2001年 第24卷 第3期
—107—
增强疫苗免疫原性的研究进展
复旦大学生命科学学院(200433) 刘明秋 雷呈祥综述上海生物制品研究所
史久华审校
摘要 提高疫苗免疫原性是疫苗开发中一个重要的方向, 本文对近年来在提高疫苗免疫原性方面所取得的进展予以综述, 包括肽疫苗佐剂、DN A 疫苗佐剂、M HC-肽结合稳定性、共刺激信号、抗原呈递细胞和疫苗改造等。
关键词 疫苗免疫原性 佐剂 相关因素 疫苗改造
近年来免疫学的发展, 对免疫应答中信号传递的机理、主要组织相溶性复合体(MHC ) 的等位基因多态性及其与疾病的关系的进一步揭示和阐明, 为进一步提高疫苗免疫原性、研究和开发有效疫苗奠定了坚实的基础[1]。
明, T KPR 40作为载体可以增强机体对弱合成肽免疫原的免疫应答。 免疫刺激融合脂质体
Hay ashi 等[3]调查了免疫刺激融合脂质体(FL ) 在鼠内增强抗原特异性体液免疫的能力。FL 具有和病毒包膜蛋白一致的高免
疫原性, 起淋巴细胞有丝分裂原的作用。用包在FL 中的卵清蛋白(OVA) 免疫小鼠, 其血清抗OVA 抗体水平比用天然OVA 或将OVA 包在一般脂质体中免疫小鼠明显增高。用OVA 与空FL 的简单混合物免疫小鼠, 血清中没有检测到抗OVA 抗体。可见FL 作为一种新的免疫佐剂诱导抗原特异性抗体生成。
山梨聚糖单硬脂酸酯(SM )
M ur dan 等[4]用非离子表面活性剂SM 作为凝胶剂形成含有非离子型表面活性剂泡体(niosomes ) 的多组份有机胶, 评价了油包水型凝胶(W /O ) 用油包水型泡状凝胶(V /W /O ) 作为疫苗载体的潜力。光学显微镜下SM 聚集成管状网络结构, niosomes 位于管状网络中。肌肉注射含BSA 的胶, 可在几天内看到BSA -胶存在。短期贮存的特性是由于胶与局部间质液体相互作用导致胶原位分解所致。因此含抗原的noiso mes 从有机胶中释放, 抗原发挥作用。以血凝素(HA ) 抗原为肽疫苗佐剂——新的疫苗
传递系统
应用合成多肽抗原预防疾病仍然面临着一个很重要的问题, 即寻找没有副作用的合适载体。尤其是用于防治人类疾病的载体, 应该本身无免疫原性, 却能增强机体对肽抗原的免疫应答。
多聚吞噬细胞增强激素
Gokulan 等[2]用化学交联法将人类免疫缺陷病毒(HIV ) 肽抗原连接到多聚吞噬细胞增强激素(polytuftsin , T KPR 40) 上, TKPR 40作为HIV gp 41和g p 120合成肽的载体。他们用嵌合抗原免疫不同MHC 单元型小鼠, 检测总IgG 、IgG 亚类、T 细胞增殖和离体细胞因子的释放情况, 发现用嵌合抗原免疫的鼠比仅用二肽免疫的鼠表现更强的免疫应答。在初次和二次免疫后, 嵌合肽诱导IgG2a 和Ig G2b 的同型转变, 还发现细胞因
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IgG 、IgG 1、Ig G 2a 、Ig G 2b ) 均有所提高, 且就体液免疫而言, W /O 型胶比V /W /O 型胶有更强的佐剂作用, 即使对低剂量抗原(0. 1 g HA) 也是有效的。
铝胶(alhydro gel ) [5]、M F 59和LT -[6]
K 63也可作为肽疫苗佐剂增强疫苗的免疫原性。特别是M F59和LT -K63作为亚单位疫苗HA 的佐剂, 经鼻腔免疫途径, 不仅提高了IgG 水平, 而且还提高了抗HA 的Ig A 水平。
《国外医学》预防、诊断、治疗用生物制品分册
(rVVenv , r VVlucIL -12, rVVenv lucIL -12) 。
发现用1×107PFU 的rV VenvlucIL -12注射鼠, 检测到Th1型应答, 抗g p160、IFN- 分泌型CD8T 细胞数增加近2倍; 用2×10
7
PFU 的rVVlucIL -12和1×10PFU 的rVVenv 给鼠共注射, 可检测到最高特异性的细胞免疫(CM I) 应答。来自重组痘苗病毒的IL-12的传递可使载体减毒且使机体对HIV -1Env 的剂量依赖性免疫应答增强。Zuckermann 等[10]研究表明, IL-12可增强猪对疱疹病毒灭活疫苗的细胞免疫应答。
