营养学报2013年第35卷第3期 293
枸杞多糖对高糖环境下肾小球系膜
细胞基质的影响
罗 琼1,2，唐 韦1，向春燕1，阎 俊1，赵颀涵1，陆明艳1
（1武汉大学公共卫生学院营养与食品卫生学系，2武汉大学食品与药品评价研究中心，武汉430071）
【摘 要】目的 研究枸杞多糖对高糖环境下肾小球系膜细胞基质的影响。方法 将细胞分为空白、正常糖、高糖及不同浓度(200、400和800mg/L)枸杞杞多糖干预共6组，MTT法检测细胞增殖情况，H2DCF-DA法检测细胞内活性氧水平，ELISA法检测细胞蛋白激酶C（PKC）活性，免疫细胞化学法检测转化生长因子β 1（TGF-β1）及纤维连接蛋白（FN）的表达情况。结果 高糖组分别与空白组、正常糖组比，其细胞内活性氧的生成和蛋白激酶C活性均显著增加（P
关键词： 枸杞多糖；氧化应激；蛋白激酶C；细胞因子
中图分类号：R151.4 文献标识码：A 文章编号：0512-7955(2013)03-0293-04
EFFECTS OF LYCIUM BARBARUM POLYSACCHARIDES ON THE FORMATION OF EXTRACELLULAR MATRIX IN GLOMERULAR MESANGIAL CELLS CULTURED
IN HIGH GLUCOSE
(1School of Public Health,Wuhan University,2Research Center of Food and Drug Evaluation,Wuhan University,Wuhan 430071,China)
LUO Qiong，TANG Wei，XIANG Chun-yan1，YAN Jun1，ZHAO Qi-han1，LU Ming-yan1
1,21
【Abstract】 Objective To study the effects of Lycium barbarum polysaccharides (LBP) on the formation of extracellu- lar matrix of human mesangial cells in high glucose. Methods Human mesangial cells were cultured in vitro and divided into control group, normal glucose group, high glucose group, and LBP groups at different concentrations (200, 400, 800 mg/L), for 48 h. Endogenous ROS was measured by a fluorometric assay with 2′,7′-dichlorofluorescin diacetate (DCFH-DA). The proliferation of mesangial cells was measured by MTT colorimetric method. The activity of protein kinase C (PKC) was measured by enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA). The expression of transforming growth factor-beta 1 (TGF-β1), fibronectin (FN) were detected by immunocytochemistry. Results High glucose could promote the growth of cells，increase ROS production，PKC activity and decrease the expression of TGF-β1 and FN. LBP could inhibit the growth of cells, reduce the expression of TGF-β1, FN, PKC activity and ROS production in mesangial cells cultured under high glucose. Conclusion LBP could protect against the cellular damage induced by high glucose. [ACTA NUTRIMENTA SINICA, 2013,35(3)：
