【摘要】 目的 建立测定盐酸多巴酚丁胺注射液中盐酸多巴酚丁胺的含量的HPLC方法。方法 采用ODS柱,流动相为乙腈-磷酸盐缓冲溶液(取磷酸铵2.75 g,加水950 ml,用磷酸调节pH值至2.4,补水至1000 ml,摇匀)(梯度洗脱);检测波长282 nm,流速1.0 ml/min,柱温30℃。结果 盐酸多巴酚丁胺的在浓度93.4~934 μg/ml与峰面积呈良好的线性关系,平均回收率为99.9%,RSD为0.11%。结论 所建立的方法简便易行,准确可靠,可用于盐酸多巴酚丁胺注射液中盐酸多巴酚丁胺的含量测定。 【关键词】盐酸多巴酚丁胺;高效液相色谱;梯度洗脱 Determination of Dobutamine Hydrochloride in Dobutamine Injectionby HPLC 【Abstract】 Objective To establish a HPLC method for determination of dobutamine hydrochloride in dextrose injection.Methods An ODS column was used with the mobile phase of acetonitride-phosphate buffer(Dissolve 2.75 g of phosphate amine in 950 ml of water.Adjust the solution with phosphoric acid to a pH of 2.4,dilute with water to 1000 ml,and mix.),gradient elution,at the detection wavelength of 282 nm and flow rate of 1.0 ml/min,and the column temperature was 30℃.Results The calibration curves of dobutamine hydrochloride was linear in the range of 93.4~934 μg/ml.The average recovery was 99.9%(RSD 0.11%).Conclusion This method is accurate,sensitive and reproducible.It can be used for the dobutamine hydrochloride assay in dobutamine injection. 【Key words】Dobutamine hydrochloride; HPLC; Gradient elution 作者单位:415500湖南省澧县人民医院药剂科 盐酸多巴酚丁胺属β肾上腺素受体激动药,用于治疗各种不同原因引起的心肌收缩力衰弱的心衰,如冠心病引起的急性心肌梗死泵衰竭,扩张型心肌病,风湿性瓣膜病引起的心衰,心脏直视手术后所致的低排血量综合征以及难治性心力衰竭等[1,2]。目前对多巴酚丁胺含量测定的报道比较少,中国药典2000年版二部曾收载本品,采用非水滴定法测定本品的含量[3]。为了有效控制盐酸多巴酚丁胺注射液的质量,我们参考有关文献[4,5]并改进,通过实验摸索,运用HPLC法对盐酸多巴酚丁胺注射液中盐酸多巴酚丁胺进行测定,现报告如下。 1 仪器与试药 Waters-2690及其色谱工作站(美国Waters),配备紫外检测器。UV-2550紫外可见分光光度计(日本岛津)盐酸多巴酚丁胺对照品(D-060102,含量99.2%,上海紫源制药有限公司);盐酸多巴酚丁胺注射液[20 mg/2 ml(按多巴酚丁胺计),湖南中南科伦药业有限公司,批号:070921、070922、070923]。 2 方法与结果 2.1 色谱条件 色谱柱Waters Symmetry C18(5 μm 4.6×250 mm),以乙腈为流动相A,以磷酸盐缓冲溶液(取磷酸铵2.75 g,加水950 ml,用磷酸调节pH值至2.4,补水至1000 ml,摇匀)为流动相B,梯度洗脱(梯度洗脱方式见表1);流速1.0 ml/min;检测波长282 nm;进样量10 μl,柱温30℃。 