概述
阻断剂应用于酶联免疫吸附试验和横向免疫层析试验以减少来自患者样本中 的蛋白质干扰并由此可能造成的假阳性，假阴性的错误检测结果。
选择最佳检测方法取决于预期测定方法的实际应用，待分析的样品的种类，原材料的可用性，以及该检测方法只是用于一个实验室的单个检测还是在多个实验室中由不同技术人员操作。一般而言，免疫测定方法包括下列类别：
• 酶联免疫吸附免疫夹心法检测抗原 - 用于定量检测靶抗原/分析物• 酶联免疫吸附俘获法检测抗体 - 用于筛查特定抗体 (如: IgG, IgM, IgA & IgE)• 酶联免疫吸附竞争法 - 用于检测存在于样品中抗原/分析物，通常用于当小分子抗原或只有1-2个表位。 对于所有的方法有几个参数是决定检测方法性能的关键：（1）固相材料的选择（2）抗体/抗原的选择（3）阻断剂的选择。为了生产出高灵敏度和高特异性的试剂，最关键的因素是选择具有与靶分子的高特异性结合的抗体或抗原。然而，正确地使用阻断剂也有助于提高检测的灵敏度和特异性。这些阻断剂的使用可以减少非特异性结合以增加信噪比。
在免疫测试中非特异性结合可发生于（1）固相材 料和非目标的蛋白质结合 （2）患者的样品中存在的内源性抗体和检测试剂内抗体的结合。为了防止非特异性结合，在固相材料包被之后使用阻断缓冲剂中以封闭固相材料上任何剩余未结合的位点。在准备检测样本的过程中使用其他的阻断剂以防止内源性干扰抗体与检测试剂组分抗体结合。
理想的固体表面是既有高度的结合能力又不破坏包被的抗原或抗体的天然蛋白质的构象。
2 | 阻断剂 - 应用指南
免疫诊断方法分类
免疫夹心法检测抗原
抗原直接法
抗原间接法
这是一个灵敏感和稳定的方法。靶抗原加在两个抗体之间（捕获抗体和检测抗体）。捕获抗体被预先包被到固相材料上然后加入含有抗原的样品。经过洗涤步骤以去除未结合的抗原，而后加入可直接和检测抗体结合的检测抗体。捕获抗体和检测抗体必须结合到抗原的非重迭表位上。任何单克隆抗体或经亲和纯化的多克隆抗体均可以用作捕获抗体或检测抗体。进而，被检测抗原可以与标记的检测抗体（直接检测）结合或与一组匹配的未标记的检测抗体和标记的二抗（间接检测）来结合，从而达到检测的目的。
免疫捕获法检测抗体 (IgG, IgM & IgA)
抗原
抗原
IgG 检测
IgM检测
抗原直接包被在固相材料上。加入含有抗体的样本。使用标记的检测抗体（直接检测）或一组匹配的未标记检测抗体和标记二抗（间接检测）检测病人样本中的的抗体。直接检测法如图所示。
病人样本
捕获抗体
直接法
这是一个患者的目标分析物中的抗原和竞争抗原（抑制剂抗原）之间的竞争性结合的过程。目标分析物特异性抗体特被包被到固相材料上，患者样品中的抗原和标记的抑制剂抗原一起与包被的抗体温育并且竞争结合位点。未结合的标记的抑制剂抗原和分析物通过洗涤除去。样品中的分析物抗原越多则越少的标记抑制剂抗原可以结合到抗体。由此产生的测定信号则越弱。反之亦然。这种方法通常用于只有 1-2个表位的小分子的抗原。
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固相材料的封闭
固相的定量免疫学测定方法，如酶联免疫吸附，横向免疫层析，以及免疫印迹均涉及抗体通过共价结合包被到固相材料的表面上这一过程。固相材料表面其他蛋白质或生物分子的非特异性结合可以减少检测的特异性和灵敏度。由此而专门设计的固相材料封闭剂是用以饱和固相材料的表面上未被抗体包被的结合位点以防止其他物质的非特异性结合从而提高试剂的灵敏度。
