#144#
辽宁中医杂志2009年第36卷第1期
独活对AD 模型大鼠定位航行行为学的影响
杜久钢, 高嵩松, 王 辰, 杨雪山, 刘媛媛, 指导:王佰庆
(辽宁中医药大学, 辽宁沈阳110032)
摘 要:目的:观察独活改善老年性痴呆(AD ) 模型大鼠定位航行学习记忆功能的作用。方法:应用M orris 水迷宫检测独活对AD 模型大鼠定位航行学习记忆改善的情况。结果表明:独活能够改善模型大鼠的定位航行学习记忆能力, 缩短模型大鼠在水迷宫中定位航行的时间, 提示独活对AD 模型大鼠的定位航行学习记忆能力有一定的改善作用。
关键词:独活; 老年性痴呆病; 学习记忆; 定位航行
中图分类号:R 28515 文献标识码:B 文章编号:1000-1719(2009) 01-0144-02
D uhuo c s E ffect on t he Positio n ing N avigation E t hology of the AD M odel Rat D U J i u-gang, GAO Song -song, WAN G Chen , YAN G Xue -shan , L IU Yuan -yuan , advisor :WAN G B ai -qing
(L i aoni ng Universit y of T raditional Ch i nese M e d ici ne , Shenyang 110032, L iaoning, China)
Abstrac t :O bjective :T o observe the effect that Duhuo can be used to i m prove the f unc tion of AD m ode l ra t c s pos i tion i ng nav-i
ga tion learn i ng m e m ory . M et hod s :A pply the M orr i s w ater m aze to test AD m ode l ra t c s positi on i ng navigati on l earn i ng m e m ory , wh ich is caused by i n j ec ting agg l ome ra te A B 1-40i nto r i ghtH I P. Results :Duhuo can i m prove the mode l rat c s pos i tion i ng nav i ga -ti on learn i ng m e m ory , shorten t he ti m e spent by the model rat i n positi on i ng nav igati on i n t he wa ter m aze . Ind ica te tha tD uhuo can so m ehow i m prov e the AD mode l ra t c s positi oning navigati on lea rning m e m ory .
K ey word s :D uhuo ; A D ; L earn i ng m emo ry ; Po siti oni ng nav i g ati on 老年性痴呆, 亦称阿尔茨海默病(AD) 是一种以病
理改变为特征的进行性退行性神经病变[1]。老年性痴呆的防治已成为十分紧迫的社会和医学问题, 目前尚无特异性治疗方法。而中医对该病有丰富的理论和其独特的认识, 并在长期的临床实践中积累了丰富的治疗经验, 在临床治疗、预防和康复方面都显示出独特优势。因此, 进一步研究中医药治疗老年性痴呆病意义重大。为此, 采用M orris 水迷宫观察独活对AD 模型大鼠定位航行学习记忆改善情况。1 材料与方法
111 动物 雄性W i star 大鼠36只, 普通级, 体重(200? 20) g , 由中国医科大学大学实验动物中心提供, 许可证号:SCXK (辽) 2003-0009。
