＿ 二 ＿ ｜ ｜科 论 坛 学Ｃ ｉａｓ ｉｎｅａ ｄＴｃｎ ｌｇ ｅｉｗ ｈ ｎ ｃ ｅｃ ｎ ｅｈｏ ｏｙＲ ｖｅ 。曩 Ｉ 粪大肠菌群的测定 多管发酵法 李嘉鹏 刘宣彩 周 波 刘育 【 要ｊ 摘 对地表水和废 水中粪大肠菌群 目前通用的多管发酵检测方法进行优化。本文结合作 者多年的工作 实践对粪 大肠菌群的测定方法 （ 多 管发酵法 ）进行分析探 讨。 【 关键词Ｊ 粪大肠菌群 多管发酵法 测定 中图分类号：Ｘ８ ２ ３ 文献标识码：Ａ 文章编号：１ ０ － １Ｘ （０ ２ １２ ３ ０ ０ ９ ９４ ２ １ ）１— ０ — １ 目前 ，ＷＨ 、ＩＯ组织 以及世界上绝大多数国家 ，都以粪大肠菌 Ｏ Ｓ 群 （ ｅａＣ ｌｏｍ） Ｆ ｃｌ ｏｉｒ 作为水 质粪便污染指示菌 ，来判断水质卫生状况 。 ｆ 中国颁布的 《 地表水环境质量标准 》 （ Ｂ ８ ８ ２０ ） 。 Ｇ ３ ３ － ０ ２ 中 也规定 了 粪大肠菌群监测指标 。国内外报道的粪大肠菌群的检测方 法，其 中多 管发酵法是通用 的方法 ，其特点是不受浊度的影响 ，可以检验浊度较 大 的水样 ，价格便宜 ，但操作繁杂、干扰因素多 ， 且检测周期长 。而 酶底物法、聚合酶链式技术、荧光原位杂交技术以及 自 动化检测方法 等先进的方法 ，操作简单 ，检测设备及试剂费用高昂 ，鉴于 中国现阶 段的国情 ，还无法再短时间内应用普及 。近几年 ，随着生活水平的提 高 ，人们 的健康理念随之提升 ，同时 ，国家为了加大水源地和 自然环 境的保护 ， 监测力度越来越大 ，监测手段也 越来越高 。下文结合作者 多年的工作实践对粪大肠菌群 的测定方法 （ 多管发酵法 ） 进行分析探 讨。 一３ 监测点位 ： 细菌学 监测水样采集 和保存 的物质条件和手段不足 ， 如采样船、采样 器 、 采样点标致等 ，导致 监测点位置 、 次、深度定 层位 过 泛 ，随意 性 大 ，影 、地 表水 中粪大肠 菌群分布特点 表１ 列举某实验监测结果 ，表 ２ 列举某城市市饮用水源地实验监 测 结果 。 某粪大肠菌群 ＭＰ Ｎ监测实验结果表 （ 位 ：个 ／Ｌ） 单 取样深度 （ ｍ） 左岸 ５米 ｃ 左岸 ２ ０米 中泓 右岸 ２ ０米 右岸 ５米 ０ ５ 一一 ｌ 一Ｏ ５一 ２ ５ ０ ≥２ ０ ｌ０ ０ ４ ｏＯ ６ ｏ ≥２ ０Ｏ ９ ０ ４０ ２ ０ ５０ ４０ ３０ ５０ ｌ００ ６ ０ ≥ ２ ０ ０ ４ ０ ９ ０ １０ ０ ２０ ６ ０ ５ ０ ５０ ４０ ４ ０ ≥２Ｏ ０ ４０ ≥２０ ０ ４０ ≥２ ０ ４０ ０表 ｌ 响监测数据科学性 、 比性 、连续性。 可 ４水样采集 与保存 ：采样人员大多缺少细菌学监测知识 （ 非细菌 学监测人员 ），细菌学监测水样和化学监测水样混采，采样瓶开盖过 早、 所取水样在空气中暴露时间过长 ， 违反无菌操作 规程 ，污染水样 ； 水样采集量过满 ， 不利于水样检测前振荡摇匀 ；水样常温运输存放 时 间过长 ， 未采取低温保存措施 ，不符合技术 规范要求 ，影响监测数据 准确性 。 ５ 水样分析 ： 检测 前水样振荡力度 、 次数不够 ， 水样稀释不规范 ， 向水样打气搅拌 ，导致分析样品粪大肠 菌分布不均匀 。