高效液相色谱法测定食品中叔丁基对苯二酚(TBHQ)含量

现代科学仪器

ＭｏｄｅｍＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃＩｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ

２００８年１０月

高效液相色谱法测定食品中叔丁基对苯二酚（ＴＢＨＱ）含量

、

卢业举程静蒋俊树

（国家农副加工食品质量监督检验中心合肥２３００５１）

Ｅ—ｍａｉｌ：ｌｕｙｅｊｕ９９８＠ｓｉｎａ．ｅｏｎｌ

摘要本文对我国允许使用ＴＢＨＱ的食品样品的前处理方法进行详细研究，优化了样品处理及分析条件，建立了液相色谱一荧光检测器法（ＨＰＬＣ—ＦＤ）对食品中ＴＢＨＱ进行定量检测的方法：样品经乙腈提取其中的ＴＢＨＱ，经反相Ｃ１８色谱柱分离后，用荧光检测器检测，以保留时间定性，面积外标法定量。最低检出限０．０５ｍｇ／Ｌ，线性范围０．１

ｍｓ／Ｌ一１０

ｍｓ／Ｌ。本方法灵敏度高，能简便、快速、准确地检测食品中抗氧化剂ＴＢｔｔＱ。

关键词食品；叔丁基对苯二酚（ＴＢＨＱ）；检测中图分类号０６５７．７＋２

虽然ＴＢＨＱ的安全性已通过了联合国粮农组织

和世界卫生组织（ＦＡＯ／ＷＨＯ）评价…，但是，有些国

涡混合器，振荡器，微孔过滤器：孑Ｌ径０．４５１ｘｍ，有机溶

剂型滤膜。１．２试验方法１．２．１色谱条件

家不允许食品中含有ＴＢＨＱ，如欧盟和日本。而美国

早在１９７２年就批准使用ＴＢＨＱ，目前已有３０多个国家和地区允许在食用油及油炸食品中使用ＴＢＨＱ旧Ｊ。

色谱柱：美国安捷伦公司生产的Ｃ１８柱（４．６．ｍｍ

×２５０

我同于１９９１年批准使用，食品添加剂使用卫生

标准ＧＢ２７６０最大使用限量为２００ｍｇ／ｋｇ，允许在食用

ｍｍ，５９ｍ）。

流动相：Ａ溶剂：乙腈，Ｂ溶剂：１．５％乙酸。线形梯度洗脱：０—１０．Ｏｍｉｎ，Ａ溶剂：Ｂ溶剂＝

４０：６０；１１．０—１８．０

油脂、油炸食品、饼干等９种食品中使用ＴＢＨＱ。

目前，国内外的一些高校及检疫检测机构对抗氧化剂的检测已经采取了一些措施和方法。主要有气

ｒａｉｎ，Ａ溶剂：Ｂ溶剂＝１００：０；

１９．０～２２．０ｍｉｎ，Ａ溶剂：Ｂ溶剂＝４０：６０。

流速：１．０ｍＬ／ｍｉｎ。检测波长：激发波长：２９３ｎｍ，发射波长：３３２ｎｍ。进样量：ｌＯｌＬ。１．２．２标准溶液配制

相色谱法∞Ｊ，气相色谱一质谱联用法ＨＪ，高效液相色

谱法帕Ｊ，液相色谱一质谱联用法”１等。

由于气相色谱法样品处理繁琐，质谱法的质谱检测器的普及率不是很高，液相色谱法的多数研究者使用的紫外检测器的灵敏度较低怕Ｊ，本方法结合液相色谱法的样品处理简单，荧光检测器的高灵敏度的优

点，减轻了检测人员的劳动强度，提高了检测灵敏度。

１）叔丁基对苯二酚（ＴＢＨＱ）标准储备液：准确称

取１００ｍｇＴＢＨＱ．加饱和乙腈溶解定容至ｌＯＯｍＬ。ＴＢ—

ＨＱ含量１ｍｇ／ｍＬ，作为贮备液。

２）ＴＢＨＱ标准使用溶液：移取１ｍＬＴＢＨＱ的储备液，加饱和乙腈定容至１００ｍＬ，分别移取１，５，１０，２０，５０ｒａＬ该ＴＢＨＱ溶液，放人ｌＯＯｍＬ容量瓶，加饱和乙腈

１

验部分

至刻度，制成ＴＢＨＱ含量分别为０．１，０．５，１，２，５ｉｘｇ／

１．１主要仪器与试剂

实验用水均为高纯水；叔丁基对苯二酚（ＴＢＨＱ）标准品：（Ｄｒ．ＥｈｒｅｎｓｔｅｒｆｅｒＧｍｂＨ）纯度：９８％。冰乙酸：分析纯。Ｌ一抗坏血酸棕榈酸酯：分析纯。正己烷：分析纯。乙腈：色谱纯及分析纯。饱和乙腈：将乙腈和正己烷混合，在分液漏斗中充分振摇。静置分

