疫诊断技术规程；
GB/T 18935-2003，口蹄疫诊断技术；
GB/T 18936-2003，高致病性禽流感诊断技术；
NY/SY 156-2000，猪瘟诊断技术规程；
GB 16551-2008，猪瘟检疫技术规范
GB 16550-2008，新城疫检疫技术规范。
NY/SY 168-2000，猪繁殖与呼吸综合症诊断技术规程;
GB/T 18090-2008， 猪繁殖与呼吸综合症诊断方法；
3监测病种
动物疫病免疫抗体监测重点是重大动物疫病（口蹄疫、高致病性禽流感、猪瘟、新城疫、高致病性蓝耳病）。
4监测布点
4.1 散养畜禽的监测布点
应根据交通情况、饲养规模、地域分布、代表性等进行综合布点。以乡镇为监测单元，每次随机监测至少一个建制村，分别采集经产母猪、2-4月龄猪、出栏肥猪、牛、羊、鸡、鸭、鹅、鸽子等易感动物血清。样品来源不少于5个农户。
4.2 规模养殖场的监测布点
每个规模养猪场每次随机采集经产母猪、2-4月龄猪、出栏肥猪血清；每个规模蛋禽（种禽）场每次随机采集60、120、200、300日龄的蛋禽血清；每个规模饲养肉用牛、羊、禽场每次随机采集牛、羊、禽的血清。（中小规模饲养场是指禽存栏量在1000-10000羽，猪存栏量在100-1000头，牛存栏量在20-200头，羊存栏量在50-1000只。）
4.3监测布点实行轮流制度
散养畜禽以乡镇为监测单元，每次在一个建制村中采样，每个建制村都被采样一次后才轮流采样第二次；规模养殖场以镇为单元，每个规模养殖场都被监测一次后才轮流监测第二次。
5 采血
5.1 采血器材
采样所需器材：防护服、无粉乳胶手套、防护口罩、灭菌剪刀（包括毛剪）、镊子、手术刀、注射器、针头、记号笔、签字笔、空白标签纸、胶布、抗凝剂、75%酒精棉球、碘酒棉球、15ml的离心管、1.5mLEP管、冰袋、冷藏容器、消毒药品、血清采样单和调查表等。
5.2采血时间：免疫注射后21天的动物方可采血，其中猪口蹄疫、高致病性蓝耳病免疫注射后28天方可采血。
5.3 采血方法
对采血部位用75%的酒精或碘酊消毒，待干燥后采血。采血方法根据动物种类采用不同的静脉采血方法，采血过程严格执行无菌操作。
5.4 全血采集量
家畜样品每份不少于5毫升全血，凝固后析出血清不少于1.5毫升（统一使用1.5ml离心管）；家禽样品每份不少于2毫升全血，凝固后析出血清不少于0.5毫升（统一使用1.5ml离心管）。
5.5 全血保存
采集好的全血（在注射器或离心管内）30～45度斜面存放，室温凝固后（特殊情况可直接放在盛有冰块的保温箱），送镇站实验室。注意在此过程中不要强力震荡所采血液，否则会造成溶血。从全血采出到血清分出的时间一般不超过24小时。特殊情况可适当延长时间。
5.6 血清分离与保存
5.6.1 分离血清
凝固全血在室温2～4小时后，有血清析出时，用无菌针剥离血凝块，然后放在室温4～15小时后，待大量血清析出时，吸出血清。自然析出血清为好，每份血清量猪、羊不少于1.0ml，禽不少于0.5 ml。不能析出血清的可用离心机分离，并严格控制离心机转速。必要时用低速（不超过4000rpm 为好）离心5～15分钟，分离血清。用移液器或注射器吸出血清，置于小离心管内，并在管盖及管壁上做好标记（与采样离心管编号一致）。血清要求无溶血无腐败。血样不能混合，一禽、一畜一个样。各类血清用塑料自封袋封装保存以备送检。
5.6.2血清编号、封装及采样单填写