293－296]
Key words：Lycium barbarum polysaccharides; oxidative stress； protein kinase C; cytokine
随着人们经济和生活水平的改变，人类的疾病模式已发生改变，慢性非传染性疾病已成为全
[1-2]
糖尿病在我国已球面临的重大公共卫生问题。
成为一个广泛流行的慢性疾病，中国的糖尿病患者人数接近一个亿，发病率高达9.7%。糖尿病的严重后果是其后期形成的多种并发症，主要涉及全身大小血管，累及心脏、肾脏、神经、皮肤、
[4-5]
视网膜等多个器官，可导致残疾和死亡，其主
[3]
收稿日期 2012-11-08
基金项目 湖北省卫生厅科研基金（No.JX5B10） 作者简介 罗琼（1957－），女，博士，教授， E-mail：[email protected]； 通讯作者：罗琼
要病变为细胞外基质的沉积。
肾小球系膜细胞是一种肾小球固有细胞，肾小球系膜细胞增生、细胞外基质增多是糖尿病肾病的重要标志，细胞内活性氧（ROS）生成增多、蛋白激酶C（PKC）激活是糖尿病肾病的重要发病机制。有研究表明，植物多糖能够减少ROS的生成，减少PKC的激活。
枸杞多糖（lycium barbarum polysaccha- rides，LBP）是枸杞子的主要活性成分。研究表明，枸杞多糖具有抗氧化、抗辐射、降血脂、抗疲劳等多种生理活性作用，但目前其降血糖作用的具体机制尚不明确。本研究观察了枸杞多糖对高糖环境下肾小球系膜细胞增殖抑制、PKC激活及活性氧生成的影响，探讨枸杞多糖对系膜细胞可能的保护机制。
1 材 料 与 方 法 1.1 材料
人肾小球系膜细胞购于中南大学湘雅中心实验室；枸杞子产自宁夏中宁县，枸杞多糖按文 [6]
献方法制备。活性氧检测试剂盒（Beyotime公司）；PKC ELISA试剂盒（厦门慧嘉生物）；抗体、DAB显色试剂盒（武汉博士德生物）；荧光分光光度计（HITACHI F-2500）；酶标仪（BioTek synergy2）。 1.2 方法
1.2.1 实验分组及处理：将肾小球系膜细胞随机分为空白组、正常糖组(NG组：5 mmol/LD-葡萄糖)、高糖组（HG组：30 mmol/LD-葡萄糖）、LBP低、中、高剂量组（含200、400和800mg/L枸杞多糖+高糖培养基）。
1.2.2 细胞抑制实验：消化贴壁的肾小球系膜细胞，调整密度后接种于96孔板，待细胞贴壁后将培养液换成含30 mmol/L葡萄糖的RPMI1640培养基，并加入不同浓度的LBP（0、200、400和800 mg/L）。每孔100 μl，每一组设5个复孔，于48h后，每孔加入5 mg/ml MTT 20 μl继续孵育4 h，弃去培养液后，每孔加入DMSO 150 μl，充分混匀振荡10min，酶标仪在490nm处测吸光度（OD）值。计算平均OD值和抑制率。
抑制率（%）=（1-实验组OD值/对照组OD值）×100
将细胞接种于6孔板中培养，分别给予不同刺激，每组3个复孔，培养48 h后，结束培养。弃掉细胞培养液，加入不含血清，含10 µmol/L DCFH- DA的培养液1.5 ml。37℃培养箱内孵育20 min。用PBS洗涤细胞3次，以除去未进入细胞内的DCFH-DA。用胰蛋白酶将细胞消化下来收集，用
荧光分光光度计观察活性氧水平（激发波长 488 nm，发射波长525 nm）。
1.2.4 PKC含量测定：各组细胞贴壁后，按实验分组分别加入不同处理因素，每组3个复孔，培养48h后，收集细胞上清液，按ELISA试剂盒步骤操作。用酶标仪于450 nm波长处依序测定各组OD值。根据绘制的标准曲线，计算PKC含量。 1.2.5 转化生长因子β1（TGF-β1）和纤维连接蛋白（FN）蛋白表达检测：细胞贴壁后，用PBS洗细胞板2次，干燥后用4%多聚甲醛固定15 min。室温下用3% H2O2灭活内源性酶。滴加5%BSA封闭液室温作用10 min。滴加适当稀释的一抗，37℃孵育1 h，PBS洗后滴加二抗，37℃孵育30 min，PBS洗后DAB显色，封片观察。镜下观察有棕黄色颗粒者为阳性细胞，在40×光镜下，随机选取10个不重叠的视野，人工计数着色阳性的细胞，计算阳性率。
阳性率(%)=视野内阳性细胞数目/视野内总细胞数
