血涂片制作

血涂片制作

将血标本均匀地涂抹在清洁干燥的载玻片上,经染色后在显微镜下检查,这是血细胞形态学检查的基本方法,临床应用很广,特别是对各种血液病的形态学诊断很有价值。但是,如果血徐片制备不良,染色不佳,常使血细胞的形态学鉴别和诊断发生困难,甚至导致错误的结论。如血膜过厚,细胞重叠缩小;血膜太薄,白细胞多集中于边缘。因此,制备厚薄适宜、分布均匀的血涂片是血液学检验的基本技术之一。

一、载玻片的清洁

新载玻片上常有游离碱质,必须用约 lmol/L HCI浸泡 24h后,再用清水彻底冲洗,干燥备用。用过的载玻片可放入含适量肥皂或合成洗涤剂的清水中煮沸20min,再用热水将肥皂和血膜洗净,用清水反复冲洗,干燥备用。如急用载玻片,可将其置0、9乙醇中浸泡 lh,用蒸馏水洗净后,擦干或烘干备用。使用载玻片时,只能手持玻片边缘,切勿用手触及玻片表面,以保持玻片清洁、干燥、中性、无油腻。

二、制作血涂片的标本

血涂片既可由非抗凝的静脉血和毛细血管血制备,也可由

EDTA抗凝血制备。EDTA抗凝血中,钙离子被螫合后,能阻止血小板聚集,推片时血小板均匀平铺,显微镜下易于对血小板进行观察评价。但有时可观察到因EDTA引起的红细胞皱缩及白细胞丛集现象。但随着血液分析仪的逐步普及,血标本多为EDTA抗凝血,除作全血细细胞计数及多参数分析外,制备血涂片也非常方便,虽有上述弊端,但显微镜下易于发现。

三、血涂片的制备

血涂片的制备方法很多,如手工推片法、自动推片法、载(盖)玻片压拉法、旋转涂片法、棕黄层(buffy-coat)涂片法及厚血膜涂片法等,现介绍如下。

1、手工推片法 取血标本一滴置载玻片的一端,以边缘平滑的推片一端,从血滴前沿方向接触血液,使血液沿推片散开,推片与载玻片保持25~30o的平面夹角,平稳地将血向前推动,血液即在载玻片上形成一薄层血膜。将制成的血膜在空气中挥动,使迅速干燥,以免血细胞皱缩。

一张良好的涂片,要求厚薄适宜,头体尾分明,边缘整齐,两侧应留有空隙。玻片的一端应留有贴标签的地方。涂片的好坏与血滴大小、推片与载片之间角度、推片时的速度有关。血滴大、角度大、速度快,则血膜厚;反之则血膜薄。血膜分布不匀,主要是推片边缘不齐、用力不匀或载玻片不清洁

所致。

2、载玻片压拉法 取两张贴有标签的载玻片备用,将血液滴于一张载玻片的近中央处,立即将另一载玻片于之贴合,四角对齐,标签一端一个,使贴合后的玻片间留下如标签一样厚的间距。先将血滴沿纵向轻压展开,再将两玻片横向均匀拉开,得到两张血膜。此法最适用于血细胞的活体染色,预先将染料滴加在玻片上,干燥后备用。涂制时先将血液与染料混染一段时间,再按上述方法制成血涂片,显微镜下检查,如网织红细胞的检验。

3、旋转器涂片法 旋转涂片器的基本结构是:在与电动机转轴垂直的方向装一水平转盘,正中夹置载玻片。徐制时将血标本滴加在载玻片的中央,开动旋转涂片机,在规定的时间内即可制备一张良好的血涂片。对该仪器的要求应具有低惯性高转矩,开动时能立即加速(5000r/min),关机时能迅速停止(O、25s内)。使用这种仪器涂片,白细胞及红细胞能均匀分布在玻片上,且形态保持完好。

4、棕黄层涂片法为了获得较多的有核细胞,使用离心的方法,将 EDTA 抗凝血作分层离心(RCF—2260g,5min),取红细胞层上的棕黄层(有核细胞和血小板集中层,)作标本,用手工推制成涂片供检查用。

5、厚血膜涂片法从指尖或耳垂取血1滴(约20ul)于载玻片中央,用推片的一角将血由内向外旋转涂布,制成厚薄均

匀、直径约1、5cm的圆形血膜,自然干燥后,滴加数滴蒸馏水,使红细胞溶解,脱去血红蛋白。倾去水后血膜呈灰白色,干后染色镜检。厚血膜片因取血量多,待检成分较集中,因此特别适合于疟原虫、丝虫的微丝蚴等的检查。

