南宁庞博生物工程有限公司企业标准
Q/NPB 01-2009
食品添加剂 木瓜蛋白酶制剂
1、 范围
本标准规定了食品添加剂 木瓜蛋白酶制剂的原辅料要求、技术要求、试验方法、检验规则、标志、包装、运输、贮存。
本标准适用于以木瓜果乳汁为原料，添加葡萄糖，经浸泡提取、过滤、浓缩、干燥、调配粉碎、包装等工艺制成的食品添加剂 木瓜蛋白酶制剂。
2、 规范性引用文件
下列文件中的条款通过本标准引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。
GB/T 191-2008 包装储运图示标志
GB/T 601-2002 化学试剂 标准滴定溶液的制备 GB/T 602-2002 化学试剂 杂质测定用标准溶液的制备 GB/T 603-2002 化学试剂 试验方法中所用制剂及制品的制备 GB 2760 食品添加剂使用卫生标准
GB/T 4789.2-2008 食品卫生微生物检验 菌落总数的测定 GB/T 4789.3-2008 食品卫生微生物检验 大肠菌群计数 GB/T 4789.4-2008 食品卫生微生物检验 沙门氏菌检测 GB/T 4789.6-2008 食品卫生微生物检验 致泻大肠埃希氏菌检测 GB/T 4789.10-2008 食品卫生微生物检验 金黄色葡萄球菌检验 GB/T 5009.3-2003 食品中水分的测定
GB/T 5009.74-2003 食品添加剂中重金属限量试验 GB/T 5009.75-2003 食品添加剂中铅的测定 GB/T 5009.76-2003 食品添加剂中砷的测定 GB 5749-2006 生活饮用水卫生标准
GB/T 6682-2008 分析实验室用水规格和试验方法 GB 7718 预包装食品标签通则
GB/T 8170-2008 数值修约规则与极限数值的表示和判定 GB/T 20880-2007 食用葡萄糖
JJF 1070 定量包装商品净含量检验规则 NY/T 691-2003 番木瓜
定量包装商品计量监督管理办法 国家质量监督检验检疫总局令（2005）第75号 3、 原辅料要求 3.1 水
应符合 GB 5749-2006规定 3.2 木瓜果
应符合NY/T 691-2003的规定 3.3 葡萄糖
应符合GB/T 20880-2007中无水葡萄糖的规定 3.4 食品添加剂
食品添加剂使用的品种和使用量应符合GB2760 的规定，质量应符合相应产品标准的规定。 4、 技术要求 4.1 感官
应符合表1的规定
表1
4.2 理化指标 应符合表2的规定。
4.3 微生物指标 应符合表3规定。
5、 试验方法 5.1 一般规定
本标准所用试剂和水，在没有注明其他要求时，均指分析纯试剂和GB/T 6682-2008中规定的三级水；所述溶液如未指明溶剂，均系水溶液；所有滴定分析用标准溶液按GB/T 601-2002配制和标定；所有杂质测定用标准溶液按GB/T 601-2002配制；所有试验方法中所用制剂和制品按GB/T 603-2002配制。 5.2 感官
用目测、鼻嗅、口尝方法检查。 5.3 理化指标 5.3.1 酶活力的测定 5.3.1.1 原理
蛋白酶在一定温度与PH条件下，水解酪蛋白底物，然后加入三氯乙酸终止酶反应，并使未水解的酪蛋白沉淀除去，滤液对紫外光有吸收，可用紫外分光光度法测定，根据吸收度计算酶活力。 5.3.1.2 酶活力定义
在一定的条件下，每分钟水解酪蛋白生成1ug酪氨酸所需的酶的量，为1个酶活力单位（U）。 5.3.1.3 仪器和设备
恒温水浴（37±0.2℃）.