填表要求：采血时应按《采样登记表》的内容详细填写采样单，保证监测资料的完整性。动物血清采样单一式三份，一份由被采样单位保存，一份由送检单位保存，一份由检测单位保存。农村散养户采样单可一式二份，动物血清采样登记表详见附表一。所有表格填写之前须仔细阅读表格及下面的相关备注或填表说明。应完整、清楚、工整填写，不得使用省略或简易符号替代，不得随意对表格进行合并或删除。
血清编号、封装：同一种畜禽血清样品编通号，以“A01～A20、B01～B10、C01～C10、D01～D30、E01～E10、F01～F10”（字母与数字间不要加任何符号）模式编写。不同种类动物以不同英文字母标记（猪A，牛B，羊C，鸡D，鸭E，鹅F）。用防水记号笔清晰标记于离心管。猪、鸡血清有散养与规模场之分，散养户编在前，规模场编在后。编号时用质量可靠的用防水记号笔在1.5ml离心管盖上或侧面写上编号。也可用标签贴上。将编好号的各类动物血清用塑料自封袋分类封装。标签注明样品名称、样品数量、样品编号等。
5.6.3血清保存及运送
样品正确的保存、运送是保证监测结果准确的重要条件。分离的血清样品，一般不加防腐剂。若能在1-2天内及时送检，可放在2—4℃的冰箱中短时间冷藏保存（切忌冷冻）。若较长时间不能送检，应放在-20℃冰箱内保存。冷冻的血清应避免反复冻融，影响监测结果。运送血清时可将血清放在盛有冰袋的保温箱中运送。送检时除提交《采样登记表》外，还应填写样品送检单（见附表3）。
各种样品到达实验室后，实验室应做好《检验样品登记表》及样品收样单的填写。若暂时不进行检测，则应冷冻（以-20℃或以下为宜）保存，不宜反复冻融。
6抗体检测方法
常见动物疫病免疫抗体检测标准及方法详见附表2。
7检测结果记录与汇总
7.1 抗体效价记录
每份血清检测完毕，分滴度（效价）进行记录。抗体检测记录表以实验室的表格为准。
7.2 抗体检测结果汇总
以监测乡镇为单位，按散养户、规模畜禽场、监测病种、动物种类等分滴度（合格与不合格）进行汇总。抗体结果汇总表详见附表4。
8血清留样
血清监测完以后，需要对血清进行留存，保存三个月后销毁。
9生物安全
动物监测样品的采集、暂存、运送、检测等全程活动，应按照《病原微生物实验室生物安全管理条例》及有关规定执行，防止人员伤害事件。
10档案管理
10.1原始信息保存
动物疫情监测样品的采集、运送、检测结果等过程中所产生的资料应按《档案法》的有关规定整理归档。
10.2 可追溯制度
动物免疫抗体监测实行可追溯制度，做到每一环节的工作结果都有人签字负责。
11 附表
11.1、采样登记表（表1.1~1.5）；
11.2、常见动物疫病免疫抗体检测标准及方法；
11.3、动物疫病监测样品送检单
11.4、抗体结果汇总表；
威远县畜牧食品局关于印发《威远县动物疫病免疫抗体监测 技术规范（试行）》的通知
威畜食发[2012]23号
各镇畜牧兽医站：
为了进一步加强动物疫病抗体监测，搞好免疫质量评估，规范我县动物疫病监测技术工作，及时做好动物疫情预警预报，确保无疫区和保障人民身体健康安全。现将《威远县动物疫病免疫抗体监测技术规范（试行）》印发给你们，请遵照执行。
附件：威远县动物疫病免疫抗体监测技术规范（试行）
威远县畜牧食品局
二0一二年三月六日
主题词：动物 抗体 检测 规范 通知
抄送：内江市畜牧食品局，市动监所，市动物疫病中心，县纪委派出第一纪工委。
威远县畜牧食品局 2012年3月7日印发
附件