影响监测结果 准确度 和精密度 ；发酵管内小倒管 （ 塞氏管 ） 汉 有空气泡 ，影响发酵 结果 的观察与判断 ； 接种环制作 及接种操作不规范 ， 接种环灼烧 面积 、 强度、时间 ，伸人液面的深度、停留时间控 制不佳 ，环 内形不成 水膜 ， 导致接种无效或交叉污染 ，影响监测结果 的准确性 ；复发酵接样时 试 管 口、管塞、接种环远 离酒精 灯焰附近无菌 区域 ，影响监测结果 的准 确性 。 ６环境卫生安全防护 ：监测人员 环境卫生安全防护意识淡薄 ，防 护措施不力 ， 大多数仅与一般化学监测采取 同样防护措施 ， 实验器具 、 废液 （ 实验阳性 ） 直接 倒弃清洗或长 时间暴露于环境中 ， 及监测人 危 员身体健康。 ｌ０ ０ ５ ｏ ４ｏ４０ ９ ３ ３０２０ ７ ９０ ２ 三 、强 化 质 量控 制 、 环 境 卫生 安全 及 防 护 对 策 建 议 ．根据细菌学监测的特 殊性 、粪大肠菌群特性分布及监测过程存在 问题 、影响分析 ，提出强化质量控制 、环境卫生防护对策措施 ： ｌ 、坚持持 证上岗制度 ，规定合格的实验室操作人员 、仪器设备 、 实验用品、数据处理和质量控 制的最低标准 ，重点考核监 测人员监测 全过程无菌操作技术和实验室无 菌室或无菌操作台是否合格达标。 ２ 全省或流域网络站各实验室应 采取统一采样步骤和使用规范化 、 的分析方法 ，并加强对 监测过程 重要环节 ，尤其是样品采集 和保存环 节 的质量控制 ，实行细 菌学监测 与化学监测采样瓶分开装运 ，水样分 开采集 ，坚持细菌学监测 样品优 先采集 的原则 。 ３ 省中心站或流域 网络牵 头站加强对各实验室和监测断面 、 、 点位 的调查研究 ，针对监测 全过程存 在各类 问题 ，组织开展监 测专业技术 培训 、交流和监测比对工 作，及 时给予必要技术支持和技术监督。 ４ 各级监测站加强监测点位的管理 ， 、 创造条件 ， 落实监测点位标 志、采样交通工具和仪器设备 ，确保水样采集点的位置、层 次、深度 符合技术要求 ，具有代表性 、科学性 、连续性。 ５ 强化监测人员环境卫 生安全 防护意识 ， 、 进入实验室要穿带 防护 服 和防护器具 ，避免人 体与实验废液 （阳性 ）直接接触 ，实验废液及 受 污染 的实验器皿、用具及时高温高压灭菌 、消毒后倒弃清洗，实验 室用紫外线消毒 ；传染 病疫情 发生地 区监测人员要采取与 “ 传染病 医 院医务人员”同等的防护措施 ，尽量使用一次性实验器皿、用具 ， 实 验 固体废弃物按照传染 病医院医疗固体废弃物处置方法处 置。 备注 ： 右岸上游 ｉ０ ５０米有多处人群生活活动点 （ Ｏ— ０ 洗衣 、 漱 、 洗 运输船装卸码头等 ） 表 ２ 某市饮用水地表水源地粪大肠 菌群 ＭＰ Ｎ监测实验结果表 （ 位 ：个 ／Ｌ） 单 取样深度（ ｍ） ｃ 取水 口护 网 取水 口护网栏外 （ 漂浮物 、 取水 口上游 栏内 水生植物 ） １０ ５ ｍ处 ｌ— ２ ５ ０ ５ —６ ０ １０ ２ ０ ５ －－ ０ ＊ ｌ— ２ ５ ０ ５ 一６ ｏ １０ ２ ０ －－ ０ ＊ ５ ｌ— ２ ５ ０ ５ —６ Ｏ ９ｏ ２０ ７０ ９ ｌＯ ｌ ５０ ４０ ｌｏ １０ ２ｌ ０ ５ Ｏ ４０ ２０ ２ ≥ ｌ０ ０ ６ ０ ２０ ２０ ｜ ≥２ ０ ０ ４Ｏ ７０ ９ ≥２ ｏ ４０ ２０ ８ｏ １０ ０ ６０ ｌ０ １０ ｌ ３ ０ ５０ ・ ９０ ４ ｌ ９０ ２０ ９０ ０ ｌ０ ２ ｏ ５ －－ ０ １Ｏ ７ ， ， 注： 水样取 自 进入 自来水净水 厂原水 ，取水层深度 １０～ ０ ｅ ５ ２０ｍ左 右。 