细胞涂片染色分析
学习细胞学时，对常规的技术环节曾作了大致总结，请指正：
染色不良原因分析
细胞涂片常规巴氏染色步骤及原理：
具体步骤：
1、涂片投入95%酒精固定液 固定15分钟。
目的：细胞及胞内物质形态稳定（由半液态变为半固态），易于染色。
原因：固态比液态（流动性）更具稳定性，着色更迅速，染色效果也更稳定。
2、水洗 用浓度由高到低的 梯度酒精 入水 或直接 自来水漂洗。
目的：脱醇—置换出细胞内酒精，以便使水溶性苏木素进入。
3、苏木（水溶液）染核 时间灵活掌握，根据镜下观察染色效果 确定。
4、水洗 洗去过多残留苏木染液，
5、碱水（饱和碳酸锂）返蓝
目的：使苏木色精进一步形成，且使胞浆偏碱性，以便更好的与酸性染料结合。
6、水洗去多余碱水。
7、脱水 用浓度由低到高的 梯度酒精 或直接由水进入95%酒精。
8、橘黄和EA （O —E 染色）染胞浆
操作：每次染后 进入 95% 酒精漂净多余染液，以保证 不影响 下一步。
9、无水酒精脱水 —— 二甲苯透明 —— 树胶封固。
可能出现误差的步骤：
1、固定时间要求是：大于15 分钟，小于48小时。
如果制完片后马上进入水洗染色，固定效果必然欠佳。
2、水洗脱醇 应保证足够的时间和换水次数，
否则脱醇不彻底，会干扰水溶性苏木素进入细胞内进行染色反应。
3、苏木素的染色效果与本身的浓度、纯度，染色反应的速度直接相关。
此外，染色速度还受温度影响（温度越高，染色速度越快，效果越好）。
所以：本步骤注意事项为：
苏木素的质量——每日过滤并加新液；
天气温度（室温）的变化——调整时间，温高则时间短，温度低则时间长，皆以镜下观察的效果为准灵活掌握。
4、碱水返蓝：
为水溶液, 其浓度和纯度都会影响返蓝效果。
如果碱水使用时间过长，未及时更换，其浓度、纯度必然下降。
为加快速度或工作时间调整，玻片放入碱水中的时间常常偏长或偏短。
偏短——苏木色精形成不充分；
偏长——涂片在水溶液中浸泡过久会影响细胞固定效果, 从而影响染色效果。
以至于影响苏木素的显色效果和下一步胞浆染色效果。
5、橘黄和EA 的染色效果，
由 染液质量（配方、浓度、纯度）和染色时间 决定。
且橘黄和EA 一般都使用醇溶液，所以，此前的酒精漂洗脱水步骤也很重要。
此外，温度对效果的影响也和苏木素一样。
6、酒精的浓度、纯度受温度和使用率的影响。
气温上升，会使酒精挥发——浓度下降，导致以下效果
● 固定效果不佳，影响染色。
● 脱水不彻底，影响胞浆染色；
● 脱水不彻底，影响二甲苯透明。
7、透明
二甲苯透明不充分，镜下观察的效果就是结构模糊——不透明、不清亮的感觉。 比喻：透明良好的效果象是泡在清水中，清澈见底；
不透明 或透明效果不好 就象是泡在米汤或胶水中，（或是嵌在毛玻璃内）， 感觉模模糊糊，看不清结构。
此外，还可用石蜡油做透明剂。
8、有些医院的巴氏染色效果很好，几年不褪色，而效果不好的最快三五个月就开始褪色。 我观察实验的结果是：EA 染色有问题。褪色的涂片残留的颜色为红色，而且是苏木精被还原后呈现的红色，而EA 中的伊红、淡绿颜色全无；所以，应该注意：
伊红、淡绿的染色效果——包括原液的质量和配制；如酸碱度的调整；还有就是操作。
9、所有的染液和洗液都应定时过滤、定时更换。
其中的很多原理至今我也没弄清楚，翻了一些书也是操作过程、结论明确，但原理未分析透彻，或许是因为自己水平太浅，期待出现一本简明扼要因果清晰的书。