[11]
Buchanan 等报道, IL -12可增强机体对肺炎球菌多糖疫苗的T 细胞非依赖性抗体应答, 以上研究结果均表明IL-12是增强疫苗免疫原性的有力佐剂。 IL -6
Lee 等[12]发现IL-12或IL-6可增强流感病毒核蛋白(NP) 特异性细胞毒性T 淋巴细胞(CT L ) 应答, 尤其是IL -6基因与DNA 疫苗共免疫鼠可使鼠在受到致死性攻击时得到保护, 而IL-4的介入使鼠更易受到致死性攻击。所以IL-6能增强流感DN A 疫苗的效果, 且不同细胞因子作用不同。
其他细胞因子[12～14]如IL-2、IL-4、粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM -CSF) 、 2b 干扰素(IFN - 2b ) 等均能提高疫苗的免疫原性。其中IFN - 2b 已用于辅助卡介苗(BCG ) 免疫治疗膀胱癌病人, 并取得良好效果[14]。
+
4
DN A 疫苗佐剂
Sasaki 等[7]认为, DNA 疫苗佐剂可通过几种机制来实现其免疫调节性能:(1) 淋巴样细胞募集; (2) 细胞因子诱导; (3) 使DNA 容易进入机体细胞。 白细胞介素12(IL -12)
将DNA 疫苗免疫方法与以基因方式传递的免疫刺激分子结合起来可大大增强体内抗原特异性免疫应答, 尤其是IL -12分子, 已被证明在体内外均有增强细胞免疫的作用。Sin 等将IL 12cDNA 作为2型单纯疱疹病毒(HSV -2) DNA 疫苗佐剂免疫鼠, 直接肌肉注射IL
12cDN A 可激活体内静息免疫
细胞, 而且, 与单独注射gD DNA 比, IL 12cDNA 与gD DNA 共注射抑制了全身gD 特异性抗体和局部抗体水平。而T h 细胞增殖应答、细胞因子(IL-2, IFN- ) 和趋化性细胞因子(RANT ES 和M IP-1 ) 因IL-12共注射而明显增强, IL -4及趋化性细胞因子M CP -1受到抑制。实验证明, IL-12与g D DNA 疫苗共注射对致死性HSV-2攻击的防御作用是由CD4T 细胞介导的, 所以认为IL-12cDNA 作为DNA 疫苗佐剂驱动抗原特异性Th1型CD4+T 细胞应答, 从而降低HSV-2引起的发病率和死亡率。
Gherardi 等[9]构建了表达H IV -1Env 和/+[8]
提高疫苗免疫原性相关因素
MHC -肽结合稳定性
一般认为, 在体内免疫原性肽疫苗的有效性是由M HC -肽复合物的稳定性决定的, 所以有必要建立一种简单的方法来增强亚适表位与MHC 结合的稳定性。Ug er 等用一个多肽链将2个高亲和性的Db -限制性流感蛋白肽的亚适表位变异物共价连接到人 2[15]
2001年 第24卷 第3期
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的免疫方案比皮下BCG 免疫时间要短得多(7天:100天) , 但二者对鼠的保护作用相似。从而可见, DC 可能是诱导抗结核杆菌细胞免疫应答的有效因子。 破伤风类毒素(TT )
Chenalvala 等[21]将T T Th 表位(TT e) 插入HBsAg 编码序列中, 构建出新的HBsAg 分子。评价嵌合HBsAg 颗粒免疫原时发现, 与天然H BsA g 相比, 嵌合颗粒能使抗-HBs 应答增强几倍。若使鼠预先接触T T, 再用嵌合颗粒免疫鼠, 可看到更大的增强作用。这种高度免疫原性HBsAg 形式可望成为一种改进的亚单位疫苗。 Vidar sson 等
[22]
肠杆菌中表达。结果表明与 2m 联接的表位增强了M HC 稳定性和CT L 表位的抗原性, 这对设计肽疫苗及免疫治疗是很好的提示。 根据与M HC Ⅰ类分子结合的抗原的特点, Irvine 等[16]采用锚定免疫原方法以增加结合到MH C Ⅰ类分子上的表位。他们对肿瘤抗原gp100的210位进行修饰(Thr →M et) 后免疫鼠, 发现含有锚定修饰残基的免疫原引发了抗自身抗原的CD 8+T 细胞增加, 这些细胞可特异性识别在表达HLA-A *0201/H-2Kb 分子的小鼠黑素瘤B16表面的天然表位, 说明锚定表位增强了重组病毒免疫原性。 Tobery 等
