南京农业大学学报 2005,28(4):140～143
JournalofNanjingAgriculturalUniversity
植物组织中有机酸的提取方法比较
董园园,董彩霞,卢颖林,缪辰,沈其荣
3
(南京农业大学资源与环境科学学院,江苏南京210095)
摘要:以番茄果实和不结球白菜叶片为试验材料,用蒸馏水(水提)、80%乙醇旋转蒸发浓缩(醇提)、蒸馏水冷冻干燥浓缩(水提冻干)分别提取有机酸,采用高效液相色谱法测定。结果表明:3种提取方法下番茄果实中富马酸、丁二酸含量无显著性差异,草酸、酒石酸、苹果酸、草酰乙酸含量均以水提最高,而丙酮酸和柠檬酸以醇提含量最高;不同提取方法对不结球白菜叶片中草酸、酒石酸、富马酸含量无影响,其他几种有机酸(除草酰乙酸外)干含量高于醇提,其中,水提法和水提冻干法提取丙酮酸、苹果酸、丁二酸的含量无显著差异,干法最高。综合考虑试验步骤和结果等各方面因素发现,又能大大简化试验步骤。
关键词:高效液相色谱;植物组织;果实;有机酸
中图分类号:O658 文献标识码:A )04014004
extractionorganicacidsfrom
planttissuebyHPLC
DONGYuan2yuan,DONGCai2xia,LUYing2lin,MIAOChen,SHENQi2rong
3
(CollegeofResourcesandEnvironmentalSciences,NanjingAgriculturalUniversity,Nanjing210095,China)
Abstract:Inthisexperiment,organicacidswereextractedfromtomatofruitandChinesecabbageleavesbydifferentextractionmethods,suchasbydistilledwaterdirectly(W),by80%ethanolandthenevaporationforconcentration(E),andbydistilledwaterforextractionandthenfrozen2evaporationconcentration(WF)andthendeterminatedbyHPLC.Theresultsobtainedarelis2tedasfollows.
Intermsoftomatofruits,theextractedamountsoffumarateandsuccinatewerenotinfluencedbyextractionmeth2
ods,whiletheamountsofoxalicacid,tartaricacid,malateandoxaloacetateextractedbyWmethodweresignificantlyhigherthanthoseextractedbytheothertwomethods.Emethodcouldextractthehighestamountofpyruvateandcitrate.ForChinesecabbageleaves,nosignificantdifferenceswerefoundinoxalicacid,tartaricacidandfumarateextractedbythethreeextractionmethods,whereastheamountoftheotherorganicacids(exceptforoxaloacetate)extractedbyWandWFmethodweresignificantlyhigherthanthoseextractedbyEmethod.Therewerenosignificantdifferenceofpyruvate,malate,andsuccinateextractedbyWandWFmethodwhilecitrateamountextractedbyWFwashigherthanthatbyW.andextractionqualitytogetherintoaccount.
