２０１０年９月环渤海第一届暨天津市第十九届色谱学术报告会・仪器展览会文集
高效液相色谱法对呋塞米注射液含量检测
的方法学验证
于润芳，唐洪
（天津金耀氨基酸有限公司）
参照中国药典２０１０版附录ＸｌＸＡ《药品质量标准分析方法验证指导原则》的要求，对呋塞米注射液含量测定项目进行方法学验证。
呋塞米注射液主要成分为呋塞米。其药理作用：能增加水、钠、氯、钾、钙、镁、磷等的排泄，可抑制前列腺素分解酶的活性，使前列腺素Ｅ２含量升高，从而具有扩张血管作用。扩张肾血管，降低肾血管阻力，在呋塞米的利尿作用中具有重要意义，也是其用于预防急性肾功能衰竭的理论基础。其适应症为：１．水肿性疾病。３．预防急性肾功能衰竭。４．高钾血症及高钙血症。分泌过多症（ＳＩＡＤＨ）。１
７．急性药物毒物中毒等。
２．高血压。
５．稀释性低钠血症。６．抗利尿激素
仪器与试药
１．１仪器
注：试验用水均为天津金耀氨基酸有限公司每天生产的注射用水。
２色谱条件及测定方法
２．１色谱条件
色谱柱：艾杰尔Ｃ１８（４．６ｍｍ×２００ｍｍ，ＳＯｒｅ），流动相：水一四氢呋喃一冰醋酸（７０：３０：１），流速：１．２ｍｌ・ｍｉｎ，柱温：３０℃，检测波长：２７２ｎｍ。
２．２
中国药典２０１０版收载的呋塞米注射液的检验方法：
有关物质取本品５ｍｌ，用混合溶剂［取冰醋酸２２ｍ１．加乙腈一水（１：１）至１０００ｍ１．混
匀］稀释制成每ｌｍｌ中约含ｌｍｇ的溶液，作为供试品溶液；精密量取适量，用上述混合溶剂定量稀释制成每ｌｍｌ中含１０
ｕ
ｇ的溶液，作为对照溶液。照含量测定项下的色谱条件，取对
ｕ
照溶液２０ｐ１注入液相色谱仪，再精密量取供试品溶液与对照溶液各２０１，分别注入液相
色谱仪，记录色谱图至主成分峰保留时间的３倍，供试品溶液的色谱图中如有杂质峰，单个杂质峰面积不得大于对照溶液主峰面积的１．５倍（１．５％），各杂质峰面积的和不得大于对照
２０１０年９月
环渤海第一届暨天津市第十九届色谱学术报告会一仪器展览会文集
溶液主峰面积的３倍（３．０９６）。
含量测定照高效液相测定法（附录ＶＤ）测定。色谱条件与系统适用性试验
用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以水一四氢呋喃一冰醋酸
（７０：３０：１）为流动相：检测波长为２７２姗。理论板数按呋塞米峰计算不低于４０００。
测定法精密量取本品５ｍｌ，用混合溶剂［取冰醋酸２２ｍｌ，加乙腈一水（１：１）至１０００ｍｌ，混匀］定量稀释制成每ｌｍｌ中约含呋塞米０．１ｍｇ的溶液。精密量取２０
２．３
ＩＩ
ｌ注入液相色谱仪，记录色
谱图：另取呋塞米对照品０．００９６８９，同法测定。按外标法以峰面积计算，即得。
２０１０版中国药典标准
３呋塞米注射液的验证方法
３．１呋塞米注射液的限度
３．２测定结果计算公式：
３．２．１含量测定
标示量％＝
％碱
小工
Ｘ１００％
式中：Ａｘ～供试品峰面积。ＡＲ——一对照品峰面积，ｍｌ…一供试品质量，嘶——
对照品质量（对照品称样量１０．１９ｍｇ，１０．４０ｒａｇ）。３．２．２有关物质计算
