盐酸普萘洛尔片含量的测定
一、实验目的
1．培养查阅文献、资料的能力。
2．培养根据实验题目拟出实验方案的能力。
3．进一步熟悉紫外分光光度计的操作。
4掌握紫外分光光度法测定片剂含量的一般步骤和操作。
二、实验原理
盐酸普萘洛尔又名心得安，为白色或类白色的结晶性粉末。化学名称：1-异丙氨基-3-(1-萘氧基)-２-丙醇盐酸盐。
分子式：C16H21NO2·HCl
分子量：295.81
1．紫外分光光度法（中国药典规定方法）
盐酸普萘洛尔甲醇溶液在290、306与319nm波长处有最大吸收，在290nm波长处的比吸光系数（E1%/1cm）为207，因此可在290nm处测定吸光度，计算含量。
2．高效液相色谱法
根据对照品与供试品最后出峰面积之比等于对照品与供试品浓度之比求得样品浓度。
3．荷移光谱法
盐酸普萘洛尔是一种富电子物质, 其氮原子上的孤对电子能够与缺电子的TCNQ 作用生成荷移络合物。利用该反应可测定盐酸普萘洛尔含量
4．流动注射化学发光法
在稀硫酸溶液中及低浓度罗丹明B( 浓度高于0. 010 mmol/ L 的罗丹明B 可被Ce C 氧化产生化学发光导致背景迅速升高) 存在的条件下, 铈C 可氧化盐酸普萘洛尔产生化学发光反应, 但发光反应的信号较弱。多次的实验表明, 若在铈C 的硫酸溶液中再加入适量的盐酸, 化学发光信号极大地增强。盐酸普萘洛尔浓度在8. 0 @ 10- 5~ 8. 0 @ 10- 3g/ L 范围内与发光强度呈良好的线性关系。
5．量热滴定法
量热滴定法是以测定反应体系温度的变化为基础的容量分析方法。利用盐酸普蔡洛尔中Cl-与标准溶液中Ag+沉淀反应的热效应来测定盐酸普萘洛尔原料药及其制剂的含量。
四、实验内容
1．紫外分光光度法
仪器：752型紫外-可见分光光度仪；Mettler AL204电子天平；5ml刻度移液管；100ml容量瓶；50ml容量瓶；研钵。
试剂：盐酸普萘洛尔片样品（10mg/片），甲醇。
方法：取本品20片，精密称定，研细，精密称取适量（约相当于盐酸普萘洛尔20mg），置于100ml容量瓶中，加水2ml，振摇5分钟使盐酸普萘洛尔溶解，用甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，精密量取续滤液5ml，置于50ml容量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀。根据紫
外-可见分光光度法的操作方法，在290nm的波长处测定吸光度，按C16H21NO2·HCl的吸收系数（E1%/1cm）为207计算，即得。
2．高效液相色谱法
仪器：岛津LC-2010AHT液相色谱；TU-1901紫外可见分光光度计；AB265-S电子分析天平；SartoriusPb-10pH计。
试剂：盐酸普萘洛尔对照品，盐酸普萘洛尔片；甲醇、庚烷磺酸钠(色谱纯)，磷酸二氢钾（分析纯）。
色谱条件： 色谱柱：SHIMADZU ShimpackVP-ODS C 18（250mm×4.6mm，5μm）；流动相：甲醇-含0.1%庚烷磺酸钠的0.05mol/L磷酸二氢钾溶液(57∶43)；流速：1.0mL•min-1；检测波长：290nm；进样量：10μl；柱温：30℃。
方法：取盐酸普萘洛尔片20片，精密称定，研细，精密称取适量 (约相当于盐酸普萘洛尔10mg)，置50ml量瓶中，加水2ml，振摇5mim使溶解，用甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，作为供试品溶液。精密称取盐酸普萘洛尔对照品约10mg，置50ml量瓶中，加水2ml，振摇5mim使溶解，用甲醇稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液。精密量取供试品溶液与对照品溶液各10μl，分别注入高效液相色谱仪，记录色谱图，按外标法以峰面积计算含量。