Keywords:HPLC;planttissue;fruit;organicacids
Therefore,distilledwaterextraction(W)methodwas
proposedtoextractorganicacidsfromtomatofruitsandChinesecabbageleaveswhentakingtheextractionsteps,workingefficiency
有机酸广泛存在于水果、蔬菜中,其种类和含量是决定果蔬风味的重要指标,也是果蔬成熟度、耐储藏性、加工性的重要依据,因此测定果蔬中有机酸的种类及含量具有重要的意义。有机酸的测定方法
[1,2][3～5][6,7]
主要有3种,蒸馏水直接提取法,乙醇旋转蒸发提取法,乙氰、甲醇提取法。由于乙氰、甲醇成本高且有毒性,因此较少使用。根系分泌物中有机酸含量的分析步骤通常采用蒸馏水提取—冷冻
[8]
干燥(或旋转蒸发)浓缩—溶解—HPLC分析。为了确保植物组织中有机酸的高效提取和分离,我们也将此法运用于植物组织中有机酸的分析。
目前大部分研究均是采用一种方法提取一种材料中的有机酸,而不同提取方法对同一种材料提取效
收稿日期:20050111
基金项目:国家自然科学基金资助项目(30270790);中国博士后科学基金资助项目(2003033494)
3 作者简介:董园园(1981),硕士研究生,E2mail:qianlicao99@sina1com。通讯作者Correspondingauthor:沈其荣(1957),教
授,从事植物氮素营养研究,Tel:[1**********],E2mail:qrshen@njau1edu1cn。
第4期 董园园等:植物组织中有机酸的提取方法比较・141・
果的比较分析较少。不同的试验材料,如植物的果实和叶片,由于组织结构和物质种类的差异,不同的提取剂和提取方法所能提取到的有机酸量会相差很大。因此,本研究用不同提取方法对不同植株器官有机酸的提取进行比较,以期能寻找到一条既能一次性提取多种有机酸又能简化试验步骤提高工作效率的途径。
1 试验条件与方法
111 仪器与试剂
Waters600
2487高效液相色谱仪,紫外检测器,上海亚荣长化仪器厂RE52
C旋转蒸发仪,美
国Sawant公司SML2400s冰冻干燥机。有机酸标准品:草酸、酒石酸、草酰乙酸、丙酮酸、α2酮戊二酸、柠檬酸、富马酸、丁二酸均为分析纯试剂,苹果酸采用Sigma公司产品。112 色谱条件
色谱柱:德国Merck公司生产的HibarcolumnRT250×46Cμm,柱温30℃,流动相为015%(NH4)2HPO42H3PO4(pH215)m滤膜抽滤,流速为1mL・min
-1
,紫外检测波长214nm,进样量20113 样品采集
番茄Lycopersicon()和不结球白菜Brassicachinensis(南农矮脚黄)采用蛭石培养,浇灌试验材料。114 有机酸提取
[9]11411 蒸馏水直接提取(简写为水提,W) 参照沈宏等方法。番茄果实约20g用打浆机打碎,准
确称取匀浆后的番茄5100g,加入20mL蒸馏水,于75℃水浴中提取15min;以20000r・min离心20min,上清液过0122μm滤膜后进行HPLC测定。称取剪碎混匀的不结球白菜叶片2150g置于研钵中,加入3mL蒸馏水和少许石英砂,研磨成匀浆,移入10mL离心管中,再用1mL蒸馏水洗涤研钵2次并转移至离心管,总体积为5mL,于75℃水浴中提取15min;以20000r・min离心20min,上清液过0122μm滤膜后进行HPLC测定。
[3]
11412 80%乙醇旋转蒸发浓缩提取(简写为醇提,E) 参照李连朝等方法。将11411中提取液改为80%乙醇溶液,称样、研磨、水浴、离心步骤同上。番茄沉淀用10mL80%乙醇溶液洗涤2次,上清液定容至50mL;不结球白菜叶片沉淀用2mL80%乙醇溶液洗涤2次,上清液定容至10mL,于旋转蒸发仪75℃蒸干,番茄残渣加20mL(不结球白菜叶片用5mL)流动相溶解,过0122μm滤膜,然后进行HPLC测定。11413 蒸馏水冷冻干燥提取(简写为水提冻干,
[8]
WF) 参照郜红建等方法。称样、研磨、水浴、离心步骤同11411。番茄沉淀用10mL蒸馏水洗涤2次,上清液定容至50mL;不结球白菜叶片沉淀用2mL蒸馏水洗涤2次,上清液定容至10mL,于冰冻干燥机中冷冻干燥,番茄沉淀加20mL(不结球白菜叶片用5mL)流动相溶解,过0122μm滤膜后进行HPLC测定。115 数据处理
所有数据处理均采用SPSS2LSD法。
-1
-1
t/min
图1 9种有机酸混合标准品色谱图
Fig11 Chromatogramofamixtureof9organicacid
standards
(1.草酸Oxalicacid;2.酒石酸Tartaricacid;3.草酰乙酸
Oxaloacetate;4.丙酮酸Pyruvate;5.苹果酸Malate;6.α2酮戊二
2 结果与讨论
211 9种有机酸标准品HPLC分析色谱图
酸,α2Ketoglutarate;7.柠檬酸Citrate;8.富马酸Fumarate;9.丁二酸Succinate.ThesameasFig12.)