紫外分光光度计。 5.3.1.4 试剂和溶液 5.3.1.4.1 酶稀释液
称取L-半胱氨酸盐酸盐（C3N7NO2S·HCl·H2O=157.63）5.27g，氯化钠（NaCl）23.4g，加水500mL溶解，另取乙二胺四乙酸二钠（C10H14N2O8Na2·2H2O）（该物质在水中的溶解度不高，如果没有溶解会使溶液出现浑浊现象）2.23g，加水200mL溶解，合并两液均匀，用0.1mol/L氢氧化钠溶液或0.1mol/L盐酸溶液调至PH=5.5（初次配该溶液PH原始值为1.75，需要加0.5mol/L的氢氧化钠25ml左右调节至PH=5.5），加水稀释至1000mL。 5.3.1.4.2 0.05mol/L磷酸氢二钠溶液
称取磷酸氢二钠（Na2HPO4·12H2O）17.89g，加水溶解，并定容至1000mL。（该溶液使用量为80ml，配制时可考虑配100ml） 5.3.1.4.3 酪蛋白溶液（该溶液配制过程较快，可以不用提前很久配制。）
称取经硅胶干燥器中干燥至恒重的酪蛋白（干酪素，不经干燥至恒重仍可做检测）0.6g（精确至0.0002g），置烧杯中，加入0.05mol/L磷酸氢二钠溶液80mL。在沸水浴中边加热边搅拌，直至完全溶解，冷却后，用0.1mol/L盐酸调至PH=7.0（初次配该溶液，配制好后PH值在7.5左右，需要加盐酸调节，0.1mol/L的盐酸用量为5ml左右），转移到100mL容量瓶中，加水至刻度。临用现配。 5.3.1.4.4 三氯乙酸溶液
称取三氯乙酸（C2HCl3O2）17.99g，加无水乙酸钠（CH3COONa）29.94g和冰乙酸（CH3COOH）18.9mL，加适量水溶解后，加水定容至1000mL，振摇均匀。
5.3.1.4.5 酪氨酸标准溶液
称取于105℃干燥至恒重的酪氨酸50mg（精确至0.0002g），用0.1mol/L盐酸溶解，移入100mL容量瓶中，并用0.1mol/L盐酸定容至刻度，摇匀。吸收1.00mL置10mL容量瓶中，加0.1mol/L盐酸至刻度，摇匀，即得含酪氨酸50ug/mL的溶液。 5.3.1.4.6 试样溶液（稀释倍数为25000）
称取适量试样（精确至0.0002g）（稀释倍数参考表4）置研体中，加少量酶稀释液研磨20min，用酶稀释液移至250mL容量瓶中，加酶稀释液至刻度，充分摇匀；根据不同品种酶活力高低，吸取适量试样溶液置于容量瓶中，加酶稀释液稀释至适当浓度（稀释至试样溶液吸光度在0.2～0.6范围内），充分摇匀，供测试用（60min内使用）。
表4
5.3.1.5 测定步骤
吸取试样溶液1.00mL置于10mL具塞比色管中，于37℃±0.2℃水
浴中保温10min，加入在37℃±0.2℃水浴中预热的酪蛋白溶液5.00mL，摇匀，置37℃±0.2℃水浴中，反应10min，加入在37℃±0.2℃水浴中预热的三氯乙酸溶液5.00mL，摇匀，于37℃±0.2℃水浴中放置40min，用干燥滤纸过滤，取续滤液，在2h内，在波长为275nm处用蒸馏水作参比测出滤液的吸光度A1。（可做两个平行，第一次测定两个平行值分别为0.389、0.399）
空白试验：吸取试样溶液1.00mL置于10mL具塞比色管中，于37℃±0.2℃水浴中保温10min，加入在37℃±0.2℃水浴中预热的三氯乙酸溶液5.00mL，摇匀，反应10min，加入在37℃±0.2℃水浴中预热的酪蛋白溶液5.00mL，摇匀，于37℃±0.2℃水浴中放置40min，用干燥滤纸过滤，取续滤液，在2h内，在波长为275nm处用蒸馏水作参比测出滤液的吸光度A2。（初次测定该值为0.292）
酪氨酸标准溶液吸光度：用蒸馏水作参比，在波长275nm处测定50ug/mL酪氨酸标准溶液的吸光度A3。（初次测定该值为0.346） 5.3.1.6 结果计算