ｍＬ的ＴＢＨＱ标准溶液，用于制定标准曲线。１．２．３样品前处理

称取混合均匀的样品２．５９（食用油脂样品１０９）

（精确至０．００１９），置于ｌＯＯｍＬ具塞锥形瓶中，用２０ｍＬ饱和乙腈振荡提取５ｍｉｎ，再加入２０ｍＬ正己烷继续振荡５ｍｉｎ，过滤到分液漏斗中，静置分层后，收

集下层乙腈层；再向样品残渣中加入２０ｍＬ正己烷振荡提取ｌＯｍｉｎ，再过滤到分液漏斗中，加入２０ｒａＬ乙腈，振摇ｌｍｉｎ，静置分层，收集合并乙腈层定容至５０ｒａＬ容

层，收集下层乙腈液，于１Ｌ该溶液中溶解１００ｍｇ／Ｌ一抗坏血酸棕榈酸酯。该溶液称作“饱和乙腈”。日本岛津ＬＣ一２０１０Ａ高效液相色谱仪附荧光检测器，漩

收稿日期：２００８－０８—１４

作者简介：卢业举，男（１９６７一），研究生，研究方向：食品、农产品品质分析。

万方数据　

２００８年第５期

卢、业举等：高效液相色谱法测定食品中叔丁基对苯二酚（ＴＢＨＱ）含量一——

：５９：

量瓶中。经０．４５Ｉｘｍ滤膜过滤作为测试液。１．２．４定量方法（外标法）

根据样品不同类型，用不同的样品处理方法进行样品处理，取系列标准溶液和样品处理液各１０恤Ｌ，进行高效液相色谱分析，以标准溶液峰的保留时间为依据进行定性，以标准溶液浓度对峰面积制作校正曲线，对样品进行定量。１・２・５结果计算

食品中ＴＢＨＱ的含量按照一Ｆ式ｉ－Ｉ－％：

Ｘ＝１０００ＣＶｌ／ｍ

式中：

ｘ——被测食品中ＴＢＩｔＱ含量，ｇ／ｋｇ；ｃ——样品溶液中ＴＢＨＱ浓度，Ｉ山ｇ／ｍＬ；ｙ一一乙腈溶液最终定容的总体积，ｍＬ；ｍ——称取的样品质量，ｇ。２果与讨论

２．１样品前处理方法的选择２．１．１样品提取溶剂的选择

一般食品中ＴＢＨＱ的样品处理多采用有机溶剂（如乙腈、甲醇、乙醇、异丙醇等）提取，然后用与前一种有机溶剂互不相溶的另外一种有机溶剂（正己烷、环己烷等）去除提取液中的油脂的方法。根据溶剂的极性：乙腈＞甲醇＞乙醇＞异丙醇＞丙酮＞乙酸乙酯＞环己烷＞正己烷，可见乙腈和正己烷两者极性差别最大，可分别作为提取和去脂两种溶剂。２．１．２萃取次数对回收率的影响

通过试验发现ＴＢＨＱ在乙腈和正己烷中的分配比大概在９７：３左右，也就是说经过一次液液萃取，原来在正己烷中的ＴＢＨＱ还残留３％；那么

再经过第２次液液萃取，正己烷中ＴＢＨＱ还残留

３％半３％，即０．０９％，可以忽略不计。所以，在样品提取工作中，我们用２０ｍＬ正己烷溶解、提取样

品中的ＴＢＨＱ，再分别用２０ｍＬ乙腈苇取２次，合并乙腈萃取液即可。

２．１．３提取溶剂和萃取溶剂的用量（一次萃取）对回收率的影响

分别用１０，２０，３０，５０ｍＬ的正己烷提取样品中

的ＴＢＨＱ，而后分别用１０，２０，３０，５０ｍＬ的乙腈萃取

一次。测定结果的回收率见图１，图中４条线分别代表４种乙腈体积下，提取液正己烷的体积和回收，卒的关系。

万　

方数据图１提取溶剂和革取溶剂的崩壁对回收率的影响

由上图可以看出，分别用１０ｍＬ的正己烷和乙腈所得到的同收率较低；分别用２０ｍＬ的正己烷和乙腈所得到的回收率则达到了９４．７％。２．１．４乙腈溶剂提取时间对回收率的影响

在加标样品中加入２０ｍＬ乙腈分别振荡提取一定时间后，测定同收率，束研究振荡提取时间与回收率的关系，得到图２。

图２提取时问与回收牢的关系

从图２可以看出，溶剂提取时间从５ｍｉｎ到８ｒａｉｎ，

回收率迅速上升，到１０ｒａｉｎ左右几乎达到回收率的最大值；但是１０ｍｉｎ以后，随着时间的延长，回收率基本

没有变化，甚至在３０ｒａｉｎ以后还会有所下降，这可能是样品中的ＴＢＨＱ被空气中的Ｏ：氧化的缘故。因此，我们将溶剂的振荡提取时间定在１Ｏｍｉｎ。２．２ＨＰＬＣ流动相的选择２．２．１．流动相ＰＨ值的影响

文献资料【５。６１多采用乙腈：甲醇：５％乙酸为２：２：６（Ｖ：Ｖ：Ｖ）峰形较好，但是由于其ｐＨ值偏低，（ｐＨ２—３），对多数的色谱柱都有所伤害，为了避其害，并且仍然用乙酸调整流动相的极性，我们试验用两种流动相对分离效果和对峰形的影响，发现两者并没有明显的差别。说明１．５％的乙酸浓度已经具