单个杂质：单个杂质峰面积／对照溶液主峰面积木Ｏ．０１５＊１００％总杂质峰：各杂质峰面积的和／对照溶液主峰面积如．０３＊１００％３．３样品测定
有关物质测定结果（％）：
１３９
２０１０年９月环渤海第一届暨天津市第十九届色谱学术报告会・仪器展览会文集
４验证内容
４．１
专属性
①称取无水碳酸钠Ｑ：垒墨Ｑ璺ｇ配成１０％溶液，备用。
②称取氯化钠Ｑ：Ｚ墨！墨ｇ，转移至ｌＯＯｍｌ量瓶中，加入纯化水适量溶解：再加入１０％无水碳酸
钠溶液，用纯化水稀释至刻度，摇匀，作为空白辅料溶液。４．１．１酸破坏：
取本品５ｍｌ至５０ｍｌ量瓶中，加入０．Ｉｍｏｌ／Ｌ盐酸溶液２ｍｌ，摇匀，置８０℃
水浴３ｈ，放冷，用Ｉｍｏｌ／Ｌ氢氧化钠溶液调ｐＨ至中性，用稀释液稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液；取空白辅料溶液适量至５０ｍｌ量瓶中，同法操作，按有关物质方法进样测定。４．１．２碱破坏：
取本品５ｍｌ至５０ｍｌ量瓶中，加入Ｉｍｏｌ／Ｌ氢氧化钠溶液Ｉｍｌ，摇匀，置
６０℃水浴１ｈ，放冷，用ｉｍｏｌ／Ｌ盐酸溶液调ｐＨ至中性，用稀释液稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液；取空白辅料溶液适量至５０ｍｌ量瓶中，同法操作，按有关物质方法进样测定。４．Ｉ．３加热破坏：取本品（玻璃瓶）置沸水中煮沸２小时后取出，放冷，取空白辅料溶液适量，同法操作，按有关物质方法进样测定。
４．１．４氧化破坏：取本品５ｍｉ，加３０％过氧化氢溶液Ｉｍｌ，摇匀，置６０℃水浴２ｈ后，加稀释液溶解并稀释至５０ｍｌ，取空白辅料溶液５ｍｌ至５０ｍｌ量瓶中，同法操作，按有关物质方法进样测定。４．Ｉ．５光照破坏：
取本品（玻璃瓶）１０支，空白辅料溶液２０ｍｌ（置于玻璃瓶中），在照度
为４０００—５０００ＬＸ日光灯条件下放置５天，ｌＯ天后，按有关物质方法进样测定。４．１．６测定结果（％）：
４．２检测限
精密称取呋塞米ｌＯｍｇ，加入ｌＯｍｌ容量瓶中，加入混合溶剂［取冰醋酸２２ｍｉ，加乙腈一水（１：１）至１０００ｍｌ，混匀］溶解并稀释至刻度，精密量取Ｉｍｌ至ｌＯＯｍｌ、Ｉｍｌ至２００ｍｌ容量瓶中容量瓶中，加入混合溶剂溶解并稀释至刻度，按照有关物质方法进样测定
２０１０年９月环渤海第一届暨天津市第十九届色谱学术报告会・仪器展览会文集
４．５
中间精密度
不同操作人员，不同时间对供试品溶液按含量方法进样测定。重复测定６次，共１２次，
计算ＲＳＤ。
塞米注射液含量趋势图为驴⑥
４．５线性范围
按确认的各溶剂的验证范围，以标准溶液为１００％浓度为基础，配制６０％、８０％、１００％、１２０％、１４０％浓度系列，作为线性测定溶液。包括范围的最高点和最低点以及标准点，每个溶液进样２次２０弘ｌ，记录色谱图。以峰面积对浓度二次回归，得到回归方程和相关系数。（标准溶液的配制要相对样品的浓度考虑）呋塞米线性结果：
８５７７９５２
０．０１４０４９
