中国热带医学2005年第5卷第1期CHINATROPICALMEDICINEV01.5No.,February2005
103
[临床诊治]
血浆凝固酶试验影响因素研究
Study
Oil
thefactorsaffectingplasmacoagulaseassay.ZHANGXiao.meil,BAI
partmentofAffiliatedHospitalofBeihuaUniversityMedical
Shu-jin92.(Laboratory
College,Jilin132000,Jilin,P.R.China)
De.
张晓梅1,白淑晶2
摘要:目的
探讨不同因素对玻片法和试管法检测血浆凝固酶的影响。
方法
比较、观察不同种类血浆、抗凝
结果柠檬酸钠和EDTA-
剂、培养时间、茵液浓度、血浆灭活、纤维蛋白原等各种因素对血浆凝固酶试验的影响。
Na2抗凝的兔血浆和人血浆检测葡萄球菌凝固酶均能得到正确结果;兔血浆更适合于检测游离凝固酶;玻片法和试管法所需的茵株一定要新鲜;反应时间取决于血浆种类和茵液浓度。
关犍词:凝固酶试验;葡萄球菌;鉴定中图分类号:R446.112
文献标识码:B
文章煽号:1009—9727(2005)01—103—02
结论血浆凝固酶试验受多因素影响。
血浆凝固酶试验是鉴定葡萄球菌的重要试验,分为玻片法和试管法,目的是测定细菌凝固血浆的能力。尽管方法简单,但受影响因素颇多,一般实验室及临床只是按操作规程做玻片法,并未了解更多可能影响结果的因素。我们针对这一情况,系统地研究了多种影响血浆凝固酶试验的因素,主要为不同种类的血浆、抗凝剂、培养时间、菌液浓度、血浆灭活i纤维蛋白等。通过做大量的试验,得到一些可靠的数据,从而观察到上述因素可能对结果产生的影响,以及对传统理论的一些不同看法,目的是为了更加准确地鉴定葡萄球菌。1材料和方法
果,若无凝块,继续孵育,24h后观察,阳性结果出现凝块;无凝块,倾斜试管,血浆非常流动,可判定为阴性。开始孵育时,每30rain观察1次结果【lJ。2结果
2.1使用不同抗凝剂和血浆,玻片法结果见表1。
表1
57株葡萄球菌玻片法凝固酶阳性结果
1.1材料菌株:共57种葡萄球菌,来自于临床分离
菌株,标准菌株为ATCC25923。兔血浆:生理实验兔分别用EDTA.Na2、EDTA.K2和柠檬酸钠抗凝。人血浆取自健康体检者,分别用EDTA.Na2、EDTA—K2和柠檬酸钠抗凝。法国梅里埃公司鉴定阳性球菌板块,电脑打印结果。1.2方法
1.2.1鉴定方法G+球菌,直径0.5~1.5牡m,成单、双不规则葡萄状,无动力,无芽胞,兼性厌氧,呼吸兼发酵代谢,发酵甘油产酸,触酶阳性,氧化酶阴性。通常在10%NaCl培养基生长,最适温度30—37℃,符合这些条件,可鉴定为葡萄球菌属,种的鉴定应用法国梅里埃公司鉴定板。
1.2.2玻片凝固酶试验(聚集因子试验)
按标准方
表2
57株葡萄球菌试管法凝固酶阳性结果
2.2使用不同抗凝剂和血浆,试管法结果见表2。
法[1,2]进行,将1滴均匀浓菌悬液滴于洁净玻片上,加1滴蒸馏水,混均无自凝,然后加1滴血浆,不要过分摆动,10s内观察结果。1.2.3试管凝固酶试验
将数个葡萄球菌菌落置于
2.3新鲜菌株(18~24h培养)和陈旧菌株(室温放置
0.5ml血浆中,制成菌悬液,35~37℃孵育,4h观察结
万方数据
作者单位:1.北华大学医学院附属医院.吉林吉林
132000;2.吉林省临床检验中心,吉林吉林
132000
1,04
CHINATROPICALMEDICINEV01.SNo.//bhrunry26t75
中国热带医学2005年第5卷第1期
3d)比较,使用柠檬酸钠兔血浆,17株金黄色葡萄球菌
