(1)取材:选取生长良好、有代表性的目标材料,洗净。用锋利的双面刀片截取材料,动作要迅速。材料的大小不超过0.5~lcm。
(2)固定:将选取的材料放人固定液中,固定液的体积大约是材料的20倍。固定剂有FAA 固定液。FAA 既是良好的固定剂,也是保存剂,材料可以在其中长久保存。而卡诺固定液和纳瓦兴固定液则不能长久保留材料,固定后,使用70%的乙醇尽快清洗2~3次,转人70%乙醇中保存。若材料含有空气,固定时需要抽气。
(3)脱水:固定好的材料经各级乙醇脱水至纯乙醇。各级乙醇的浓度为:30%、50%、70%、85%、95%和l0O%、l0O%,每次脱水40min ,材料可浸泡二甲苯保存在4℃冰箱
(4)透明:。由于石蜡溶于二甲苯而不溶于乙醇,因此透明的作用除了使材料变得透明外,另一方面是将材料中的乙醇除去。采用3/4乙醇+1/4二甲苯, 2/4乙醇+2/4二甲苯, 1/4乙醇+3/4二甲苯, 纯二甲苯两次,每次透明时间为40min ,透明完成后材料可浸泡纯乙醇保存在4℃冰箱。
(5)浸蜡:使石蜡慢慢溶于透明剂中,然后完全取代透明剂进人植物组织中。一般将透明好的材料换入新的二甲苯中,然后加入等体积的碎蜡,置于65℃左右的温箱中。随着碎蜡的溶解,不断加入碎蜡使石蜡饱和为止,时间大约l~2天。
(6)包埋:浸蜡后,在60℃的温箱中浸蜡后,在60℃的温箱中,换两次已溶解的纯蜡,每次约2h ,新石蜡然后将材料和石蜡一起倒应先融一次增加密度,凝固后再融才能使用,小纸盒中,用加热的镊子迅速把材料按需要的切面和一定的间隔排列整齐,再将小纸盒平放于冷水中,使其很快凝固。
(7)修块:将包埋好的材料切割成小块,每个小块包含一个材料。然后按需要的切面将蜡块切成梯形,切面在梯形的上部,注意上部矩形的对边平行。梯形的底部用烧热的蜡铲将其固定在木块上。
(8)切片:用手摇切片机将蜡块切成连续的蜡带。切片时,把切片刀夹在刀架上,再把木块夹在固定装置上,调整固着位置,使材料的切与面刀口平行。然后调整厚度,转动切片机切片。
(9)粘片:粘片是将切好的蜡片粘在载玻片上。在洁净的载玻片上,加少许粘贴剂并涂匀。然后加几滴3%福尔马林或蒸馏水,用解剖针或镊子轻轻将蜡片放在液面上。再将带有蜡片的载玻片放在温台上,温台的温度在45℃左右,蜡片受热后慢慢伸直。用滤纸吸去多余液体,表面烤干后,转入30℃温箱放置一昼夜。
(10)脱蜡、染色、脱水透明和封片的过程:二甲苯 →二甲苯(每次均10~15min.)→1/3纯酒精+2/3二甲苯(1~2min.)→1/2纯酒精+1/2二甲苯(1~2min.)→2/3纯酒精+1/3二甲苯(1~2min.)→纯酒精两次(每次1~2min.)→95%、85%、70%、50%梯度酒精复水(每级1~2min.或更长)→用 1%番红配50%酒精染色1小时→50%、70%、85%、95%梯度酒精脱水(每级1~2min.或更长)→用0.1%固绿配95%酒精复染2~5秒 →95%酒精脱水1~2分钟→纯酒精两次(每次1~2min.)→2/3纯酒精+1/3二甲苯透明(1~2min.)→1/2纯酒精+1/2二甲苯透明(1~2min.)→1/3纯酒精+2/3二甲苯透明(1~2min.)→二甲苯 →二甲苯(每次均10~15min.)→加拿大树胶封片→贴标签镜检及保存。
一些试剂的配制:
番红水溶液(1%),2h 。
番红染色液的配制:
成分 用量 配制方法
番红 1g 将番红溶于蒸馏水中,使其完全溶解,过滤。
蒸馏水 100mL
固绿染色液的配制:
成分 用量 配制方法
固绿 0.5g 将固绿溶于乙醇中,使其完全溶解,过滤。
95%乙醇 100mL
FAA 固定液的配制:
70%的乙醇90mL ,冰醋酸5 mL,福尔马林(38%甲醛)5 mL。
粘片剂:甲液:明胶1g ,甘油15 mL,苯酚(固体)2g; 乙液:甲醛4 mL,蒸馏水100 mL。或者(可用蛋青和甘油各50ml ,加1g 水杨酸混合而成)蛋青是什么东西
还缺的试剂有:
番红、固绿、甘油、中性树胶、修蜡块的小刀、苯酚(固体),明胶、戴橡胶塞的瓶子50mL 和30mL 的15个,包埋用的模具盒子、熔蜡用的容器。
在盛有材料及二甲苯的烧杯中加入与二甲苯等量的石蜡,然后加盖放在 45 ℃恒温箱中,经 1~2 d 石蜡不再继续熔化为止,打开杯盖,并将恒温箱调到 60 ℃,让二甲苯慢慢蒸发,约 24 h 后,用镊子将材料拨入盛有融熔石蜡的烧杯中,每隔 2~5 h 换 1 次纯蜡,共换 2 次,使留在组织中的透明剂完全排除后包埋。