[17]
也通过N -末端规则途径将T T 应用到肺炎球菌
(rule pathw ay ) 将抗原导向细胞质, 使其快速降解, 从而特异性诱导CT L 依赖性保护性免疫应答。
共刺激信号
Kalus 等[18]研究表明, 表达特异靶抗原的重组痘苗病毒和表达共刺激信号的重组痘苗病毒组成的组合疫苗, 以及在同一载体上表达2个基因的双基因疫苗均能增强经T 细胞共刺激途径引发的抗原特异性应答。Lorenz 等[19]用表达CD70的重组痘苗病毒诱导了抗肿瘤免疫。CD70是T 细胞共刺激受体CD 27的配体, 主要由活化的B 细胞表达, 且已知它能增强未接触抗原的T 细胞的增殖和细胞毒活性, 所以表达CD70的重组痘苗病毒疫苗可增强T 细胞应答和介导抗肿瘤免疫。
抗原呈递细胞(APC )
树突状细胞(DC) 是肺中的主要APC, 能引发对吸入病原体的特异性细胞应答, 因此在引发抗分枝杆菌感染的早期反应上很重要。Demang el 等[20]在鼠气管内给予BCG 感染的DC, 发现感染的DC 诱导了有力的T 细胞应答并且纵隔淋巴结中产生抗分枝杆菌抗原的IFN - , 使鼠具有抗气雾型结核杆菌多糖疫苗中, 构建了6B 型肺炎球菌多糖
(Pn 6B ) 与T T 联合疫苗(Pn 6B -T T ) 。Pn 6B -T T 注射后, 总抗体水平提高, 且调理素活性也明显增加, 与总抗体及IgG 抗Pn6B 抗体水平相关性很好。另外, Pn 6B -TT 免疫婴儿后, 体内IgG 1水平的提高可以克服多糖疫苗对婴儿保护作用差的缺陷。
编码霍乱毒素的丝状噬菌体的抑制因子 rstR 是El T or 型霍乱弧菌编码霍乱毒素的丝状噬菌体(CT Xphi) 的抑制因子(El T or CTXphi-rstR) 。CT Xphi 能感染现有霍乱减毒活疫苗, 并可导致疫苗毒力回复。Kimsey 等认为El T or rstR 无论在El T or 型还是古典型霍乱减毒疫苗株中表达, 均可有效保护这些疫苗免受CT Xphi 感染, 从而增强疫苗的生物安全性。
[23]
疫苗的修饰改造
用甲型流感病毒的转膜蛋白M 2免疫鼠, 可增强病毒清除率, 使鼠从甲型流感病毒感染中恢复。然而M 2的高度疏水性使其在疫苗加工时难于纯化。Frace 等[24]试图改变M 2的结构, 使其在大肠杆菌中能高效表达, ,
—110—
为亚单位疫苗候选者的性能。他们研究了2个构建物:一是M 2的26-43残基缺失, 另一是26-55残基缺失。用谷胱甘肽-S-转移酶(GST ) -M 2融合蛋白免疫小鼠, 发现每个缺失构建物都提高了M 2特异性血清抗体, 增强了清除鼠体内异源、同源流感病毒的效率。从GST 融合部位切下的M 2的同样具有可溶性, 产生同样的免疫效果。结果表明, M 2结构的改变能提高其溶解性且易于纯化, 而其免疫原性不减弱。
Jones 等构建了含前S1、前S2和HBsAg 表位的乙型肝炎疫苗(Hepagene ) , 可诱导BALB/c 、SWR/J 鼠产生强烈的细胞免疫和体液免疫, 且在BALB/c 鼠中, Hepagene 可比Engerix -B 诱导更强的抗HBs 应答(分别为11097IU /ml 和1276IU /ml) 。
参 考 文 献
1M orris on W I et al. Adv Vet M ed , 1999; 41:181-1952Gok ulan K et al . DNA Cell Biol , 1999; 18(8) :623-6303Hayash i A et al . Biochem Bioph ys Res Commun . 1999; 261(3) :824-828
4M urdan S et al. Eur J Ph arm S ci, 1999; 8(3) :177-1865Jones CD et al. J Viral Hepat, 1998; 5(S uppl 2) :5-8
[5]
《国外医学》预防、诊断、治疗用生物制品分册
6Barchfeld GL et al . Vaccine , 1999; 17(7-8) :695-7047Sasaki S et al. Anticancer Res , 1998; 18(5D) :3907-3915