和ATCC25923对照,见表3。
表3新鲜菌株和陈旧菌株试管法和玻片法凝固酶阳性结果
G反应呈现颗粒状,使用蒸馏水稀释会减弱这种反应。
试管法测凝固酶时,前4h内每30min观察1次,这是由于葡萄球菌如果产生大量的葡萄球菌链激酶,可以溶解纤维蛋白凝块,产生假阴性。
不论做试管法,还是玻片法,菌株一定要新鲜。一般培养18~24h,可以获得好结果。
2.4菌液浓度对试管法结果的影响将ATCC25923
菌液浓度对试管法结果影响较大,为了尽快得到结果,菌液越浓,形成凝块时间越短。本文结果和文献[6]的结论一致,即菌液的浓度影响着血浆凝固的速度。
有文献指出,人血浆对于路邓葡萄球菌检测聚集因子更有效,但玻片法观察结果要注意出现大的白色凝块,为阳性结果,而不是细小凝集颗粒,这是因为血浆内含有抗体,导致凝集颗粒形成,或者由于菌株产生A蛋白和7球蛋白…。
配制成0.5麦氏浓度、1.0麦氏浓度、2.0麦氏浓度菌液均取0.5ml菌液,再加入0.5ml柠檬酸钠兔血浆,记
录形成凝块时间分别为6h、4h、lh。
3讨论
血浆凝固酶试验测定方法分为玻片法和试管法,
但应明确玻片法测定结合凝固酶,也称聚集因子;试管法测定游离凝固酶[1,3|。金黄色葡萄球菌(黄金亚
种)、中间葡萄球菌、路邓葡萄球菌聚集因子阳性,而游离凝固酶阳性的有金黄色葡萄球菌(包括厌氧亚种和黄金亚种)、猪葡萄球菌、中间葡萄球菌。这充分表明有的葡萄球菌只产生聚集因子,而不产生游离凝固酶。
有文献指出,试管法测定凝固酶,兔血浆优于人血浆【4J。也有文献指出,兔血浆和人血浆都可以使用L5j。本文证实,试管法抗凝剂不能使用EDTA.K2,以往的研究没有发现这一现象,认为血浆和抗凝剂没有关系。
玻片法测聚集因子时,应用蒸馏水代替盐水稀释血浆,一是葡萄球菌对盐敏感,特别是不能使用高盐培养基。血浆不能过多,否则产生假阳性;二是一些菌株产生过多的A蛋白,A蛋白和血浆内的免疫球蛋白
参考文献:
[1]HenryD.Isenberg,ClincalMicrobiologyProcedures-Hamdbook[M].Wash—
ington.USA:AmerrieanSocietyforMierobiohgy,1992,205—207.
【2]Cadness.GravesB,WilliamsR,HarperGJ,eta1.Slide-testforcoagula.n
positive
slaphyloeocei[J].Lancet,1943,1:736.
R,BaronE
[3]MurrayP
J,PfallerMA,eta1.Manualof
ClinicalMicrobiology
for
[M].SixthEdition,WashingtonUSA:American
1995,288—289.
SocietyMicrobiology,
[4]ChapmanGH.The
blood
fortesting
the
comparative
valueofhuman
whole
plasmaandhuman
coagulating
powerofstaphylococci[J].J.Baeteriol,
1944,47:211,
【5]SneathH
A,MairN
M,Sharpeetul
M
E.Bergey’SManualofSystematic
Bacteriology
Bnhimore[M].USA:Williams,Wilkins,1986。1018.
of
[6]HaqⅪrEM,ConwayNs.Clotting
humaneitrated
plⅫabygraranegative
organisms[J].J.Path01.Bacterial,1948,60:247.
