病理切片质量事关病理诊断的准确性，其制作环节多，影响质量的因素也多。多年来我们注重做好病理切片制作的全程质量控制，优片率保持在92%以上。现将做法介绍如下。
1 标本接收
认真核对申请单与送检标本及其标志(联号、姓名、性别、科室、日期等)是否一致，符合要求者方可接收［1］，并让送标本人签字；病理技师对标本及时编号和登记。
2 固定 一是要及时
标本无论大小，离体后要立即固定(30 min内)，特别是淋巴组织固定不及时或不当，易引起自溶，出现细胞核质着色较浅、轮廓不清、程度不等的条状发白区等现象。二是要充分。固定液首选10%中性缓冲福尔马林，固定液量要完全浸没标本，大标本固定一般要在18~24 h(或以上)、小标本4~6 h。较大标本要沿最大的剖面切开、空腔脏器应剪开，淋巴结组织应沿长轴从中央做纵切面剖开，组织块不要与容器壁紧贴。固定好的标本利于脱水、透明和切片，染色不易脱片。组织块过大、过厚，固定液渗透不均匀，在固定和脱水过程中易发生变形。三是要定期检查固定液是否失效。如缺少刺鼻味或出现白色沉淀表明已失效，须更换。我们体会到，及时固定和固定充分的标本制作的切片，细胞核、细胞浆清晰，颜色鲜艳且不容易褪色；未及时固定和固定不充分的标本脱水、透明影响大，染色时容易脱片，细胞核、细胞浆模糊，组织有自溶现象，容易褪色。
3 取材
一是取材时组织块大小应适中，厚薄基本一致，形状规则。小标本取材时要用滤纸包裹，大标本取材面积通常为(1.2~1.5)cm×(1.2~1.5)cm，厚度不超过0.3 cm。组织太厚，脱水不易干净；太薄，脱水后组织容易发生变形变脆。二是清除组织周围的脂肪和剔除标本中残留的手术线等异物。脂肪过多，易引起脱水不良，致使切片困难。
4 脱水
一是脱水乙醇应逐步从低浓度到高浓度，标本不能一开始就在高浓度乙醇中进行或在无水乙醇中时间过长，否则会导致组织变硬变脆。淋巴组织及带有少许脂肪组织在95％乙醇中时间要长一些，利于组织脱水彻底［2］。二是要定期更换试剂。乙醇因挥发或者混有其他杂质，浓度变低，影响组织固定、脱水、透明、浸蜡，要根据标本量灵活掌握，最好用酒精比重计测量，既准确又节约。
5 透明
一是首选二甲苯透明。二是要掌握好时间和温度，以室温为宜，时间20~40 min，温度过低或时间过短透明不彻底，过高或时间过长组织易变脆。三是二甲苯出现絮状物时及时更换。
6 浸蜡
一要控制好蜡温。浸蜡所用石蜡熔点为56~58℃，蜡温设置应高出其溶点3~5℃，控制在60~62℃为宜。浸蜡温度过高，组织会收缩变硬变脆。二是浸蜡时间适合。第一道为软蜡(熔点45~50℃)时间为45 min，第二、三道均为硬蜡(熔点56~60℃)、时间均为60 min。时间过短浸蜡不充分(组织过软)，过长组织发硬。三要定期更换石蜡。根据标本量，逐渐淘汰二甲苯，一般为15 d更换一道。
7 包埋
一是包埋蜡温要比浸蜡温度高约3~5℃，包埋要迅速(尤其在冬天)。二是包埋时要把组织的病灶面向下；皮肤、肠管、囊壁要立埋,以保证各层组织结构都能被观察；多粒小块组织应尽量靠近并保证在一个平面上。三是选择合适的包埋盒，使蜡块上下不少于2 mm 的蜡边，左右蜡边愈少愈好，以利于连片及切片的伸展。四是要去除蜡内气体。新购包埋石蜡含有气体，往往与组织融合不好，影响切片。可将石蜡反复加温、冷却，使气体蒸发，也可溶解后放置65℃温箱内3~5 d后使用。五是病理编号要清晰。
8 切片