表1 梯度洗脱时间表 时间(min)流动相A(%)流动相B(%) 01684 103565 10~253565 2.2 溶液配制 2.2.1 对照品溶液 精密称取对盐酸多巴酚丁胺照品适量置50 ml量瓶中,加水适量溶解并稀释成0.4 mg/ml的对照品溶液。 2.2.2 供试品溶液 精密量取本品2 ml,置25 ml量瓶中,加水定容,摇匀,即得。 2.2.3 空白样品溶液 按本品处方,制备成缺盐酸多巴酚丁胺的阴性样品,然后按“2.2.2”项下方法制备成阴性样品溶液。 2.3 系统适用性试验 分别取对照品溶液、供试品溶液、阴性样品溶液各10 μl进样测定,在“2.1”项下色谱条件下,其他物质对盐酸多巴酚丁胺无影响,分离度>1.5,按盐酸多巴酚丁胺计理论塔板数>5000,典型色谱图见图1,空白辅料不干扰测定。 A对照品 B阴性对照品C样品 图1 盐酸多巴酚丁胺HPLC图 2.4 线性关系考察 以水为溶剂,分别配制对盐酸多巴酚丁胺照品浓度(C)为每1 ml中含93.41、186.82、280.23、373.64、467.10、560.46、747.28、934.10 μg的溶液分别进样,以浓度C对峰面积A进行回归,得的盐酸多巴酚丁胺线性方程为A=-77.31+16.23C,r=0.9999。结果表明:本品在93.4~934.1 μg/ml浓度范围内A与C成良好的线性关系。 2.5 稳定性试验 精密吸取同一批供试品溶液分别于0、1、2、4和8 h进样,测得含量的RSD为0.45%,表明供试品溶液在8 h内稳定。 2.6 精密度试验 取同一批供试品溶液连续进样6次,测得盐酸多巴酚丁胺含量的RSD为0.17%。 2.7 重复性 取同一批号样品6份,按“2.2.2"项下制成供试品溶液,进样测得盐酸多巴酚丁胺含量的RSD为0.25%。 2.8 加样回收试验 按处方量,精密称取含对照品适量,用含有辅料的水溶液配制成高、中、低三种浓度的溶液,进样测定,测得盐酸多巴酚丁胺的平均回收率为100.2%,RSD为0.68%。 表2 盐酸多巴酚丁胺的回收试验(n=6) 编号加入量�(mg)测得量�(mg)回收率�(%)平均回收�率(%)RSD�(%) 116.1816.0999.4 215.8615.98100.8 316.0416.11100.4 420.0820.22100.7 520.1620.0199.3100.20.68 619.9020.06100.8 723.8224.02100.8 824.0423.8899.3 923.8824.01100.5 2.9 样品测定 分别取对照品溶液和供试品溶液进样测定,按外标法以峰面积计算得盐酸多巴酚丁胺的含量,结果见表3。 表3 样品测定结果(n=3) 批号标示量(%) 060720C0198.2 060720C0298.4 060720C0398.9 3 讨论 3.1 检测波长的选择 经紫外扫描,盐酸多巴酚丁胺在282 nm波长附近有较大吸收,故本实验选择282 nm为检测波长。 3.2 流动相的选择 曾参考文献[4]使用反相离子对试剂进行分析,但由于其流动相组分多、费用高,处理时间长,且分析完成后色谱柱需清洗较长时间。在预试验时曾用乙腈-磷酸盐缓冲溶液分别为16:84、20:80、30:70、40:60等不同配比的流动相测定,盐酸多巴酚丁胺与5-羟甲基糠醛、中间体4-4-羟苯基-2-丁酮、盐酸多巴胺及其他辅料达不到分离要求。而采用本文的梯度洗脱,能实现有效分离。 参 考 文 献 [1] 陈孝治.药物处方手册.湖南科学技术出版社:444-445. [2] 刘国树.非洋地黄类正性肌力药物的临床应用现状.中华心血管病杂志,2002,30(8):510-512. [3] 中国药典.二部,2000:592-593. [4] 陈桂良,余琛,张慧.盐酸多巴酚丁胺及有关物质的反相离子对HPLC法测定.中国医药工业杂志,2001,32(7):307-309. [5] 王贵法,黄萍.盐酸多巴酚丁胺葡萄糖注射液制备工艺研究.中国药业,2003,12(9):43-44.