收稿日期:2004一09—20
(上接第108页)
3讨论
患者在治疗疾病时,出现药品不良反应是比较普
遍的。359例ADR病例报告就涉及到15大类原患疾病,且这些不良反应现象种类繁多,可影响到皮肤、呼吸、消化、神经、循环等多个系统,其中以过敏样反应、胃肠道反应较为常见。从药品种类来看,引起ADR的药品种类也很多,其中抗生素、喹诺酮类抗菌药所占的比率超过60%。从剂型看,以注射剂为主,所占比率高达78%以上,而大多数都是通过静脉滴注给药,其它剂型相对较少。提示临床上应合理使用抗菌药物,对注射剂静脉给药所产生的不良反应予以高度重视。
收稿日期:2004—08—23
反应最频繁,占45.60%(207/454),其余依次为喹诺酮
类16.30%(74/454),中药制剂10.57%(48/454),生物制剂5.73%(26/454),见表4。
表4
ADR病例的药物分类
万方数据
血浆凝固酶试验影响因素研究
作者:作者单位:刊名:英文刊名:年,卷(期):
张晓梅, 白淑晶
张晓梅(北华大学医学院附属医院,吉林,吉林,132000), 白淑晶(吉林省临床检验中心,吉林,吉林,132000)
中国热带医学
CHINA TROPICAL MEDICINE2005,5(1)
参考文献(6条)
1. Harper E M;Conway N S Clotting of human citrated plasma by gramnegative organisms 19482. Sneath H A;Mair N M;Sharpeetul M E Bergey's Manual of Systematic Bacteriology Bnltimore 19863. Ghapman G H The comparative value of human plasma and human whole blood for testing thecoagulating power of staphylococci 1944
4. Murray P R;Baron E J;Pfaller M A Manual of Clinical Microbiology 1995
5. Cadness-Graves B;Williams R;Harper G J Slide-test for coagulasepositive staphylococci 19436. Henry D Isenberg Clincal Microbiology Procedures-Hamdbook 1992
本文链接:http://d.g.wanfangdata.com.cn/Periodical_zgrdyx200501053.aspx
中国热带医学2005年第5卷第1期CHINATROPICALMEDICINEV01.5No.,February2005
103
[临床诊治]
血浆凝固酶试验影响因素研究
Study
Oil
thefactorsaffectingplasmacoagulaseassay.ZHANGXiao.meil,BAI
partmentofAffiliatedHospitalofBeihuaUniversityMedical
Shu-jin92.(Laboratory
College,Jilin132000,Jilin,P.R.China)
De.
张晓梅1,白淑晶2
摘要:目的
探讨不同因素对玻片法和试管法检测血浆凝固酶的影响。
方法
比较、观察不同种类血浆、抗凝
结果柠檬酸钠和EDTA-
剂、培养时间、茵液浓度、血浆灭活、纤维蛋白原等各种因素对血浆凝固酶试验的影响。
Na2抗凝的兔血浆和人血浆检测葡萄球菌凝固酶均能得到正确结果;兔血浆更适合于检测游离凝固酶;玻片法和试管法所需的茵株一定要新鲜;反应时间取决于血浆种类和茵液浓度。
关犍词:凝固酶试验;葡萄球菌;鉴定中图分类号:R446.112
文献标识码:B
文章煽号:1009—9727(2005)01—103—02
结论血浆凝固酶试验受多因素影响。
血浆凝固酶试验是鉴定葡萄球菌的重要试验,分为玻片法和试管法,目的是测定细菌凝固血浆的能力。尽管方法简单,但受影响因素颇多,一般实验室及临床只是按操作规程做玻片法,并未了解更多可能影响结果的因素。我们针对这一情况,系统地研究了多种影响血浆凝固酶试验的因素,主要为不同种类的血浆、抗凝剂、培养时间、菌液浓度、血浆灭活i纤维蛋白等。通过做大量的试验,得到一些可靠的数据,从而观察到上述因素可能对结果产生的影响,以及对传统理论的一些不同看法,目的是为了更加准确地鉴定葡萄球菌。1材料和方法