威远县动物疫病免疫抗体监测技术规范（试行）
1范围
本规范规定了动物疫病免疫抗体监测的病种、采血（采血器材、采血时间、采血方法、采血数量、全血保存、血清分离与保存）、检测方法、检测结果记录与汇总、血清留样等技术。
本规范适用于威远县行政区域内动物疫病免疫抗体的监测活动。
2 规范性引用文件
下列文件中的条款通过本规范的引用而成为本规范的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本规范。
引用标准有：
中华人民共和国动物防疫法；
NY/T 541-2002，动物疫病实验室检验采样方法；
NY/SY 150-2000，口蹄疫诊断技术规程；
GB/T 18935-2003，口蹄疫诊断技术；
GB/T 18936-2003，高致病性禽流感诊断技术；
NY/SY 156-2000，猪瘟诊断技术规程；
GB 16551-2008，猪瘟检疫技术规范
GB 16550-2008，新城疫检疫技术规范。
NY/SY 168-2000，猪繁殖与呼吸综合症诊断技术规程;
GB/T 18090-2008， 猪繁殖与呼吸综合症诊断方法；
3监测病种
动物疫病免疫抗体监测重点是重大动物疫病（口蹄疫、高致病性禽流感、猪瘟、新城疫、高致病性蓝耳病）。
4监测布点
4.1 散养畜禽的监测布点
应根据交通情况、饲养规模、地域分布、代表性等进行综合布点。以乡镇为监测单元，每次随机监测至少一个建制村，分别采集经产母猪、2-4月龄猪、出栏肥猪、牛、羊、鸡、鸭、鹅、鸽子等易感动物血清。样品来源不少于5个农户。
4.2 规模养殖场的监测布点
每个规模养猪场每次随机采集经产母猪、2-4月龄猪、出栏肥猪血清；每个规模蛋禽（种禽）场每次随机采集60、120、200、300日龄的蛋禽血清；每个规模饲养肉用牛、羊、禽场每次随机采集牛、羊、禽的血清。（中小规模饲养场是指禽存栏量在1000-10000羽，猪存栏量在100-1000头，牛存栏量在20-200头，羊存栏量在50-1000只。）
4.3监测布点实行轮流制度
散养畜禽以乡镇为监测单元，每次在一个建制村中采样，每个建制村都被采样一次后才轮流采样第二次；规模养殖场以镇为单元，每个规模养殖场都被监测一次后才轮流监测第二次。
5 采血
5.1 采血器材
采样所需器材：防护服、无粉乳胶手套、防护口罩、灭菌剪刀（包括毛剪）、镊子、手术刀、注射器、针头、记号笔、签字笔、空白标签纸、胶布、抗凝剂、75%酒精棉球、碘酒棉球、15ml的离心管、1.5mLEP管、冰袋、冷藏容器、消毒药品、血清采样单和调查表等。
5.2采血时间：免疫注射后21天的动物方可采血，其中猪口蹄疫、高致病性蓝耳病免疫注射后28天方可采血。
5.3 采血方法
对采血部位用75%的酒精或碘酊消毒，待干燥后采血。采血方法根据动物种类采用不同的静脉采血方法，采血过程严格执行无菌操作。
5.4 全血采集量
家畜样品每份不少于5毫升全血，凝固后析出血清不少于1.5毫升（统一使用1.5ml离心管）；家禽样品每份不少于2毫升全血，凝固后析出血清不少于0.5毫升（统一使用1.5ml离心管）。
5.5 全血保存
采集好的全血（在注射器或离心管内）30～45度斜面存放，室温凝固后（特殊情况可直接放在盛有冰块的保温箱），送镇站实验室。注意在此过程中不要强力震荡所采血液，否则会造成溶血。从全血采出到血清分出的时间一般不超过24小时。特殊情况可适当延长时间。