【摘要】 目的 建立测定盐酸多巴酚丁胺注射液中盐酸多巴酚丁胺的含量的HPLC方法。方法 采用ODS柱,流动相为乙腈-磷酸盐缓冲溶液(取磷酸铵2.75 g,加水950 ml,用磷酸调节pH值至2.4,补水至1000 ml,摇匀)(梯度洗脱);检测波长282 nm,流速1.0 ml/min,柱温30℃。结果 盐酸多巴酚丁胺的在浓度93.4~934 μg/ml与峰面积呈良好的线性关系,平均回收率为99.9%,RSD为0.11%。结论 所建立的方法简便易行,准确可靠,可用于盐酸多巴酚丁胺注射液中盐酸多巴酚丁胺的含量测定。 【关键词】盐酸多巴酚丁胺;高效液相色谱;梯度洗脱 Determination of Dobutamine Hydrochloride in Dobutamine Injectionby HPLC 【Abstract】 Objective To establish a HPLC method for determination of dobutamine hydrochloride in dextrose injection.Methods An ODS column was used with the mobile phase of acetonitride-phosphate buffer(Dissolve 2.75 g of phosphate amine in 950 ml of water.Adjust the solution with phosphoric acid to a pH of 2.4,dilute with water to 1000 ml,and mix.),gradient elution,at the detection wavelength of 282 nm and flow rate of 1.0 ml/min,and the column temperature was 30℃.Results The calibration curves of dobutamine hydrochloride was linear in the range of 93.4~934 μg/ml.The average recovery was 99.9%(RSD 0.11%).Conclusion This method is accurate,sensitive and reproducible.It can be used for the dobutamine hydrochloride assay in dobutamine injection. 【Key words】Dobutamine hydrochloride; HPLC; Gradient elution 作者单位:415500湖南省澧县人民医院药剂科 盐酸多巴酚丁胺属β肾上腺素受体激动药,用于治疗各种不同原因引起的心肌收缩力衰弱的心衰,如冠心病引起的急性心肌梗死泵衰竭,扩张型心肌病,风湿性瓣膜病引起的心衰,心脏直视手术后所致的低排血量综合征以及难治性心力衰竭等[1,2]。目前对多巴酚丁胺含量测定的报道比较少,中国药典2000年版二部曾收载本品,采用非水滴定法测定本品的含量[3]。为了有效控制盐酸多巴酚丁胺注射液的质量,我们参考有关文献[4,5]并改进,通过实验摸索,运用HPLC法对盐酸多巴酚丁胺注射液中盐酸多巴酚丁胺进行测定,现报告如下。 1 仪器与试药 Waters-2690及其色谱工作站(美国Waters),配备紫外检测器。UV-2550紫外可见分光光度计(日本岛津)盐酸多巴酚丁胺对照品(D-060102,含量99.2%,上海紫源制药有限公司);盐酸多巴酚丁胺注射液[20 mg/2 ml(按多巴酚丁胺计),湖南中南科伦药业有限公司,批号:070921、070922、070923]。 2 方法与结果 2.1 色谱条件 色谱柱Waters Symmetry C18(5 μm 4.6×250 mm),以乙腈为流动相A,以磷酸盐缓冲溶液(取磷酸铵2.75 g,加水950 ml,用磷酸调节pH值至2.4,补水至1000 ml,摇匀)为流动相B,梯度洗脱(梯度洗脱方式见表1);流速1.0 ml/min;检测波长282 nm;进样量10 μl,柱温30℃。 