有较好的作用，并且ｐＨ值对一般Ｃ１８液相色谱柱都

没有伤害（ｐＨ４左右）。

２．２．２．流动相中乙腈和乙酸不同比例对分析的影响

我们通过试验，分析不同比例下保留时间、柱压、

总分析时间的关系，发现乙腈比例越多，保留ｎ寸问、柱压、总分析时间越小，但是，保留时间小，杂质峰干扰也

越多，分离效果差。考虑到缩短样品分析时间，提高工

现代科学仪器

・６０・

ＭｏｄｅｍＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃＩｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ

作效率，虽然４０：６０时柱压较高，我们还是选择这一

比例，既保证分离效果，将ＴＢＨＱ目标峰控制在１０ｒａｉｎ

左右出峰，并且附近杂质干扰峰较少。我们将流动相

比例（乙腈：１．５％乙酸）定在４：６（Ｖ：Ｖ）比较理想。２．２．３用乙腈取代甲醇后分离效果

由于甲醇的水溶液在该比例下（４：６，Ｖ：Ｖ）粘

度接近最大值，从而造成柱压较大，我们去掉甲醇，完

全用乙腈和乙酸作为流动相，达到了预期效果（分离效果好、峰形好、柱压小）。２．２．４梯度洗脱

由于测试液中有较多极性杂质，我们用梯度洗脱的办法从色谱柱中加以去除，目标峰出现后，流动相变成乙腈１００％，洗脱６ｍｉｎ以上，在下一次进样前将

流动相比例恢复至乙腈＋１．５％乙酸（４＋６）以平衡色谱柱，避免了因杂质峰而干扰下一次的样品分析。综

上，我们将流动相条件确定在乙腈＋１．５％（Ｖ／Ｖ）乙

酸（４＋６），梯度洗脱程序。２．３检测器的选择

２．３．１

ＴＢＨＱ发射光谱和荧光光谱的确定

以乙腈为溶剂，配制０．２ｍｇ／Ｌ的ＴＢＨＱ标准溶

液，在仪器上扫描其紫外吸收，得到两个吸收峰

２９３ｎｍ和３２８ｎｍ，再以２９３ｎｍ和３２８ｎｍ作为激发波

长Ｅｘ：，分别扫描其荧光信号得出：最大激发波长：Ｅｘ

一２９３

ｎｍ，最大发射（荧光）波长：Ｅｍ一３３２ｔｉｍ时，荧光信号最佳。

ＵＶ和ＦＤ对同一浓度的ＴＢＨＱ响应信号的比较

ｕＶ和ＦＤ是液相色谱常用两种检测器，以下是ｕＶ和ＦＤ检测器对０．１Ｉｘｇ／ｍＬ的ＴＢＨＱ同时检测所

得到的谱图，ＦＤ对ｕＶ的Ｓ／Ｎ值为５０倍到１００倍。

所以我们选用ＦＤ。

图３紫外检测信号

图４荧光检测信号

我们从理论和实践两方面证实了ＦＤ比ｕＶ的优

万　

方数据２００８年１０月

越性，所以我们选择ＦＤ作为该标准方法的检测器．

２．４标准回归方程

配制６种ＴＢＨＱ标准溶液，浓度分别为０．１，ｏ．５，

１．０，２．０，５．０、１０．０斗ｇ／ｍＬ，进样１０Ｉ＿ｒＬ，以峰面积Ａ对浓度Ｃ（斗ｇ／ｍＬ）进行回归分析。结果表明，线性关系

良好。线性相关系数０．９９９８。２．５加标回收实验

为了验证方法的准确性和可靠性，我们对测定方法

进行加标回收试验。我们选定五种不同样品，在其中加

入不同量的ＴＢＨＱ标液，按照试验方法进行处理和测定，根据标准曲线的回归方程计算回收率，试验结果如表１。

表ｌ不同样品加标回收试验结果

从以上结果可以看出，样品回收率在不同添加量，不同样品中其回收率不同，回收率在９０．６２％～９８．３０％之间，回收率总体情况满意。

２．６方法检出限的研究

对本标准适用范围内的各类食品进行样品处理，所得到的不含有ＴＢＨＱ的处理液作为稀释液。

按照对倍稀释法用上述稀释液不断稀释０．５ｗｇ／ｍＬ标准使用液，过滤后进样检测。当ＴＢＨＱ浓度被稀释到０．０５Ｉｘｇ／ｍＬ时，信噪比Ｓ／Ｎ＝１０。

因此，我们定义０．０５ｐｃ／ｍＥ为方法的定量检测限。

图５方法的定量检测限图

本方法应用液相色谱一荧光检测器法（ＨＰＬＣ—ＦＤ）对食品中叔丁基对苯二酚（ＴＢＨＱ）进行定量检测。样品经乙腈提取其中的ＴＢＨＱ，经反相Ｃ１８色谱柱分离后，用荧光检测器检测，以保留时间定性，面积ｍｇ／Ｌ～１０ｍｇ／Ｌ。本方法灵敏度高，能简便、快速、准