本篇文章来源于 检验在线 http://www.labbbs.com/ 原文链接:http://www.labbbs.com/article/know/wMMDAwMDAwNDQwMg.html

血涂片制作

将血标本均匀地涂抹在清洁干燥的载玻片上,经染色后在显微镜下检查,这是血细胞形态学检查的基本方法,临床应用很广,特别是对各种血液病的形态学诊断很有价值。但是,如果血徐片制备不良,染色不佳,常使血细胞的形态学鉴别和诊断发生困难,甚至导致错误的结论。如血膜过厚,细胞重叠缩小;血膜太薄,白细胞多集中于边缘。因此,制备厚薄适宜、分布均匀的血涂片是血液学检验的基本技术之一。

一、载玻片的清洁

新载玻片上常有游离碱质,必须用约 lmol/L HCI浸泡 24h后,再用清水彻底冲洗,干燥备用。用过的载玻片可放入含适量肥皂或合成洗涤剂的清水中煮沸20min,再用热水将肥皂和血膜洗净,用清水反复冲洗,干燥备用。如急用载玻片,可将其置0、9乙醇中浸泡 lh,用蒸馏水洗净后,擦干或烘干备用。使用载玻片时,只能手持玻片边缘,切勿用手触及玻片表面,以保持玻片清洁、干燥、中性、无油腻。

二、制作血涂片的标本

血涂片既可由非抗凝的静脉血和毛细血管血制备,也可由

EDTA抗凝血制备。EDTA抗凝血中,钙离子被螫合后,能阻止血小板聚集,推片时血小板均匀平铺,显微镜下易于对血小板进行观察评价。但有时可观察到因EDTA引起的红细胞皱缩及白细胞丛集现象。但随着血液分析仪的逐步普及,血标本多为EDTA抗凝血,除作全血细细胞计数及多参数分析外,制备血涂片也非常方便,虽有上述弊端,但显微镜下易于发现。

三、血涂片的制备

血涂片的制备方法很多,如手工推片法、自动推片法、载(盖)玻片压拉法、旋转涂片法、棕黄层(buffy-coat)涂片法及厚血膜涂片法等,现介绍如下。

1、手工推片法 取血标本一滴置载玻片的一端,以边缘平滑的推片一端,从血滴前沿方向接触血液,使血液沿推片散开,推片与载玻片保持25~30o的平面夹角,平稳地将血向前推动,血液即在载玻片上形成一薄层血膜。将制成的血膜在空气中挥动,使迅速干燥,以免血细胞皱缩。

一张良好的涂片,要求厚薄适宜,头体尾分明,边缘整齐,两侧应留有空隙。玻片的一端应留有贴标签的地方。涂片的好坏与血滴大小、推片与载片之间角度、推片时的速度有关。血滴大、角度大、速度快,则血膜厚;反之则血膜薄。血膜分布不匀,主要是推片边缘不齐、用力不匀或载玻片不清洁

所致。

2、载玻片压拉法 取两张贴有标签的载玻片备用,将血液滴于一张载玻片的近中央处,立即将另一载玻片于之贴合,四角对齐,标签一端一个,使贴合后的玻片间留下如标签一样厚的间距。先将血滴沿纵向轻压展开,再将两玻片横向均匀拉开,得到两张血膜。此法最适用于血细胞的活体染色,预先将染料滴加在玻片上,干燥后备用。涂制时先将血液与染料混染一段时间,再按上述方法制成血涂片,显微镜下检查,如网织红细胞的检验。

3、旋转器涂片法 旋转涂片器的基本结构是:在与电动机转轴垂直的方向装一水平转盘,正中夹置载玻片。徐制时将血标本滴加在载玻片的中央,开动旋转涂片机,在规定的时间内即可制备一张良好的血涂片。对该仪器的要求应具有低惯性高转矩,开动时能立即加速(5000r/min),关机时能迅速停止(O、25s内)。使用这种仪器涂片,白细胞及红细胞能均匀分布在玻片上,且形态保持完好。

4、棕黄层涂片法为了获得较多的有核细胞,使用离心的方法,将 EDTA 抗凝血作分层离心(RCF—2260g,5min),取红细胞层上的棕黄层(有核细胞和血小板集中层,)作标本,用手工推制成涂片供检查用。

5、厚血膜涂片法从指尖或耳垂取血1滴(约20ul)于载玻片中央,用推片的一角将血由内向外旋转涂布,制成厚薄均

匀、直径约1、5cm的圆形血膜,自然干燥后,滴加数滴蒸馏水,使红细胞溶解,脱去血红蛋白。倾去水后血膜呈灰白色,干后染色镜检。厚血膜片因取血量多,待检成分较集中,因此特别适合于疟原虫、丝虫的微丝蚴等的检查。

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