开发一种新的免疫测试方法，第一步就是优化抗原或捕获抗体在固相材料上的包被条件以期最大限度地把有效蛋白包被到固相材料表面。包被之后，固相材料表面任何剩余的未占据的结合位点必须被封闭以防止非特异性物质的结合。一个理想的封闭剂通常为蛋白质，因为它能够有效地封闭固相材料表面疏水性和亲水性位点。此外，它可以作为一种稳定剂用以防止蛋白在与固相材料的表面反应时发生变性。封闭剂的用量和使用时间必须根据每个检测方法进行优化。封闭剂的用量不足将导致过高的背景信号以及减小的信噪比。而使用浓度过高的封闭剂则可能掩盖抗体 - 抗原相互作用，从而也可引起信噪比的减小。
理想封闭剂具有以下特征：• 有效地阻断测定反应物非特异性结合到固体材料表面
• 不影响已包被到固体材料表面的试剂有效成分• 可以起到试剂有效成分在固相表面稳定剂（防止变性）的作用
• 不与其它试剂有效成分发生交叉反应
• 不具有酶活性并由此可能与试剂中的底物反应而使信号加强或降解试剂中的反应物• 每个批号批间差小
酶联免疫吸附试验中不使用封闭缓冲液时
联免疫吸附试验中使用封闭缓冲液时
检测抗体
抗原捕获抗体
检测抗体抗原捕获抗体
患者样品中的未结合的杂质，如蛋白质，干扰分子等和测定标记物结合到固相材料表面并与特异性抗原 - 抗体反应信号竞争从而引起的背景噪声和减少检测信号。
封闭缓冲液旨在饱固相材料上的开放位点从而防止未结合的杂质与开放位点的非特异性结合。
4 | 阻断剂 - 应用指南
推荐使用的封闭剂
常规封闭流程
1. 在抗原抗体包被在固相基质上后，直接加封闭液到小孔，磁珠，印迹膜或NC膜上。2. 选择检测时封闭剂的最佳浓度，可以是1X或进一步稀释。3. 优化最佳的孵育温度和时间来调节封闭剂的效果，提高温度和增长时间都会增加封闭的效率，典型的条件为在25℃-30℃下孵育30-120分钟。4. 进行洗涤步骤。
注意事项：（除了加封闭液以外，每一步之间的充分洗涤也很重要。可以减小残留试剂和膜的非特异性结合，降低背景，增强信噪比，未充分洗涤会造成本底过高。经常用的技术是稀释的封闭液中加上一些高纯度的去污剂。）
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阻断试验中出现的干扰
免疫检测干扰是一类会引起检测结果假阳性或假阴性现象的泛指。潜在的干扰因素包括内源性抗体或病人样本中的其它结合蛋白，多反应抗体，自身抗体（嗜异性抗体）和人抗动物抗体。
在免疫检测时，干扰物可通过非特异性结合来干扰抗体和分析物之间的反应，一方面抑制目标分析物与检测抗体的结合，产生假阴性，另一方面又可以在缺少目标分析物的情况下与捕获和检测抗体结合，从而产生假阳性。
抗原
干扰抗体 真正的阳性结果
假阴性
干扰抗阻断捕获或检测抗体的结合位
点。通常发生在夹心法和竞争法分析。
假阳性
干扰抗体在没有抗原的的情况下和捕获抗体和检测抗体结合。通常只发生在有夹心法测定。
容易受到干扰的检测包括双抗体夹心抗原检测，竞争性检测和IgM捕获检测。文献中报道过的典型的例子包括对ToRCH，CEA，CA-125，CK-MB，LH，FSH，prolactin，TSH，AFP，cardiac troponin I (cTnI)和hCG等的检测。
常见的引起夹心抗原检测和竞争性检测偏差的类型主要是异嗜性抗体（HA）的干扰，HA是一类结合力弱的天然抗体，可与来自不同物种的免疫球蛋白反应，这些物种包括小鼠，山羊，兔子，绵羊和鸡。在诊断检测中，HA可以结合多种类型的无关抗原，从而干扰抗原-抗体的特异性结合反应。