切片是保证质量的最重要环节，要求切片要薄(3~5um)，且厚薄均匀、平面完整、无刀痕和皱褶。一是切片前拧紧切片机各个螺旋、蜡块要足够冰冻并牢固固定、切片刀锋利无缺口。切片机震动、蜡块固定不牢、切片刀不锋利，可出现切片厚薄不均、卷起(或皱起)、断裂等现象。二是 调节好切片刀角度，刀刃与蜡块表面一般呈15~20°夹角。过大蜡片卷起，过小蜡片皱褶。三是用力要轻柔均匀，一般以每分钟转40~50次为宜。用力过大、速度过快会导致机件的震动，导致切片厚薄不均。四是注意放置蜡块位置。纤维、肌肉等组织的走向应与切片刀平行，皮肤、含包膜(或浆膜)的组织，应把较难切的部分放在上面，可以减少断裂现象。内镜、穿刺取检标本因组织细小，需切8~12个切面。切片要求完整，漂片不能有气泡和皱折，充分展平，保持水面清洁，切忌水面残留组织碎屑，以防污染。
9 展片和捞片
一是展片水温适宜。展片水温和包埋蜡的熔点有关，一般设定在42~45℃，可自如地捞片；在切片时可边切边向蜡片吹气，切片平整易于展开。二是载玻片须洁净，既能防止脱片又能提高切片清晰度。
10 烤片和脱蜡
一是烤片温度适宜。贴片后，放入65℃的温箱内烤片0.5~1 h，否则染色时会发生脱片。烤片温度太高、时间太长，会出现组织“焦糊”现象; 温度低、时间不足，染色时易发生脱片［3］。二是脱蜡要彻底。脱蜡不彻底，切片不易着色或着色不均，淋巴结组织和细胞模糊不清。为确保脱蜡质量，以每500 ml二甲苯处理500张切片后更换一次为宜。冬天可将二甲苯在温箱(约65℃)预热30~60 min后脱蜡，脱蜡易彻底。
11 染色
一是温度以室温为宜(20℃左右)。二是时间要适当。 根据苏木精染色液的新旧、室温高低，掌握染色时间，一般为5~10 min为宜。三是盐酸乙醇分化要严格掌握时间，一般为2~3 s。分化影响细胞核的染色，分化过度，核染色淡；分化不足，核染色模糊不清。四是氨水返蓝时间不可过长，在5~10 s为宜，否则容易发生脱片。分化返蓝后，要用自来水冲洗10 min以上，以除去残留酸，细胞核显示更清晰，也利于切片长期保存。五是要注意观察染色效果。染色要求红蓝分明，对比清晰。每次染色前必须去除苏木精染液表面的氧化膜，如出现苏木精沉渣必须更换染液。新配染液使用前可用胃、肠等组织切片染色观察其染色效果，保持前后切片染色效果一致。
12 脱水和封片
一是低浓度的酒精容易使伊红褪色，放置时间以30 s为宜;无水酒精时间要长一些，以1~3 min为宜。二是切片要湿封。封片不及时和用温箱烤干(或电吹风吹干)后干燥封片，因吸收空气中的水分而出现黑色的细胞核，引起组织干涸使组织细胞收缩龟裂，影响细胞折光率改变和染色效果。三是封片时，工作人员须戴口罩，因呼气会影响透明度。空气湿度大可用电吹风把盖玻片稍微吹一下，再封片。霉雨季节或天气较潮湿时，切片经最后一道酒精后应尽快放入二甲苯中，以免在空气中停留时间过长而产生雾气。四是封片用中性树胶浓度适宜，太稀或太稠会产生大小气泡而影响折光率；滴加适当，不能有溢胶而影响美观。
根据病理组织切片质量评判基本标准［4］，随机抽出的2009~2010年切片500张进行评价，优良级片率为96.2％(优级片率为92.8％)，无不合格切片。
参 考 文 献
［1］ 中华医学会.中华医学会临床技术操作规范・病理学分册.人民军医出版社，2004:3.
［2］ 王德田，罗玉风．如何制作精良的淋巴组织切片.诊断病理学杂志，2005，12(4):314.
［3］ 蒯宝林，谢君，赵红艳，等.提高病理切片质量的几点体会.临床与实验病理学杂志，2002，18(5):568-569.
［4］ 中华医学会.中华医学会临床技术操作规范・病理学分册.人民军医出版社，2004:6.