８５７４７６９７３１７１１５
０．０１２０４２
７３１５３９８
６０７６０４７
８５７６３６１
７３１６２５７
０．０１００３５
６０７７３０６４８２８４５６
０．００８０２８
６０７６６７７
Ｒ＝ｌ
４８２７４７０
４８２６４８４３５７４２９８
Ｏ．００６０２１
３５７３４１ｌ
３５７３８５５
回归方程：Ｙ＝Ｏ．６ｘ＋６Ｅ－１７２７７６
以上结果表明：呋塞米注射液浓度和峰面积呈现良好的线性关系。（呋塞米注射液线性试验趋势图附后。）
４．６回收率：
标准溶液：线性项下８０％，１００％，１２０％浓度溶液作为标准溶液。
呋塞米的回收率：精密称取呋塞米约０．８
ｍｇ、１．０ｍｇ、１．２
ｍｇ各三份，分别加入ｌＯＯｍｌ容
１４１
２０１０年９月环渤海第一届暨天津市第十九届色谱学术报告会一仪器展览会文集
量瓶中，加入纯化水稀释至刻度，照呋塞米含量测定项下方法测定，计算回收率，试验结果
见表：
浓度
Ｍ加入量（懈）
ｍ
Ｍ测得的量（孵）
ｎｎ
回收率（＞９５％）平均回收率（＞９５％）ＲＳＤ（％）（≤２％）
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呋塞米的回收率均大于９５％，符合要求。
５．变更和偏差调查
如验证过程中出现变更，则按公司相对应的ＳＯＰ的名称进行。如验证过程中出现偏差，则按公司相对应的ＳＯＰ的名称进行。此次呋塞米注射液验证过程中没有出现偏差。
６结论：
根据实验结果，与方案中的标准进行比较，均符合规定。此次呋塞米注射液按照中国药典２０１０年版分析方法验证成功，此方法可用于呋塞米注射液的检测，可以有效保证产品质量，为产品使用者提供安全保证。
７趋势图
呋塞米注射液含量趋势图①
呋塞米注射液含量趋势图①
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１．１５１．１１．０５
１
０．９５０．９０．８５
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毳纛象磊：滋；么磊豢差鬟簸；：茹纛囊溢笼ｉ乏叠簇囊篓翻
１
２
３
４
５
６
０７
注：呋塞米注射液含量趋势图２－６略
（下转第１４４页）
１４２
２０１０年９月环渤海第一届暨天津市第十九届色谱学术报告会一仪器展览会文集
可以看出，在该色谱条件下，九种物质在不到８分钟的时间洗脱出来并达到基线分离，具有分析时间短、分离度高、选择性好的优点；同时由于该法采用等度洗脱，降低了仪器的配置要求，简化了操作，为建立快速、有效的精神类药物检测提供了一定的理论依据。参考文献：
【ｉ】Ｈ．Ｙ．Ａｂｏｕｌ・Ｅｎｅｉｎ【２】
ｅｔ
ａＬ，Ａｎａｌ
ＰｒｏｆｉｌｅｓＤｒｕｇ鼠缸．９，４８７（１９８０）．
５７（１９７８）．
Ｖ．Ｈ．Ｓｅｔｈｙ，Ａｒｃｈ．Ｐｈａｒｍａｃ０１．３０１，１
ｅｔ
【３】八ＭａｃＤｏｎａｌｄ【４１
ａＬ，Ａｎａｌ
ＰｒｏｆｉｒｅｓＤｒｕｇＳｕｂｓ．１，７９（１９７２）．