×100
1.3 数据处理
采用SPSS18.0软件进行统计分析，计量资料结果以±s 表示，结果使用单因素方差分析，组间两两比较采用Dunnet-t检验进行分析。
2 结 果
2.1 LBP对高糖环境下肾小球系膜细胞增殖抑制的影响（表1）
Table 1 Effects of LBP on the proliferation of
mesangial cells induced by high glucose
Group OD Inhibition (%) High glucose 1.173±0.021 LBP 200 mg/L 0.693±0.040a 40.96 LBP 400 mg/L 0.552±0.062a 52.96 LBP 800 mg/L 0.368±0.309a 68.66
1.2.3细胞内活性氧检测：根据试剂盒说明书，
LBP低、中、高各剂量组OD值均低于高糖组，
。LBP对高糖环境差异有统计学意义（P＜0.05）
下系膜细胞增殖的抑制效果随着浓度的增加而
营养学报2013年第35卷第3期 295
作用增强。 是糖尿病最常见和严重的并发症之一，其发生率2.2 LBP对活性氧生成的影响（表2） 呈现逐年上升趋势，已经成为发达国家终末期肾 正常糖组与空白组相比，活性氧的生成量无病的主要原因。该病的发病基础是高糖环境引起
。高糖组分别与空白组、正明显差别（P＞0.05）的葡萄糖代谢异常，由糖代谢异常引起的氧化应
。常糖组相比，活性氧生成明显增多（P＜0.05）激产生、PKC激活等多种机制共同作用造成了对
与高糖组比，LBP低、中、高各剂量组活性氧生机体的损伤。枸杞多糖是中药材枸杞子中重要生
。LBP中剂量组活性成量均明显减少（P＜0.05）物活性成分，具有多种生物功能，其在糖尿病及
氧生成量低于LBP低剂量组和LBP高剂量组 其并发症的预防治疗等方面的作用受到关注。
；LBP低剂量组与LBP高剂量组相比，（P＜0.05）当细胞处于高糖环境时，系膜细胞成为高血
。 活性氧生成量无明显的差别（P＞0.05）糖作用的靶点之一，细胞内由高糖诱导产生的一
2.3 LBP对PKC激活的影响（表2） 些活性物质会影响细胞的增殖，系膜细胞的异常
增殖是糖尿病发生发展过程中的一个主要特征。Table 2 Effect of LBP on ROS and PKC levels in
mesangial cells (±s, n=18) 本研究显示，当枸杞多糖浓度在200、400、 Group ROS(F) PKC(ng/ml)
800 mg/L时，能明显的抑制高糖环境引起的系膜Control 0.986±0.033 20.403±0.131
Normal glucose 1.021±0.008 21.501±0.515 。 细胞的异常增殖（P＜0.05）
ab
High glucose 1.807±0.048 27.340±0.359ab
ROS是调节微血管结构和功能状态的重要信LBP 200 mg/L 1.494±0.043c 23.150±0.644c
LBP 400 mg/L 1.257±0.150cde 24.333±0.436c 号分子，高糖浓度的培养环境，可刺激细胞内活LBP 800 mg/L 1.383±0.190c 26.901±0.542 a性氧的增加，氧化应激与糖尿病肾病的发病机制P
叶伟兵等报道，黄芪多糖能有效改善糖尿病肾正常糖组与空白组比，PKC含量无明显差别病患者的临床症状，改善肾功能，对肾脏起到一
[9]。高糖组分别与空白组、正常糖组相（P＞0.05）定的保护作用。杨旭东等研究表明，姬松茸多
比较，PKC含量明显增多，差异均有统计学意义糖能够使糖尿病大鼠肾脏中MDA含量明显下降，
。与高糖组比，LBP低、中剂量组PKC（P＜0.05）SOD、GSH-Px活性显著上升，通过抑制肾组织的
[10]。含量明显减少，差异有统计学意义（P＜0.05）氧化应激达到保护肾组织的目的。芮海云等报
。 LBP高剂量组与高糖组比无明显差别（P＞0.05）道，白芨多糖具有显著抑制羟自由基的产生、清
2.4 LBP对TGF-β1和FN蛋白表达的影响（表3） 除超氧阴离子等抗氧化作用。本研究表明，高糖
Table 3 Effects of LBP on expression of TGF-β1 and 环境下系膜细胞的ROS生成显著增多，枸杞多糖
FN in mesangial cells