(1)取材:选取生长良好、有代表性的目标材料,洗净。用锋利的双面刀片截取材料,动作要迅速。材料的大小不超过0.5~lcm。
(2)固定:将选取的材料放人固定液中,固定液的体积大约是材料的20倍。固定剂有FAA 固定液。FAA 既是良好的固定剂,也是保存剂,材料可以在其中长久保存。而卡诺固定液和纳瓦兴固定液则不能长久保留材料,固定后,使用70%的乙醇尽快清洗2~3次,转人70%乙醇中保存。若材料含有空气,固定时需要抽气。
(3)脱水:固定好的材料经各级乙醇脱水至纯乙醇。各级乙醇的浓度为:30%、50%、70%、85%、95%和l0O%、l0O%,每次脱水40min ,材料可浸泡二甲苯保存在4℃冰箱
(4)透明:。由于石蜡溶于二甲苯而不溶于乙醇,因此透明的作用除了使材料变得透明外,另一方面是将材料中的乙醇除去。采用3/4乙醇+1/4二甲苯, 2/4乙醇+2/4二甲苯, 1/4乙醇+3/4二甲苯, 纯二甲苯两次,每次透明时间为40min ,透明完成后材料可浸泡纯乙醇保存在4℃冰箱。
(5)浸蜡:使石蜡慢慢溶于透明剂中,然后完全取代透明剂进人植物组织中。一般将透明好的材料换入新的二甲苯中,然后加入等体积的碎蜡,置于65℃左右的温箱中。随着碎蜡的溶解,不断加入碎蜡使石蜡饱和为止,时间大约l~2天。
(6)包埋:浸蜡后,在60℃的温箱中浸蜡后,在60℃的温箱中,换两次已溶解的纯蜡,每次约2h ,新石蜡然后将材料和石蜡一起倒应先融一次增加密度,凝固后再融才能使用,小纸盒中,用加热的镊子迅速把材料按需要的切面和一定的间隔排列整齐,再将小纸盒平放于冷水中,使其很快凝固。
(7)修块:将包埋好的材料切割成小块,每个小块包含一个材料。然后按需要的切面将蜡块切成梯形,切面在梯形的上部,注意上部矩形的对边平行。梯形的底部用烧热的蜡铲将其固定在木块上。
(8)切片:用手摇切片机将蜡块切成连续的蜡带。切片时,把切片刀夹在刀架上,再把木块夹在固定装置上,调整固着位置,使材料的切与面刀口平行。然后调整厚度,转动切片机切片。
(9)粘片:粘片是将切好的蜡片粘在载玻片上。在洁净的载玻片上,加少许粘贴剂并涂匀。然后加几滴3%福尔马林或蒸馏水,用解剖针或镊子轻轻将蜡片放在液面上。再将带有蜡片的载玻片放在温台上,温台的温度在45℃左右,蜡片受热后慢慢伸直。用滤纸吸去多余液体,表面烤干后,转入30℃温箱放置一昼夜。
(10)脱蜡、染色、脱水透明和封片的过程:二甲苯 →二甲苯(每次均10~15min.)→1/3纯酒精+2/3二甲苯(1~2min.)→1/2纯酒精+1/2二甲苯(1~2min.)→2/3纯酒精+1/3二甲苯(1~2min.)→纯酒精两次(每次1~2min.)→95%、85%、70%、50%梯度酒精复水(每级1~2min.或更长)→用 1%番红配50%酒精染色1小时→50%、70%、85%、95%梯度酒精脱水(每级1~2min.或更长)→用0.1%固绿配95%酒精复染2~5秒 →95%酒精脱水1~2分钟→纯酒精两次(每次1~2min.)→2/3纯酒精+1/3二甲苯透明(1~2min.)→1/2纯酒精+1/2二甲苯透明(1~2min.)→1/3纯酒精+2/3二甲苯透明(1~2min.)→二甲苯 →二甲苯(每次均10~15min.)→加拿大树胶封片→贴标签镜检及保存。
一些试剂的配制:
番红水溶液(1%),2h 。
番红染色液的配制:
成分 用量 配制方法
番红 1g 将番红溶于蒸馏水中,使其完全溶解,过滤。
蒸馏水 100mL
固绿染色液的配制:
成分 用量 配制方法
固绿 0.5g 将固绿溶于乙醇中,使其完全溶解,过滤。
95%乙醇 100mL
FAA 固定液的配制:
70%的乙醇90mL ,冰醋酸5 mL,福尔马林(38%甲醛)5 mL。
粘片剂:甲液:明胶1g ,甘油15 mL,苯酚(固体)2g; 乙液:甲醛4 mL,蒸馏水100 mL。或者(可用蛋青和甘油各50ml ,加1g 水杨酸混合而成)蛋青是什么东西
还缺的试剂有:
番红、固绿、甘油、中性树胶、修蜡块的小刀、苯酚(固体),明胶、戴橡胶塞的瓶子50mL 和30mL 的15个,包埋用的模具盒子、熔蜡用的容器。
在盛有材料及二甲苯的烧杯中加入与二甲苯等量的石蜡,然后加盖放在 45 ℃恒温箱中,经 1~2 d 石蜡不再继续熔化为止,打开杯盖,并将恒温箱调到 60 ℃,让二甲苯慢慢蒸发,约 24 h 后,用镊子将材料拨入盛有融熔石蜡的烧杯中,每隔 2~5 h 换 1 次纯蜡,共换 2 次,使留在组织中的透明剂完全排除后包埋。