由图1可见,用HPLC分析法在15min
内同时
・142・ 南 京 农 业 大 学 学 报 第28卷
测定草酸、苹果酸、柠檬酸等9种有机酸是可行的,各种酸的出峰时间较为稳定而且互不干扰。212 不同提取方法所得番茄果实和不结球白菜叶片各种有机酸含量从图2可以看出,在3种不同提取方法下8种有机酸(其中α2酮戊二酸均未测出)的出峰时间比
较一致且与标准图谱基本相同,但其峰面积则存在不同程度的差异。不结球白菜叶片醇提和水提冻干法
-2-中草酸峰过高,可能是被NO3或SO4干扰所致,同时该法测定草酸时回收率偏高,也会使最终结果偏高
[10]
。
图2 番茄果实(A)和不结球白菜叶片(B)有机酸的HPLC色谱图
Fig12 Chromatogramof8organicacidsextractedfromtomatofruit(A)andChinesecabbageleaves(B)
bythreedifferentextractionmethods:W,EandWF
(W,EandWFstandfordistilledwaterdirectly,80%ethanolandthenevaporationforconcentration,anddistilledwaterforextractionand
thenfrozen2evaporationconcentration,respectively.ThesameasinTable1.)
对番茄果实和不结球白菜叶片中各种有机酸的含量(以鲜重计)进行计算,表1结果表明,3种提
取方法对番茄果实内富马酸、丁二酸含量基本无影响,其他几种有机酸含量则由于提取方法的不同而各有差异,其中除柠檬酸和丙酮酸以醇提最高外,草酰乙酸、苹果酸、酒石酸和草酸均以水提为最高。3种方法提取不结球白菜叶片中有机酸时,酒石酸、富马酸含量无显著差异,除草酰乙酸以醇提含量较高外,丙酮酸、苹果酸和丁二酸含量均以水提和水提冻干法显著高于醇提,其中水提法和水提冻干法中的丙酮酸、苹果酸和丁二酸含量无显著差异。柠檬酸含量以水提冻干法含量高于其他两种提取方法。
第4期 董园园等:植物组织中有机酸的提取方法比较
表1 不同提取方法所得番茄果实和不结球白菜叶片中8种有机酸含量
Table1 EightorganicacidscontentsextractedfromtomatofruitandChinesecabbageleaves
bythreedifferentextractionmethods
作物种类
Plants
・143・
mg・kg
提取方法 Extractionmethods
醇提E27114±4916ab79217±11315b1810±415b1014±313a71815±12318b6318±1711a6113±0112a100513±9412a2941±[1**********]1a518±017b146616±18117b29010±4610b12310±211a232813±12617b1996517±243015b
-1
有机酸种类
Organicacids
番茄果实
Tomatofruit
草酸Oxalicacid
酒石酸Tartaricacid草酰乙酸Oxaloacetate丙酮酸Pyruvate苹果酸Malate柠檬酸Citrate富马酸Fumarate丁二酸Succinate总酸Total
草酸Oxalicacid酒石酸Tartaricacid草酰乙酸Oxaloacetate丙酮酸Pyruvate苹果酸Malate柠檬酸Total
1
1
14
水提W31515±4511a14118±1313a5517±1511a610±117b70413±1512a2514±719b6510±0115a17013±18013a48318±27818a
36119±7214a67173313±318a
水提冻干WF
22810±717b75415±7418b1716±212b313±110c175114±19210a4313±1515ab±0114a1±5811a135114a
16±130611a39711±10714a3419±713b3516±514a925113±114411a84812±8614a12317±613a9745715±1112515a12171518±1378816a
不结球白菜叶片
LeavesofChinesecabbage
1391112±161517a
832018a±373b12712±912a9578619±1430017a11890413±1688411a
3 讨论与结论