能够抑制高糖环境下ROS的生成，抵抗氧化应激Group TGF-β1 positive cells (%) FN positive cells (%)
Control 58.3 19.4 损伤，发挥对肾脏的保护作用，与前面上述植物
bb
Normal glucose 61.4 23.8
多糖抗氧化研究结果一致。 High glucose 78.1a 67.3a
LBP 200 mg/L 76.8a 62.1a PKC是丝氨酸/苏氨酸激酶家族的总称，参与LBP 400 mg/L 66.1ab 50.8ab
了生化反应、基因表达等的调控，是一种非常重LBP 800 mg/L 69.5a 54.6ab
P
时，额外的葡萄糖代谢通过多元醇途径重新合成与空白组相比，高糖刺激48h后，系膜细胞
DAG和磷脂酸，而DAG是激活PKC的第二信使，的TGF-β1、FN表达明显上调。与高糖组相比， LBP
因此，高糖环境可激活PKC 。有研究表明，枸杞中剂量组均能够抑制明显抑制TGF-β1、FN的表
多糖能够改善2型糖尿病小鼠的肾功能，抑制糖，而LBP高剂量组能够抑制FN的达（P＜0.05）
尿病小鼠PCK-βⅡ和IV 型胶原的表达，保护肾。 表达（P＜0.05）
[11]
脏。体外研究表明，LBP可通过促进细胞膜的
流动性及促进Co小鼠淋巴细胞浆内的PKC从胞3 讨 论
[12]
浆转到胞膜的转位从而发挥免疫调节作用。本糖尿病肾病（diabetic nephropathy，DN）
研究结果提示枸杞多糖能够通过抑制PKC活性从而达到保护肾小球系膜细胞的作用。
TGF-β1作为一种致纤维化因子,在肾脏中的系膜细胞、肾小管上皮细胞、成纤维细胞等肾脏固有细胞受损时其表达发生异常，DN时其表达增加。FN是一种高分子量糖蛋白，是构成肾小球基底膜非胶原蛋白质的重要成分，参与了DN的发生发展。本研究结果显示，高糖可使系膜细胞TGF-β1、FN表达增加，LBP能够下调高糖的刺激作用，使TGF-β1、FN表达下降。
[参 考 文 献]
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* * * * * * *
（上接292页）
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（续完）
营养学报2013年第35卷第3期 293
枸杞多糖对高糖环境下肾小球系膜
细胞基质的影响
罗 琼1,2，唐 韦1，向春燕1，阎 俊1，赵颀涵1，陆明艳1
（1武汉大学公共卫生学院营养与食品卫生学系，2武汉大学食品与药品评价研究中心，武汉430071）
【摘 要】目的 研究枸杞多糖对高糖环境下肾小球系膜细胞基质的影响。方法 将细胞分为空白、正常糖、高糖及不同浓度(200、400和800mg/L)枸杞杞多糖干预共6组，MTT法检测细胞增殖情况，H2DCF-DA法检测细胞内活性氧水平，ELISA法检测细胞蛋白激酶C（PKC）活性，免疫细胞化学法检测转化生长因子β 1（TGF-β1）及纤维连接蛋白（FN）的表达情况。结果 高糖组分别与空白组、正常糖组比，其细胞内活性氧的生成和蛋白激酶C活性均显著增加（P
关键词： 枸杞多糖；氧化应激；蛋白激酶C；细胞因子
中图分类号：R151.4 文献标识码：A 文章编号：0512-7955(2013)03-0293-04
EFFECTS OF LYCIUM BARBARUM POLYSACCHARIDES ON THE FORMATION OF EXTRACELLULAR MATRIX IN GLOMERULAR MESANGIAL CELLS CULTURED
IN HIGH GLUCOSE
(1School of Public Health,Wuhan University,2Research Center of Food and Drug Evaluation,Wuhan University,Wuhan 430071,China)
LUO Qiong，TANG Wei，XIANG Chun-yan1，YAN Jun1，ZHAO Qi-han1，LU Ming-yan1
1,21