112 药物与试剂 独活采用中药颗粒剂, 江阴制药公司(批号Z45022402) 。制成含生药1108mg /mL的浓缩液。盐酸吲哚美辛片, 上海华氏股份有限公司生产(国药准字Z13021850) , 配制成含生药0110m g /mL水溶液。A B 1-40购自瑞士巴亨公司(批号K49512) 。113 仪器 脑立体定位仪, NAR IS H I GE S N -2型四川成都产; M orris 水迷宫, 由中国医学科学院药物研究所研制的电脑自动摄象装备系统。
114 分组造模和给药 36只大鼠随机平均分为4组。假手术组、独活组、西药组、模型组用10%水合氯醛(40m g /kg) 腹腔麻醉后, 固定于大鼠脑立体定位仪上, 头部备皮, 常规无菌操作, 沿颅中缝做2~3c m 的切口, 剥离骨膜, 暴露十字缝和人字缝, 海马定位坐标在前囟后310mm 、旁开212mm , 定位后用牙科钻钻开颅骨, 微量注射器自脑表面垂直进针415mm 。右侧海
马区注射1L l A B 1-40(提前1mL 用无菌生理盐水将A B 1-40稀释成10L l /L L, 37e 孵育1m L ) , 使其变为聚
n , 留针集态的A B 1-40后供造模用[1]。注射时间5m i [2]
5m i n , 缓慢出针后, 局部消毒, 缝合皮肤。假手术组于右侧海马区内注射等体积的生理盐水。7天后做定位航行实验, 灌胃4周后再次定位航行实验。
115 水迷宫组成 M o rris 水迷宫由一不锈钢圆形水池和一可移动位置的平台组成。实验时, 在水池里加入自来水, 使水面高出平台2c m, 水深30c m, 水温控制在(26? 1) e , 平台置于第四象限的中间[3]。水池上方安置摄像机与监视器和计算机连接, 跟踪并记录下大鼠游泳轨迹和自动计算出在水池中所游过的路程, 及找到平台所需的时间, 进行图像采集与分析。
116 定位航行实验 各种实验条件保持不变。实验前将大鼠放入水池中(不放入平台) 自由游泳2m i n , 使大鼠熟悉迷宫内环境并用红色绸缎系住大鼠腰部, 便于摄像机跟踪。实验共进行4天, 每天训练2次, 分别以第1、2、3象限作为入水点, 每次训练2m i n 的方案。测试时沿水池象限中部的池壁将大鼠轻巧的放入水池, 入水时大鼠面对池壁。若大鼠在1m i n 之内尚未找到平台(潜伏期记为60s) , 则将大鼠拿到平台上并使它在上面站15s , 若大鼠在1m i n 之内找到平台, 也让其在平台上站15s 。如此训练4天, 记录每只大鼠所
[4]
需时间、路程。
117 统计方法 所有结果均以x ? s 表示, 采用SPSS1010统计软件分别进行方差分析。2 结 果
对大鼠定位航行试验的影响:与模型组比较, 独活组, 假手术组的定位航行总时间、总路程明显缩短(P 0105) , 见表1。3 讨 论
目前, 有关动物行为学研究主要包括两个方面:一是, ; 收稿日期:2008-04-24
基金项目:国家重大基础研究项目973课题(20060664)
作者简介:杜久钢(1970-), 男, 辽宁朝阳人, 硕士研究生, 研究方向:中
医藏象学说及其应用研究。
辽宁中医杂志2009年第36卷第1期
#145#
咳喘康对博莱霉素A5致肺纤维化大鼠肺组织中TGF-B 1及其受体mRNA 表达的影响
徐艳玲, 曲妮妮, 马丽佳, 赵克明, 邓 莉, 张 杨, 王丽娜, 夏欣田, 陈 锋, 郑洪亮
(辽宁中医药大学附属医院, 辽宁沈阳110032)
摘 要:目的:研究咳喘康对博莱霉素A5致肺纤维化大鼠肺组织中TGF -B 1及其受体mRNA 表达的影响。方法:
将60只健康S D 大鼠随机分为正常组、模型组、中药咳喘康组和激素组。除正常组外, 其余3组大鼠经气管注入博莱霉素A 5复制肺纤维化大鼠模型, 各组于造模后第1天分组予以给药, 于给药7、14、28天分批处死各组大鼠, 每次每组5只。利用EL ISA 法检测肺组织中TG F -B 1的含量、RT -PCR 法检测肺组织中TG F -B 1mRNA 的表达水平。结果:模型组在不同时段TG F-B 1含量及TGF -B 1mRNA 表达较正常对照组均明显增高, 具有显著的统计学意义(P
关键词:肺纤维化; 大鼠; TGF -B 1; TGF -B 1mRNA; 咳喘康