表 ｌ 、表 ２ 列举实验监测结果表明 ； 粪大肠菌群在河流分布呈现 “ 中泓低 、两侧高，表层高 、深层低 ，受人群活动 、漂浮物、水生植 物影 响”的规律。取样点位偏离对监测结果影响显著。 二、监测过程中常见 问题及其 影响 结合细菌学监测分析 、质控工作实践和两 次参加省环境监测中心 站举办粪大肠菌群监测技术培训 、比对 监测研讨情况 ，目前我省地 表 水样粪大肠菌群监测过程存在下列常见 问题及其对监测结果影响。 ｌ监测人员 ：二、三级站监测人员大多数 非在校所学专业 ，上岗 持证率低 ，二级站 ６ ％、三级站仅 ３ ％左右 （ ０ ０ 这与项 目监测工作 开 展、参 与地表水质评价 时间不长有关 ）， 响监测数据的准确性、有 影 效性 。 ２采样瓶 ：材质、规格 、瓶 口包扎方式各式各样 ， 很多不符合方 法和规范所规定的要求 ，与化学监测水 样采样瓶混装 。不能满足无 菌 操作要求 ， 影响监测 数据 准确性 、可比性。 作者简介 ： ｌ 、李嘉鹏 （１７ 一），男 ，汉族 ，现供 职于广东省深圳市龙 岗区 ９７ 龙 岗环境监测站 。 ２ 、刘宣彩 （ ９４ ），男 。汉族 ，江西赣州市人 ，助理工程 师 ， １８ 一 学 士，现供职于深圳市龙岗区环境监测站 ， 研究方 向：环境工程 、环 境检测方 向。 ３ 、周波 （ ９３ ） ，汉族 ，湖南 岳阳人 ， 理工程师 ，现供 职 １８一 男 助 单位深圳市龙岗 区环境监测站 ，研究方 向 ： 境。 环 ４ 、刘育 （１８ 一 ） ９ ４ ，男 ，汉族 ，广东省梅州市人，学士 ，现供职 于龙岗区环境监测站 ，研究方 向：环境监测。 科挂博置 Ｉ ２３ ０
＿ 二 ＿ ｜ ｜科 论 坛 学Ｃ ｉａｓ ｉｎｅａ ｄＴｃｎ ｌｇ ｅｉｗ ｈ ｎ ｃ ｅｃ ｎ ｅｈｏ ｏｙＲ ｖｅ 。曩 Ｉ 粪大肠菌群的测定 多管发酵法 李嘉鹏 刘宣彩 周 波 刘育 【 要ｊ 摘 对地表水和废 水中粪大肠菌群 目前通用的多管发酵检测方法进行优化。本文结合作 者多年的工作 实践对粪 大肠菌群的测定方法 （ 多 管发酵法 ）进行分析探 讨。 【 关键词Ｊ 粪大肠菌群 多管发酵法 测定 中图分类号：Ｘ８ ２ ３ 文献标识码：Ａ 文章编号：１ ０ － １Ｘ （０ ２ １２ ３ ０ ０ ９ ９４ ２ １ ）１— ０ — １ 目前 ，ＷＨ 、ＩＯ组织 以及世界上绝大多数国家 ，都以粪大肠菌 Ｏ Ｓ 群 （ ｅａＣ ｌｏｍ） Ｆ ｃｌ ｏｉｒ 作为水 质粪便污染指示菌 ，来判断水质卫生状况 。 ｆ 中国颁布的 《 地表水环境质量标准 》 （ Ｂ ８ ８ ２０ ） 。 Ｇ ３ ３ － ０ ２ 中 也规定 了 粪大肠菌群监测指标 。国内外报道的粪大肠菌群的检测方 法，其 中多 管发酵法是通用 的方法 ，其特点是不受浊度的影响 ，可以检验浊度较 大 的水样 ，价格便宜 ，但操作繁杂、干扰因素多 ， 且检测周期长 。而 酶底物法、聚合酶链式技术、荧光原位杂交技术以及 自 动化检测方法 等先进的方法 ，操作简单 ，检测设备及试剂费用高昂 ，鉴于 中国现阶 段的国情 ，还无法再短时间内应用普及 。近几年 ，随着生活水平的提 高 ，人们 的健康理念随之提升 ，同时 ，国家为了加大水源地和 自然环 境的保护 ， 监测力度越来越大 ，监测手段也 越来越高 。下文结合作者 多年的工作实践对粪大肠菌群 的测定方法 （ 多管发酵法 ） 进行分析探 讨。 