确地检测食品中抗氧化剂ＴＢｒ｛Ｑ。

（下接７２页）

２．３．２

３结论

外标法定量。最低检出限０．０５ｍｇ／Ｌ，线性范围０．１

现代科学仪器

．７２．

ＭｏｄｅｍＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃＩｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ

２００８年１０月

３

结论

采用离子色谱法测定饮料中的柠檬酸盐，并结合

仪器，２００６，１：３５—３９

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ｏｒｇａｎｉｃ

ａｃｉｄｓｉｎｉｎｄｕｓｔｒｉａｌ

ｓ咖ｂｙ

ｗａｓｔｅ

ｉｏｎ

固相萃取的样品前处理技术，简便、快速、灵敏度高，

且结果准确。

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（２ＨｅｂｅｉＴｅａｃｈｅｒｓＣｏｌｌｅｇｅ。Ｓｈｉｊｉａｚｈｕａｎｇ０５００２１，Ｃｈｉｎａ）

Ａｂｓｔｒａｃｔ

ＴｈｅｍｅｔｈｏｄｆｏｒｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎｏｆｃｉｔｒａｔｅｉｎｂｅｖｅｒａｇｅｂｙｔｈｅＳＰＥ（ＳｏｌｉｄＰｈ砧ｅＥｘｔｒａｃｔｉｏｎ）一ｉｏｎ

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ＯＮＥＸＯｎＧｕａｒｄＩＩＲＰｓａｍｐｌｅｐｒｅｔｒｅａｔｍｅｎｔｃａｒｔｒｉｄｇｅｂｉｃｃｏｍｐｏｕｎｄ．ｔｈｅｎｗａｓｆｉｌｔｅｒｅｄｂｙ０．２ｔｒｍｆｉｌｔｅｒｓａｎｄ３５ｍＭＫＯＨａｓｉｓｏｃｒａｔｉｃｍｏｂｉｌｅｐｈａｓｅ—ＨＣｃｏｌｕｍｎ．Ｔｈｅｃａｌｉｂｒａｔｉｏｎ

ｃｕｎｒｅ

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ｗｉｐｅｏｆｆｆａｔａｎｄｏｔｈｅｒｈｙｄｒｏｐｈｏ—

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ｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄ

ｄｉｒｅｃｔｌｙ．Ｔｈｅｓｅｐａｒａｔｉｏｎｗａｓｐｅｒｆｏｒｍｅｄｗｉｔｈ

ａ

ｆｌｏｗ

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ＤｉｏｎｅｘＩｏｎＰａｃＡＳｌｌ

ｏｆｃｉｔｒａｔｅｗａｓｌｉｎｅａｒ．Ａｎｄｔｈｅｃｏｒｒｅｌａｔｉｏｎｃｏｅｍｃｉｅｎｔｗａｓ０．９９９８．Ｌｉｍｉｔｏｆ

ｗｅｒｅ

ｄｅｔｅｃｔｉｏｎｆｏｒｔｈｅｍｅｔｈｏｄｗａｓ０．０３６１ｘｇ／ｍＬ．Ｔｈｅｒｅｃｏｖｅｒｉｅｓ

９６％～１０２％．Ｔｈｅ

ｐｒｅｃｉｓｉｏｎｗａｓ

ｌｅｓｓｔｈａｎ１．

５％．Ｔｈｅ

ｍｅｔｈｏｄｗａｓｓｉｍｐｌｅ．ｒａｐｉｄａｎｄ

ａｃｃｕｒａｔｅ．

Ｋｅｙｗｏｒｄｓ

ＳＰＥ；ｉｏｎｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ；ｂｅｖｅｒａｇｅ；ｃｉｔｒａｔｅ

（上接６０页）对于油脂含量较多的样品的前处理，用正己烷去除提取液中的油脂；而对于油脂类样品，

ｂｉｌｉｚａｔｉｏｎｏｆｅｄｉｂｌｅｏｉｌ

ｈａｌｏｆ

ａｎｄ

ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ

ｗｉｔｈ

ｓｙｎｔｈｅｔｉｃａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔｓ，Ｊｏｕｒ－

Ｆｏｏｄ

Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ

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则用正己烷溶解，乙腈萃取后作为测试液。参考文献

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Ｆｏｏｄ；Ｔｅｒｔ—ｂｕｔｙｌｈｙｄｒｏｑｕｉｎｏｎｅ（ＴＢＨＱ）；Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ

万方数据　

高效液相色谱法测定食品中叔丁基对苯二酚(TBHQ)含量

作者：作者单位：刊名：英文刊名：年，卷(期)：

卢业举， 程静， 蒋俊树， Lu Yeju， Cheng Jing， Jiang Junshu国家农副加工食品质量监督检验中心,合肥,230051现代科学仪器

MODERN SCIENTIFIC INSTRUMENTS2008(5)

参考文献(6条)

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现代科学仪器

ＭｏｄｅｍＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃＩｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ

２００８年１０月

高效液相色谱法测定食品中叔丁基对苯二酚（ＴＢＨＱ）含量

、

卢业举程静蒋俊树

（国家农副加工食品质量监督检验中心合肥２３００５１）

Ｅ—ｍａｉｌ：ｌｕｙｅｊｕ９９８＠ｓｉｎａ．ｅｏｎｌ

摘要本文对我国允许使用ＴＢＨＱ的食品样品的前处理方法进行详细研究，优化了样品处理及分析条件，建立了液相色谱一荧光检测器法（ＨＰＬＣ—ＦＤ）对食品中ＴＢＨＱ进行定量检测的方法：样品经乙腈提取其中的ＴＢＨＱ，经反相Ｃ１８色谱柱分离后，用荧光检测器检测，以保留时间定性，面积外标法定量。最低检出限０．０５ｍｇ／Ｌ，线性范围０．１

ｍｓ／Ｌ一１０

ｍｓ／Ｌ。本方法灵敏度高，能简便、快速、准确地检测食品中抗氧化剂ＴＢｔｔＱ。

关键词食品；叔丁基对苯二酚（ＴＢＨＱ）；检测中图分类号０６５７．７＋２

虽然ＴＢＨＱ的安全性已通过了联合国粮农组织

和世界卫生组织（ＦＡＯ／ＷＨＯ）评价…，但是，有些国

涡混合器，振荡器，微孔过滤器：孑Ｌ径０．４５１ｘｍ，有机溶

剂型滤膜。１．２试验方法１．２．１色谱条件

家不允许食品中含有ＴＢＨＱ，如欧盟和日本。而美国

早在１９７２年就批准使用ＴＢＨＱ，目前已有３０多个国家和地区允许在食用油及油炸食品中使用ＴＢＨＱ旧Ｊ。

色谱柱：美国安捷伦公司生产的Ｃ１８柱（４．６．ｍｍ

×２５０

我同于１９９１年批准使用，食品添加剂使用卫生

标准ＧＢ２７６０最大使用限量为２００ｍｇ／ｋｇ，允许在食用

ｍｍ，５９ｍ）。

流动相：Ａ溶剂：乙腈，Ｂ溶剂：１．５％乙酸。线形梯度洗脱：０—１０．Ｏｍｉｎ，Ａ溶剂：Ｂ溶剂＝

４０：６０；１１．０—１８．０

油脂、油炸食品、饼干等９种食品中使用ＴＢＨＱ。

目前，国内外的一些高校及检疫检测机构对抗氧化剂的检测已经采取了一些措施和方法。主要有气

ｒａｉｎ，Ａ溶剂：Ｂ溶剂＝１００：０；

１９．０～２２．０ｍｉｎ，Ａ溶剂：Ｂ溶剂＝４０：６０。

流速：１．０ｍＬ／ｍｉｎ。检测波长：激发波长：２９３ｎｍ，发射波长：３３２ｎｍ。进样量：ｌＯｌＬ。１．２．２标准溶液配制

相色谱法∞Ｊ，气相色谱一质谱联用法ＨＪ，高效液相色

谱法帕Ｊ，液相色谱一质谱联用法”１等。

由于气相色谱法样品处理繁琐，质谱法的质谱检测器的普及率不是很高，液相色谱法的多数研究者使用的紫外检测器的灵敏度较低怕Ｊ，本方法结合液相色谱法的样品处理简单，荧光检测器的高灵敏度的优

点，减轻了检测人员的劳动强度，提高了检测灵敏度。

１）叔丁基对苯二酚（ＴＢＨＱ）标准储备液：准确称

取１００ｍｇＴＢＨＱ．加饱和乙腈溶解定容至ｌＯＯｍＬ。ＴＢ—

ＨＱ含量１ｍｇ／ｍＬ，作为贮备液。

２）ＴＢＨＱ标准使用溶液：移取１ｍＬＴＢＨＱ的储备液，加饱和乙腈定容至１００ｍＬ，分别移取１，５，１０，２０，５０ｒａＬ该ＴＢＨＱ溶液，放人ｌＯＯｍＬ容量瓶，加饱和乙腈

１

验部分

至刻度，制成ＴＢＨＱ含量分别为０．１，０．５，１，２，５ｉｘｇ／

１．１主要仪器与试剂

实验用水均为高纯水；叔丁基对苯二酚（ＴＢＨＱ）标准品：（Ｄｒ．ＥｈｒｅｎｓｔｅｒｆｅｒＧｍｂＨ）纯度：９８％。冰乙酸：分析纯。Ｌ一抗坏血酸棕榈酸酯：分析纯。正己烷：分析纯。乙腈：色谱纯及分析纯。饱和乙腈：将乙腈和正己烷混合，在分液漏斗中充分振摇。静置分

ｍＬ的ＴＢＨＱ标准溶液，用于制定标准曲线。１．２．３样品前处理

称取混合均匀的样品２．５９（食用油脂样品１０９）

（精确至０．００１９），置于ｌＯＯｍＬ具塞锥形瓶中，用２０ｍＬ饱和乙腈振荡提取５ｍｉｎ，再加入２０ｍＬ正己烷继续振荡５ｍｉｎ，过滤到分液漏斗中，静置分层后，收

集下层乙腈层；再向样品残渣中加入２０ｍＬ正己烷振荡提取ｌＯｍｉｎ，再过滤到分液漏斗中，加入２０ｒａＬ乙腈，振摇ｌｍｉｎ，静置分层，收集合并乙腈层定容至５０ｒａＬ容