8Sin JI et al. J Im munol, 1999; 162(5) :2912-29219Gherardi M M et al. J Immunol, 1999; 162(11) :6724-6733
10Zu ckermann FA et al. Adv Vet M ed, 1999; 41:447-46111Buch anan RM et al. J Imm unol, 1998; 161(10) :5525-5533
12Lee SW et al. Vaccin e, 1999; 17(5) :490-49613Lee AH et al . Vaccine , 1999; 17(5) :473-47914Luo Y et al. J Immunol, 1999; 162(4):2399-240515Uger RA et al. J Imm unol, 1999; 162(10) :6024-602816Irvine KR et al. Cancer Res , 1999; 59(11) :2536-254017Tob ery T et al. J Immunol, 1999; 162(2) :639-64218Kalus RM et al . Vaccine , 1999; 17(7-8) :893-90319Loren z M G et al. Hu m Gene Ther, 1999; 10(7) :1095-1103
20Demangel C et al. Eur J Immunol, 1999; 29(6) :1972-1979
21Chengalvala M V et al . Vaccine , 1999; 17(9-10) :1035-1041
22Vidarsson G et al. Infect Immun , 1998; 66(6) :2866-2870
23Kimsey HH et al. Proc Natl Acad Sci US A, 1998; 95
(12) :7035-7039
24Frace AM et al . Vaccine , 1999; 17(18) :2237-2244
(2000-12-29收稿 2001-02-05修回)
新型分子佐剂C 3d
上海基因免疫与疫苗研究中心
(200032) 王立新 熊思东综述
复旦大学医学院免疫学教研室
摘要 C3d 片段是补体C3分子不能被蛋白酶再裂解但仍保持与抗原共价连接的最小片段, 除具有促进B 细胞活化、增进抗体亲和性成熟、维持免疫记忆等功能外, 近来发现C3d 分子还具备增强B 细胞的抗原递呈能力、降低B 细胞的活化阈等分子佐剂作用, 本文介绍了C 3d 分子的分子特征、生物学功能, 并对C 3d 分子作为分子佐剂的机制及存在问题作一探讨。 关键词 补体C3d 分子佐剂 免疫原性
补体C3成分是补体激活的经典途径、替代途径以及甘露聚糖结合凝集素(M BL ) 分子。C3分子在特异性抗体产生或特异性效应细胞激活以前, 就具备获得性免疫所没有,
2001年 第24卷 第3期
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增强疫苗免疫原性的研究进展
复旦大学生命科学学院(200433) 刘明秋 雷呈祥综述上海生物制品研究所
史久华审校
摘要 提高疫苗免疫原性是疫苗开发中一个重要的方向, 本文对近年来在提高疫苗免疫原性方面所取得的进展予以综述, 包括肽疫苗佐剂、DN A 疫苗佐剂、M HC-肽结合稳定性、共刺激信号、抗原呈递细胞和疫苗改造等。
关键词 疫苗免疫原性 佐剂 相关因素 疫苗改造
近年来免疫学的发展, 对免疫应答中信号传递的机理、主要组织相溶性复合体(MHC ) 的等位基因多态性及其与疾病的关系的进一步揭示和阐明, 为进一步提高疫苗免疫原性、研究和开发有效疫苗奠定了坚实的基础[1]。
明, T KPR 40作为载体可以增强机体对弱合成肽免疫原的免疫应答。 免疫刺激融合脂质体
Hay ashi 等[3]调查了免疫刺激融合脂质体(FL ) 在鼠内增强抗原特异性体液免疫的能力。FL 具有和病毒包膜蛋白一致的高免