试样中酶活力X1（U/g）按式（1）计算：
X1=
式中：
A1——试样溶液的吸光度 A2——空白试样的吸光度 A3——酪氨酸标准溶液的吸光度
m1——对照品溶液每毫升中含酪氨酸的量，单位为微克（ug），
„„„„„„（1）
即为50
m2——试样的质量，单位为克（g） n——试样溶液的稀释倍数，即为25000 5.3.1.7 允许差
二次平行测定结果的相对误差应不大于10%，取其算术平均值为测定结果。 5.3.2 水分的测定
按GB/T 5009.3-2003的规定执行。 5.3.3 重金属
按GB/T 5009.74-2003的规定执行。 5.3.4 铅
按GB/T 5009.75-2003的规定执行。 5.3.5 总砷
按GB/T 5009.76-2003的规定执行。 5.4 微生物指标 5.4.1 菌落总数
按GB/T 4789.2-2008的规定执行。 5.4.2 大肠菌群
按GB/T 4789.3-2008的规定执行。 5.4.3 沙门氏菌
按GB/T 4789.4-2008的规定执行。 5.4.4 金黄色葡萄球菌
按GB/T 4789.10-2008的规定执行。 5.4.5 致泻大肠埃希氏菌
按GB/T 4789.6-2003的规定执行。 5.5 净含量
按JJF 1070的规定执行。 6、 6.1 组批
以相同的原材料，同一班次生产的产品为一批。 6.2 抽样
6.2.1 感官、理化及微生物指标
随机从每批5%以上的包装箱中抽取样品，每箱中抽取样品约10g左右，试样总量应不小于50g。迅速混匀后分别装入两个清洁干燥的磨口玻璃瓶中，并在标签上注明生产厂名，产品名称，批号，数量及取样日期。一瓶作检验用，一瓶留存备查。微生物检验按无菌操作取样。 6.2.2 净含量
按JJF 1070及国家质量监督检验检疫总局令（2005）第75号的规定进行。 6.3 出厂检验
6.3.1 每批产品均应进行出厂检验。
6.3.2 出厂检验项目为：4.1，4.2中酶活力、水分，4.3中菌落总数、大肠菌群，净含量。 6.4 型式检验
检验规则
6.4.1 型式检验每半年进行一次，有下列情况之一时亦应进行型式检验：
——产品试制、正式投产时
——更换设备或长期停产再恢复生产时
——出厂检验结果与上次型式检验结果有较大差异时 ——原料、工艺较大变化，可能影响产品质量时 ——卫生或质量监督机构提出要求时 6.4.2 型式检验项目为第4章全部要求。 6.5 判定规则
6.5.1 质量指标合格的判断，采用GB/T 8170-2008中的“修约值比较法”。
6.5.2 微生物指标及净含量有一项不符合本标准规定，即判定产品为不合格，不复检。其他指标若有一项以上（含一项）不符合本标准规定，应重新从该批产品中抽取两倍样品进行复检。复检结果全部符合本标准要求时，产品判为合格。如果复检结果仍有一项不符合本标准规定，则判定为产品不合格。 7 标志、包装、运输、贮存 7.1 标志
小时包装的标签应符合GB 7718的规定。外包装储运图示标志应符合GB/T 191-2008的规定。 7.2 包装
产品用塑料袋和铝箔袋包装，每袋净含量为1000g。产品净含量应符
合《定量包装商品计量监督管理办法》的规定。有外包装的产品外包装用瓦楞纸箱。包装材料均应符合食品卫生要求。
7.3 运输
运输工具必须清洁、卫生，严禁与有毒、有害、有腐蚀性、易挥发性或有异味的物品混装混运，必须轻装轻卸，严禁摔撞，避免受潮和日晒雨淋。
7.4 贮存
应贮存在阴凉、通风、干燥的仓库内。不得露天存放，不得与有毒、有污染的物品或其他杂物混存。
7.5 保质期