层，收集下层乙腈液，于１Ｌ该溶液中溶解１００ｍｇ／Ｌ一抗坏血酸棕榈酸酯。该溶液称作“饱和乙腈”。日本岛津ＬＣ一２０１０Ａ高效液相色谱仪附荧光检测器，漩

收稿日期：２００８－０８—１４

作者简介：卢业举，男（１９６７一），研究生，研究方向：食品、农产品品质分析。

万方数据　

２００８年第５期

卢、业举等：高效液相色谱法测定食品中叔丁基对苯二酚（ＴＢＨＱ）含量一——

：５９：

量瓶中。经０．４５Ｉｘｍ滤膜过滤作为测试液。１．２．４定量方法（外标法）

根据样品不同类型，用不同的样品处理方法进行样品处理，取系列标准溶液和样品处理液各１０恤Ｌ，进行高效液相色谱分析，以标准溶液峰的保留时间为依据进行定性，以标准溶液浓度对峰面积制作校正曲线，对样品进行定量。１・２・５结果计算

食品中ＴＢＨＱ的含量按照一Ｆ式ｉ－Ｉ－％：

Ｘ＝１０００ＣＶｌ／ｍ

式中：

ｘ——被测食品中ＴＢＩｔＱ含量，ｇ／ｋｇ；ｃ——样品溶液中ＴＢＨＱ浓度，Ｉ山ｇ／ｍＬ；ｙ一一乙腈溶液最终定容的总体积，ｍＬ；ｍ——称取的样品质量，ｇ。２果与讨论

２．１样品前处理方法的选择２．１．１样品提取溶剂的选择

一般食品中ＴＢＨＱ的样品处理多采用有机溶剂（如乙腈、甲醇、乙醇、异丙醇等）提取，然后用与前一种有机溶剂互不相溶的另外一种有机溶剂（正己烷、环己烷等）去除提取液中的油脂的方法。根据溶剂的极性：乙腈＞甲醇＞乙醇＞异丙醇＞丙酮＞乙酸乙酯＞环己烷＞正己烷，可见乙腈和正己烷两者极性差别最大，可分别作为提取和去脂两种溶剂。２．１．２萃取次数对回收率的影响

通过试验发现ＴＢＨＱ在乙腈和正己烷中的分配比大概在９７：３左右，也就是说经过一次液液萃取，原来在正己烷中的ＴＢＨＱ还残留３％；那么

再经过第２次液液萃取，正己烷中ＴＢＨＱ还残留

３％半３％，即０．０９％，可以忽略不计。所以，在样品提取工作中，我们用２０ｍＬ正己烷溶解、提取样

品中的ＴＢＨＱ，再分别用２０ｍＬ乙腈苇取２次，合并乙腈萃取液即可。

２．１．３提取溶剂和萃取溶剂的用量（一次萃取）对回收率的影响

分别用１０，２０，３０，５０ｍＬ的正己烷提取样品中

的ＴＢＨＱ，而后分别用１０，２０，３０，５０ｍＬ的乙腈萃取

一次。测定结果的回收率见图１，图中４条线分别代表４种乙腈体积下，提取液正己烷的体积和回收，卒的关系。

万　

方数据图１提取溶剂和革取溶剂的崩壁对回收率的影响

由上图可以看出，分别用１０ｍＬ的正己烷和乙腈所得到的同收率较低；分别用２０ｍＬ的正己烷和乙腈所得到的回收率则达到了９４．７％。２．１．４乙腈溶剂提取时间对回收率的影响

在加标样品中加入２０ｍＬ乙腈分别振荡提取一定时间后，测定同收率，束研究振荡提取时间与回收率的关系，得到图２。

图２提取时问与回收牢的关系

从图２可以看出，溶剂提取时间从５ｍｉｎ到８ｒａｉｎ，

回收率迅速上升，到１０ｒａｉｎ左右几乎达到回收率的最大值；但是１０ｍｉｎ以后，随着时间的延长，回收率基本

没有变化，甚至在３０ｒａｉｎ以后还会有所下降，这可能是样品中的ＴＢＨＱ被空气中的Ｏ：氧化的缘故。因此，我们将溶剂的振荡提取时间定在１Ｏｍｉｎ。２．２ＨＰＬＣ流动相的选择２．２．１．流动相ＰＨ值的影响

文献资料【５。６１多采用乙腈：甲醇：５％乙酸为２：２：６（Ｖ：Ｖ：Ｖ）峰形较好，但是由于其ｐＨ值偏低，（ｐＨ２—３），对多数的色谱柱都有所伤害，为了避其害，并且仍然用乙酸调整流动相的极性，我们试验用两种流动相对分离效果和对峰形的影响，发现两者并没有明显的差别。说明１．５％的乙酸浓度已经具