Ｃ．Ｍ．Ｓｈｅａｒｅｒ，Ｃ．ＲＰｉｌｌａ，Ａｎａｌ．ＰｒｏｆｉｌｅｓＤｒｕｇＳｕｂｓ．３，４４１（１９７４）．
【５】ｋｋＯｋａｗａ，Ｇ．Ｓ．Ａｌｉｅｎｓ，ｚＩｎｔ．Ｍｅｄ．Ｒｅｓ．６＇３４３（１９７８）．【６】Ｗ．Ｃ．Ｗｉｎｓｌｏｗ，Ａｎａｌ，ＰｒｏｆｉｌｅｓＤｒｕｇ鼬凰．６，６１（１９７７）．
ｍ
【８】
Ｊ．Ｌ．Ｈａｌｅ，Ａｎａｌ尸聊ｌｅｓＤｒｕｇ鼠瓠．１，２３３（１９７２）．
八八Ａｌ・Ｂａｄｒ，Ａｎａｌ．ＰｒｏｆｉｌｅｓＤｒｕｇ勘ｈ１２，６８３（１９８３）．
Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｄｒｕｇｓａｃｔｉｎｇ
ｏｎ
ｔｈｅｃｅｎｔｒａｌｎｅｒｖｏＬＩ￥ｓｙｓｔｅｍ
ｏｆ
ｃｌｉｎｉｃａｌｌｙ－ｕｓｅｄ
ｃａｒｌ
ａｆｆｅｃｔｃｏｇｎｉｔｉｏｎ，ｅｍｏｔｉｏｎａｎｄｏｔｈｅｒｉｎｃｌｕｄｅ
ａｒｅ
ｍｅｎｔａｌｆｕｎｃｔｉｏｎｓ．Ｔｈｅｃｌａｓｓｅｓ
ｄｒｕｇｓａｎｔｉｐｓｙｃｈｏｔｉｃｓ，ａｎｘｉｏｌｙｔｉｃｓ，
ａｎｔｉｄｅｐｒｅｓｓａｎｔｓ
ａｎｄａｎｔｉｍａｎｉｃｓ．Ｈｏｗｅｖｅｒ，ｔｈｅｃｌａｓｓｉｆｉｃａｔｉｏｎｓ
ｎｏｔ
ａｂｓｏｌｕｔｅ，ａｓｔｈｅｒｅｅｘｉｓｔｓ
ａ
ｃｅｒｔａｉｎｄｅｇｒｅｅｏｆｏｖｅｒｌａｐｂｅｔｗｅｅｎｔｈｅｃａｔｅｇｏｒｉｅｓ．Ｔｈｅｓｅｄｒｕｇｓｏｆｔｅｎｈａｖｅｓｉｄｅｅｆｆｅｃｔｓｏｆｖａｒｙｍｇ
ｄｅｇｒｅｅｓ．ａｎｄｌｏｎｇ—ｔｅｒｍｕｓｅｃａｎｒｅｓｕｌｔｉｎａｄｄｉｃｔｉｏｎａｎｄｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ．Ｔｈｉｓｃｏｍｍｏｎｌｙｕｓｅｄｔｒｉｃｙｃｌｉｃａｎｔｉｄｅｐｒｅｓｓａｎｔｓａｎｄｂｅｎｚｏｄｉａｚｅｐｉｎｅａｎｘｉｏｌｙｔｉｃｓ
ＨＰＬＣｍｅｔｈｏｄｉｎｔｈｅＤｉｋｍａＤｉａｍｏｎｓｉｌ
ａｓａ
ｐａｐｅｒｓｅｌｅｃｔｓ
ｎｉｎｅ
ａｎａｌｙｔｅｓ，ｕｓｉｎｇ
ａｎ
５岬Ｃ１８（２）ｃｏｌｕｍｎ
ｔｏａｃｈｉｅｖｅ
ｂａｓｅｌｉｎｅｓｅｐａｒａｔｉｏｎ
ａｎｄ
ｕｎｄｅｒｉｓｏｅｒａｔｉｃｅｌｕｔｉｏｎ．１１ｌｉｓｍｅｔｈｏｄｉｓｓｉｍｐｌｅ．ｆａｓｔｒｅｓｏｌｕｔｉｏｎ．
ａｎｄｅｆｆｉｃｉｅｎｔ、析也ｏｕｔｓｔａｎｄｉｎｇｓｅｌｅｃｔｉｖｉｔｙ
（上接第１４２页）
线性试验趋势图
１ＵＵＵＵＵＵＵ
９００００００
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１
１．２
参考文献
Ｉ．ＣｈＰ（中国药典ｏ
２０１０．Ｖｏｉ
ＩＩ（二部）：３３６
１４４
高效液相色谱法对呋塞米注射液含量检测的方法学验证
作者：作者单位：
于润芳， 唐洪
天津金耀氨基酸有限公司
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２０１０年９月环渤海第一届暨天津市第十九届色谱学术报告会・仪器展览会文集
高效液相色谱法对呋塞米注射液含量检测
