实验四、DNA 和RNA 的的浓度检测
【实验目的】
熟练掌握分光光度法检测DNA 纯度和浓度的方法。
【实验原理】
DNA 或RNA 链上碱基的苯环结构在紫光区具有较强吸收，其吸收峰在260nm 处。波长为260nm 时，DNA 或RNA 的光密度OD 260不仅与总含量有关，也随构型而有差异。 对标准样品来说，浓度为1μg / ml时，DNA 钠盐的OD 260＝0.02，当OD 260＝1时，dsDNA 浓度约为50μg / ml；ssDNA 浓度约为37μg / ml；RNA 浓度约为40μg / ml；寡核苷酸浓度约为30μg / ml（youyu 底物不同有差异）
当DNA 样品中含有蛋白质、酚或其他小分子污染物时，会影响DNA 吸光度的准确测定。一般情况下同时检测同一样品的OD 260、OD 280和OD 230，计算其比值来衡量样品的纯度。经验值：纯DNA ：OD 260/OD2800≈1.8(＞1.9, ，表明有RNA 污染；＜1.6，表明有蛋白质、酚等污染）纯RNA ：1.7 ＜OD 260/OD280＜2.0（＜1.7时表明有蛋白质或酚污染；＞2.0时表明可能有异硫氰酸残存）。OD 260/OD280的比值用于估计核酸的纯度,OD 260/OD230估计去盐的程度。对于RNA 纯制品，其OD 260/OD280≈2.0，OD 260/OD230应大于2。OD 260/OD280
【实验材料】
DNA 和RNA
【试剂和器材】
试剂：灭菌重蒸水；TE 缓冲液。
器材：移液器；石英比色皿；紫外分光光度计等。
【实验步骤】
1、紫外分光光度计开机预热10min 。
2、用重蒸水洗涤比色皿，吸水纸吸干，加入TE 缓冲液后，放入样品室的S 池架上，关上盖板。
3、设定狭缝后校零。
4、将标准样品和待测样品适当稀释（DNA5μl或RNA4μl用TE 缓冲液稀释至1000μl）后，记录编号和稀释度。
5、把装有标准样品或待测样品的比色皿放进样品室的S 架上，关闭盖板。
6、设定紫外光波长，分别测定230nm 、260nm 、280nm 波长时的OD 值。
7、计算待测样品的浓度与纯度。DNA 样品的浓度（μg / μl）:OD260×稀释倍数×50/1000 RNA 样品的浓度（μg / μl）：OD 260×稀释倍数×40/1000
【实验结果】
实验四、DNA 和RNA 的的浓度检测
【实验目的】
熟练掌握分光光度法检测DNA 纯度和浓度的方法。
【实验原理】
DNA 或RNA 链上碱基的苯环结构在紫光区具有较强吸收，其吸收峰在260nm 处。波长为260nm 时，DNA 或RNA 的光密度OD 260不仅与总含量有关，也随构型而有差异。 对标准样品来说，浓度为1μg / ml时，DNA 钠盐的OD 260＝0.02，当OD 260＝1时，dsDNA 浓度约为50μg / ml；ssDNA 浓度约为37μg / ml；RNA 浓度约为40μg / ml；寡核苷酸浓度约为30μg / ml（youyu 底物不同有差异）
当DNA 样品中含有蛋白质、酚或其他小分子污染物时，会影响DNA 吸光度的准确测定。一般情况下同时检测同一样品的OD 260、OD 280和OD 230，计算其比值来衡量样品的纯度。经验值：纯DNA ：OD 260/OD2800≈1.8(＞1.9, ，表明有RNA 污染；＜1.6，表明有蛋白质、酚等污染）纯RNA ：1.7 ＜OD 260/OD280＜2.0（＜1.7时表明有蛋白质或酚污染；＞2.0时表明可能有异硫氰酸残存）。OD 260/OD280的比值用于估计核酸的纯度,OD 260/OD230估计去盐的程度。对于RNA 纯制品，其OD 260/OD280≈2.0，OD 260/OD230应大于2。OD 260/OD280
【实验材料】
DNA 和RNA
【试剂和器材】
试剂：灭菌重蒸水；TE 缓冲液。
器材：移液器；石英比色皿；紫外分光光度计等。
【实验步骤】
1、紫外分光光度计开机预热10min 。
2、用重蒸水洗涤比色皿，吸水纸吸干，加入TE 缓冲液后，放入样品室的S 池架上，关上盖板。
3、设定狭缝后校零。
4、将标准样品和待测样品适当稀释（DNA5μl或RNA4μl用TE 缓冲液稀释至1000μl）后，记录编号和稀释度。
5、把装有标准样品或待测样品的比色皿放进样品室的S 架上，关闭盖板。
6、设定紫外光波长，分别测定230nm 、260nm 、280nm 波长时的OD 值。
7、计算待测样品的浓度与纯度。DNA 样品的浓度（μg / μl）:OD260×稀释倍数×50/1000 RNA 样品的浓度（μg / μl）：OD 260×稀释倍数×40/1000
【实验结果】