人抗小鼠抗体（HAMA）的干扰是HA干扰的一种类型，它可以特异性的结合小鼠抗体。因为小鼠单克隆在免疫检测的商业诊断中应用非常广泛，所以HAHA的干扰经常会遇到。例如人自身抗体类风湿因子（RF），可以与人自身的免疫球蛋白（IG）结合，同时也可以与动物免疫球蛋白交叉反应，可引起与HA/HAMA干扰类似的RF干扰。通常同种型（Fc 区域）特异性的HA干扰比异种型（Fab或结合位点）特异性的HA更普遍。IgM捕获检测一般会受到两种类型的干扰，第一来自于病人的高丰度的IgG抗体在固相时会与IgM竞争性的结合抗原上的结合位点。因为人血清中IgG抗体含量非常高，大约占血清中总抗体的75%，所以在竞争性结合抗原的 结合位点时占据绝对优势。第二个干扰是IgM RF,它可以与免疫球蛋白上的Fc片段互做产生假阳性结
果。RF在1-4%的人群中发现，而在75%的65岁以上的成年病人中都有存在。
6 | 阻断剂 - 应用指南
夹心法免疫检测是指用两个抗体（单抗或者多抗）分别结合抗原或其它目标物上的两个位点，捕获抗体对抗原的亲和能力是免疫检测敏感度的决定因素，但是人抗动物免疫球蛋白抗体（HA抗体）可以干扰这种亲和，减少免疫检测的敏感性和特异性。
动物IGG
属于被动阻断剂，例如动物IgG通过干扰抗体和捕获物的结合，提供可选结合位点来检测抗体。动物IgG（例如羊IgG）只能封闭一种类型的干扰物（例如人抗山羊抗体），因此通常不止一种类型的IgG被选用，这取决于捕获和检测抗体的性质。动物IgG应该过量添加，有效性取决于动物IgG对干扰抗体的亲和力。推荐使用浓度:
在检测中需要使用10倍于的多抗 /单抗的浓度 (例如 5mg/mL 的偶联单抗, 要加50mg/mL 动物IgG).可以直接加到样本或酶联物稀释液中，但理想的状态是在加入检测捕获抗体孵育前先和病人的样本混合。
动物IgG (如：羊 IgG)干扰抗体
(如：人抗羊 IgG)
动物 IgG 干扰抗体
抗原
TRU BLockTM – 针对人抗鼠抗体和类风湿因子的阻断剂
它们是在双鼠单抗检测中另一类的阻断剂。它们被用来去除嗜异类型的干扰，即人抗鼠抗体
（HAMA）和类风湿因子（RF）干扰。HAMA阻断剂含有特异结合位点来结合嗜异干扰物，包括HAMA和RF。TRU BlocK通过与干扰物结合而产生空间位阻进一步阻止干扰物与分析物质结合。这类主动型阻断剂通常使用浓度要低于被动型阻断剂，从而可以减少由于过量使用被动型阻断剂而引起的检测信号减小等负作用。
推荐使用浓度：
TRU Block应该作为样本或酶联稀释液的一部分，以下是推荐的使用浓度范围：
0.5mg/mL – 20mg/mL (稀释过的样本) 或 5mg/mL – 20mg/mL (未稀释过的样本)
TRU BlockIgM 类风湿因子
TRU Block应该作为样本或酶联稀释液的一部分，理想的TRU Block应该在与捕获抗体孵育之前与病人样本结合。
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正确选择阻断剂
双抗体夹心试验
双小鼠单抗
推荐的阻断剂
TRU BlockTM
A66800H (TRU Block 1)
A66802H (TRU Block 2) A66803H (TRU Block 3)A66186M (9-13mg/mL) A66185M (50-55mg/mL) A66185M-LY (冻干)
小鼠 IgG
不同物种