【Abstract】 Objective To study the effects of Lycium barbarum polysaccharides (LBP) on the formation of extracellu- lar matrix of human mesangial cells in high glucose. Methods Human mesangial cells were cultured in vitro and divided into control group, normal glucose group, high glucose group, and LBP groups at different concentrations (200, 400, 800 mg/L), for 48 h. Endogenous ROS was measured by a fluorometric assay with 2′,7′-dichlorofluorescin diacetate (DCFH-DA). The proliferation of mesangial cells was measured by MTT colorimetric method. The activity of protein kinase C (PKC) was measured by enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA). The expression of transforming growth factor-beta 1 (TGF-β1), fibronectin (FN) were detected by immunocytochemistry. Results High glucose could promote the growth of cells，increase ROS production，PKC activity and decrease the expression of TGF-β1 and FN. LBP could inhibit the growth of cells, reduce the expression of TGF-β1, FN, PKC activity and ROS production in mesangial cells cultured under high glucose. Conclusion LBP could protect against the cellular damage induced by high glucose. [ACTA NUTRIMENTA SINICA, 2013,35(3)：
293－296]
Key words：Lycium barbarum polysaccharides; oxidative stress； protein kinase C; cytokine
随着人们经济和生活水平的改变，人类的疾病模式已发生改变，慢性非传染性疾病已成为全
[1-2]
糖尿病在我国已球面临的重大公共卫生问题。
成为一个广泛流行的慢性疾病，中国的糖尿病患者人数接近一个亿，发病率高达9.7%。糖尿病的严重后果是其后期形成的多种并发症，主要涉及全身大小血管，累及心脏、肾脏、神经、皮肤、
[4-5]
视网膜等多个器官，可导致残疾和死亡，其主
[3]
收稿日期 2012-11-08
基金项目 湖北省卫生厅科研基金（No.JX5B10） 作者简介 罗琼（1957－），女，博士，教授， E-mail：[email protected]； 通讯作者：罗琼
要病变为细胞外基质的沉积。
肾小球系膜细胞是一种肾小球固有细胞，肾小球系膜细胞增生、细胞外基质增多是糖尿病肾病的重要标志，细胞内活性氧（ROS）生成增多、蛋白激酶C（PKC）激活是糖尿病肾病的重要发病机制。有研究表明，植物多糖能够减少ROS的生成，减少PKC的激活。
枸杞多糖（lycium barbarum polysaccha- rides，LBP）是枸杞子的主要活性成分。研究表明，枸杞多糖具有抗氧化、抗辐射、降血脂、抗疲劳等多种生理活性作用，但目前其降血糖作用的具体机制尚不明确。本研究观察了枸杞多糖对高糖环境下肾小球系膜细胞增殖抑制、PKC激活及活性氧生成的影响，探讨枸杞多糖对系膜细胞可能的保护机制。
1 材 料 与 方 法 1.1 材料
人肾小球系膜细胞购于中南大学湘雅中心实验室；枸杞子产自宁夏中宁县，枸杞多糖按文 [6]
献方法制备。活性氧检测试剂盒（Beyotime公司）；PKC ELISA试剂盒（厦门慧嘉生物）；抗体、DAB显色试剂盒（武汉博士德生物）；荧光分光光度计（HITACHI F-2500）；酶标仪（BioTek synergy2）。 1.2 方法