疫原性, 起淋巴细胞有丝分裂原的作用。用包在FL 中的卵清蛋白(OVA) 免疫小鼠, 其血清抗OVA 抗体水平比用天然OVA 或将OVA 包在一般脂质体中免疫小鼠明显增高。用OVA 与空FL 的简单混合物免疫小鼠, 血清中没有检测到抗OVA 抗体。可见FL 作为一种新的免疫佐剂诱导抗原特异性抗体生成。
山梨聚糖单硬脂酸酯(SM )
M ur dan 等[4]用非离子表面活性剂SM 作为凝胶剂形成含有非离子型表面活性剂泡体(niosomes ) 的多组份有机胶, 评价了油包水型凝胶(W /O ) 用油包水型泡状凝胶(V /W /O ) 作为疫苗载体的潜力。光学显微镜下SM 聚集成管状网络结构, niosomes 位于管状网络中。肌肉注射含BSA 的胶, 可在几天内看到BSA -胶存在。短期贮存的特性是由于胶与局部间质液体相互作用导致胶原位分解所致。因此含抗原的noiso mes 从有机胶中释放, 抗原发挥作用。以血凝素(HA ) 抗原为肽疫苗佐剂——新的疫苗
传递系统
应用合成多肽抗原预防疾病仍然面临着一个很重要的问题, 即寻找没有副作用的合适载体。尤其是用于防治人类疾病的载体, 应该本身无免疫原性, 却能增强机体对肽抗原的免疫应答。
多聚吞噬细胞增强激素
Gokulan 等[2]用化学交联法将人类免疫缺陷病毒(HIV ) 肽抗原连接到多聚吞噬细胞增强激素(polytuftsin , T KPR 40) 上, TKPR 40作为HIV gp 41和g p 120合成肽的载体。他们用嵌合抗原免疫不同MHC 单元型小鼠, 检测总IgG 、IgG 亚类、T 细胞增殖和离体细胞因子的释放情况, 发现用嵌合抗原免疫的鼠比仅用二肽免疫的鼠表现更强的免疫应答。在初次和二次免疫后, 嵌合肽诱导IgG2a 和Ig G2b 的同型转变, 还发现细胞因
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IgG 、IgG 1、Ig G 2a 、Ig G 2b ) 均有所提高, 且就体液免疫而言, W /O 型胶比V /W /O 型胶有更强的佐剂作用, 即使对低剂量抗原(0. 1 g HA) 也是有效的。
铝胶(alhydro gel ) [5]、M F 59和LT -[6]
K 63也可作为肽疫苗佐剂增强疫苗的免疫原性。特别是M F59和LT -K63作为亚单位疫苗HA 的佐剂, 经鼻腔免疫途径, 不仅提高了IgG 水平, 而且还提高了抗HA 的Ig A 水平。
《国外医学》预防、诊断、治疗用生物制品分册
(rVVenv , r VVlucIL -12, rVVenv lucIL -12) 。
发现用1×107PFU 的rV VenvlucIL -12注射鼠, 检测到Th1型应答, 抗g p160、IFN- 分泌型CD8T 细胞数增加近2倍; 用2×10
7
PFU 的rVVlucIL -12和1×10PFU 的rVVenv 给鼠共注射, 可检测到最高特异性的细胞免疫(CM I) 应答。来自重组痘苗病毒的IL-12的传递可使载体减毒且使机体对HIV -1Env 的剂量依赖性免疫应答增强。Zuckermann 等[10]研究表明, IL-12可增强猪对疱疹病毒灭活疫苗的细胞免疫应答。
[11]
Buchanan 等报道, IL -12可增强机体对肺炎球菌多糖疫苗的T 细胞非依赖性抗体应答, 以上研究结果均表明IL-12是增强疫苗免疫原性的有力佐剂。 IL -6
Lee 等[12]发现IL-12或IL-6可增强流感病毒核蛋白(NP) 特异性细胞毒性T 淋巴细胞(CT L ) 应答, 尤其是IL -6基因与DNA 疫苗共免疫鼠可使鼠在受到致死性攻击时得到保护, 而IL-4的介入使鼠更易受到致死性攻击。所以IL-6能增强流感DN A 疫苗的效果, 且不同细胞因子作用不同。
其他细胞因子[12～14]如IL-2、IL-4、粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM -CSF) 、 2b 干扰素(IFN - 2b ) 等均能提高疫苗的免疫原性。其中IFN - 2b 已用于辅助卡介苗(BCG ) 免疫治疗膀胱癌病人, 并取得良好效果[14]。
