含量方法学验证
（HPLC法）
一、检测波长与流动相条件的确定。
一般有国家标准的并不改变国家标准，可直接参照国家标准，可不做。
确实有需要的，检测波长一般用紫外扫描确定，流动相可以多种流动相比较确定，选取其中最合适的。
二、系统适应性
配制6份相同浓度的供试品溶液进行分析，主峰峰面积的相对标准差应不大于2.0%，主峰保留时间的相对标准差应不大于1.0%。另外，主峰的拖尾因子不得大于2.0，主峰与杂质峰必须达到基线分离，主峰的理论塔板数应符合质量标准的规定。
有特殊规定的，按规定办。
三、专属性
色谱条件与有关物质相同时，可不做。
若不相同，则需单独做。参照有关物质方法。
可接受的标准为：空白对照应无干扰，主成分与各有关物质应能完全分离，分离度不得小于2.0。以二极管阵列检测器进行纯度分析时，主峰的纯度因子应大于980。
四、检测限与定量限
色谱条件与有关物质相同时，可不做。
若不相同，则需单独做。
可接受标准为：主峰与噪音峰信号的强度比应不得小于3。主峰与噪音峰信号的强度比应不得小于10。另外，配制6份最低定量限浓度的溶液，所测6份溶液主峰的保留时间的相对标准差应不大于2.0%。
五．线性
取对照品，在80％至120％的浓度范围外配制6份浓度不同的供试液，分别测定其主峰的面积，计算相应的含量。以含量为横坐标（X），峰面积为纵坐标（Y），进行线性回归分析。
具体操作：取对照品，配制成一定浓度（大于对照浓度）贮备液，精密稀释，或分别精密称样，制备一系列被测物质浓度系列进行测定，至少制备 5 个浓度。
上述被测物质浓度系列，以对照溶液浓度为中间浓度，向两边梯度延伸。比如先配制成对照溶液浓度两倍的溶液，分别量取3、4、5、6、7ml置10ml量瓶中，即得到相对浓度为
60%、80%、100%、120%、140%（相对于自身对照浓度）的系列溶液。取该系列溶液进样，记录色谱图，计算回归方程。
可接受的标准为：回归线的相关系数（R）不得小于0.9990。
六、精密度
1、重复性
配制6份相同浓度的供试品溶液，由一个分析人员在尽可能相同的条件下进行测试，所得6份供试液含量的相对标准差应不大于2.0%。
具体操作：一般可取线性关系试验项下中间浓度溶液，连续进样，记录色谱图。
2、中间精密度
A、取样品，由不同人员，在不同时间，使用不同仪器，按照测定法测定同一样品的含量。计算检查结果的RSD。RSD不大于2.0%。
可以5名人员分别使用5台仪器，于不同工作日测定。仪器也可3台。
B、配制6份相同浓度的供试品溶液，分别由两个分析人员使用不同的仪器与试剂进行测试，所得12个含量数据的相对标准差应不大于2.0%。
3、重现性
指不同实验室之间不同分析人员测定结果的精密度。
当分析方法将被法定标准采用时，应进行重现性试验。
七、准确度
该指标主要是通过回收率来反映。验证时一般要求分别配制浓度为80％、100％和120％的供试品溶液各三份，分别测定其含量，将实测值与理论值比较，计算回收率。
原料药一般采用加样回收率法。比如药物A，含量测定样品溶液浓度为0.5mg/ml。那么，可以取已知含量的样品25mg，置100ml量瓶中，共九份，分别加入对照品20mg（80%）、25mg（100%）、30mg（120%），然后稀释至刻度，即得测试溶液。分别进样，记录色谱图。另取对照品配制成0.5mg/ml溶液，进样，记录色谱图。外标法计算，以测得量和加入量，计算回收率。
可接受的标准为：各浓度下的平均回收率均应在98.0%-102.0%之间，9个回收率数据的相对标准差（RSD）应不大于2.0%。
八．耐用性
1、溶液稳定性
取供试品溶液，规定条件下放置8小时，分别于0、2、4、6、8小时进样，记录色谱图，
观察主峰峰面积变化并计算RSD。确定溶液是否稳定，不稳定的应注明立刻进样。
可接受标准：主峰峰面积RSD不大于2.0%。
2、其他
分别考察流动相离子强度变化、流动相pH值变化、柱温变化、流速相对值变化时，仪器色谱行为的变化，每个条件下各测试两次。