果,若无凝块,继续孵育,24h后观察,阳性结果出现凝块;无凝块,倾斜试管,血浆非常流动,可判定为阴性。开始孵育时,每30rain观察1次结果【lJ。2结果
2.1使用不同抗凝剂和血浆,玻片法结果见表1。
表1
57株葡萄球菌玻片法凝固酶阳性结果
1.1材料菌株:共57种葡萄球菌,来自于临床分离
菌株,标准菌株为ATCC25923。兔血浆:生理实验兔分别用EDTA.Na2、EDTA.K2和柠檬酸钠抗凝。人血浆取自健康体检者,分别用EDTA.Na2、EDTA—K2和柠檬酸钠抗凝。法国梅里埃公司鉴定阳性球菌板块,电脑打印结果。1.2方法
1.2.1鉴定方法G+球菌,直径0.5~1.5牡m,成单、双不规则葡萄状,无动力,无芽胞,兼性厌氧,呼吸兼发酵代谢,发酵甘油产酸,触酶阳性,氧化酶阴性。通常在10%NaCl培养基生长,最适温度30—37℃,符合这些条件,可鉴定为葡萄球菌属,种的鉴定应用法国梅里埃公司鉴定板。
1.2.2玻片凝固酶试验(聚集因子试验)
按标准方
表2
57株葡萄球菌试管法凝固酶阳性结果
2.2使用不同抗凝剂和血浆,试管法结果见表2。
法[1,2]进行,将1滴均匀浓菌悬液滴于洁净玻片上,加1滴蒸馏水,混均无自凝,然后加1滴血浆,不要过分摆动,10s内观察结果。1.2.3试管凝固酶试验
将数个葡萄球菌菌落置于
2.3新鲜菌株(18~24h培养)和陈旧菌株(室温放置
0.5ml血浆中,制成菌悬液,35~37℃孵育,4h观察结
万方数据
作者单位:1.北华大学医学院附属医院.吉林吉林
132000;2.吉林省临床检验中心,吉林吉林
132000
1,04
CHINATROPICALMEDICINEV01.SNo.//bhrunry26t75
中国热带医学2005年第5卷第1期
3d)比较,使用柠檬酸钠兔血浆,17株金黄色葡萄球菌
和ATCC25923对照,见表3。
表3新鲜菌株和陈旧菌株试管法和玻片法凝固酶阳性结果
G反应呈现颗粒状,使用蒸馏水稀释会减弱这种反应。
试管法测凝固酶时,前4h内每30min观察1次,这是由于葡萄球菌如果产生大量的葡萄球菌链激酶,可以溶解纤维蛋白凝块,产生假阴性。
不论做试管法,还是玻片法,菌株一定要新鲜。一般培养18~24h,可以获得好结果。
2.4菌液浓度对试管法结果的影响将ATCC25923
菌液浓度对试管法结果影响较大,为了尽快得到结果,菌液越浓,形成凝块时间越短。本文结果和文献[6]的结论一致,即菌液的浓度影响着血浆凝固的速度。
有文献指出,人血浆对于路邓葡萄球菌检测聚集因子更有效,但玻片法观察结果要注意出现大的白色凝块,为阳性结果,而不是细小凝集颗粒,这是因为血浆内含有抗体,导致凝集颗粒形成,或者由于菌株产生A蛋白和7球蛋白…。
配制成0.5麦氏浓度、1.0麦氏浓度、2.0麦氏浓度菌液均取0.5ml菌液,再加入0.5ml柠檬酸钠兔血浆,记
录形成凝块时间分别为6h、4h、lh。
3讨论
血浆凝固酶试验测定方法分为玻片法和试管法,
但应明确玻片法测定结合凝固酶,也称聚集因子;试管法测定游离凝固酶[1,3|。金黄色葡萄球菌(黄金亚
种)、中间葡萄球菌、路邓葡萄球菌聚集因子阳性,而游离凝固酶阳性的有金黄色葡萄球菌(包括厌氧亚种和黄金亚种)、猪葡萄球菌、中间葡萄球菌。这充分表明有的葡萄球菌只产生聚集因子,而不产生游离凝固酶。
有文献指出,试管法测定凝固酶,兔血浆优于人血浆【4J。也有文献指出,兔血浆和人血浆都可以使用L5j。本文证实,试管法抗凝剂不能使用EDTA.K2,以往的研究没有发现这一现象,认为血浆和抗凝剂没有关系。
玻片法测聚集因子时,应用蒸馏水代替盐水稀释血浆,一是葡萄球菌对盐敏感,特别是不能使用高盐培养基。血浆不能过多,否则产生假阳性;二是一些菌株产生过多的A蛋白,A蛋白和血浆内的免疫球蛋白
参考文献:
[1]HenryD.Isenberg,ClincalMicrobiologyProcedures-Hamdbook[M].Wash—
ington.USA:AmerrieanSocietyforMierobiohgy,1992,205—207.