捕获和检测抗体可以是多抗也可以是单抗
兔，鼠，鸡，鼠兔，鼠，鸡，鼠
抗原使用的IgG阻断剂的物种种类一定要和捕获检测抗体宿主的物种种类一致。如果在夹心检测中使用两个物种抗体的话，那应该使用相同两个物种的IgG阻断剂。
山羊多抗
山羊 IgG A66200H
小鼠单抗
小鼠 IgG 鸡 IgY
A66186M (9-13mg/mL)
A66185M (50-55mg/mL) A66185M-LY (Lyophilized)A01302C (Lyophilized)
鸡多抗
大鼠单抗
大鼠 IgG A64391R
兔单抗或多抗
兔 IgG A66100H
绵羊多抗
绵羊 IgG A66400S (70-77mg/mL, Liquid)
8 | 阻断剂 - 应用指南
IgM俘获法中的干扰
IgM抗体是肌体免疫系统对于感染应答所产生的第一种类型的抗体。因此，IgM的检测已被证明是帮助识别早期和近期感染有价值的诊断指标。然而，IgM抗体仅占体内总抗体的5％至10％。与此相反，IgG抗体是体内含量最丰富的免疫球蛋白，它占了体内总抗体的约75％至80％。为了确保IgM的检测的敏感性和特异性，阻断来自含量丰富的IgG抗体和其它非特异性蛋白质，如类风湿因子对于IgM的检测的干扰是十分必要的。
IgG 吸附剂
IgG吸附剂是纯化的山羊抗 - 人IgG（GAH IgG）的Fc片段。它专门为酶联免疫或其他免疫学方法血清检测特异性IgM抗体而设计。 它旨在在IgM抗体检测之前去除人血标本中的IgG以及IgG/类风湿因子（RF）结合物。试验证明，除去IgG的干扰可以显著增加的IgM检测方法的灵敏度。迈迪安公司的IgG吸附剂经由免疫电泳测试以确保特异性地针对IgG而和IgM或IgA没有交叉反应性。
IgM 稀释液
IgM的稀释液用于定性和定量检测IgM抗体。这一稀释剂的配方旨在减少患者血液标本中的IgG抗体，类风湿因子，嗜异性抗体，和任何可以影响IgM抗体免疫学检测结果的非特异性蛋白的干扰。 IgM稀释液含有高浓度的各种阻断蛋白，它们可以封闭任何干扰因素可能结合的位点以防止它们与干扰因素结合。作为免疫测试试剂盒的一部分，IgM稀释液可以增加IgM检测的灵敏度。
推荐原料:
L15406G 山 羊抗人IgG的Fc片段(GAH
IgG) 荐议在与病人标本混合前先用PBS稀释1:10。
1:10比例与病人标本混合以
并孵育 5-30 分钟。 gM 稀释液在一个单独的试I
管中，以1:21或更高稀释度稀释病人血清（混匀）。稀释液必须与试剂其它组分标准量化。
8120
山羊抗人IgG 或IgM 稀释液
标记物
抗原
IgM 俘获法
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动物血清
动物血清中含有各种不同的蛋白质，它们能吸收各种嗜异干扰。动物血清可以代替动物源性IgG或与之合并使用。作为阻断剂
使用的动物血清必须和诊断试剂中的试剂是来自同一种动物。
鸡 IgY
鸡IgY应用于使用鸡抗体的免疫夹心法或竞争发的酶联免疫或横向免疫层析试剂。鸡IgY可以预先结合任何患者样品中人自身抗鸡抗体的抗体以防止其非特异性结合由此可能产生的对于测定结果的干扰
10 | 阻断剂 - 应用指南
山羊 IgG
山羊 IgG应用于使用山羊抗体的免疫夹心法或竞争发的酶联免疫或横向免疫层析试剂。山羊 IgG可以预先结合任何患者样品
中人自身抗山羊抗体的抗体以防止其非特异性结合由此可能产生的对于测定结果的干扰。
小鼠免疫球蛋白