含量方法学验证
（HPLC法）
一、检测波长与流动相条件的确定。
一般有国家标准的并不改变国家标准，可直接参照国家标准，可不做。
确实有需要的，检测波长一般用紫外扫描确定，流动相可以多种流动相比较确定，选取其中最合适的。
二、系统适应性
配制6份相同浓度的供试品溶液进行分析，主峰峰面积的相对标准差应不大于2.0%，主峰保留时间的相对标准差应不大于1.0%。另外，主峰的拖尾因子不得大于2.0，主峰与杂质峰必须达到基线分离，主峰的理论塔板数应符合质量标准的规定。
有特殊规定的，按规定办。
三、专属性
色谱条件与有关物质相同时，可不做。
若不相同，则需单独做。参照有关物质方法。
可接受的标准为：空白对照应无干扰，主成分与各有关物质应能完全分离，分离度不得小于2.0。以二极管阵列检测器进行纯度分析时，主峰的纯度因子应大于980。
四、检测限与定量限
色谱条件与有关物质相同时，可不做。
若不相同，则需单独做。
可接受标准为：主峰与噪音峰信号的强度比应不得小于3。主峰与噪音峰信号的强度比应不得小于10。另外，配制6份最低定量限浓度的溶液，所测6份溶液主峰的保留时间的相对标准差应不大于2.0%。
五．线性
取对照品，在80％至120％的浓度范围外配制6份浓度不同的供试液，分别测定其主峰的面积，计算相应的含量。以含量为横坐标（X），峰面积为纵坐标（Y），进行线性回归分析。
具体操作：取对照品，配制成一定浓度（大于对照浓度）贮备液，精密稀释，或分别精密称样，制备一系列被测物质浓度系列进行测定，至少制备 5 个浓度。
上述被测物质浓度系列，以对照溶液浓度为中间浓度，向两边梯度延伸。比如先配制成对照溶液浓度两倍的溶液，分别量取3、4、5、6、7ml置10ml量瓶中，即得到相对浓度为
60%、80%、100%、120%、140%（相对于自身对照浓度）的系列溶液。取该系列溶液进样，记录色谱图，计算回归方程。
可接受的标准为：回归线的相关系数（R）不得小于0.9990。
六、精密度
1、重复性
配制6份相同浓度的供试品溶液，由一个分析人员在尽可能相同的条件下进行测试，所得6份供试液含量的相对标准差应不大于2.0%。
具体操作：一般可取线性关系试验项下中间浓度溶液，连续进样，记录色谱图。
2、中间精密度
A、取样品，由不同人员，在不同时间，使用不同仪器，按照测定法测定同一样品的含量。计算检查结果的RSD。RSD不大于2.0%。
可以5名人员分别使用5台仪器，于不同工作日测定。仪器也可3台。
B、配制6份相同浓度的供试品溶液，分别由两个分析人员使用不同的仪器与试剂进行测试，所得12个含量数据的相对标准差应不大于2.0%。
3、重现性
指不同实验室之间不同分析人员测定结果的精密度。
当分析方法将被法定标准采用时，应进行重现性试验。
七、准确度
该指标主要是通过回收率来反映。验证时一般要求分别配制浓度为80％、100％和120％的供试品溶液各三份，分别测定其含量，将实测值与理论值比较，计算回收率。
原料药一般采用加样回收率法。比如药物A，含量测定样品溶液浓度为0.5mg/ml。那么，可以取已知含量的样品25mg，置100ml量瓶中，共九份，分别加入对照品20mg（80%）、25mg（100%）、30mg（120%），然后稀释至刻度，即得测试溶液。分别进样，记录色谱图。另取对照品配制成0.5mg/ml溶液，进样，记录色谱图。外标法计算，以测得量和加入量，计算回收率。
可接受的标准为：各浓度下的平均回收率均应在98.0%-102.0%之间，9个回收率数据的相对标准差（RSD）应不大于2.0%。
八．耐用性
1、溶液稳定性
取供试品溶液，规定条件下放置8小时，分别于0、2、4、6、8小时进样，记录色谱图，
观察主峰峰面积变化并计算RSD。确定溶液是否稳定，不稳定的应注明立刻进样。
可接受标准：主峰峰面积RSD不大于2.0%。
2、其他
分别考察流动相离子强度变化、流动相pH值变化、柱温变化、流速相对值变化时，仪器色谱行为的变化，每个条件下各测试两次。