【2]Cadness.GravesB,WilliamsR,HarperGJ,eta1.Slide-testforcoagula.n
positive
slaphyloeocei[J].Lancet,1943,1:736.
R,BaronE
[3]MurrayP
J,PfallerMA,eta1.Manualof
ClinicalMicrobiology
for
[M].SixthEdition,WashingtonUSA:American
1995,288—289.
SocietyMicrobiology,
[4]ChapmanGH.The
blood
fortesting
the
comparative
valueofhuman
whole
plasmaandhuman
coagulating
powerofstaphylococci[J].J.Baeteriol,
1944,47:211,
【5]SneathH
A,MairN
M,Sharpeetul
M
E.Bergey’SManualofSystematic
Bacteriology
Bnhimore[M].USA:Williams,Wilkins,1986。1018.
of
[6]HaqⅪrEM,ConwayNs.Clotting
humaneitrated
plⅫabygraranegative
organisms[J].J.Path01.Bacterial,1948,60:247.
收稿日期:2004一09—20
(上接第108页)
3讨论
患者在治疗疾病时,出现药品不良反应是比较普
遍的。359例ADR病例报告就涉及到15大类原患疾病,且这些不良反应现象种类繁多,可影响到皮肤、呼吸、消化、神经、循环等多个系统,其中以过敏样反应、胃肠道反应较为常见。从药品种类来看,引起ADR的药品种类也很多,其中抗生素、喹诺酮类抗菌药所占的比率超过60%。从剂型看,以注射剂为主,所占比率高达78%以上,而大多数都是通过静脉滴注给药,其它剂型相对较少。提示临床上应合理使用抗菌药物,对注射剂静脉给药所产生的不良反应予以高度重视。
收稿日期:2004—08—23
反应最频繁,占45.60%(207/454),其余依次为喹诺酮
类16.30%(74/454),中药制剂10.57%(48/454),生物制剂5.73%(26/454),见表4。
表4
ADR病例的药物分类
万方数据
血浆凝固酶试验影响因素研究
作者:作者单位:刊名:英文刊名:年,卷(期):
张晓梅, 白淑晶
张晓梅(北华大学医学院附属医院,吉林,吉林,132000), 白淑晶(吉林省临床检验中心,吉林,吉林,132000)
中国热带医学
CHINA TROPICAL MEDICINE2005,5(1)
参考文献(6条)
1. Harper E M;Conway N S Clotting of human citrated plasma by gramnegative organisms 19482. Sneath H A;Mair N M;Sharpeetul M E Bergey's Manual of Systematic Bacteriology Bnltimore 19863. Ghapman G H The comparative value of human plasma and human whole blood for testing thecoagulating power of staphylococci 1944
4. Murray P R;Baron E J;Pfaller M A Manual of Clinical Microbiology 1995
5. Cadness-Graves B;Williams R;Harper G J Slide-test for coagulasepositive staphylococci 19436. Henry D Isenberg Clincal Microbiology Procedures-Hamdbook 1992
本文链接:http://d.g.wanfangdata.com.cn/Periodical_zgrdyx200501053.aspx