中图分类号:R 28515 文献标识码:B 文章编号:1000-1719(2009) 01-0145-03 肺间质纤维化是呼吸系统疾病中一组病因各异、表现相似的疾病谱, 其病理改变以大量的成纤维细胞聚集、细胞外基质沉积并伴有炎症和损伤所致组织结构破坏为特征[1]。中医对本病的病证归属于肺痿、肺痹范畴。肺肾气阴两虚, 血脉瘀阻贯穿疾病的始终, 是公认的病机[2]。本实验采用EL I S A 法及RT -PCR 法研究咳喘康对博莱霉素A5致肺纤维化大鼠肺组织中
表1 各组大鼠的定位航行试验总时间总路程比较组别独活组西药组模型组假手术组
n 9999
总时间(S ) 24. 94? 11. 8259. 64? 19. 22v 57. 22? 30. 50v 35. 47? 24. 95v
总路程(c m ) 1587. 7? 87. 33727. 3? 20. 8v v 3273. 5? 14. 5v v 1821. 1? 11. 3v v
TGF -B 1及其受体mRNA 表达的影响, 从而为肺纤维
化的中医治疗提供理论依据。1 材料与方法111 动物
成年雄性S D 大鼠, 60只, 体重200~250g , 由中国医科大学动物实验中心提供, 合格证号:SC XK (辽) 2003-0013。湿阻窍是AD 的重要因素。独活, 味辛、苦, 性微温, 归肾, 膀胱经。现代中药学多用其祛风除湿, 通痹止痛的功效, 以治风寒湿痹, 腰膝疼痛, 少阴伏风头痛。独活为常用中药, 始载于5神农本草经6, 列为上品, /主风寒所击, 金疮止痛, 奔豚痫疰, 女子疝瘕, 久服轻身耐老0。纵观历代本草可以看出, 独活是一味行气活血、温养营卫、入阴升阳、通补兼得的抗衰老之良药。其延缓衰老的机制主要是行气活血、祛瘀除湿。现代药理研究表明, 独活具有抑制血小板聚集、抗血栓、拮抗钙通道受体、增强免疫功能、抗关节炎、镇痛等作用[6]。故独活可适用于防治老年性痴呆。
本实验采用M orris 水迷宫检测独活对大鼠定位航行学习记忆能力的改善作用。实验结果表明, 模型组大鼠在检测中的所用时间延长、游泳距离明显增加, 说明模型组大鼠的学习记忆能力受到严重损伤。独活组大鼠在试验中的上述两项检测指标都明显优于模型组, 表明独活对AD 模型大鼠的学习记忆能力有明显改善作用。
参考文献
[1] 宋葆华. 地黄引子对老年痴呆大鼠认知能力的影响[J].辽宁中医
杂志, 2005, 32(6):616.
[2] 丁正明. 老年痴呆动物模型研究进展[J].浙江中西医杂志, 2000,
10(10):638-640.
[3] 胡海燕. 清心开窍方对老年痴呆模型大鼠学习记忆能力的影响研
究[J].浙江中西医志, 2008, 2, 43(2):104-106.
[4] 杨文明. 智脑胶囊对血管性痴呆模型大鼠学习记忆及脑组织钙含
量的影响[J].中国实用方剂学杂志, 2007(12):34-36.
[5] 谢宁. 地黄引子对AD 模型大鼠定位航行学习记忆的影响[J].中
医药学报, 2005, 33(4):28-29.
[6] 裴媛. 独活及其醇提物对自然衰老小鼠脑细胞凋亡作用的实验研
究[J].辽宁中医杂志, 2004, 5(8):989-990.
注:各实验组与独活组比较, v P
v v P
性学习, 包括各类迷宫。本实验采用的M orris 的水迷宫行为学是一种空间记忆的模型, 与大鼠的学习记忆功能有关, 较其他方法有其明显的优越性, 结合特定的迷宫及摄像系统、正确的训练程序及专用的统计软件, 使学习记忆实验研究的指标观测系统而全面, 具有操作简便、数据误差小的特点, 近年来常利用这种方法来研究大鼠的学习记忆功能。观察的指标主要是计算动物找到平台所需要的时间以及动物游泳的路程。这种水迷宫方法已成为神经科学研究前沿公认的动物学习记忆行为学检测先进方法。本实验采用直接向大鼠海马区注射凝聚态A B 1-40方法制作AD 的动物模型, 可较好地模拟老年性痴呆行为学表现, 可作为AD 模型之一[5]。
中医认为AD 的病位在脑, 与心肝脾肾功能失调密切相关。其性质是本虚标实, 本虚主要为肾精亏损和气血不足, 标实主要表现为淤血阻络、痰湿阻窍。脏腑功能失调是AD 发病的重要病理基础, 瘀血阻络、痰
收稿日期:2008-07-08
基金项目:辽宁省教育厅科研课题(05L241)
作者简介:徐艳玲(1957-), 女, 辽宁绥中人, 主任医师、教授, 硕士生导
师, 研究方向:中西医结合治疗呼吸系统疾病。
