测序原理及流程图
测序原理
目前关于测序方法主要采用双脱氧链终止法，双脱氧链终止法又称为Sanger 法，其原理是DNA 模板在DNA 聚合酶、引物、四种脱氧核苷酸三磷酸(dNTP)存在下进行复制时，在四管反应体系中分别按一定的比例引入四种双脱氧核苷三磷酸(ddNTP)。由于ddNTP 缺乏延伸所需要的3’-OH 基团，当ddNTP 掺入链的末端时，该链就会停止延伸。如此每管反应体系中就产生了一系列长度不等的以ddNTP 为3’端的DNA 片段。反应终止后，分4个泳道进行凝胶电泳以分离长短不一的DNA 片段，相邻的片段长度相差一个碱基。经放射自显影后，根据片段3’端的双脱氧核苷，便可获得合成片段的碱基排列顺序。 我们使用的是ABI3730测序仪以及配套的BigDye Terminator Kit，original v3.1我公司目前采用Applied Biosystems 3730XL测序仪是高质量的长片段读取和序列分析的测序平台，应用灵活而广泛。3730XL 可同时分析96个样品，该仪器采用4色荧光同时检测，可不间断24小时运行，自动灌胶，上样，电泳分离，检测及数据分析。
测序流程图
测序原理及流程图
测序原理
目前关于测序方法主要采用双脱氧链终止法，双脱氧链终止法又称为Sanger 法，其原理是DNA 模板在DNA 聚合酶、引物、四种脱氧核苷酸三磷酸(dNTP)存在下进行复制时，在四管反应体系中分别按一定的比例引入四种双脱氧核苷三磷酸(ddNTP)。由于ddNTP 缺乏延伸所需要的3’-OH 基团，当ddNTP 掺入链的末端时，该链就会停止延伸。如此每管反应体系中就产生了一系列长度不等的以ddNTP 为3’端的DNA 片段。反应终止后，分4个泳道进行凝胶电泳以分离长短不一的DNA 片段，相邻的片段长度相差一个碱基。经放射自显影后，根据片段3’端的双脱氧核苷，便可获得合成片段的碱基排列顺序。 我们使用的是ABI3730测序仪以及配套的BigDye Terminator Kit，original v3.1我公司目前采用Applied Biosystems 3730XL测序仪是高质量的长片段读取和序列分析的测序平台，应用灵活而广泛。3730XL 可同时分析96个样品，该仪器采用4色荧光同时检测，可不间断24小时运行，自动灌胶，上样，电泳分离，检测及数据分析。
测序流程图