小鼠IgG应用于使用小鼠抗体的免疫夹心法或竞争发的酶联免疫或横向免疫层析试剂。小鼠 IgG可以预先结合任何患者样品中
人自身抗小鼠抗体的抗体（HAMA）以防止其非特异性结合由此可能产生的对于测定结果的干扰。
兔 IgG
兔IgG应用于使用兔抗体的免疫夹心法或竞争发的酶联免疫或横向免疫层析试剂。兔IgG可以预先结合任何患者样品中人自身
抗兔抗体的抗体以防止其非特异性结合由此可能产生的对于测定结果的干扰。
大鼠 IgG
大鼠IgG应用于使用大鼠抗体的免疫夹心法或竞争发的酶联免疫或横向免疫层析试剂。大鼠 IgG可以预先结合任何患者样品中
人自身抗大鼠抗体的抗体以防止其非特异性结合由此可能产生的对于测定结果的干扰。
绵羊 IgG
绵羊 IgG应用于使用绵羊抗体的免疫夹心法或竞争发的酶联免疫或横向免疫层析试剂。绵羊 IgG可以预先结合任何患者样品中
人自身抗绵羊抗体的抗体以防止其非特异性结合由此可能产生的对于测定结果的干扰。
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固相基质封闭缓冲液
固相基质封闭剂旨在饱和封闭在固相上未被包被物占据的结合位点以防止非特异性结合。通常固相基质封闭缓冲液能够封闭固
相基质上的疏水性和亲水性位点。另外，它们还可以作为包被物的稳定剂以及防止包被蛋白质与固相的表面发生反应而变性。.
IgG 吸附剂
IgG 吸附剂专门为酶联免疫或其他免疫学方法血清检测特异性IgM抗体而设计。 它旨在在IgM抗体检测之前去除人血标本中的
IgG以及IgG/类风湿因子（RF）结合物。试验证明，除去IgG的干扰可以显著增加的IgM检测方法的灵敏度。
TRU Block - 人抗鼠抗体和类风湿因子的阻断剂
该类主动型阻断剂是针对人抗鼠抗体（HAMA）和类风湿因子（RF）对于使用小鼠单克隆抗体的免疫夹心法的非特异性的干扰以防止假阳性和假阴性的检测结果。TRU Block我们拥有自主知识产权的主动型阻断剂。它可显著降低在免疫学诊断中出现的
干扰而大大提高检测的可靠性。和被动型封闭试剂如小鼠IgG比较，它使用浓度低，但阻断效果明显。
人抗鼠抗体和类风湿因子阳性标本
概述
阻断剂应用于酶联免疫吸附试验和横向免疫层析试验以减少来自患者样本中 的蛋白质干扰并由此可能造成的假阳性，假阴性的错误检测结果。
选择最佳检测方法取决于预期测定方法的实际应用，待分析的样品的种类，原材料的可用性，以及该检测方法只是用于一个实验室的单个检测还是在多个实验室中由不同技术人员操作。一般而言，免疫测定方法包括下列类别：
• 酶联免疫吸附免疫夹心法检测抗原 - 用于定量检测靶抗原/分析物• 酶联免疫吸附俘获法检测抗体 - 用于筛查特定抗体 (如: IgG, IgM, IgA & IgE)• 酶联免疫吸附竞争法 - 用于检测存在于样品中抗原/分析物，通常用于当小分子抗原或只有1-2个表位。 对于所有的方法有几个参数是决定检测方法性能的关键：（1）固相材料的选择（2）抗体/抗原的选择（3）阻断剂的选择。为了生产出高灵敏度和高特异性的试剂，最关键的因素是选择具有与靶分子的高特异性结合的抗体或抗原。然而，正确地使用阻断剂也有助于提高检测的灵敏度和特异性。这些阻断剂的使用可以减少非特异性结合以增加信噪比。
在免疫测试中非特异性结合可发生于（1）固相材 料和非目标的蛋白质结合 （2）患者的样品中存在的内源性抗体和检测试剂内抗体的结合。为了防止非特异性结合，在固相材料包被之后使用阻断缓冲剂中以封闭固相材料上任何剩余未结合的位点。在准备检测样本的过程中使用其他的阻断剂以防止内源性干扰抗体与检测试剂组分抗体结合。