一３ 监测点位 ： 细菌学 监测水样采集 和保存 的物质条件和手段不足 ， 如采样船、采样 器 、 采样点标致等 ，导致 监测点位置 、 次、深度定 层位 过 泛 ，随意 性 大 ，影 、地 表水 中粪大肠 菌群分布特点 表１ 列举某实验监测结果 ，表 ２ 列举某城市市饮用水源地实验监 测 结果 。 某粪大肠菌群 ＭＰ Ｎ监测实验结果表 （ 位 ：个 ／Ｌ） 单 取样深度 （ ｍ） 左岸 ５米 ｃ 左岸 ２ ０米 中泓 右岸 ２ ０米 右岸 ５米 ０ ５ 一一 ｌ 一Ｏ ５一 ２ ５ ０ ≥２ ０ ｌ０ ０ ４ ｏＯ ６ ｏ ≥２ ０Ｏ ９ ０ ４０ ２ ０ ５０ ４０ ３０ ５０ ｌ００ ６ ０ ≥ ２ ０ ０ ４ ０ ９ ０ １０ ０ ２０ ６ ０ ５ ０ ５０ ４０ ４ ０ ≥２Ｏ ０ ４０ ≥２０ ０ ４０ ≥２ ０ ４０ ０表 ｌ 响监测数据科学性 、 比性 、连续性。 可 ４水样采集 与保存 ：采样人员大多缺少细菌学监测知识 （ 非细菌 学监测人员 ），细菌学监测水样和化学监测水样混采，采样瓶开盖过 早、 所取水样在空气中暴露时间过长 ， 违反无菌操作 规程 ，污染水样 ； 水样采集量过满 ， 不利于水样检测前振荡摇匀 ；水样常温运输存放 时 间过长 ， 未采取低温保存措施 ，不符合技术 规范要求 ，影响监测数据 准确性 。 ５ 水样分析 ： 检测 前水样振荡力度 、 次数不够 ， 水样稀释不规范 ， 向水样打气搅拌 ，导致分析样品粪大肠 菌分布不均匀 。影响监测结果 准确度 和精密度 ；发酵管内小倒管 （ 塞氏管 ） 汉 有空气泡 ，影响发酵 结果 的观察与判断 ； 接种环制作 及接种操作不规范 ， 接种环灼烧 面积 、 强度、时间 ，伸人液面的深度、停留时间控 制不佳 ，环 内形不成 水膜 ， 导致接种无效或交叉污染 ，影响监测结果 的准确性 ；复发酵接样时 试 管 口、管塞、接种环远 离酒精 灯焰附近无菌 区域 ，影响监测结果 的准 确性 。 ６环境卫生安全防护 ：监测人员 环境卫生安全防护意识淡薄 ，防 护措施不力 ， 大多数仅与一般化学监测采取 同样防护措施 ， 实验器具 、 废液 （ 实验阳性 ） 直接 倒弃清洗或长 时间暴露于环境中 ， 及监测人 危 员身体健康。 ｌ０ ０ ５ ｏ ４ｏ４０ ９ ３ ３０２０ ７ ９０ ２ 三 、强 化 质 量控 制 、 环 境 卫生 安全 及 防 护 对 策 建 议 ．根据细菌学监测的特 殊性 、粪大肠菌群特性分布及监测过程存在 问题 、影响分析 ，提出强化质量控制 、环境卫生防护对策措施 ： ｌ 、坚持持 证上岗制度 ，规定合格的实验室操作人员 、仪器设备 、 实验用品、数据处理和质量控 制的最低标准 ，重点考核监 测人员监测 全过程无菌操作技术和实验室无 菌室或无菌操作台是否合格达标。 ２ 全省或流域网络站各实验室应 采取统一采样步骤和使用规范化 、 的分析方法 ，并加强对 监测过程 重要环节 ，尤其是样品采集 和保存环 节 的质量控制 ，实行细 菌学监测 与化学监测采样瓶分开装运 ，水样分 开采集 ，坚持细菌学监测 样品优 先采集 的原则 。 ３ 省中心站或流域 网络牵 头站加强对各实验室和监测断面 、 、 点位 的调查研究 ，针对监测 全过程存 在各类 问题 ，组织开展监 测专业技术 培训 、交流和监测比对工 作，及 时给予必要技术支持和技术监督。 ４ 各级监测站加强监测点位的管理 ， 、 创造条件 ， 落实监测点位标 志、采样交通工具和仪器设备 ，确保水样采集点的位置、层 次、深度 符合技术要求 ，具有代表性 、科学性 、连续性。 ５ 强化监测人员环境卫 生安全 防护意识 ， 、 进入实验室要穿带 防护 服 和防护器具 ，避免人 体与实验废液 （阳性 ）直接接触 ，实验废液及 受 污染 的实验器皿、用具及时高温高压灭菌 、消毒后倒弃清洗，实验 室用紫外线消毒 ；传染 病疫情 发生地 区监测人员要采取与 “ 传染病 医 院医务人员”同等的防护措施 ，尽量使用一次性实验器皿、用具 ， 实 验 固体废弃物按照传染 病医院医疗固体废弃物处置方法处 置。 备注 ： 右岸上游 ｉ０ ５０米有多处人群生活活动点 （ Ｏ— ０ 洗衣 、 漱 、 洗 运输船装卸码头等 ） 表 ２ 某市饮用水地表水源地粪大肠 菌群 ＭＰ Ｎ监测实验结果表 （ 位 ：个 ／Ｌ） 单 取样深度（ ｍ） ｃ 取水 口护 网 取水 口护网栏外 （ 漂浮物 、 取水 口上游 栏内 水生植物 ） １０ ５ ｍ处 ｌ— ２ ５ ０ ５ —６ ０ １０ ２ ０ ５ －－ ０ ＊ ｌ— ２ ５ ０ ５ 一６ ｏ １０ ２ ０ －－ ０ ＊ ５ ｌ— ２ ５ ０ ５ —６ Ｏ ９ｏ ２０ ７０ ９ ｌＯ ｌ ５０ ４０ ｌｏ １０ ２ｌ ０ ５ Ｏ ４０ ２０ ２ ≥ ｌ０ ０ ６ ０ ２０ ２０ ｜ ≥２ ０ ０ ４Ｏ ７０ ９ ≥２ ｏ ４０ ２０ ８ｏ １０ ０ ６０ ｌ０ １０ ｌ ３ ０ ５０ ・ ９０ ４ ｌ ９０ ２０ ９０ ０ ｌ０ ２ ｏ ５ －－ ０ １Ｏ ７ ， ， 注： 水样取 自 进入 自来水净水 厂原水 ，取水层深度 １０～ ０ ｅ ５ ２０ｍ左 右。 表 ｌ 、表 ２ 列举实验监测结果表明 ； 粪大肠菌群在河流分布呈现 “ 中泓低 、两侧高，表层高 、深层低 ，受人群活动 、漂浮物、水生植 物影 响”的规律。取样点位偏离对监测结果影响显著。 二、监测过程中常见 问题及其 影响 结合细菌学监测分析 、质控工作实践和两 次参加省环境监测中心 站举办粪大肠菌群监测技术培训 、比对 监测研讨情况 ，目前我省地 表 水样粪大肠菌群监测过程存在下列常见 问题及其对监测结果影响。 ｌ监测人员 ：二、三级站监测人员大多数 非在校所学专业 ，上岗 持证率低 ，二级站 ６ ％、三级站仅 ３ ％左右 （ ０ ０ 这与项 目监测工作 开 展、参 与地表水质评价 时间不长有关 ）， 响监测数据的准确性、有 影 效性 。 ２采样瓶 ：材质、规格 、瓶 口包扎方式各式各样 ， 很多不符合方 法和规范所规定的要求 ，与化学监测水 样采样瓶混装 。不能满足无 菌 操作要求 ， 影响监测 数据 准确性 、可比性。 作者简介 ： ｌ 、李嘉鹏 （１７ 一），男 ，汉族 ，现供 职于广东省深圳市龙 岗区 ９７ 龙 岗环境监测站 。 ２ 、刘宣彩 （ ９４ ），男 。汉族 ，江西赣州市人 ，助理工程 师 ， １８ 一 学 士，现供职于深圳市龙岗区环境监测站 ， 研究方 向：环境工程 、环 境检测方 向。 ３ 、周波 （ ９３ ） ，汉族 ，湖南 岳阳人 ， 理工程师 ，现供 职 １８一 男 助 单位深圳市龙岗 区环境监测站 ，研究方 向 ： 境。 环 ４ 、刘育 （１８ 一 ） ９ ４ ，男 ，汉族 ，广东省梅州市人，学士 ，现供职 于龙岗区环境监测站 ，研究方 向：环境监测。 科挂博置 Ｉ ２３ ０