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辽宁中医杂志2009年第36卷第1期
独活对AD 模型大鼠定位航行行为学的影响
杜久钢, 高嵩松, 王 辰, 杨雪山, 刘媛媛, 指导:王佰庆
(辽宁中医药大学, 辽宁沈阳110032)
摘 要:目的:观察独活改善老年性痴呆(AD ) 模型大鼠定位航行学习记忆功能的作用。方法:应用M orris 水迷宫检测独活对AD 模型大鼠定位航行学习记忆改善的情况。结果表明:独活能够改善模型大鼠的定位航行学习记忆能力, 缩短模型大鼠在水迷宫中定位航行的时间, 提示独活对AD 模型大鼠的定位航行学习记忆能力有一定的改善作用。
关键词:独活; 老年性痴呆病; 学习记忆; 定位航行
中图分类号:R 28515 文献标识码:B 文章编号:1000-1719(2009) 01-0144-02
D uhuo c s E ffect on t he Positio n ing N avigation E t hology of the AD M odel Rat D U J i u-gang, GAO Song -song, WAN G Chen , YAN G Xue -shan , L IU Yuan -yuan , advisor :WAN G B ai -qing
(L i aoni ng Universit y of T raditional Ch i nese M e d ici ne , Shenyang 110032, L iaoning, China)
Abstrac t :O bjective :T o observe the effect that Duhuo can be used to i m prove the f unc tion of AD m ode l ra t c s pos i tion i ng nav-i
ga tion learn i ng m e m ory . M et hod s :A pply the M orr i s w ater m aze to test AD m ode l ra t c s positi on i ng navigati on l earn i ng m e m ory , wh ich is caused by i n j ec ting agg l ome ra te A B 1-40i nto r i ghtH I P. Results :Duhuo can i m prove the mode l rat c s pos i tion i ng nav i ga -ti on learn i ng m e m ory , shorten t he ti m e spent by the model rat i n positi on i ng nav igati on i n t he wa ter m aze . Ind ica te tha tD uhuo can so m ehow i m prov e the AD mode l ra t c s positi oning navigati on lea rning m e m ory .
K ey word s :D uhuo ; A D ; L earn i ng m emo ry ; Po siti oni ng nav i g ati on 老年性痴呆, 亦称阿尔茨海默病(AD) 是一种以病
理改变为特征的进行性退行性神经病变[1]。老年性痴呆的防治已成为十分紧迫的社会和医学问题, 目前尚无特异性治疗方法。而中医对该病有丰富的理论和其独特的认识, 并在长期的临床实践中积累了丰富的治疗经验, 在临床治疗、预防和康复方面都显示出独特优势。因此, 进一步研究中医药治疗老年性痴呆病意义重大。为此, 采用M orris 水迷宫观察独活对AD 模型大鼠定位航行学习记忆改善情况。1 材料与方法
111 动物 雄性W i star 大鼠36只, 普通级, 体重(200? 20) g , 由中国医科大学大学实验动物中心提供, 许可证号:SCXK (辽) 2003-0009。