3．荷移光谱法
仪器：UV-2401PC 型紫外可见分光光度计；H H S # 21- Ni 型恒温水浴。
试剂：7, 7, 8, 8- 四氰基对二次甲基苯醌( Sigma ) 丙酮溶液: 51 0 @ 10- 3mol # L- 1；盐酸普萘洛尔对照品；11 00 g # L- 1 、01 40 g # L- 1 丙酮溶液, 甲醇、无水乙醇、丙酮、氯仿等有机试剂均为分析纯；盐酸普萘洛尔片。
方法：取标示量为10 mg/ 片- 1的盐酸普萘洛尔10 片, 精确称量后研磨混匀, 然后准确称取总量的1/ 10, 用丙酮溶解,过滤, 弃去不溶物。滤液于100 mL 容量瓶中定容备用。准确移取一定量盐酸普萘洛尔( 01 40 g# L- 1 丙酮溶液) 于10 mL 比色管中, 加入51 0@ 10- 3 mol# L- 1 7, 7, 8, 8- 四氰基对二次甲基苯醌丙酮溶液31 0 mL。用丙酮稀释至刻度, 摇匀后于40 e 下反应30 min 后冷却至室温, 于另一10 mL 比色管中移取51 0@ 10- 3 mol# L- 1 7, 7, 8, 8- 四氰基对二次甲基苯醌丙酮溶液31 0 mL, 用丙酮稀释至刻度, 作为参比溶液, 用1 cm比色皿分别在745 nm 和845 nm 处测量其吸光度。
4．流动注射化学发光法
仪器：IFFM-D 型流动注射化学发光/ 光谱/ 光度分析仪；SP-2102UVP 型紫外可见分光光度计。
方法：准确称取010100g 纯品, 用水溶解后转入100 mL 容量瓶, 定容, 配成1. 0 @ 10- 4g/ mL 储备液, 使用时逐级稀释; 准确称取2. 741 g (NH4) 2Ce( NO3) 6，在0. 050 mol/L H2SO4 介质中配成250 mL 20. 0 mmol/ L 铈C 储备液, 使用时加入盐酸逐级稀释成工作液( 盐酸浓度恒定在0. 64 mol/ L) ; 罗丹明B: 在0. 010 mol/ L H2SO4 介质中配成1. 0 mmol/ L 的罗丹明B 储备液, 使用时逐级稀释; 实验所用其它试剂均为分析纯, 水为二次亚沸蒸馏水。铈d 工作液与罗丹明B 溶液由主蠕动泵泵入, 在三通管混合, 待管路中流动平稳后, 通过进样阀向样品溶液中注入流通池, 流动注射化学发光光度仪记录发光信号, 以峰高定量。管路中主泵速度为30r/ min, 运行时间为15 s; 副泵速度为60 r/ min, 运行时间为10 s; 输液管内径为0. 8
nm, 采样管长10 cm( 采样体积为5. 0 @ 10- 5 L) , 阀池距为20 cm。
5．量热滴定法
仪器：量热滴定仪（自制）,热敏电阻（电阻6000Ω)，热惯常数
五、注意事项
1．高效液相色谱法进样前须用流动相平衡才能进样。
2．测定完毕后须用纯甲醇平衡色谱柱。
3．荷移光谱法在最佳温度为40 e下，分别选择反应时间为10~50 min,测定溶液吸光度, 研究反应时间对生成络合物的影响。试验表明: 反应的最佳时间为30 min。
4．流动注射化学发光法中，经实验表明, Ce C浓度增大, 体系的发光强度也相应增大。当Ce C 浓度达到一定值时,若再增加浓度, 发光强度反而下降( 见图2) 。故选择Ce C 浓度为
3. 0 mmol/ L。
六、参考文献
《中国药典》2010年版 二部
赵纯玉 王玲 易燕群 《HPLC法测定盐酸普萘洛尔片的含量》
黄薇 王峰 刘雪静 慈夫玲 《荷移光谱法测定盐酸普萘洛尔片含量》
饶志明 吴秋莲 谢国平 许环环 张秀青 《流动注射化学发光测定盐酸普萘洛尔》
