一、试剂准备
1. 溶液Ⅰ：50mM 葡萄糖，25mM Tris-HCl(pH 8.0)，10mM EDTA(pH 8.0）。 1M Tris-HCl(pH 8.0）12.5ml ，0.5M EDTA（pH 8.0）10ml ，葡萄糖4.730g ，加ddH2O 至500ml 。在121℃高压灭菌15min ，贮存于4℃。
1M Tris-HCl（Tris(三羟甲基) 氨基甲烷）：800ml H2O中溶解 121g Tris碱，用浓盐酸（约42ml ）调pH 值，混匀后加水到1L ；
0.5M EDTA（乙二胺四乙酸）：700ml H2O中溶解186.1g Na2EDTA.2H2O，用NaOH(约20g) 调 pH8.0， 补H2O 到 1L 。
2. 溶液Ⅱ：0.4M NaOH，2% SDS，分开配置
3. 溶液Ⅲ：醋酸钾（KAc ）缓冲液，pH 4.8。
5M KAc 300ml，冰醋酸 57.5ml ，加ddH2O 至500ml 。4℃保存备用。
4. 无水乙醇；
5. 70%乙醇；
6. RNA 酶A 母液：将RNA 酶A 溶于10mmol/L Tris·Cl(pH7.5), 15mmol/L NaCl 中，配成10mg/ml的溶液，于100℃加热15分钟，使混有的DNA 酶失活。冷却后用1.5ml eppendorf管分装成小份保存于-20℃。
11 灭菌双蒸水ddH2O
二、质粒提取操作步骤
1. 挑取LB 固体培养基上生长的单菌落，接种于2 ml LB（含抗生素）液体培养基中，37℃、250rmp 振荡培养过夜（约12-14hr ）。
2. 取1.5ml 培养液倒入1.5ml eppendorf管中，12000rmp 离心1min 。弃上清。
3、菌体沉淀重悬浮于200μl溶液Ⅰ中(需剧烈振荡，使菌体分散混匀。) 。
4、加入2% SDS 100μl，盖紧管口，混匀，然后加入0.4M NaOH 100μl快速温和颠倒eppendorf 管数次，以混匀内容物(千万不要振荡) 。
5、加入280μl预冷的溶液Ⅲ，盖紧管口，将管温和颠倒数次混匀，见白色絮状沉淀。 12000rmp 离心10min 。
6、取600μl上清液移入加有600μl无水乙醇的eppendorf 管，颠倒数次混匀, 12000rmp离心10min 。（先加无水乙醇，后加上清）
7、弃上清，加入1ml 70％乙醇，颠倒数次，然后直接倒掉乙醇，不需要离心。
8、将管倒置于卫生纸上使液体流尽，室温干燥30分钟。
9、将沉淀溶于50μl TE缓冲液(pH8.0) 或灭菌双蒸水ddH2O （含20μg /ml RnaseA，约4μl）中，37℃水浴30min 或者室温放置过夜以降解RNA 分子，然后储于-20℃冰箱中。
该质粒提取方法来源于UCLA 的林辰涛教授实验室
一、试剂准备
1. 溶液Ⅰ：50mM 葡萄糖，25mM Tris-HCl(pH 8.0)，10mM EDTA(pH 8.0）。 1M Tris-HCl(pH 8.0）12.5ml ，0.5M EDTA（pH 8.0）10ml ，葡萄糖4.730g ，加ddH2O 至500ml 。在121℃高压灭菌15min ，贮存于4℃。
1M Tris-HCl（Tris(三羟甲基) 氨基甲烷）：800ml H2O中溶解 121g Tris碱，用浓盐酸（约42ml ）调pH 值，混匀后加水到1L ；
0.5M EDTA（乙二胺四乙酸）：700ml H2O中溶解186.1g Na2EDTA.2H2O，用NaOH(约20g) 调 pH8.0， 补H2O 到 1L 。
2. 溶液Ⅱ：0.4M NaOH，2% SDS，分开配置
3. 溶液Ⅲ：醋酸钾（KAc ）缓冲液，pH 4.8。
5M KAc 300ml，冰醋酸 57.5ml ，加ddH2O 至500ml 。4℃保存备用。
4. 无水乙醇；
5. 70%乙醇；
6. RNA 酶A 母液：将RNA 酶A 溶于10mmol/L Tris·Cl(pH7.5), 15mmol/L NaCl 中，配成10mg/ml的溶液，于100℃加热15分钟，使混有的DNA 酶失活。冷却后用1.5ml eppendorf管分装成小份保存于-20℃。
11 灭菌双蒸水ddH2O
二、质粒提取操作步骤
1. 挑取LB 固体培养基上生长的单菌落，接种于2 ml LB（含抗生素）液体培养基中，37℃、250rmp 振荡培养过夜（约12-14hr ）。
2. 取1.5ml 培养液倒入1.5ml eppendorf管中，12000rmp 离心1min 。弃上清。
3、菌体沉淀重悬浮于200μl溶液Ⅰ中(需剧烈振荡，使菌体分散混匀。) 。
4、加入2% SDS 100μl，盖紧管口，混匀，然后加入0.4M NaOH 100μl快速温和颠倒eppendorf 管数次，以混匀内容物(千万不要振荡) 。
5、加入280μl预冷的溶液Ⅲ，盖紧管口，将管温和颠倒数次混匀，见白色絮状沉淀。 12000rmp 离心10min 。
6、取600μl上清液移入加有600μl无水乙醇的eppendorf 管，颠倒数次混匀, 12000rmp离心10min 。（先加无水乙醇，后加上清）
7、弃上清，加入1ml 70％乙醇，颠倒数次，然后直接倒掉乙醇，不需要离心。
8、将管倒置于卫生纸上使液体流尽，室温干燥30分钟。
9、将沉淀溶于50μl TE缓冲液(pH8.0) 或灭菌双蒸水ddH2O （含20μg /ml RnaseA，约4μl）中，37℃水浴30min 或者室温放置过夜以降解RNA 分子，然后储于-20℃冰箱中。
该质粒提取方法来源于UCLA 的林辰涛教授实验室