水提冻干法是借鉴了根系分泌物中有机酸含量的分析方法,因为根系分泌物的提取通常是在大量介质中进行的,致使目标物质含量太低,分析误差太大,因此采用冷冻干燥的方法将其进行一定比例的浓
缩以达到精确分析的目的。在本试验中,考虑到植物组织中有机酸含量的提取也可能存在这方面的问题,因此,将水提后的上清液进行冷冻干燥浓缩,结果表明,经过浓缩后的样品只有柠檬酸的含量大大提高,其他有机酸的含量均与冻干浓缩之前无显著差异,柠檬酸含量提高的原因尚待进一步分析研究。
以上分析结果表明,不同提取方法对不同试验材料的提取效果存在差异,综合考虑试验步骤和工作效率等问题,我们认为,采用蒸馏水直接提取的方法既能有效保证有机酸的提取量,又能大大简化试验步骤,收到事半功倍的效果。
参考文献:
[1] 孔红星,刘正西,李利军.高效毛细管电泳—直接紫外检测法的应用研究[J].广西工学院学报,2003,14(2):31～35.[2] 孙学谦.高效液相色谱测定山楂中的有机酸[J].大连轻工业学院学报,1997,16(1):20～23.[3] 李连朝,李天荣,汪沛洪.反相HPLC测定食物中的有机酸[J].分析测试通报,1989,8(3):21～26.
[4] 赵尊行,孙衍华,黄化成.山东苹果中可溶性糖、有机酸的研究[J].山东农业大学学报,1995,26(3):355～360.[5] 林丹,赵国玲,刘佳佳.金银花不同提取方法的绿原酸比较研究[J].天然产物研究与开发,2003,15(2):124～126.[6] 李海生,吴贵华.HPLC法用于北山楂和云南山楂中主要有机酸和维生素C的分析比较[J].中草药,1990,21(4):13～14.[7] 王树会,李天福,冉邦定,等.云南不同烟区烟叶中有机酸及乙醚提取挥发性成分含量研究[J].中国烟草科学,2004(2):
35～37.
[8] 郜红建,常江,张自立,等.研究植物根系分泌物的方法[J].植物生理学通讯,2003,39(1):56～60.
[9] 沈宏,严小龙,郑少玲,等.菜豆有机酸和无机阴离子同时分析的离子色谱法[J].华南农业大学学报,2001,22(2):8～10.[10]董彩霞,董园园,王健,等.用一种流动相测定植物体内12种有机酸和维生素C的高效液相色谱法[J].土壤学报,2005,
42(2):331～335.
责任编辑:范雪梅
南京农业大学学报 2005,28(4):140～143
JournalofNanjingAgriculturalUniversity
植物组织中有机酸的提取方法比较
董园园,董彩霞,卢颖林,缪辰,沈其荣
3
(南京农业大学资源与环境科学学院,江苏南京210095)
摘要:以番茄果实和不结球白菜叶片为试验材料,用蒸馏水(水提)、80%乙醇旋转蒸发浓缩(醇提)、蒸馏水冷冻干燥浓缩(水提冻干)分别提取有机酸,采用高效液相色谱法测定。结果表明:3种提取方法下番茄果实中富马酸、丁二酸含量无显著性差异,草酸、酒石酸、苹果酸、草酰乙酸含量均以水提最高,而丙酮酸和柠檬酸以醇提含量最高;不同提取方法对不结球白菜叶片中草酸、酒石酸、富马酸含量无影响,其他几种有机酸(除草酰乙酸外)干含量高于醇提,其中,水提法和水提冻干法提取丙酮酸、苹果酸、丁二酸的含量无显著差异,干法最高。综合考虑试验步骤和结果等各方面因素发现,又能大大简化试验步骤。
关键词:高效液相色谱;植物组织;果实;有机酸
中图分类号:O658 文献标识码:A )04014004
extractionorganicacidsfrom
planttissuebyHPLC
DONGYuan2yuan,DONGCai2xia,LUYing2lin,MIAOChen,SHENQi2rong
3
(CollegeofResourcesandEnvironmentalSciences,NanjingAgriculturalUniversity,Nanjing210095,China)
Abstract:Inthisexperiment,organicacidswereextractedfromtomatofruitandChinesecabbageleavesbydifferentextractionmethods,suchasbydistilledwaterdirectly(W),by80%ethanolandthenevaporationforconcentration(E),andbydistilledwaterforextractionandthenfrozen2evaporationconcentration(WF)andthendeterminatedbyHPLC.Theresultsobtainedarelis2tedasfollows.