112 药物与试剂 独活采用中药颗粒剂, 江阴制药公司(批号Z45022402) 。制成含生药1108mg /mL的浓缩液。盐酸吲哚美辛片, 上海华氏股份有限公司生产(国药准字Z13021850) , 配制成含生药0110m g /mL水溶液。A B 1-40购自瑞士巴亨公司(批号K49512) 。113 仪器 脑立体定位仪, NAR IS H I GE S N -2型四川成都产; M orris 水迷宫, 由中国医学科学院药物研究所研制的电脑自动摄象装备系统。
114 分组造模和给药 36只大鼠随机平均分为4组。假手术组、独活组、西药组、模型组用10%水合氯醛(40m g /kg) 腹腔麻醉后, 固定于大鼠脑立体定位仪上, 头部备皮, 常规无菌操作, 沿颅中缝做2~3c m 的切口, 剥离骨膜, 暴露十字缝和人字缝, 海马定位坐标在前囟后310mm 、旁开212mm , 定位后用牙科钻钻开颅骨, 微量注射器自脑表面垂直进针415mm 。右侧海
马区注射1L l A B 1-40(提前1mL 用无菌生理盐水将A B 1-40稀释成10L l /L L, 37e 孵育1m L ) , 使其变为聚
n , 留针集态的A B 1-40后供造模用[1]。注射时间5m i [2]
5m i n , 缓慢出针后, 局部消毒, 缝合皮肤。假手术组于右侧海马区内注射等体积的生理盐水。7天后做定位航行实验, 灌胃4周后再次定位航行实验。
115 水迷宫组成 M o rris 水迷宫由一不锈钢圆形水池和一可移动位置的平台组成。实验时, 在水池里加入自来水, 使水面高出平台2c m, 水深30c m, 水温控制在(26? 1) e , 平台置于第四象限的中间[3]。水池上方安置摄像机与监视器和计算机连接, 跟踪并记录下大鼠游泳轨迹和自动计算出在水池中所游过的路程, 及找到平台所需的时间, 进行图像采集与分析。
116 定位航行实验 各种实验条件保持不变。实验前将大鼠放入水池中(不放入平台) 自由游泳2m i n , 使大鼠熟悉迷宫内环境并用红色绸缎系住大鼠腰部, 便于摄像机跟踪。实验共进行4天, 每天训练2次, 分别以第1、2、3象限作为入水点, 每次训练2m i n 的方案。测试时沿水池象限中部的池壁将大鼠轻巧的放入水池, 入水时大鼠面对池壁。若大鼠在1m i n 之内尚未找到平台(潜伏期记为60s) , 则将大鼠拿到平台上并使它在上面站15s , 若大鼠在1m i n 之内找到平台, 也让其在平台上站15s 。如此训练4天, 记录每只大鼠所
[4]
需时间、路程。
117 统计方法 所有结果均以x ? s 表示, 采用SPSS1010统计软件分别进行方差分析。2 结 果
对大鼠定位航行试验的影响:与模型组比较, 独活组, 假手术组的定位航行总时间、总路程明显缩短(P 0105) , 见表1。3 讨 论
目前, 有关动物行为学研究主要包括两个方面:一是, ; 收稿日期:2008-04-24
基金项目:国家重大基础研究项目973课题(20060664)
作者简介:杜久钢(1970-), 男, 辽宁朝阳人, 硕士研究生, 研究方向:中
医藏象学说及其应用研究。
辽宁中医杂志2009年第36卷第1期
#145#
咳喘康对博莱霉素A5致肺纤维化大鼠肺组织中TGF-B 1及其受体mRNA 表达的影响
徐艳玲, 曲妮妮, 马丽佳, 赵克明, 邓 莉, 张 杨, 王丽娜, 夏欣田, 陈 锋, 郑洪亮
(辽宁中医药大学附属医院, 辽宁沈阳110032)
摘 要:目的:研究咳喘康对博莱霉素A5致肺纤维化大鼠肺组织中TGF -B 1及其受体mRNA 表达的影响。方法:
将60只健康S D 大鼠随机分为正常组、模型组、中药咳喘康组和激素组。除正常组外, 其余3组大鼠经气管注入博莱霉素A 5复制肺纤维化大鼠模型, 各组于造模后第1天分组予以给药, 于给药7、14、28天分批处死各组大鼠, 每次每组5只。利用EL ISA 法检测肺组织中TG F -B 1的含量、RT -PCR 法检测肺组织中TG F -B 1mRNA 的表达水平。结果:模型组在不同时段TG F-B 1含量及TGF -B 1mRNA 表达较正常对照组均明显增高, 具有显著的统计学意义(P
关键词:肺纤维化; 大鼠; TGF -B 1; TGF -B 1mRNA; 咳喘康