1.2.1 实验分组及处理：将肾小球系膜细胞随机分为空白组、正常糖组(NG组：5 mmol/LD-葡萄糖)、高糖组（HG组：30 mmol/LD-葡萄糖）、LBP低、中、高剂量组（含200、400和800mg/L枸杞多糖+高糖培养基）。
1.2.2 细胞抑制实验：消化贴壁的肾小球系膜细胞，调整密度后接种于96孔板，待细胞贴壁后将培养液换成含30 mmol/L葡萄糖的RPMI1640培养基，并加入不同浓度的LBP（0、200、400和800 mg/L）。每孔100 μl，每一组设5个复孔，于48h后，每孔加入5 mg/ml MTT 20 μl继续孵育4 h，弃去培养液后，每孔加入DMSO 150 μl，充分混匀振荡10min，酶标仪在490nm处测吸光度（OD）值。计算平均OD值和抑制率。
抑制率（%）=（1-实验组OD值/对照组OD值）×100
将细胞接种于6孔板中培养，分别给予不同刺激，每组3个复孔，培养48 h后，结束培养。弃掉细胞培养液，加入不含血清，含10 µmol/L DCFH- DA的培养液1.5 ml。37℃培养箱内孵育20 min。用PBS洗涤细胞3次，以除去未进入细胞内的DCFH-DA。用胰蛋白酶将细胞消化下来收集，用
荧光分光光度计观察活性氧水平（激发波长 488 nm，发射波长525 nm）。
1.2.4 PKC含量测定：各组细胞贴壁后，按实验分组分别加入不同处理因素，每组3个复孔，培养48h后，收集细胞上清液，按ELISA试剂盒步骤操作。用酶标仪于450 nm波长处依序测定各组OD值。根据绘制的标准曲线，计算PKC含量。 1.2.5 转化生长因子β1（TGF-β1）和纤维连接蛋白（FN）蛋白表达检测：细胞贴壁后，用PBS洗细胞板2次，干燥后用4%多聚甲醛固定15 min。室温下用3% H2O2灭活内源性酶。滴加5%BSA封闭液室温作用10 min。滴加适当稀释的一抗，37℃孵育1 h，PBS洗后滴加二抗，37℃孵育30 min，PBS洗后DAB显色，封片观察。镜下观察有棕黄色颗粒者为阳性细胞，在40×光镜下，随机选取10个不重叠的视野，人工计数着色阳性的细胞，计算阳性率。
阳性率(%)=视野内阳性细胞数目/视野内总细胞数
×100
1.3 数据处理
采用SPSS18.0软件进行统计分析，计量资料结果以±s 表示，结果使用单因素方差分析，组间两两比较采用Dunnet-t检验进行分析。
2 结 果
2.1 LBP对高糖环境下肾小球系膜细胞增殖抑制的影响（表1）
Table 1 Effects of LBP on the proliferation of
mesangial cells induced by high glucose
Group OD Inhibition (%) High glucose 1.173±0.021 LBP 200 mg/L 0.693±0.040a 40.96 LBP 400 mg/L 0.552±0.062a 52.96 LBP 800 mg/L 0.368±0.309a 68.66
1.2.3细胞内活性氧检测：根据试剂盒说明书，
LBP低、中、高各剂量组OD值均低于高糖组，
。LBP对高糖环境差异有统计学意义（P＜0.05）
下系膜细胞增殖的抑制效果随着浓度的增加而
营养学报2013年第35卷第3期 295
作用增强。 是糖尿病最常见和严重的并发症之一，其发生率2.2 LBP对活性氧生成的影响（表2） 呈现逐年上升趋势，已经成为发达国家终末期肾 正常糖组与空白组相比，活性氧的生成量无病的主要原因。该病的发病基础是高糖环境引起
。高糖组分别与空白组、正明显差别（P＞0.05）的葡萄糖代谢异常，由糖代谢异常引起的氧化应
。常糖组相比，活性氧生成明显增多（P＜0.05）激产生、PKC激活等多种机制共同作用造成了对
与高糖组比，LBP低、中、高各剂量组活性氧生机体的损伤。枸杞多糖是中药材枸杞子中重要生
。LBP中剂量组活性成量均明显减少（P＜0.05）物活性成分，具有多种生物功能，其在糖尿病及
氧生成量低于LBP低剂量组和LBP高剂量组 其并发症的预防治疗等方面的作用受到关注。
；LBP低剂量组与LBP高剂量组相比，（P＜0.05）当细胞处于高糖环境时，系膜细胞成为高血
。 活性氧生成量无明显的差别（P＞0.05）糖作用的靶点之一，细胞内由高糖诱导产生的一