病理切片质量事关病理诊断的准确性，其制作环节多，影响质量的因素也多。多年来我们注重做好病理切片制作的全程质量控制，优片率保持在92%以上。现将做法介绍如下。
1 标本接收
认真核对申请单与送检标本及其标志(联号、姓名、性别、科室、日期等)是否一致，符合要求者方可接收［1］，并让送标本人签字；病理技师对标本及时编号和登记。
2 固定 一是要及时
标本无论大小，离体后要立即固定(30 min内)，特别是淋巴组织固定不及时或不当，易引起自溶，出现细胞核质着色较浅、轮廓不清、程度不等的条状发白区等现象。二是要充分。固定液首选10%中性缓冲福尔马林，固定液量要完全浸没标本，大标本固定一般要在18~24 h(或以上)、小标本4~6 h。较大标本要沿最大的剖面切开、空腔脏器应剪开，淋巴结组织应沿长轴从中央做纵切面剖开，组织块不要与容器壁紧贴。固定好的标本利于脱水、透明和切片，染色不易脱片。组织块过大、过厚，固定液渗透不均匀，在固定和脱水过程中易发生变形。三是要定期检查固定液是否失效。如缺少刺鼻味或出现白色沉淀表明已失效，须更换。我们体会到，及时固定和固定充分的标本制作的切片，细胞核、细胞浆清晰，颜色鲜艳且不容易褪色；未及时固定和固定不充分的标本脱水、透明影响大，染色时容易脱片，细胞核、细胞浆模糊，组织有自溶现象，容易褪色。
3 取材
一是取材时组织块大小应适中，厚薄基本一致，形状规则。小标本取材时要用滤纸包裹，大标本取材面积通常为(1.2~1.5)cm×(1.2~1.5)cm，厚度不超过0.3 cm。组织太厚，脱水不易干净；太薄，脱水后组织容易发生变形变脆。二是清除组织周围的脂肪和剔除标本中残留的手术线等异物。脂肪过多，易引起脱水不良，致使切片困难。
4 脱水
一是脱水乙醇应逐步从低浓度到高浓度，标本不能一开始就在高浓度乙醇中进行或在无水乙醇中时间过长，否则会导致组织变硬变脆。淋巴组织及带有少许脂肪组织在95％乙醇中时间要长一些，利于组织脱水彻底［2］。二是要定期更换试剂。乙醇因挥发或者混有其他杂质，浓度变低，影响组织固定、脱水、透明、浸蜡，要根据标本量灵活掌握，最好用酒精比重计测量，既准确又节约。
5 透明
一是首选二甲苯透明。二是要掌握好时间和温度，以室温为宜，时间20~40 min，温度过低或时间过短透明不彻底，过高或时间过长组织易变脆。三是二甲苯出现絮状物时及时更换。
6 浸蜡
一要控制好蜡温。浸蜡所用石蜡熔点为56~58℃，蜡温设置应高出其溶点3~5℃，控制在60~62℃为宜。浸蜡温度过高，组织会收缩变硬变脆。二是浸蜡时间适合。第一道为软蜡(熔点45~50℃)时间为45 min，第二、三道均为硬蜡(熔点56~60℃)、时间均为60 min。时间过短浸蜡不充分(组织过软)，过长组织发硬。三要定期更换石蜡。根据标本量，逐渐淘汰二甲苯，一般为15 d更换一道。
7 包埋
一是包埋蜡温要比浸蜡温度高约3~5℃，包埋要迅速(尤其在冬天)。二是包埋时要把组织的病灶面向下；皮肤、肠管、囊壁要立埋,以保证各层组织结构都能被观察；多粒小块组织应尽量靠近并保证在一个平面上。三是选择合适的包埋盒，使蜡块上下不少于2 mm 的蜡边，左右蜡边愈少愈好，以利于连片及切片的伸展。四是要去除蜡内气体。新购包埋石蜡含有气体，往往与组织融合不好，影响切片。可将石蜡反复加温、冷却，使气体蒸发，也可溶解后放置65℃温箱内3~5 d后使用。五是病理编号要清晰。
8 切片