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DN A 疫苗佐剂
Sasaki 等[7]认为, DNA 疫苗佐剂可通过几种机制来实现其免疫调节性能:(1) 淋巴样细胞募集; (2) 细胞因子诱导; (3) 使DNA 容易进入机体细胞。 白细胞介素12(IL -12)
将DNA 疫苗免疫方法与以基因方式传递的免疫刺激分子结合起来可大大增强体内抗原特异性免疫应答, 尤其是IL -12分子, 已被证明在体内外均有增强细胞免疫的作用。Sin 等将IL 12cDNA 作为2型单纯疱疹病毒(HSV -2) DNA 疫苗佐剂免疫鼠, 直接肌肉注射IL
12cDN A 可激活体内静息免疫
细胞, 而且, 与单独注射gD DNA 比, IL 12cDNA 与gD DNA 共注射抑制了全身gD 特异性抗体和局部抗体水平。而T h 细胞增殖应答、细胞因子(IL-2, IFN- ) 和趋化性细胞因子(RANT ES 和M IP-1 ) 因IL-12共注射而明显增强, IL -4及趋化性细胞因子M CP -1受到抑制。实验证明, IL-12与g D DNA 疫苗共注射对致死性HSV-2攻击的防御作用是由CD4T 细胞介导的, 所以认为IL-12cDNA 作为DNA 疫苗佐剂驱动抗原特异性Th1型CD4+T 细胞应答, 从而降低HSV-2引起的发病率和死亡率。
Gherardi 等[9]构建了表达H IV -1Env 和/+[8]
提高疫苗免疫原性相关因素
MHC -肽结合稳定性
一般认为, 在体内免疫原性肽疫苗的有效性是由M HC -肽复合物的稳定性决定的, 所以有必要建立一种简单的方法来增强亚适表位与MHC 结合的稳定性。Ug er 等用一个多肽链将2个高亲和性的Db -限制性流感蛋白肽的亚适表位变异物共价连接到人 2[15]
2001年 第24卷 第3期
—109—
的免疫方案比皮下BCG 免疫时间要短得多(7天:100天) , 但二者对鼠的保护作用相似。从而可见, DC 可能是诱导抗结核杆菌细胞免疫应答的有效因子。 破伤风类毒素(TT )
Chenalvala 等[21]将T T Th 表位(TT e) 插入HBsAg 编码序列中, 构建出新的HBsAg 分子。评价嵌合HBsAg 颗粒免疫原时发现, 与天然H BsA g 相比, 嵌合颗粒能使抗-HBs 应答增强几倍。若使鼠预先接触T T, 再用嵌合颗粒免疫鼠, 可看到更大的增强作用。这种高度免疫原性HBsAg 形式可望成为一种改进的亚单位疫苗。 Vidar sson 等
[22]
肠杆菌中表达。结果表明与 2m 联接的表位增强了M HC 稳定性和CT L 表位的抗原性, 这对设计肽疫苗及免疫治疗是很好的提示。 根据与M HC Ⅰ类分子结合的抗原的特点, Irvine 等[16]采用锚定免疫原方法以增加结合到MH C Ⅰ类分子上的表位。他们对肿瘤抗原gp100的210位进行修饰(Thr →M et) 后免疫鼠, 发现含有锚定修饰残基的免疫原引发了抗自身抗原的CD 8+T 细胞增加, 这些细胞可特异性识别在表达HLA-A *0201/H-2Kb 分子的小鼠黑素瘤B16表面的天然表位, 说明锚定表位增强了重组病毒免疫原性。 Tobery 等
[17]
也通过N -末端规则途径将T T 应用到肺炎球菌
(rule pathw ay ) 将抗原导向细胞质, 使其快速降解, 从而特异性诱导CT L 依赖性保护性免疫应答。
共刺激信号
Kalus 等[18]研究表明, 表达特异靶抗原的重组痘苗病毒和表达共刺激信号的重组痘苗病毒组成的组合疫苗, 以及在同一载体上表达2个基因的双基因疫苗均能增强经T 细胞共刺激途径引发的抗原特异性应答。Lorenz 等[19]用表达CD70的重组痘苗病毒诱导了抗肿瘤免疫。CD70是T 细胞共刺激受体CD 27的配体, 主要由活化的B 细胞表达, 且已知它能增强未接触抗原的T 细胞的增殖和细胞毒活性, 所以表达CD70的重组痘苗病毒疫苗可增强T 细胞应答和介导抗肿瘤免疫。
抗原呈递细胞(APC )