表1 梯度洗脱时间表 时间(min)流动相A(%)流动相B(%) 01684 103565 10~253565 2.2 溶液配制 2.2.1 对照品溶液 精密称取对盐酸多巴酚丁胺照品适量置50 ml量瓶中,加水适量溶解并稀释成0.4 mg/ml的对照品溶液。 2.2.2 供试品溶液 精密量取本品2 ml,置25 ml量瓶中,加水定容,摇匀,即得。 2.2.3 空白样品溶液 按本品处方,制备成缺盐酸多巴酚丁胺的阴性样品,然后按“2.2.2”项下方法制备成阴性样品溶液。 2.3 系统适用性试验 分别取对照品溶液、供试品溶液、阴性样品溶液各10 μl进样测定,在“2.1”项下色谱条件下,其他物质对盐酸多巴酚丁胺无影响,分离度>1.5,按盐酸多巴酚丁胺计理论塔板数>5000,典型色谱图见图1,空白辅料不干扰测定。 A对照品 B阴性对照品C样品 图1 盐酸多巴酚丁胺HPLC图 2.4 线性关系考察 以水为溶剂,分别配制对盐酸多巴酚丁胺照品浓度(C)为每1 ml中含93.41、186.82、280.23、373.64、467.10、560.46、747.28、934.10 μg的溶液分别进样,以浓度C对峰面积A进行回归,得的盐酸多巴酚丁胺线性方程为A=-77.31+16.23C,r=0.9999。结果表明:本品在93.4~934.1 μg/ml浓度范围内A与C成良好的线性关系。 2.5 稳定性试验 精密吸取同一批供试品溶液分别于0、1、2、4和8 h进样,测得含量的RSD为0.45%,表明供试品溶液在8 h内稳定。 2.6 精密度试验 取同一批供试品溶液连续进样6次,测得盐酸多巴酚丁胺含量的RSD为0.17%。 2.7 重复性 取同一批号样品6份,按“2.2.2"项下制成供试品溶液,进样测得盐酸多巴酚丁胺含量的RSD为0.25%。 2.8 加样回收试验 按处方量,精密称取含对照品适量,用含有辅料的水溶液配制成高、中、低三种浓度的溶液,进样测定,测得盐酸多巴酚丁胺的平均回收率为100.2%,RSD为0.68%。 表2 盐酸多巴酚丁胺的回收试验(n=6) 编号加入量�(mg)测得量�(mg)回收率�(%)平均回收�率(%)RSD�(%) 116.1816.0999.4 215.8615.98100.8 316.0416.11100.4 420.0820.22100.7 520.1620.0199.3100.20.68 619.9020.06100.8 723.8224.02100.8 824.0423.8899.3 923.8824.01100.5 2.9 样品测定 分别取对照品溶液和供试品溶液进样测定,按外标法以峰面积计算得盐酸多巴酚丁胺的含量,结果见表3。 表3 样品测定结果(n=3) 批号标示量(%) 060720C0198.2 060720C0298.4 060720C0398.9 3 讨论 3.1 检测波长的选择 经紫外扫描,盐酸多巴酚丁胺在282 nm波长附近有较大吸收,故本实验选择282 nm为检测波长。 3.2 流动相的选择 曾参考文献[4]使用反相离子对试剂进行分析,但由于其流动相组分多、费用高,处理时间长,且分析完成后色谱柱需清洗较长时间。在预试验时曾用乙腈-磷酸盐缓冲溶液分别为16:84、20:80、30:70、40:60等不同配比的流动相测定,盐酸多巴酚丁胺与5-羟甲基糠醛、中间体4-4-羟苯基-2-丁酮、盐酸多巴胺及其他辅料达不到分离要求。而采用本文的梯度洗脱,能实现有效分离。 参 考 文 献 [1] 陈孝治.药物处方手册.湖南科学技术出版社:444-445. [2] 刘国树.非洋地黄类正性肌力药物的临床应用现状.中华心血管病杂志,2002,30(8):510-512. [3] 中国药典.二部,2000:592-593. [4] 陈桂良,余琛,张慧.盐酸多巴酚丁胺及有关物质的反相离子对HPLC法测定.中国医药工业杂志,2001,32(7):307-309. [5] 王贵法,黄萍.盐酸多巴酚丁胺葡萄糖注射液制备工艺研究.中国药业,2003,12(9):43-44.