应符合上述贮运规定、产品包装完整、未经启封的条件下，保质期为12个月（长时间贮存温度应不大于0℃）
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食品添加剂 木瓜蛋白酶制剂
1、 范围
本标准规定了食品添加剂 木瓜蛋白酶制剂的原辅料要求、技术要求、试验方法、检验规则、标志、包装、运输、贮存。
本标准适用于以木瓜果乳汁为原料，添加葡萄糖，经浸泡提取、过滤、浓缩、干燥、调配粉碎、包装等工艺制成的食品添加剂 木瓜蛋白酶制剂。
2、 规范性引用文件
下列文件中的条款通过本标准引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。
GB/T 191-2008 包装储运图示标志
GB/T 601-2002 化学试剂 标准滴定溶液的制备 GB/T 602-2002 化学试剂 杂质测定用标准溶液的制备 GB/T 603-2002 化学试剂 试验方法中所用制剂及制品的制备 GB 2760 食品添加剂使用卫生标准
GB/T 4789.2-2008 食品卫生微生物检验 菌落总数的测定 GB/T 4789.3-2008 食品卫生微生物检验 大肠菌群计数 GB/T 4789.4-2008 食品卫生微生物检验 沙门氏菌检测 GB/T 4789.6-2008 食品卫生微生物检验 致泻大肠埃希氏菌检测 GB/T 4789.10-2008 食品卫生微生物检验 金黄色葡萄球菌检验 GB/T 5009.3-2003 食品中水分的测定
GB/T 5009.74-2003 食品添加剂中重金属限量试验 GB/T 5009.75-2003 食品添加剂中铅的测定 GB/T 5009.76-2003 食品添加剂中砷的测定 GB 5749-2006 生活饮用水卫生标准
GB/T 6682-2008 分析实验室用水规格和试验方法 GB 7718 预包装食品标签通则
GB/T 8170-2008 数值修约规则与极限数值的表示和判定 GB/T 20880-2007 食用葡萄糖
JJF 1070 定量包装商品净含量检验规则 NY/T 691-2003 番木瓜
定量包装商品计量监督管理办法 国家质量监督检验检疫总局令（2005）第75号 3、 原辅料要求 3.1 水
应符合 GB 5749-2006规定 3.2 木瓜果
应符合NY/T 691-2003的规定 3.3 葡萄糖
应符合GB/T 20880-2007中无水葡萄糖的规定 3.4 食品添加剂
食品添加剂使用的品种和使用量应符合GB2760 的规定，质量应符合相应产品标准的规定。 4、 技术要求 4.1 感官
应符合表1的规定
表1
4.2 理化指标 应符合表2的规定。
4.3 微生物指标 应符合表3规定。
5、 试验方法 5.1 一般规定
本标准所用试剂和水，在没有注明其他要求时，均指分析纯试剂和GB/T 6682-2008中规定的三级水；所述溶液如未指明溶剂，均系水溶液；所有滴定分析用标准溶液按GB/T 601-2002配制和标定；所有杂质测定用标准溶液按GB/T 601-2002配制；所有试验方法中所用制剂和制品按GB/T 603-2002配制。 5.2 感官
用目测、鼻嗅、口尝方法检查。 5.3 理化指标 5.3.1 酶活力的测定 5.3.1.1 原理
蛋白酶在一定温度与PH条件下，水解酪蛋白底物，然后加入三氯乙酸终止酶反应，并使未水解的酪蛋白沉淀除去，滤液对紫外光有吸收，可用紫外分光光度法测定，根据吸收度计算酶活力。 5.3.1.2 酶活力定义
在一定的条件下，每分钟水解酪蛋白生成1ug酪氨酸所需的酶的量，为1个酶活力单位（U）。 5.3.1.3 仪器和设备
恒温水浴（37±0.2℃）.