盐酸普萘洛尔片含量的测定
一、实验目的
1．培养查阅文献、资料的能力。
2．培养根据实验题目拟出实验方案的能力。
3．进一步熟悉紫外分光光度计的操作。
4掌握紫外分光光度法测定片剂含量的一般步骤和操作。
二、实验原理
盐酸普萘洛尔又名心得安，为白色或类白色的结晶性粉末。化学名称：1-异丙氨基-3-(1-萘氧基)-２-丙醇盐酸盐。
分子式：C16H21NO2·HCl
分子量：295.81
1．紫外分光光度法（中国药典规定方法）
盐酸普萘洛尔甲醇溶液在290、306与319nm波长处有最大吸收，在290nm波长处的比吸光系数（E1%/1cm）为207，因此可在290nm处测定吸光度，计算含量。
2．高效液相色谱法
根据对照品与供试品最后出峰面积之比等于对照品与供试品浓度之比求得样品浓度。
3．荷移光谱法
盐酸普萘洛尔是一种富电子物质, 其氮原子上的孤对电子能够与缺电子的TCNQ 作用生成荷移络合物。利用该反应可测定盐酸普萘洛尔含量
4．流动注射化学发光法
在稀硫酸溶液中及低浓度罗丹明B( 浓度高于0. 010 mmol/ L 的罗丹明B 可被Ce C 氧化产生化学发光导致背景迅速升高) 存在的条件下, 铈C 可氧化盐酸普萘洛尔产生化学发光反应, 但发光反应的信号较弱。多次的实验表明, 若在铈C 的硫酸溶液中再加入适量的盐酸, 化学发光信号极大地增强。盐酸普萘洛尔浓度在8. 0 @ 10- 5~ 8. 0 @ 10- 3g/ L 范围内与发光强度呈良好的线性关系。
5．量热滴定法
量热滴定法是以测定反应体系温度的变化为基础的容量分析方法。利用盐酸普蔡洛尔中Cl-与标准溶液中Ag+沉淀反应的热效应来测定盐酸普萘洛尔原料药及其制剂的含量。
四、实验内容
1．紫外分光光度法
仪器：752型紫外-可见分光光度仪；Mettler AL204电子天平；5ml刻度移液管；100ml容量瓶；50ml容量瓶；研钵。
试剂：盐酸普萘洛尔片样品（10mg/片），甲醇。
方法：取本品20片，精密称定，研细，精密称取适量（约相当于盐酸普萘洛尔20mg），置于100ml容量瓶中，加水2ml，振摇5分钟使盐酸普萘洛尔溶解，用甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，精密量取续滤液5ml，置于50ml容量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀。根据紫
外-可见分光光度法的操作方法，在290nm的波长处测定吸光度，按C16H21NO2·HCl的吸收系数（E1%/1cm）为207计算，即得。
2．高效液相色谱法
仪器：岛津LC-2010AHT液相色谱；TU-1901紫外可见分光光度计；AB265-S电子分析天平；SartoriusPb-10pH计。
试剂：盐酸普萘洛尔对照品，盐酸普萘洛尔片；甲醇、庚烷磺酸钠(色谱纯)，磷酸二氢钾（分析纯）。
色谱条件： 色谱柱：SHIMADZU ShimpackVP-ODS C 18（250mm×4.6mm，5μm）；流动相：甲醇-含0.1%庚烷磺酸钠的0.05mol/L磷酸二氢钾溶液(57∶43)；流速：1.0mL•min-1；检测波长：290nm；进样量：10μl；柱温：30℃。
方法：取盐酸普萘洛尔片20片，精密称定，研细，精密称取适量 (约相当于盐酸普萘洛尔10mg)，置50ml量瓶中，加水2ml，振摇5mim使溶解，用甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，作为供试品溶液。精密称取盐酸普萘洛尔对照品约10mg，置50ml量瓶中，加水2ml，振摇5mim使溶解，用甲醇稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液。精密量取供试品溶液与对照品溶液各10μl，分别注入高效液相色谱仪，记录色谱图，按外标法以峰面积计算含量。