的方法学验证
于润芳，唐洪
（天津金耀氨基酸有限公司）
参照中国药典２０１０版附录ＸｌＸＡ《药品质量标准分析方法验证指导原则》的要求，对呋塞米注射液含量测定项目进行方法学验证。
呋塞米注射液主要成分为呋塞米。其药理作用：能增加水、钠、氯、钾、钙、镁、磷等的排泄，可抑制前列腺素分解酶的活性，使前列腺素Ｅ２含量升高，从而具有扩张血管作用。扩张肾血管，降低肾血管阻力，在呋塞米的利尿作用中具有重要意义，也是其用于预防急性肾功能衰竭的理论基础。其适应症为：１．水肿性疾病。３．预防急性肾功能衰竭。４．高钾血症及高钙血症。分泌过多症（ＳＩＡＤＨ）。１
７．急性药物毒物中毒等。
２．高血压。
５．稀释性低钠血症。６．抗利尿激素
仪器与试药
１．１仪器
注：试验用水均为天津金耀氨基酸有限公司每天生产的注射用水。
２色谱条件及测定方法
２．１色谱条件
色谱柱：艾杰尔Ｃ１８（４．６ｍｍ×２００ｍｍ，ＳＯｒｅ），流动相：水一四氢呋喃一冰醋酸（７０：３０：１），流速：１．２ｍｌ・ｍｉｎ，柱温：３０℃，检测波长：２７２ｎｍ。
２．２
中国药典２０１０版收载的呋塞米注射液的检验方法：
有关物质取本品５ｍｌ，用混合溶剂［取冰醋酸２２ｍ１．加乙腈一水（１：１）至１０００ｍ１．混
匀］稀释制成每ｌｍｌ中约含ｌｍｇ的溶液，作为供试品溶液；精密量取适量，用上述混合溶剂定量稀释制成每ｌｍｌ中含１０
ｕ
ｇ的溶液，作为对照溶液。照含量测定项下的色谱条件，取对
ｕ
照溶液２０ｐ１注入液相色谱仪，再精密量取供试品溶液与对照溶液各２０１，分别注入液相
色谱仪，记录色谱图至主成分峰保留时间的３倍，供试品溶液的色谱图中如有杂质峰，单个杂质峰面积不得大于对照溶液主峰面积的１．５倍（１．５％），各杂质峰面积的和不得大于对照
２０１０年９月
环渤海第一届暨天津市第十九届色谱学术报告会一仪器展览会文集
溶液主峰面积的３倍（３．０９６）。
含量测定照高效液相测定法（附录ＶＤ）测定。色谱条件与系统适用性试验
用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以水一四氢呋喃一冰醋酸
（７０：３０：１）为流动相：检测波长为２７２姗。理论板数按呋塞米峰计算不低于４０００。
测定法精密量取本品５ｍｌ，用混合溶剂［取冰醋酸２２ｍｌ，加乙腈一水（１：１）至１０００ｍｌ，混匀］定量稀释制成每ｌｍｌ中约含呋塞米０．１ｍｇ的溶液。精密量取２０
２．３
ＩＩ
ｌ注入液相色谱仪，记录色
谱图：另取呋塞米对照品０．００９６８９，同法测定。按外标法以峰面积计算，即得。
２０１０版中国药典标准
３呋塞米注射液的验证方法
３．１呋塞米注射液的限度
３．２测定结果计算公式：
３．２．１含量测定
标示量％＝
％碱
小工
Ｘ１００％
式中：Ａｘ～供试品峰面积。ＡＲ——一对照品峰面积，ｍｌ…一供试品质量，嘶——
对照品质量（对照品称样量１０．１９ｍｇ，１０．４０ｒａｇ）。３．２．２有关物质计算