Intermsoftomatofruits,theextractedamountsoffumarateandsuccinatewerenotinfluencedbyextractionmeth2
ods,whiletheamountsofoxalicacid,tartaricacid,malateandoxaloacetateextractedbyWmethodweresignificantlyhigherthanthoseextractedbytheothertwomethods.Emethodcouldextractthehighestamountofpyruvateandcitrate.ForChinesecabbageleaves,nosignificantdifferenceswerefoundinoxalicacid,tartaricacidandfumarateextractedbythethreeextractionmethods,whereastheamountoftheotherorganicacids(exceptforoxaloacetate)extractedbyWandWFmethodweresignificantlyhigherthanthoseextractedbyEmethod.Therewerenosignificantdifferenceofpyruvate,malate,andsuccinateextractedbyWandWFmethodwhilecitrateamountextractedbyWFwashigherthanthatbyW.andextractionqualitytogetherintoaccount.
Keywords:HPLC;planttissue;fruit;organicacids
Therefore,distilledwaterextraction(W)methodwas
proposedtoextractorganicacidsfromtomatofruitsandChinesecabbageleaveswhentakingtheextractionsteps,workingefficiency
有机酸广泛存在于水果、蔬菜中,其种类和含量是决定果蔬风味的重要指标,也是果蔬成熟度、耐储藏性、加工性的重要依据,因此测定果蔬中有机酸的种类及含量具有重要的意义。有机酸的测定方法
[1,2][3～5][6,7]
主要有3种,蒸馏水直接提取法,乙醇旋转蒸发提取法,乙氰、甲醇提取法。由于乙氰、甲醇成本高且有毒性,因此较少使用。根系分泌物中有机酸含量的分析步骤通常采用蒸馏水提取—冷冻
[8]
干燥(或旋转蒸发)浓缩—溶解—HPLC分析。为了确保植物组织中有机酸的高效提取和分离,我们也将此法运用于植物组织中有机酸的分析。
目前大部分研究均是采用一种方法提取一种材料中的有机酸,而不同提取方法对同一种材料提取效
收稿日期:20050111
基金项目:国家自然科学基金资助项目(30270790);中国博士后科学基金资助项目(2003033494)
3 作者简介:董园园(1981),硕士研究生,E2mail:qianlicao99@sina1com。通讯作者Correspondingauthor:沈其荣(1957),教
授,从事植物氮素营养研究,Tel:[1**********],E2mail:qrshen@njau1edu1cn。
第4期 董园园等:植物组织中有机酸的提取方法比较・141・
果的比较分析较少。不同的试验材料,如植物的果实和叶片,由于组织结构和物质种类的差异,不同的提取剂和提取方法所能提取到的有机酸量会相差很大。因此,本研究用不同提取方法对不同植株器官有机酸的提取进行比较,以期能寻找到一条既能一次性提取多种有机酸又能简化试验步骤提高工作效率的途径。
1 试验条件与方法
111 仪器与试剂
Waters600
2487高效液相色谱仪,紫外检测器,上海亚荣长化仪器厂RE52
C旋转蒸发仪,美
国Sawant公司SML2400s冰冻干燥机。有机酸标准品:草酸、酒石酸、草酰乙酸、丙酮酸、α2酮戊二酸、柠檬酸、富马酸、丁二酸均为分析纯试剂,苹果酸采用Sigma公司产品。112 色谱条件