3．荷移光谱法
仪器：UV-2401PC 型紫外可见分光光度计；H H S # 21- Ni 型恒温水浴。
试剂：7, 7, 8, 8- 四氰基对二次甲基苯醌( Sigma ) 丙酮溶液: 51 0 @ 10- 3mol # L- 1；盐酸普萘洛尔对照品；11 00 g # L- 1 、01 40 g # L- 1 丙酮溶液, 甲醇、无水乙醇、丙酮、氯仿等有机试剂均为分析纯；盐酸普萘洛尔片。
方法：取标示量为10 mg/ 片- 1的盐酸普萘洛尔10 片, 精确称量后研磨混匀, 然后准确称取总量的1/ 10, 用丙酮溶解,过滤, 弃去不溶物。滤液于100 mL 容量瓶中定容备用。准确移取一定量盐酸普萘洛尔( 01 40 g# L- 1 丙酮溶液) 于10 mL 比色管中, 加入51 0@ 10- 3 mol# L- 1 7, 7, 8, 8- 四氰基对二次甲基苯醌丙酮溶液31 0 mL。用丙酮稀释至刻度, 摇匀后于40 e 下反应30 min 后冷却至室温, 于另一10 mL 比色管中移取51 0@ 10- 3 mol# L- 1 7, 7, 8, 8- 四氰基对二次甲基苯醌丙酮溶液31 0 mL, 用丙酮稀释至刻度, 作为参比溶液, 用1 cm比色皿分别在745 nm 和845 nm 处测量其吸光度。
4．流动注射化学发光法
仪器：IFFM-D 型流动注射化学发光/ 光谱/ 光度分析仪；SP-2102UVP 型紫外可见分光光度计。
方法：准确称取010100g 纯品, 用水溶解后转入100 mL 容量瓶, 定容, 配成1. 0 @ 10- 4g/ mL 储备液, 使用时逐级稀释; 准确称取2. 741 g (NH4) 2Ce( NO3) 6，在0. 050 mol/L H2SO4 介质中配成250 mL 20. 0 mmol/ L 铈C 储备液, 使用时加入盐酸逐级稀释成工作液( 盐酸浓度恒定在0. 64 mol/ L) ; 罗丹明B: 在0. 010 mol/ L H2SO4 介质中配成1. 0 mmol/ L 的罗丹明B 储备液, 使用时逐级稀释; 实验所用其它试剂均为分析纯, 水为二次亚沸蒸馏水。铈d 工作液与罗丹明B 溶液由主蠕动泵泵入, 在三通管混合, 待管路中流动平稳后, 通过进样阀向样品溶液中注入流通池, 流动注射化学发光光度仪记录发光信号, 以峰高定量。管路中主泵速度为30r/ min, 运行时间为15 s; 副泵速度为60 r/ min, 运行时间为10 s; 输液管内径为0. 8
nm, 采样管长10 cm( 采样体积为5. 0 @ 10- 5 L) , 阀池距为20 cm。
5．量热滴定法
仪器：量热滴定仪（自制）,热敏电阻（电阻6000Ω)，热惯常数
五、注意事项
1．高效液相色谱法进样前须用流动相平衡才能进样。
2．测定完毕后须用纯甲醇平衡色谱柱。
3．荷移光谱法在最佳温度为40 e下，分别选择反应时间为10~50 min,测定溶液吸光度, 研究反应时间对生成络合物的影响。试验表明: 反应的最佳时间为30 min。
4．流动注射化学发光法中，经实验表明, Ce C浓度增大, 体系的发光强度也相应增大。当Ce C 浓度达到一定值时,若再增加浓度, 发光强度反而下降( 见图2) 。故选择Ce C 浓度为
3. 0 mmol/ L。
六、参考文献
《中国药典》2010年版 二部
赵纯玉 王玲 易燕群 《HPLC法测定盐酸普萘洛尔片的含量》
黄薇 王峰 刘雪静 慈夫玲 《荷移光谱法测定盐酸普萘洛尔片含量》
饶志明 吴秋莲 谢国平 许环环 张秀青 《流动注射化学发光测定盐酸普萘洛尔》