紫外分光光度计。 5.3.1.4 试剂和溶液 5.3.1.4.1 酶稀释液
称取L-半胱氨酸盐酸盐（C3N7NO2S·HCl·H2O=157.63）5.27g，氯化钠（NaCl）23.4g，加水500mL溶解，另取乙二胺四乙酸二钠（C10H14N2O8Na2·2H2O）（该物质在水中的溶解度不高，如果没有溶解会使溶液出现浑浊现象）2.23g，加水200mL溶解，合并两液均匀，用0.1mol/L氢氧化钠溶液或0.1mol/L盐酸溶液调至PH=5.5（初次配该溶液PH原始值为1.75，需要加0.5mol/L的氢氧化钠25ml左右调节至PH=5.5），加水稀释至1000mL。 5.3.1.4.2 0.05mol/L磷酸氢二钠溶液
称取磷酸氢二钠（Na2HPO4·12H2O）17.89g，加水溶解，并定容至1000mL。（该溶液使用量为80ml，配制时可考虑配100ml） 5.3.1.4.3 酪蛋白溶液（该溶液配制过程较快，可以不用提前很久配制。）
称取经硅胶干燥器中干燥至恒重的酪蛋白（干酪素，不经干燥至恒重仍可做检测）0.6g（精确至0.0002g），置烧杯中，加入0.05mol/L磷酸氢二钠溶液80mL。在沸水浴中边加热边搅拌，直至完全溶解，冷却后，用0.1mol/L盐酸调至PH=7.0（初次配该溶液，配制好后PH值在7.5左右，需要加盐酸调节，0.1mol/L的盐酸用量为5ml左右），转移到100mL容量瓶中，加水至刻度。临用现配。 5.3.1.4.4 三氯乙酸溶液
称取三氯乙酸（C2HCl3O2）17.99g，加无水乙酸钠（CH3COONa）29.94g和冰乙酸（CH3COOH）18.9mL，加适量水溶解后，加水定容至1000mL，振摇均匀。
5.3.1.4.5 酪氨酸标准溶液
称取于105℃干燥至恒重的酪氨酸50mg（精确至0.0002g），用0.1mol/L盐酸溶解，移入100mL容量瓶中，并用0.1mol/L盐酸定容至刻度，摇匀。吸收1.00mL置10mL容量瓶中，加0.1mol/L盐酸至刻度，摇匀，即得含酪氨酸50ug/mL的溶液。 5.3.1.4.6 试样溶液（稀释倍数为25000）
称取适量试样（精确至0.0002g）（稀释倍数参考表4）置研体中，加少量酶稀释液研磨20min，用酶稀释液移至250mL容量瓶中，加酶稀释液至刻度，充分摇匀；根据不同品种酶活力高低，吸取适量试样溶液置于容量瓶中，加酶稀释液稀释至适当浓度（稀释至试样溶液吸光度在0.2～0.6范围内），充分摇匀，供测试用（60min内使用）。
表4
5.3.1.5 测定步骤
吸取试样溶液1.00mL置于10mL具塞比色管中，于37℃±0.2℃水
浴中保温10min，加入在37℃±0.2℃水浴中预热的酪蛋白溶液5.00mL，摇匀，置37℃±0.2℃水浴中，反应10min，加入在37℃±0.2℃水浴中预热的三氯乙酸溶液5.00mL，摇匀，于37℃±0.2℃水浴中放置40min，用干燥滤纸过滤，取续滤液，在2h内，在波长为275nm处用蒸馏水作参比测出滤液的吸光度A1。（可做两个平行，第一次测定两个平行值分别为0.389、0.399）
空白试验：吸取试样溶液1.00mL置于10mL具塞比色管中，于37℃±0.2℃水浴中保温10min，加入在37℃±0.2℃水浴中预热的三氯乙酸溶液5.00mL，摇匀，反应10min，加入在37℃±0.2℃水浴中预热的酪蛋白溶液5.00mL，摇匀，于37℃±0.2℃水浴中放置40min，用干燥滤纸过滤，取续滤液，在2h内，在波长为275nm处用蒸馏水作参比测出滤液的吸光度A2。（初次测定该值为0.292）
酪氨酸标准溶液吸光度：用蒸馏水作参比，在波长275nm处测定50ug/mL酪氨酸标准溶液的吸光度A3。（初次测定该值为0.346） 5.3.1.6 结果计算