细胞涂片染色分析
学习细胞学时，对常规的技术环节曾作了大致总结，请指正：
染色不良原因分析
细胞涂片常规巴氏染色步骤及原理：
具体步骤：
1、涂片投入95%酒精固定液 固定15分钟。
目的：细胞及胞内物质形态稳定（由半液态变为半固态），易于染色。
原因：固态比液态（流动性）更具稳定性，着色更迅速，染色效果也更稳定。
2、水洗 用浓度由高到低的 梯度酒精 入水 或直接 自来水漂洗。
目的：脱醇—置换出细胞内酒精，以便使水溶性苏木素进入。
3、苏木（水溶液）染核 时间灵活掌握，根据镜下观察染色效果 确定。
4、水洗 洗去过多残留苏木染液，
5、碱水（饱和碳酸锂）返蓝
目的：使苏木色精进一步形成，且使胞浆偏碱性，以便更好的与酸性染料结合。
6、水洗去多余碱水。
7、脱水 用浓度由低到高的 梯度酒精 或直接由水进入95%酒精。
8、橘黄和EA （O —E 染色）染胞浆
操作：每次染后 进入 95% 酒精漂净多余染液，以保证 不影响 下一步。
9、无水酒精脱水 —— 二甲苯透明 —— 树胶封固。
可能出现误差的步骤：
1、固定时间要求是：大于15 分钟，小于48小时。
如果制完片后马上进入水洗染色，固定效果必然欠佳。
2、水洗脱醇 应保证足够的时间和换水次数，
否则脱醇不彻底，会干扰水溶性苏木素进入细胞内进行染色反应。
3、苏木素的染色效果与本身的浓度、纯度，染色反应的速度直接相关。
此外，染色速度还受温度影响（温度越高，染色速度越快，效果越好）。
所以：本步骤注意事项为：
苏木素的质量——每日过滤并加新液；
天气温度（室温）的变化——调整时间，温高则时间短，温度低则时间长，皆以镜下观察的效果为准灵活掌握。
4、碱水返蓝：
为水溶液, 其浓度和纯度都会影响返蓝效果。
如果碱水使用时间过长，未及时更换，其浓度、纯度必然下降。
为加快速度或工作时间调整，玻片放入碱水中的时间常常偏长或偏短。
偏短——苏木色精形成不充分；
偏长——涂片在水溶液中浸泡过久会影响细胞固定效果, 从而影响染色效果。
以至于影响苏木素的显色效果和下一步胞浆染色效果。
5、橘黄和EA 的染色效果，
由 染液质量（配方、浓度、纯度）和染色时间 决定。
且橘黄和EA 一般都使用醇溶液，所以，此前的酒精漂洗脱水步骤也很重要。
此外，温度对效果的影响也和苏木素一样。
6、酒精的浓度、纯度受温度和使用率的影响。
气温上升，会使酒精挥发——浓度下降，导致以下效果
● 固定效果不佳，影响染色。
● 脱水不彻底，影响胞浆染色；
● 脱水不彻底，影响二甲苯透明。
7、透明
二甲苯透明不充分，镜下观察的效果就是结构模糊——不透明、不清亮的感觉。 比喻：透明良好的效果象是泡在清水中，清澈见底；
不透明 或透明效果不好 就象是泡在米汤或胶水中，（或是嵌在毛玻璃内）， 感觉模模糊糊，看不清结构。
此外，还可用石蜡油做透明剂。
8、有些医院的巴氏染色效果很好，几年不褪色，而效果不好的最快三五个月就开始褪色。 我观察实验的结果是：EA 染色有问题。褪色的涂片残留的颜色为红色，而且是苏木精被还原后呈现的红色，而EA 中的伊红、淡绿颜色全无；所以，应该注意：
伊红、淡绿的染色效果——包括原液的质量和配制；如酸碱度的调整；还有就是操作。
9、所有的染液和洗液都应定时过滤、定时更换。
其中的很多原理至今我也没弄清楚，翻了一些书也是操作过程、结论明确，但原理未分析透彻，或许是因为自己水平太浅，期待出现一本简明扼要因果清晰的书。