色谱柱:德国Merck公司生产的HibarcolumnRT250×46Cμm,柱温30℃,流动相为015%(NH4)2HPO42H3PO4(pH215)m滤膜抽滤,流速为1mL・min
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,紫外检测波长214nm,进样量20113 样品采集
番茄Lycopersicon()和不结球白菜Brassicachinensis(南农矮脚黄)采用蛭石培养,浇灌试验材料。114 有机酸提取
[9]11411 蒸馏水直接提取(简写为水提,W) 参照沈宏等方法。番茄果实约20g用打浆机打碎,准
确称取匀浆后的番茄5100g,加入20mL蒸馏水,于75℃水浴中提取15min;以20000r・min离心20min,上清液过0122μm滤膜后进行HPLC测定。称取剪碎混匀的不结球白菜叶片2150g置于研钵中,加入3mL蒸馏水和少许石英砂,研磨成匀浆,移入10mL离心管中,再用1mL蒸馏水洗涤研钵2次并转移至离心管,总体积为5mL,于75℃水浴中提取15min;以20000r・min离心20min,上清液过0122μm滤膜后进行HPLC测定。
[3]
11412 80%乙醇旋转蒸发浓缩提取(简写为醇提,E) 参照李连朝等方法。将11411中提取液改为80%乙醇溶液,称样、研磨、水浴、离心步骤同上。番茄沉淀用10mL80%乙醇溶液洗涤2次,上清液定容至50mL;不结球白菜叶片沉淀用2mL80%乙醇溶液洗涤2次,上清液定容至10mL,于旋转蒸发仪75℃蒸干,番茄残渣加20mL(不结球白菜叶片用5mL)流动相溶解,过0122μm滤膜,然后进行HPLC测定。11413 蒸馏水冷冻干燥提取(简写为水提冻干,
[8]
WF) 参照郜红建等方法。称样、研磨、水浴、离心步骤同11411。番茄沉淀用10mL蒸馏水洗涤2次,上清液定容至50mL;不结球白菜叶片沉淀用2mL蒸馏水洗涤2次,上清液定容至10mL,于冰冻干燥机中冷冻干燥,番茄沉淀加20mL(不结球白菜叶片用5mL)流动相溶解,过0122μm滤膜后进行HPLC测定。115 数据处理
所有数据处理均采用SPSS2LSD法。
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t/min
图1 9种有机酸混合标准品色谱图
Fig11 Chromatogramofamixtureof9organicacid
standards
(1.草酸Oxalicacid;2.酒石酸Tartaricacid;3.草酰乙酸
Oxaloacetate;4.丙酮酸Pyruvate;5.苹果酸Malate;6.α2酮戊二
2 结果与讨论
211 9种有机酸标准品HPLC分析色谱图
酸,α2Ketoglutarate;7.柠檬酸Citrate;8.富马酸Fumarate;9.丁二酸Succinate.ThesameasFig12.)
由图1可见,用HPLC分析法在15min
内同时
・142・ 南 京 农 业 大 学 学 报 第28卷
测定草酸、苹果酸、柠檬酸等9种有机酸是可行的,各种酸的出峰时间较为稳定而且互不干扰。212 不同提取方法所得番茄果实和不结球白菜叶片各种有机酸含量从图2可以看出,在3种不同提取方法下8种有机酸(其中α2酮戊二酸均未测出)的出峰时间比
较一致且与标准图谱基本相同,但其峰面积则存在不同程度的差异。不结球白菜叶片醇提和水提冻干法
-2-中草酸峰过高,可能是被NO3或SO4干扰所致,同时该法测定草酸时回收率偏高,也会使最终结果偏高
[10]
。
图2 番茄果实(A)和不结球白菜叶片(B)有机酸的HPLC色谱图
Fig12 Chromatogramof8organicacidsextractedfromtomatofruit(A)andChinesecabbageleaves(B)
bythreedifferentextractionmethods:W,EandWF
(W,EandWFstandfordistilledwaterdirectly,80%ethanolandthenevaporationforconcentration,anddistilledwaterforextractionand
thenfrozen2evaporationconcentration,respectively.ThesameasinTable1.)