单个杂质：单个杂质峰面积／对照溶液主峰面积木Ｏ．０１５＊１００％总杂质峰：各杂质峰面积的和／对照溶液主峰面积如．０３＊１００％３．３样品测定
有关物质测定结果（％）：
１３９
２０１０年９月环渤海第一届暨天津市第十九届色谱学术报告会・仪器展览会文集
４验证内容
４．１
专属性
①称取无水碳酸钠Ｑ：垒墨Ｑ璺ｇ配成１０％溶液，备用。
②称取氯化钠Ｑ：Ｚ墨！墨ｇ，转移至ｌＯＯｍｌ量瓶中，加入纯化水适量溶解：再加入１０％无水碳酸
钠溶液，用纯化水稀释至刻度，摇匀，作为空白辅料溶液。４．１．１酸破坏：
取本品５ｍｌ至５０ｍｌ量瓶中，加入０．Ｉｍｏｌ／Ｌ盐酸溶液２ｍｌ，摇匀，置８０℃
水浴３ｈ，放冷，用Ｉｍｏｌ／Ｌ氢氧化钠溶液调ｐＨ至中性，用稀释液稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液；取空白辅料溶液适量至５０ｍｌ量瓶中，同法操作，按有关物质方法进样测定。４．１．２碱破坏：
取本品５ｍｌ至５０ｍｌ量瓶中，加入Ｉｍｏｌ／Ｌ氢氧化钠溶液Ｉｍｌ，摇匀，置
６０℃水浴１ｈ，放冷，用ｉｍｏｌ／Ｌ盐酸溶液调ｐＨ至中性，用稀释液稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液；取空白辅料溶液适量至５０ｍｌ量瓶中，同法操作，按有关物质方法进样测定。４．Ｉ．３加热破坏：取本品（玻璃瓶）置沸水中煮沸２小时后取出，放冷，取空白辅料溶液适量，同法操作，按有关物质方法进样测定。
４．１．４氧化破坏：取本品５ｍｉ，加３０％过氧化氢溶液Ｉｍｌ，摇匀，置６０℃水浴２ｈ后，加稀释液溶解并稀释至５０ｍｌ，取空白辅料溶液５ｍｌ至５０ｍｌ量瓶中，同法操作，按有关物质方法进样测定。４．Ｉ．５光照破坏：
取本品（玻璃瓶）１０支，空白辅料溶液２０ｍｌ（置于玻璃瓶中），在照度
为４０００—５０００ＬＸ日光灯条件下放置５天，ｌＯ天后，按有关物质方法进样测定。４．１．６测定结果（％）：
４．２检测限
精密称取呋塞米ｌＯｍｇ，加入ｌＯｍｌ容量瓶中，加入混合溶剂［取冰醋酸２２ｍｉ，加乙腈一水（１：１）至１０００ｍｌ，混匀］溶解并稀释至刻度，精密量取Ｉｍｌ至ｌＯＯｍｌ、Ｉｍｌ至２００ｍｌ容量瓶中容量瓶中，加入混合溶剂溶解并稀释至刻度，按照有关物质方法进样测定
２０１０年９月环渤海第一届暨天津市第十九届色谱学术报告会・仪器展览会文集
４．５
中间精密度
不同操作人员，不同时间对供试品溶液按含量方法进样测定。重复测定６次，共１２次，
计算ＲＳＤ。
塞米注射液含量趋势图为驴⑥
４．５线性范围
按确认的各溶剂的验证范围，以标准溶液为１００％浓度为基础，配制６０％、８０％、１００％、１２０％、１４０％浓度系列，作为线性测定溶液。包括范围的最高点和最低点以及标准点，每个溶液进样２次２０弘ｌ，记录色谱图。以峰面积对浓度二次回归，得到回归方程和相关系数。（标准溶液的配制要相对样品的浓度考虑）呋塞米线性结果：
８５７７９５２
０．０１４０４９
８５７４７６９７３１７１１５
０．０１２０４２
７３１５３９８
６０７６０４７
８５７６３６１