中图分类号:R 28515 文献标识码:B 文章编号:1000-1719(2009) 01-0145-03 肺间质纤维化是呼吸系统疾病中一组病因各异、表现相似的疾病谱, 其病理改变以大量的成纤维细胞聚集、细胞外基质沉积并伴有炎症和损伤所致组织结构破坏为特征[1]。中医对本病的病证归属于肺痿、肺痹范畴。肺肾气阴两虚, 血脉瘀阻贯穿疾病的始终, 是公认的病机[2]。本实验采用EL I S A 法及RT -PCR 法研究咳喘康对博莱霉素A5致肺纤维化大鼠肺组织中
表1 各组大鼠的定位航行试验总时间总路程比较组别独活组西药组模型组假手术组
n 9999
总时间(S ) 24. 94? 11. 8259. 64? 19. 22v 57. 22? 30. 50v 35. 47? 24. 95v
总路程(c m ) 1587. 7? 87. 33727. 3? 20. 8v v 3273. 5? 14. 5v v 1821. 1? 11. 3v v
TGF -B 1及其受体mRNA 表达的影响, 从而为肺纤维
化的中医治疗提供理论依据。1 材料与方法111 动物
成年雄性S D 大鼠, 60只, 体重200~250g , 由中国医科大学动物实验中心提供, 合格证号:SC XK (辽) 2003-0013。湿阻窍是AD 的重要因素。独活, 味辛、苦, 性微温, 归肾, 膀胱经。现代中药学多用其祛风除湿, 通痹止痛的功效, 以治风寒湿痹, 腰膝疼痛, 少阴伏风头痛。独活为常用中药, 始载于5神农本草经6, 列为上品, /主风寒所击, 金疮止痛, 奔豚痫疰, 女子疝瘕, 久服轻身耐老0。纵观历代本草可以看出, 独活是一味行气活血、温养营卫、入阴升阳、通补兼得的抗衰老之良药。其延缓衰老的机制主要是行气活血、祛瘀除湿。现代药理研究表明, 独活具有抑制血小板聚集、抗血栓、拮抗钙通道受体、增强免疫功能、抗关节炎、镇痛等作用[6]。故独活可适用于防治老年性痴呆。
本实验采用M orris 水迷宫检测独活对大鼠定位航行学习记忆能力的改善作用。实验结果表明, 模型组大鼠在检测中的所用时间延长、游泳距离明显增加, 说明模型组大鼠的学习记忆能力受到严重损伤。独活组大鼠在试验中的上述两项检测指标都明显优于模型组, 表明独活对AD 模型大鼠的学习记忆能力有明显改善作用。
参考文献
[1] 宋葆华. 地黄引子对老年痴呆大鼠认知能力的影响[J].辽宁中医
杂志, 2005, 32(6):616.
[2] 丁正明. 老年痴呆动物模型研究进展[J].浙江中西医杂志, 2000,
10(10):638-640.
[3] 胡海燕. 清心开窍方对老年痴呆模型大鼠学习记忆能力的影响研
究[J].浙江中西医志, 2008, 2, 43(2):104-106.
[4] 杨文明. 智脑胶囊对血管性痴呆模型大鼠学习记忆及脑组织钙含
量的影响[J].中国实用方剂学杂志, 2007(12):34-36.
[5] 谢宁. 地黄引子对AD 模型大鼠定位航行学习记忆的影响[J].中
医药学报, 2005, 33(4):28-29.
[6] 裴媛. 独活及其醇提物对自然衰老小鼠脑细胞凋亡作用的实验研
究[J].辽宁中医杂志, 2004, 5(8):989-990.
注:各实验组与独活组比较, v P
v v P
性学习, 包括各类迷宫。本实验采用的M orris 的水迷宫行为学是一种空间记忆的模型, 与大鼠的学习记忆功能有关, 较其他方法有其明显的优越性, 结合特定的迷宫及摄像系统、正确的训练程序及专用的统计软件, 使学习记忆实验研究的指标观测系统而全面, 具有操作简便、数据误差小的特点, 近年来常利用这种方法来研究大鼠的学习记忆功能。观察的指标主要是计算动物找到平台所需要的时间以及动物游泳的路程。这种水迷宫方法已成为神经科学研究前沿公认的动物学习记忆行为学检测先进方法。本实验采用直接向大鼠海马区注射凝聚态A B 1-40方法制作AD 的动物模型, 可较好地模拟老年性痴呆行为学表现, 可作为AD 模型之一[5]。
中医认为AD 的病位在脑, 与心肝脾肾功能失调密切相关。其性质是本虚标实, 本虚主要为肾精亏损和气血不足, 标实主要表现为淤血阻络、痰湿阻窍。脏腑功能失调是AD 发病的重要病理基础, 瘀血阻络、痰
收稿日期:2008-07-08
基金项目:辽宁省教育厅科研课题(05L241)
作者简介:徐艳玲(1957-), 女, 辽宁绥中人, 主任医师、教授, 硕士生导
师, 研究方向:中西医结合治疗呼吸系统疾病。