理想的固体表面是既有高度的结合能力又不破坏包被的抗原或抗体的天然蛋白质的构象。
2 | 阻断剂 - 应用指南
免疫诊断方法分类
免疫夹心法检测抗原
抗原直接法
抗原间接法
这是一个灵敏感和稳定的方法。靶抗原加在两个抗体之间（捕获抗体和检测抗体）。捕获抗体被预先包被到固相材料上然后加入含有抗原的样品。经过洗涤步骤以去除未结合的抗原，而后加入可直接和检测抗体结合的检测抗体。捕获抗体和检测抗体必须结合到抗原的非重迭表位上。任何单克隆抗体或经亲和纯化的多克隆抗体均可以用作捕获抗体或检测抗体。进而，被检测抗原可以与标记的检测抗体（直接检测）结合或与一组匹配的未标记的检测抗体和标记的二抗（间接检测）来结合，从而达到检测的目的。
免疫捕获法检测抗体 (IgG, IgM & IgA)
抗原
抗原
IgG 检测
IgM检测
抗原直接包被在固相材料上。加入含有抗体的样本。使用标记的检测抗体（直接检测）或一组匹配的未标记检测抗体和标记二抗（间接检测）检测病人样本中的的抗体。直接检测法如图所示。
病人样本
捕获抗体
直接法
这是一个患者的目标分析物中的抗原和竞争抗原（抑制剂抗原）之间的竞争性结合的过程。目标分析物特异性抗体特被包被到固相材料上，患者样品中的抗原和标记的抑制剂抗原一起与包被的抗体温育并且竞争结合位点。未结合的标记的抑制剂抗原和分析物通过洗涤除去。样品中的分析物抗原越多则越少的标记抑制剂抗原可以结合到抗体。由此产生的测定信号则越弱。反之亦然。这种方法通常用于只有 1-2个表位的小分子的抗原。
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固相材料的封闭
固相的定量免疫学测定方法，如酶联免疫吸附，横向免疫层析，以及免疫印迹均涉及抗体通过共价结合包被到固相材料的表面上这一过程。固相材料表面其他蛋白质或生物分子的非特异性结合可以减少检测的特异性和灵敏度。由此而专门设计的固相材料封闭剂是用以饱和固相材料的表面上未被抗体包被的结合位点以防止其他物质的非特异性结合从而提高试剂的灵敏度。
开发一种新的免疫测试方法，第一步就是优化抗原或捕获抗体在固相材料上的包被条件以期最大限度地把有效蛋白包被到固相材料表面。包被之后，固相材料表面任何剩余的未占据的结合位点必须被封闭以防止非特异性物质的结合。一个理想的封闭剂通常为蛋白质，因为它能够有效地封闭固相材料表面疏水性和亲水性位点。此外，它可以作为一种稳定剂用以防止蛋白在与固相材料的表面反应时发生变性。封闭剂的用量和使用时间必须根据每个检测方法进行优化。封闭剂的用量不足将导致过高的背景信号以及减小的信噪比。而使用浓度过高的封闭剂则可能掩盖抗体 - 抗原相互作用，从而也可引起信噪比的减小。
理想封闭剂具有以下特征：• 有效地阻断测定反应物非特异性结合到固体材料表面
• 不影响已包被到固体材料表面的试剂有效成分• 可以起到试剂有效成分在固相表面稳定剂（防止变性）的作用
• 不与其它试剂有效成分发生交叉反应
• 不具有酶活性并由此可能与试剂中的底物反应而使信号加强或降解试剂中的反应物• 每个批号批间差小
酶联免疫吸附试验中不使用封闭缓冲液时
联免疫吸附试验中使用封闭缓冲液时
检测抗体
抗原捕获抗体
检测抗体抗原捕获抗体
患者样品中的未结合的杂质，如蛋白质，干扰分子等和测定标记物结合到固相材料表面并与特异性抗原 - 抗体反应信号竞争从而引起的背景噪声和减少检测信号。