７３１６２５７
０．０１００３５
６０７７３０６４８２８４５６
０．００８０２８
６０７６６７７
Ｒ＝ｌ
４８２７４７０
４８２６４８４３５７４２９８
Ｏ．００６０２１
３５７３４１ｌ
３５７３８５５
回归方程：Ｙ＝Ｏ．６ｘ＋６Ｅ－１７２７７６
以上结果表明：呋塞米注射液浓度和峰面积呈现良好的线性关系。（呋塞米注射液线性试验趋势图附后。）
４．６回收率：
标准溶液：线性项下８０％，１００％，１２０％浓度溶液作为标准溶液。
呋塞米的回收率：精密称取呋塞米约０．８
ｍｇ、１．０ｍｇ、１．２
ｍｇ各三份，分别加入ｌＯＯｍｌ容
１４１
２０１０年９月环渤海第一届暨天津市第十九届色谱学术报告会一仪器展览会文集
量瓶中，加入纯化水稀释至刻度，照呋塞米含量测定项下方法测定，计算回收率，试验结果
见表：
浓度
Ｍ加入量（懈）
ｍ
Ｍ测得的量（孵）
ｎｎ
回收率（＞９５％）平均回收率（＞９５％）ＲＳＤ（％）（≤２％）
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０
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Ｌ
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Ｌ
Ｌ
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呋塞米的回收率均大于９５％，符合要求。
５．变更和偏差调查
如验证过程中出现变更，则按公司相对应的ＳＯＰ的名称进行。如验证过程中出现偏差，则按公司相对应的ＳＯＰ的名称进行。此次呋塞米注射液验证过程中没有出现偏差。
６结论：
根据实验结果，与方案中的标准进行比较，均符合规定。此次呋塞米注射液按照中国药典２０１０年版分析方法验证成功，此方法可用于呋塞米注射液的检测，可以有效保证产品质量，为产品使用者提供安全保证。
７趋势图
呋塞米注射液含量趋势图①
呋塞米注射液含量趋势图①
工．‘
１．１５１．１１．０５
１
０．９５０．９０．８５
Ｕ．石
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１
２
３
４
５
６
０７
注：呋塞米注射液含量趋势图２－６略
（下转第１４４页）
１４２
２０１０年９月环渤海第一届暨天津市第十九届色谱学术报告会一仪器展览会文集
可以看出，在该色谱条件下，九种物质在不到８分钟的时间洗脱出来并达到基线分离，具有分析时间短、分离度高、选择性好的优点；同时由于该法采用等度洗脱，降低了仪器的配置要求，简化了操作，为建立快速、有效的精神类药物检测提供了一定的理论依据。参考文献：
【ｉ】Ｈ．Ｙ．Ａｂｏｕｌ・Ｅｎｅｉｎ【２】
ｅｔ
ａＬ，Ａｎａｌ
ＰｒｏｆｉｌｅｓＤｒｕｇ鼠缸．９，４８７（１９８０）．
５７（１９７８）．
Ｖ．Ｈ．Ｓｅｔｈｙ，Ａｒｃｈ．Ｐｈａｒｍａｃ０１．３０１，１
ｅｔ
【３】八ＭａｃＤｏｎａｌｄ【４１
