高效液相色谱法测定萘乙酸的含量
一、实验目的
1、学习高效液相色谱仪的操作。
2、了解高效液相色谱法测定萘乙酸的基本原理。
3、掌握高效液相色谱法进行定性及定量分析的基本方法。
二、实验原理
将已配制的浓度不同的萘乙酸标准溶液进入色谱系统。如流动相流速和泵的压力在整个实验过程中是恒定的，测定它们在色谱图上的保留时间tR和峰高A后，可直接用tR定性，用峰面积A作为定量测定的参数，采用工作曲线法（即外标法）测定未知浓度萘乙酸的含量。
三、仪器和试剂
1、Agilent 1100高效液相色谱仪。
2、色谱柱： Zorbax C8，5µm，250×4.6mm，20μL定样环。
3、流动相：H2O和CH3OH
4、萘乙酸标准溶液：精密称取萘乙酸标准品制成浓度(mg/L)分别为0.1、0.2、0.4、0.6、0.8、2、5、8、10、15、20 mg/L的对照品溶液，放入冰箱备用。
5、未知物萘乙酸
6、平头微量注射器。 四、实验步骤
1、开机
(1) 检查流动相、废液瓶和色谱柱；
(2) 打开打印机和计算机的电源；
(3) 自上而下打开个组件电源，Bootp Server里显示有信号时（有六行字符）；
(4) 打开工作站。
2、编辑方法
(1) 选择“Method”菜单，然后“EDIT METHOD”依屏幕提示进入以下设定：
(a） 泵对话框：设定泵的流速：1.0mL/min；H2O和CH3OH线性梯度洗脱：H2O 0 min：10%；1 min：20%；3 min：30%；4 min：30%；
(b）检测器对话框：设定波长337 nm。
(2) 单击“Method”菜单，选中“Save Method As…”，输入方法名，单击OK。
(3) 从“Run Control”菜单中选择“Sample Info…”选项，输入操作者名称，在“Data file”中选择“Manual”或“Prefix”。
(4) 单击Ok，等仪器Ready，基线平稳。
3、进样
(1）用样品洗注射器；
(2）先进标准样品，绘制标准曲线；
(3）再进未知物萘乙酸，测定含量。
4、分析结束，打印结果报告。
5、关闭检测器。
6、如果使用缓冲溶液，则先用90%水清洗色谱系统30分钟以上，再用甲醇清洗30分钟以上。
7、退出工作站，关闭“CAG Boot Up Server”。
8、 依次关闭主机，稳压电源，计算机和打印机。
五、结果处理
1、确定未知样萘乙酸的出峰时间。
2、绘制标准曲线。
3、求未知物萘乙酸的浓度。
六、思考题
1、用标准曲线法定量的优缺点是什么？
2、高效液相色谱柱一般可在室温进行分离，而气相色谱柱则必须恒温，为什么？高效液相色谱柱有时也实行恒温，这又为什么？
高效液相色谱法测定萘乙酸的含量
一、实验目的
1、学习高效液相色谱仪的操作。
2、了解高效液相色谱法测定萘乙酸的基本原理。
3、掌握高效液相色谱法进行定性及定量分析的基本方法。
二、实验原理
将已配制的浓度不同的萘乙酸标准溶液进入色谱系统。如流动相流速和泵的压力在整个实验过程中是恒定的，测定它们在色谱图上的保留时间tR和峰高A后，可直接用tR定性，用峰面积A作为定量测定的参数，采用工作曲线法（即外标法）测定未知浓度萘乙酸的含量。
三、仪器和试剂
1、Agilent 1100高效液相色谱仪。
2、色谱柱： Zorbax C8，5µm，250×4.6mm，20μL定样环。
3、流动相：H2O和CH3OH
4、萘乙酸标准溶液：精密称取萘乙酸标准品制成浓度(mg/L)分别为0.1、0.2、0.4、0.6、0.8、2、5、8、10、15、20 mg/L的对照品溶液，放入冰箱备用。
5、未知物萘乙酸
6、平头微量注射器。 四、实验步骤
1、开机
(1) 检查流动相、废液瓶和色谱柱；
(2) 打开打印机和计算机的电源；
(3) 自上而下打开个组件电源，Bootp Server里显示有信号时（有六行字符）；
(4) 打开工作站。
2、编辑方法
(1) 选择“Method”菜单，然后“EDIT METHOD”依屏幕提示进入以下设定：
(a） 泵对话框：设定泵的流速：1.0mL/min；H2O和CH3OH线性梯度洗脱：H2O 0 min：10%；1 min：20%；3 min：30%；4 min：30%；
(b）检测器对话框：设定波长337 nm。
(2) 单击“Method”菜单，选中“Save Method As…”，输入方法名，单击OK。
(3) 从“Run Control”菜单中选择“Sample Info…”选项，输入操作者名称，在“Data file”中选择“Manual”或“Prefix”。
(4) 单击Ok，等仪器Ready，基线平稳。
3、进样
(1）用样品洗注射器；
(2）先进标准样品，绘制标准曲线；
(3）再进未知物萘乙酸，测定含量。
4、分析结束，打印结果报告。
5、关闭检测器。
6、如果使用缓冲溶液，则先用90%水清洗色谱系统30分钟以上，再用甲醇清洗30分钟以上。
7、退出工作站，关闭“CAG Boot Up Server”。
8、 依次关闭主机，稳压电源，计算机和打印机。
五、结果处理
1、确定未知样萘乙酸的出峰时间。
2、绘制标准曲线。
3、求未知物萘乙酸的浓度。
六、思考题
1、用标准曲线法定量的优缺点是什么？
2、高效液相色谱柱一般可在室温进行分离，而气相色谱柱则必须恒温，为什么？高效液相色谱柱有时也实行恒温，这又为什么？