试样中酶活力X1（U/g）按式（1）计算：
X1=
式中：
A1——试样溶液的吸光度 A2——空白试样的吸光度 A3——酪氨酸标准溶液的吸光度
m1——对照品溶液每毫升中含酪氨酸的量，单位为微克（ug），
„„„„„„（1）
即为50
m2——试样的质量，单位为克（g） n——试样溶液的稀释倍数，即为25000 5.3.1.7 允许差
二次平行测定结果的相对误差应不大于10%，取其算术平均值为测定结果。 5.3.2 水分的测定
按GB/T 5009.3-2003的规定执行。 5.3.3 重金属
按GB/T 5009.74-2003的规定执行。 5.3.4 铅
按GB/T 5009.75-2003的规定执行。 5.3.5 总砷
按GB/T 5009.76-2003的规定执行。 5.4 微生物指标 5.4.1 菌落总数
按GB/T 4789.2-2008的规定执行。 5.4.2 大肠菌群
按GB/T 4789.3-2008的规定执行。 5.4.3 沙门氏菌
按GB/T 4789.4-2008的规定执行。 5.4.4 金黄色葡萄球菌
按GB/T 4789.10-2008的规定执行。 5.4.5 致泻大肠埃希氏菌
按GB/T 4789.6-2003的规定执行。 5.5 净含量
按JJF 1070的规定执行。 6、 6.1 组批
以相同的原材料，同一班次生产的产品为一批。 6.2 抽样
6.2.1 感官、理化及微生物指标
随机从每批5%以上的包装箱中抽取样品，每箱中抽取样品约10g左右，试样总量应不小于50g。迅速混匀后分别装入两个清洁干燥的磨口玻璃瓶中，并在标签上注明生产厂名，产品名称，批号，数量及取样日期。一瓶作检验用，一瓶留存备查。微生物检验按无菌操作取样。 6.2.2 净含量
按JJF 1070及国家质量监督检验检疫总局令（2005）第75号的规定进行。 6.3 出厂检验
6.3.1 每批产品均应进行出厂检验。
6.3.2 出厂检验项目为：4.1，4.2中酶活力、水分，4.3中菌落总数、大肠菌群，净含量。 6.4 型式检验
检验规则
6.4.1 型式检验每半年进行一次，有下列情况之一时亦应进行型式检验：
——产品试制、正式投产时
——更换设备或长期停产再恢复生产时
——出厂检验结果与上次型式检验结果有较大差异时 ——原料、工艺较大变化，可能影响产品质量时 ——卫生或质量监督机构提出要求时 6.4.2 型式检验项目为第4章全部要求。 6.5 判定规则
6.5.1 质量指标合格的判断，采用GB/T 8170-2008中的“修约值比较法”。
6.5.2 微生物指标及净含量有一项不符合本标准规定，即判定产品为不合格，不复检。其他指标若有一项以上（含一项）不符合本标准规定，应重新从该批产品中抽取两倍样品进行复检。复检结果全部符合本标准要求时，产品判为合格。如果复检结果仍有一项不符合本标准规定，则判定为产品不合格。 7 标志、包装、运输、贮存 7.1 标志
小时包装的标签应符合GB 7718的规定。外包装储运图示标志应符合GB/T 191-2008的规定。 7.2 包装
产品用塑料袋和铝箔袋包装，每袋净含量为1000g。产品净含量应符
合《定量包装商品计量监督管理办法》的规定。有外包装的产品外包装用瓦楞纸箱。包装材料均应符合食品卫生要求。
7.3 运输
运输工具必须清洁、卫生，严禁与有毒、有害、有腐蚀性、易挥发性或有异味的物品混装混运，必须轻装轻卸，严禁摔撞，避免受潮和日晒雨淋。
7.4 贮存
应贮存在阴凉、通风、干燥的仓库内。不得露天存放，不得与有毒、有污染的物品或其他杂物混存。
7.5 保质期
应符合上述贮运规定、产品包装完整、未经启封的条件下，保质期为12个月（长时间贮存温度应不大于0℃）