ａＬ，Ａｎａｌ
ＰｒｏｆｉｒｅｓＤｒｕｇＳｕｂｓ．１，７９（１９７２）．
Ｃ．Ｍ．Ｓｈｅａｒｅｒ，Ｃ．ＲＰｉｌｌａ，Ａｎａｌ．ＰｒｏｆｉｌｅｓＤｒｕｇＳｕｂｓ．３，４４１（１９７４）．
【５】ｋｋＯｋａｗａ，Ｇ．Ｓ．Ａｌｉｅｎｓ，ｚＩｎｔ．Ｍｅｄ．Ｒｅｓ．６＇３４３（１９７８）．【６】Ｗ．Ｃ．Ｗｉｎｓｌｏｗ，Ａｎａｌ，ＰｒｏｆｉｌｅｓＤｒｕｇ鼬凰．６，６１（１９７７）．
ｍ
【８】
Ｊ．Ｌ．Ｈａｌｅ，Ａｎａｌ尸聊ｌｅｓＤｒｕｇ鼠瓠．１，２３３（１９７２）．
八八Ａｌ・Ｂａｄｒ，Ａｎａｌ．ＰｒｏｆｉｌｅｓＤｒｕｇ勘ｈ１２，６８３（１９８３）．
Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｄｒｕｇｓａｃｔｉｎｇ
ｏｎ
ｔｈｅｃｅｎｔｒａｌｎｅｒｖｏＬＩ￥ｓｙｓｔｅｍ
ｏｆ
ｃｌｉｎｉｃａｌｌｙ－ｕｓｅｄ
ｃａｒｌ
ａｆｆｅｃｔｃｏｇｎｉｔｉｏｎ，ｅｍｏｔｉｏｎａｎｄｏｔｈｅｒｉｎｃｌｕｄｅ
ａｒｅ
ｍｅｎｔａｌｆｕｎｃｔｉｏｎｓ．Ｔｈｅｃｌａｓｓｅｓ
ｄｒｕｇｓａｎｔｉｐｓｙｃｈｏｔｉｃｓ，ａｎｘｉｏｌｙｔｉｃｓ，
ａｎｔｉｄｅｐｒｅｓｓａｎｔｓ
ａｎｄａｎｔｉｍａｎｉｃｓ．Ｈｏｗｅｖｅｒ，ｔｈｅｃｌａｓｓｉｆｉｃａｔｉｏｎｓ
ｎｏｔ
ａｂｓｏｌｕｔｅ，ａｓｔｈｅｒｅｅｘｉｓｔｓ
ａ
ｃｅｒｔａｉｎｄｅｇｒｅｅｏｆｏｖｅｒｌａｐｂｅｔｗｅｅｎｔｈｅｃａｔｅｇｏｒｉｅｓ．Ｔｈｅｓｅｄｒｕｇｓｏｆｔｅｎｈａｖｅｓｉｄｅｅｆｆｅｃｔｓｏｆｖａｒｙｍｇ
ｄｅｇｒｅｅｓ．ａｎｄｌｏｎｇ—ｔｅｒｍｕｓｅｃａｎｒｅｓｕｌｔｉｎａｄｄｉｃｔｉｏｎａｎｄｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ．Ｔｈｉｓｃｏｍｍｏｎｌｙｕｓｅｄｔｒｉｃｙｃｌｉｃａｎｔｉｄｅｐｒｅｓｓａｎｔｓａｎｄｂｅｎｚｏｄｉａｚｅｐｉｎｅａｎｘｉｏｌｙｔｉｃｓ
ＨＰＬＣｍｅｔｈｏｄｉｎｔｈｅＤｉｋｍａＤｉａｍｏｎｓｉｌ
ａｓａ
ｐａｐｅｒｓｅｌｅｃｔｓ
ｎｉｎｅ
ａｎａｌｙｔｅｓ，ｕｓｉｎｇ
ａｎ
５岬Ｃ１８（２）ｃｏｌｕｍｎ
ｔｏａｃｈｉｅｖｅ
ｂａｓｅｌｉｎｅｓｅｐａｒａｔｉｏｎ
ａｎｄ
ｕｎｄｅｒｉｓｏｅｒａｔｉｃｅｌｕｔｉｏｎ．１１ｌｉｓｍｅｔｈｏｄｉｓｓｉｍｐｌｅ．ｆａｓｔｒｅｓｏｌｕｔｉｏｎ．
ａｎｄｅｆｆｉｃｉｅｎｔ、析也ｏｕｔｓｔａｎｄｉｎｇｓｅｌｅｃｔｉｖｉｔｙ
（上接第１４２页）
线性试验趋势图
１ＵＵＵＵＵＵＵ
９００００００
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１
１．２
参考文献
Ｉ．ＣｈＰ（中国药典ｏ
２０１０．Ｖｏｉ
ＩＩ（二部）：３３６
１４４
高效液相色谱法对呋塞米注射液含量检测的方法学验证
作者：作者单位：
于润芳， 唐洪
天津金耀氨基酸有限公司
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