树突状细胞(DC) 是肺中的主要APC, 能引发对吸入病原体的特异性细胞应答, 因此在引发抗分枝杆菌感染的早期反应上很重要。Demang el 等[20]在鼠气管内给予BCG 感染的DC, 发现感染的DC 诱导了有力的T 细胞应答并且纵隔淋巴结中产生抗分枝杆菌抗原的IFN - , 使鼠具有抗气雾型结核杆菌多糖疫苗中, 构建了6B 型肺炎球菌多糖
(Pn 6B ) 与T T 联合疫苗(Pn 6B -T T ) 。Pn 6B -T T 注射后, 总抗体水平提高, 且调理素活性也明显增加, 与总抗体及IgG 抗Pn6B 抗体水平相关性很好。另外, Pn 6B -TT 免疫婴儿后, 体内IgG 1水平的提高可以克服多糖疫苗对婴儿保护作用差的缺陷。
编码霍乱毒素的丝状噬菌体的抑制因子 rstR 是El T or 型霍乱弧菌编码霍乱毒素的丝状噬菌体(CT Xphi) 的抑制因子(El T or CTXphi-rstR) 。CT Xphi 能感染现有霍乱减毒活疫苗, 并可导致疫苗毒力回复。Kimsey 等认为El T or rstR 无论在El T or 型还是古典型霍乱减毒疫苗株中表达, 均可有效保护这些疫苗免受CT Xphi 感染, 从而增强疫苗的生物安全性。
[23]
疫苗的修饰改造
用甲型流感病毒的转膜蛋白M 2免疫鼠, 可增强病毒清除率, 使鼠从甲型流感病毒感染中恢复。然而M 2的高度疏水性使其在疫苗加工时难于纯化。Frace 等[24]试图改变M 2的结构, 使其在大肠杆菌中能高效表达, ,
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为亚单位疫苗候选者的性能。他们研究了2个构建物:一是M 2的26-43残基缺失, 另一是26-55残基缺失。用谷胱甘肽-S-转移酶(GST ) -M 2融合蛋白免疫小鼠, 发现每个缺失构建物都提高了M 2特异性血清抗体, 增强了清除鼠体内异源、同源流感病毒的效率。从GST 融合部位切下的M 2的同样具有可溶性, 产生同样的免疫效果。结果表明, M 2结构的改变能提高其溶解性且易于纯化, 而其免疫原性不减弱。
Jones 等构建了含前S1、前S2和HBsAg 表位的乙型肝炎疫苗(Hepagene ) , 可诱导BALB/c 、SWR/J 鼠产生强烈的细胞免疫和体液免疫, 且在BALB/c 鼠中, Hepagene 可比Engerix -B 诱导更强的抗HBs 应答(分别为11097IU /ml 和1276IU /ml) 。
参 考 文 献
1M orris on W I et al. Adv Vet M ed , 1999; 41:181-1952Gok ulan K et al . DNA Cell Biol , 1999; 18(8) :623-6303Hayash i A et al . Biochem Bioph ys Res Commun . 1999; 261(3) :824-828
4M urdan S et al. Eur J Ph arm S ci, 1999; 8(3) :177-1865Jones CD et al. J Viral Hepat, 1998; 5(S uppl 2) :5-8
[5]
《国外医学》预防、诊断、治疗用生物制品分册
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(2000-12-29收稿 2001-02-05修回)
新型分子佐剂C 3d
上海基因免疫与疫苗研究中心
(200032) 王立新 熊思东综述
复旦大学医学院免疫学教研室
摘要 C3d 片段是补体C3分子不能被蛋白酶再裂解但仍保持与抗原共价连接的最小片段, 除具有促进B 细胞活化、增进抗体亲和性成熟、维持免疫记忆等功能外, 近来发现C3d 分子还具备增强B 细胞的抗原递呈能力、降低B 细胞的活化阈等分子佐剂作用, 本文介绍了C 3d 分子的分子特征、生物学功能, 并对C 3d 分子作为分子佐剂的机制及存在问题作一探讨。 关键词 补体C3d 分子佐剂 免疫原性
补体C3成分是补体激活的经典途径、替代途径以及甘露聚糖结合凝集素(M BL ) 分子。C3分子在特异性抗体产生或特异性效应细胞激活以前, 就具备获得性免疫所没有,