2.3 LBP对PKC激活的影响（表2） 些活性物质会影响细胞的增殖，系膜细胞的异常
增殖是糖尿病发生发展过程中的一个主要特征。Table 2 Effect of LBP on ROS and PKC levels in
mesangial cells (±s, n=18) 本研究显示，当枸杞多糖浓度在200、400、 Group ROS(F) PKC(ng/ml)
800 mg/L时，能明显的抑制高糖环境引起的系膜Control 0.986±0.033 20.403±0.131
Normal glucose 1.021±0.008 21.501±0.515 。 细胞的异常增殖（P＜0.05）
ab
High glucose 1.807±0.048 27.340±0.359ab
ROS是调节微血管结构和功能状态的重要信LBP 200 mg/L 1.494±0.043c 23.150±0.644c
LBP 400 mg/L 1.257±0.150cde 24.333±0.436c 号分子，高糖浓度的培养环境，可刺激细胞内活LBP 800 mg/L 1.383±0.190c 26.901±0.542 a性氧的增加，氧化应激与糖尿病肾病的发病机制P
叶伟兵等报道，黄芪多糖能有效改善糖尿病肾正常糖组与空白组比，PKC含量无明显差别病患者的临床症状，改善肾功能，对肾脏起到一
[9]。高糖组分别与空白组、正常糖组相（P＞0.05）定的保护作用。杨旭东等研究表明，姬松茸多
比较，PKC含量明显增多，差异均有统计学意义糖能够使糖尿病大鼠肾脏中MDA含量明显下降，
。与高糖组比，LBP低、中剂量组PKC（P＜0.05）SOD、GSH-Px活性显著上升，通过抑制肾组织的
[10]。含量明显减少，差异有统计学意义（P＜0.05）氧化应激达到保护肾组织的目的。芮海云等报
。 LBP高剂量组与高糖组比无明显差别（P＞0.05）道，白芨多糖具有显著抑制羟自由基的产生、清
2.4 LBP对TGF-β1和FN蛋白表达的影响（表3） 除超氧阴离子等抗氧化作用。本研究表明，高糖
Table 3 Effects of LBP on expression of TGF-β1 and 环境下系膜细胞的ROS生成显著增多，枸杞多糖
FN in mesangial cells
能够抑制高糖环境下ROS的生成，抵抗氧化应激Group TGF-β1 positive cells (%) FN positive cells (%)
Control 58.3 19.4 损伤，发挥对肾脏的保护作用，与前面上述植物
bb
Normal glucose 61.4 23.8
多糖抗氧化研究结果一致。 High glucose 78.1a 67.3a
LBP 200 mg/L 76.8a 62.1a PKC是丝氨酸/苏氨酸激酶家族的总称，参与LBP 400 mg/L 66.1ab 50.8ab
了生化反应、基因表达等的调控，是一种非常重LBP 800 mg/L 69.5a 54.6ab
P
时，额外的葡萄糖代谢通过多元醇途径重新合成与空白组相比，高糖刺激48h后，系膜细胞
DAG和磷脂酸，而DAG是激活PKC的第二信使，的TGF-β1、FN表达明显上调。与高糖组相比， LBP
因此，高糖环境可激活PKC 。有研究表明，枸杞中剂量组均能够抑制明显抑制TGF-β1、FN的表
多糖能够改善2型糖尿病小鼠的肾功能，抑制糖，而LBP高剂量组能够抑制FN的达（P＜0.05）
尿病小鼠PCK-βⅡ和IV 型胶原的表达，保护肾。 表达（P＜0.05）
[11]
脏。体外研究表明，LBP可通过促进细胞膜的
流动性及促进Co小鼠淋巴细胞浆内的PKC从胞3 讨 论
[12]
浆转到胞膜的转位从而发挥免疫调节作用。本糖尿病肾病（diabetic nephropathy，DN）
研究结果提示枸杞多糖能够通过抑制PKC活性从而达到保护肾小球系膜细胞的作用。
TGF-β1作为一种致纤维化因子,在肾脏中的系膜细胞、肾小管上皮细胞、成纤维细胞等肾脏固有细胞受损时其表达发生异常，DN时其表达增加。FN是一种高分子量糖蛋白，是构成肾小球基底膜非胶原蛋白质的重要成分，参与了DN的发生发展。本研究结果显示，高糖可使系膜细胞TGF-β1、FN表达增加，LBP能够下调高糖的刺激作用，使TGF-β1、FN表达下降。
[参 考 文 献]
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（续完）