对番茄果实和不结球白菜叶片中各种有机酸的含量(以鲜重计)进行计算,表1结果表明,3种提
取方法对番茄果实内富马酸、丁二酸含量基本无影响,其他几种有机酸含量则由于提取方法的不同而各有差异,其中除柠檬酸和丙酮酸以醇提最高外,草酰乙酸、苹果酸、酒石酸和草酸均以水提为最高。3种方法提取不结球白菜叶片中有机酸时,酒石酸、富马酸含量无显著差异,除草酰乙酸以醇提含量较高外,丙酮酸、苹果酸和丁二酸含量均以水提和水提冻干法显著高于醇提,其中水提法和水提冻干法中的丙酮酸、苹果酸和丁二酸含量无显著差异。柠檬酸含量以水提冻干法含量高于其他两种提取方法。
第4期 董园园等:植物组织中有机酸的提取方法比较
表1 不同提取方法所得番茄果实和不结球白菜叶片中8种有机酸含量
Table1 EightorganicacidscontentsextractedfromtomatofruitandChinesecabbageleaves
bythreedifferentextractionmethods
作物种类
Plants
・143・
mg・kg
提取方法 Extractionmethods
醇提E27114±4916ab79217±11315b1810±415b1014±313a71815±12318b6318±1711a6113±0112a100513±9412a2941±[1**********]1a518±017b146616±18117b29010±4610b12310±211a232813±12617b1996517±243015b
-1
有机酸种类
Organicacids
番茄果实
Tomatofruit
草酸Oxalicacid
酒石酸Tartaricacid草酰乙酸Oxaloacetate丙酮酸Pyruvate苹果酸Malate柠檬酸Citrate富马酸Fumarate丁二酸Succinate总酸Total
草酸Oxalicacid酒石酸Tartaricacid草酰乙酸Oxaloacetate丙酮酸Pyruvate苹果酸Malate柠檬酸Total
1
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水提W31515±4511a14118±1313a5517±1511a610±117b70413±1512a2514±719b6510±0115a17013±18013a48318±27818a
36119±7214a67173313±318a
水提冻干WF
22810±717b75415±7418b1716±212b313±110c175114±19210a4313±1515ab±0114a1±5811a135114a
16±130611a39711±10714a3419±713b3516±514a925113±114411a84812±8614a12317±613a9745715±1112515a12171518±1378816a
不结球白菜叶片
LeavesofChinesecabbage
1391112±161517a
832018a±373b12712±912a9578619±1430017a11890413±1688411a
3 讨论与结论
水提冻干法是借鉴了根系分泌物中有机酸含量的分析方法,因为根系分泌物的提取通常是在大量介质中进行的,致使目标物质含量太低,分析误差太大,因此采用冷冻干燥的方法将其进行一定比例的浓
缩以达到精确分析的目的。在本试验中,考虑到植物组织中有机酸含量的提取也可能存在这方面的问题,因此,将水提后的上清液进行冷冻干燥浓缩,结果表明,经过浓缩后的样品只有柠檬酸的含量大大提高,其他有机酸的含量均与冻干浓缩之前无显著差异,柠檬酸含量提高的原因尚待进一步分析研究。
以上分析结果表明,不同提取方法对不同试验材料的提取效果存在差异,综合考虑试验步骤和工作效率等问题,我们认为,采用蒸馏水直接提取的方法既能有效保证有机酸的提取量,又能大大简化试验步骤,收到事半功倍的效果。
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责任编辑:范雪梅