5.6 血清分离与保存
5.6.1 分离血清
凝固全血在室温2～4小时后，有血清析出时，用无菌针剥离血凝块，然后放在室温4～15小时后，待大量血清析出时，吸出血清。自然析出血清为好，每份血清量猪、羊不少于1.0ml，禽不少于0.5 ml。不能析出血清的可用离心机分离，并严格控制离心机转速。必要时用低速（不超过4000rpm 为好）离心5～15分钟，分离血清。用移液器或注射器吸出血清，置于小离心管内，并在管盖及管壁上做好标记（与采样离心管编号一致）。血清要求无溶血无腐败。血样不能混合，一禽、一畜一个样。各类血清用塑料自封袋封装保存以备送检。
5.6.2血清编号、封装及采样单填写
填表要求：采血时应按《采样登记表》的内容详细填写采样单，保证监测资料的完整性。动物血清采样单一式三份，一份由被采样单位保存，一份由送检单位保存，一份由检测单位保存。农村散养户采样单可一式二份，动物血清采样登记表详见附表一。所有表格填写之前须仔细阅读表格及下面的相关备注或填表说明。应完整、清楚、工整填写，不得使用省略或简易符号替代，不得随意对表格进行合并或删除。
血清编号、封装：同一种畜禽血清样品编通号，以“A01～A20、B01～B10、C01～C10、D01～D30、E01～E10、F01～F10”（字母与数字间不要加任何符号）模式编写。不同种类动物以不同英文字母标记（猪A，牛B，羊C，鸡D，鸭E，鹅F）。用防水记号笔清晰标记于离心管。猪、鸡血清有散养与规模场之分，散养户编在前，规模场编在后。编号时用质量可靠的用防水记号笔在1.5ml离心管盖上或侧面写上编号。也可用标签贴上。将编好号的各类动物血清用塑料自封袋分类封装。标签注明样品名称、样品数量、样品编号等。
5.6.3血清保存及运送
样品正确的保存、运送是保证监测结果准确的重要条件。分离的血清样品，一般不加防腐剂。若能在1-2天内及时送检，可放在2—4℃的冰箱中短时间冷藏保存（切忌冷冻）。若较长时间不能送检，应放在-20℃冰箱内保存。冷冻的血清应避免反复冻融，影响监测结果。运送血清时可将血清放在盛有冰袋的保温箱中运送。送检时除提交《采样登记表》外，还应填写样品送检单（见附表3）。
各种样品到达实验室后，实验室应做好《检验样品登记表》及样品收样单的填写。若暂时不进行检测，则应冷冻（以-20℃或以下为宜）保存，不宜反复冻融。
6抗体检测方法
常见动物疫病免疫抗体检测标准及方法详见附表2。
7检测结果记录与汇总
7.1 抗体效价记录
每份血清检测完毕，分滴度（效价）进行记录。抗体检测记录表以实验室的表格为准。
7.2 抗体检测结果汇总
以监测乡镇为单位，按散养户、规模畜禽场、监测病种、动物种类等分滴度（合格与不合格）进行汇总。抗体结果汇总表详见附表4。
8血清留样
血清监测完以后，需要对血清进行留存，保存三个月后销毁。
9生物安全
动物监测样品的采集、暂存、运送、检测等全程活动，应按照《病原微生物实验室生物安全管理条例》及有关规定执行，防止人员伤害事件。
10档案管理
10.1原始信息保存
动物疫情监测样品的采集、运送、检测结果等过程中所产生的资料应按《档案法》的有关规定整理归档。
10.2 可追溯制度
动物免疫抗体监测实行可追溯制度，做到每一环节的工作结果都有人签字负责。
11 附表
11.1、采样登记表（表1.1~1.5）；
11.2、常见动物疫病免疫抗体检测标准及方法；
11.3、动物疫病监测样品送检单
11.4、抗体结果汇总表；