有较好的作用，并且ｐＨ值对一般Ｃ１８液相色谱柱都

没有伤害（ｐＨ４左右）。

２．２．２．流动相中乙腈和乙酸不同比例对分析的影响

我们通过试验，分析不同比例下保留时间、柱压、

总分析时间的关系，发现乙腈比例越多，保留ｎ寸问、柱压、总分析时间越小，但是，保留时间小，杂质峰干扰也

越多，分离效果差。考虑到缩短样品分析时间，提高工

现代科学仪器

・６０・

ＭｏｄｅｍＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃＩｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ

作效率，虽然４０：６０时柱压较高，我们还是选择这一

比例，既保证分离效果，将ＴＢＨＱ目标峰控制在１０ｒａｉｎ

左右出峰，并且附近杂质干扰峰较少。我们将流动相

比例（乙腈：１．５％乙酸）定在４：６（Ｖ：Ｖ）比较理想。２．２．３用乙腈取代甲醇后分离效果

由于甲醇的水溶液在该比例下（４：６，Ｖ：Ｖ）粘

度接近最大值，从而造成柱压较大，我们去掉甲醇，完

全用乙腈和乙酸作为流动相，达到了预期效果（分离效果好、峰形好、柱压小）。２．２．４梯度洗脱

由于测试液中有较多极性杂质，我们用梯度洗脱的办法从色谱柱中加以去除，目标峰出现后，流动相变成乙腈１００％，洗脱６ｍｉｎ以上，在下一次进样前将

流动相比例恢复至乙腈＋１．５％乙酸（４＋６）以平衡色谱柱，避免了因杂质峰而干扰下一次的样品分析。综

上，我们将流动相条件确定在乙腈＋１．５％（Ｖ／Ｖ）乙

酸（４＋６），梯度洗脱程序。２．３检测器的选择

２．３．１

ＴＢＨＱ发射光谱和荧光光谱的确定

以乙腈为溶剂，配制０．２ｍｇ／Ｌ的ＴＢＨＱ标准溶

液，在仪器上扫描其紫外吸收，得到两个吸收峰

２９３ｎｍ和３２８ｎｍ，再以２９３ｎｍ和３２８ｎｍ作为激发波

长Ｅｘ：，分别扫描其荧光信号得出：最大激发波长：Ｅｘ

一２９３

ｎｍ，最大发射（荧光）波长：Ｅｍ一３３２ｔｉｍ时，荧光信号最佳。

ＵＶ和ＦＤ对同一浓度的ＴＢＨＱ响应信号的比较

ｕＶ和ＦＤ是液相色谱常用两种检测器，以下是ｕＶ和ＦＤ检测器对０．１Ｉｘｇ／ｍＬ的ＴＢＨＱ同时检测所

得到的谱图，ＦＤ对ｕＶ的Ｓ／Ｎ值为５０倍到１００倍。

所以我们选用ＦＤ。

图３紫外检测信号

图４荧光检测信号

我们从理论和实践两方面证实了ＦＤ比ｕＶ的优

万　

方数据２００８年１０月

越性，所以我们选择ＦＤ作为该标准方法的检测器．

２．４标准回归方程

配制６种ＴＢＨＱ标准溶液，浓度分别为０．１，ｏ．５，

１．０，２．０，５．０、１０．０斗ｇ／ｍＬ，进样１０Ｉ＿ｒＬ，以峰面积Ａ对浓度Ｃ（斗ｇ／ｍＬ）进行回归分析。结果表明，线性关系

良好。线性相关系数０．９９９８。２．５加标回收实验

为了验证方法的准确性和可靠性，我们对测定方法

进行加标回收试验。我们选定五种不同样品，在其中加

入不同量的ＴＢＨＱ标液，按照试验方法进行处理和测定，根据标准曲线的回归方程计算回收率，试验结果如表１。

表ｌ不同样品加标回收试验结果

从以上结果可以看出，样品回收率在不同添加量，不同样品中其回收率不同，回收率在９０．６２％～９８．３０％之间，回收率总体情况满意。

２．６方法检出限的研究

对本标准适用范围内的各类食品进行样品处理，所得到的不含有ＴＢＨＱ的处理液作为稀释液。

按照对倍稀释法用上述稀释液不断稀释０．５ｗｇ／ｍＬ标准使用液，过滤后进样检测。当ＴＢＨＱ浓度被稀释到０．０５Ｉｘｇ／ｍＬ时，信噪比Ｓ／Ｎ＝１０。

因此，我们定义０．０５ｐｃ／ｍＥ为方法的定量检测限。

图５方法的定量检测限图

本方法应用液相色谱一荧光检测器法（ＨＰＬＣ—ＦＤ）对食品中叔丁基对苯二酚（ＴＢＨＱ）进行定量检测。样品经乙腈提取其中的ＴＢＨＱ，经反相Ｃ１８色谱柱分离后，用荧光检测器检测，以保留时间定性，面积ｍｇ／Ｌ～１０ｍｇ／Ｌ。本方法灵敏度高，能简便、快速、准

确地检测食品中抗氧化剂ＴＢｒ｛Ｑ。

（下接７２页）

２．３．２

３结论

外标法定量。最低检出限０．０５ｍｇ／Ｌ，线性范围０．１

现代科学仪器

．７２．

ＭｏｄｅｍＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃＩｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ

２００８年１０月

３

结论

采用离子色谱法测定饮料中的柠檬酸盐，并结合

仪器，２００６，１：３５—３９

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ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙｒａｐｈｙ

ａｆｔｅｒ

ｏｒｇａｎｉｃ

ａｃｉｄｓｉｎｉｎｄｕｓｔｒｉａｌ

ｓ咖ｂｙ

ｗａｓｔｅ

ｉｏｎ

固相萃取的样品前处理技术，简便、快速、灵敏度高，

且结果准确。

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（２ＨｅｂｅｉＴｅａｃｈｅｒｓＣｏｌｌｅｇｅ。Ｓｈｉｊｉａｚｈｕａｎｇ０５００２１，Ｃｈｉｎａ）

Ａｂｓｔｒａｃｔ

ＴｈｅｍｅｔｈｏｄｆｏｒｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎｏｆｃｉｔｒａｔｅｉｎｂｅｖｅｒａｇｅｂｙｔｈｅＳＰＥ（ＳｏｌｉｄＰｈ砧ｅＥｘｔｒａｃｔｉｏｎ）一ｉｏｎ

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ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙｗａ￥ｒｅｓｅａｒｃｈｅｄｔｈｅｂａｓｉｓｏｆｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔ．１ｈｅｓａｍｐｌｅｗａｓｄｉｌｕｔｅｄａｎｄｐａｓｓｅｄｔｈｒｏｕｇｈｔｈｅＤＩ－

ａｔ

ａ

ＯＮＥＸＯｎＧｕａｒｄＩＩＲＰｓａｍｐｌｅｐｒｅｔｒｅａｔｍｅｎｔｃａｒｔｒｉｄｇｅｂｉｃｃｏｍｐｏｕｎｄ．ｔｈｅｎｗａｓｆｉｌｔｅｒｅｄｂｙ０．２ｔｒｍｆｉｌｔｅｒｓａｎｄ３５ｍＭＫＯＨａｓｉｓｏｃｒａｔｉｃｍｏｂｉｌｅｐｈａｓｅ—ＨＣｃｏｌｕｍｎ．Ｔｈｅｃａｌｉｂｒａｔｉｏｎ

ｃｕｎｒｅ

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ｆｌｏｗ

ｒａｔｅ

ｏｆ４ｍＬ／ｍｉｎ

ｔｏ

ｗｉｐｅｏｆｆｆａｔａｎｄｏｔｈｅｒｈｙｄｒｏｐｈｏ—

ｗａｓ

ｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄ

ｄｉｒｅｃｔｌｙ．Ｔｈｅｓｅｐａｒａｔｉｏｎｗａｓｐｅｒｆｏｒｍｅｄｗｉｔｈ

ａ

ｆｌｏｗ

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ｏｆ１．０ｍＬ／ｍｉｎａｎｄａｃｃｏｍｐｌｉｓｈｅｄｗｉｔｈ

ＤｉｏｎｅｘＩｏｎＰａｃＡＳｌｌ

ｏｆｃｉｔｒａｔｅｗａｓｌｉｎｅａｒ．Ａｎｄｔｈｅｃｏｒｒｅｌａｔｉｏｎｃｏｅｍｃｉｅｎｔｗａｓ０．９９９８．Ｌｉｍｉｔｏｆ

ｗｅｒｅ

ｄｅｔｅｃｔｉｏｎｆｏｒｔｈｅｍｅｔｈｏｄｗａｓ０．０３６１ｘｇ／ｍＬ．Ｔｈｅｒｅｃｏｖｅｒｉｅｓ

９６％～１０２％．Ｔｈｅ

ｐｒｅｃｉｓｉｏｎｗａｓ

ｌｅｓｓｔｈａｎ１．

５％．Ｔｈｅ

ｍｅｔｈｏｄｗａｓｓｉｍｐｌｅ．ｒａｐｉｄａｎｄ

ａｃｃｕｒａｔｅ．

Ｋｅｙｗｏｒｄｓ

ＳＰＥ；ｉｏｎｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ；ｂｅｖｅｒａｇｅ；ｃｉｔｒａｔｅ

（上接６０页）对于油脂含量较多的样品的前处理，用正己烷去除提取液中的油脂；而对于油脂类样品，

ｂｉｌｉｚａｔｉｏｎｏｆｅｄｉｂｌｅｏｉｌ

ｈａｌｏｆ

ａｎｄ

ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ

ｗｉｔｈ

ｓｙｎｔｈｅｔｉｃａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔｓ，Ｊｏｕｒ－

Ｆｏｏｄ

Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ

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则用正己烷溶解，乙腈萃取后作为测试液。参考文献

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万方数据　

高效液相色谱法测定食品中叔丁基对苯二酚(TBHQ)含量

作者：作者单位：刊名：英文刊名：年，卷(期)：

卢业举， 程静， 蒋俊树， Lu Yeju， Cheng Jing， Jiang Junshu国家农副加工食品质量监督检验中心,合肥,230051现代科学仪器

MODERN SCIENTIFIC INSTRUMENTS2008(5)

参考文献(6条)

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