切片是保证质量的最重要环节，要求切片要薄(3~5um)，且厚薄均匀、平面完整、无刀痕和皱褶。一是切片前拧紧切片机各个螺旋、蜡块要足够冰冻并牢固固定、切片刀锋利无缺口。切片机震动、蜡块固定不牢、切片刀不锋利，可出现切片厚薄不均、卷起(或皱起)、断裂等现象。二是 调节好切片刀角度，刀刃与蜡块表面一般呈15~20°夹角。过大蜡片卷起，过小蜡片皱褶。三是用力要轻柔均匀，一般以每分钟转40~50次为宜。用力过大、速度过快会导致机件的震动，导致切片厚薄不均。四是注意放置蜡块位置。纤维、肌肉等组织的走向应与切片刀平行，皮肤、含包膜(或浆膜)的组织，应把较难切的部分放在上面，可以减少断裂现象。内镜、穿刺取检标本因组织细小，需切8~12个切面。切片要求完整，漂片不能有气泡和皱折，充分展平，保持水面清洁，切忌水面残留组织碎屑，以防污染。
9 展片和捞片
一是展片水温适宜。展片水温和包埋蜡的熔点有关，一般设定在42~45℃，可自如地捞片；在切片时可边切边向蜡片吹气，切片平整易于展开。二是载玻片须洁净，既能防止脱片又能提高切片清晰度。
10 烤片和脱蜡
一是烤片温度适宜。贴片后，放入65℃的温箱内烤片0.5~1 h，否则染色时会发生脱片。烤片温度太高、时间太长，会出现组织“焦糊”现象; 温度低、时间不足，染色时易发生脱片［3］。二是脱蜡要彻底。脱蜡不彻底，切片不易着色或着色不均，淋巴结组织和细胞模糊不清。为确保脱蜡质量，以每500 ml二甲苯处理500张切片后更换一次为宜。冬天可将二甲苯在温箱(约65℃)预热30~60 min后脱蜡，脱蜡易彻底。
11 染色
一是温度以室温为宜(20℃左右)。二是时间要适当。 根据苏木精染色液的新旧、室温高低，掌握染色时间，一般为5~10 min为宜。三是盐酸乙醇分化要严格掌握时间，一般为2~3 s。分化影响细胞核的染色，分化过度，核染色淡；分化不足，核染色模糊不清。四是氨水返蓝时间不可过长，在5~10 s为宜，否则容易发生脱片。分化返蓝后，要用自来水冲洗10 min以上，以除去残留酸，细胞核显示更清晰，也利于切片长期保存。五是要注意观察染色效果。染色要求红蓝分明，对比清晰。每次染色前必须去除苏木精染液表面的氧化膜，如出现苏木精沉渣必须更换染液。新配染液使用前可用胃、肠等组织切片染色观察其染色效果，保持前后切片染色效果一致。
12 脱水和封片
一是低浓度的酒精容易使伊红褪色，放置时间以30 s为宜;无水酒精时间要长一些，以1~3 min为宜。二是切片要湿封。封片不及时和用温箱烤干(或电吹风吹干)后干燥封片，因吸收空气中的水分而出现黑色的细胞核，引起组织干涸使组织细胞收缩龟裂，影响细胞折光率改变和染色效果。三是封片时，工作人员须戴口罩，因呼气会影响透明度。空气湿度大可用电吹风把盖玻片稍微吹一下，再封片。霉雨季节或天气较潮湿时，切片经最后一道酒精后应尽快放入二甲苯中，以免在空气中停留时间过长而产生雾气。四是封片用中性树胶浓度适宜，太稀或太稠会产生大小气泡而影响折光率；滴加适当，不能有溢胶而影响美观。
根据病理组织切片质量评判基本标准［4］，随机抽出的2009~2010年切片500张进行评价，优良级片率为96.2％(优级片率为92.8％)，无不合格切片。
参 考 文 献
［1］ 中华医学会.中华医学会临床技术操作规范・病理学分册.人民军医出版社，2004:3.
［2］ 王德田，罗玉风．如何制作精良的淋巴组织切片.诊断病理学杂志，2005，12(4):314.
［3］ 蒯宝林，谢君，赵红艳，等.提高病理切片质量的几点体会.临床与实验病理学杂志，2002，18(5):568-569.
［4］ 中华医学会.中华医学会临床技术操作规范・病理学分册.人民军医出版社，2004:6.