封闭缓冲液旨在饱固相材料上的开放位点从而防止未结合的杂质与开放位点的非特异性结合。
4 | 阻断剂 - 应用指南
推荐使用的封闭剂
常规封闭流程
1. 在抗原抗体包被在固相基质上后，直接加封闭液到小孔，磁珠，印迹膜或NC膜上。2. 选择检测时封闭剂的最佳浓度，可以是1X或进一步稀释。3. 优化最佳的孵育温度和时间来调节封闭剂的效果，提高温度和增长时间都会增加封闭的效率，典型的条件为在25℃-30℃下孵育30-120分钟。4. 进行洗涤步骤。
注意事项：（除了加封闭液以外，每一步之间的充分洗涤也很重要。可以减小残留试剂和膜的非特异性结合，降低背景，增强信噪比，未充分洗涤会造成本底过高。经常用的技术是稀释的封闭液中加上一些高纯度的去污剂。）
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阻断试验中出现的干扰
免疫检测干扰是一类会引起检测结果假阳性或假阴性现象的泛指。潜在的干扰因素包括内源性抗体或病人样本中的其它结合蛋白，多反应抗体，自身抗体（嗜异性抗体）和人抗动物抗体。
在免疫检测时，干扰物可通过非特异性结合来干扰抗体和分析物之间的反应，一方面抑制目标分析物与检测抗体的结合，产生假阴性，另一方面又可以在缺少目标分析物的情况下与捕获和检测抗体结合，从而产生假阳性。
抗原
干扰抗体 真正的阳性结果
假阴性
干扰抗阻断捕获或检测抗体的结合位
点。通常发生在夹心法和竞争法分析。
假阳性
干扰抗体在没有抗原的的情况下和捕获抗体和检测抗体结合。通常只发生在有夹心法测定。
容易受到干扰的检测包括双抗体夹心抗原检测，竞争性检测和IgM捕获检测。文献中报道过的典型的例子包括对ToRCH，CEA，CA-125，CK-MB，LH，FSH，prolactin，TSH，AFP，cardiac troponin I (cTnI)和hCG等的检测。
常见的引起夹心抗原检测和竞争性检测偏差的类型主要是异嗜性抗体（HA）的干扰，HA是一类结合力弱的天然抗体，可与来自不同物种的免疫球蛋白反应，这些物种包括小鼠，山羊，兔子，绵羊和鸡。在诊断检测中，HA可以结合多种类型的无关抗原，从而干扰抗原-抗体的特异性结合反应。
人抗小鼠抗体（HAMA）的干扰是HA干扰的一种类型，它可以特异性的结合小鼠抗体。因为小鼠单克隆在免疫检测的商业诊断中应用非常广泛，所以HAHA的干扰经常会遇到。例如人自身抗体类风湿因子（RF），可以与人自身的免疫球蛋白（IG）结合，同时也可以与动物免疫球蛋白交叉反应，可引起与HA/HAMA干扰类似的RF干扰。通常同种型（Fc 区域）特异性的HA干扰比异种型（Fab或结合位点）特异性的HA更普遍。IgM捕获检测一般会受到两种类型的干扰，第一来自于病人的高丰度的IgG抗体在固相时会与IgM竞争性的结合抗原上的结合位点。因为人血清中IgG抗体含量非常高，大约占血清中总抗体的75%，所以在竞争性结合抗原的 结合位点时占据绝对优势。第二个干扰是IgM RF,它可以与免疫球蛋白上的Fc片段互做产生假阳性结
果。RF在1-4%的人群中发现，而在75%的65岁以上的成年病人中都有存在。
6 | 阻断剂 - 应用指南
夹心法免疫检测是指用两个抗体（单抗或者多抗）分别结合抗原或其它目标物上的两个位点，捕获抗体对抗原的亲和能力是免疫检测敏感度的决定因素，但是人抗动物免疫球蛋白抗体（HA抗体）可以干扰这种亲和，减少免疫检测的敏感性和特异性。
动物IGG
属于被动阻断剂，例如动物IgG通过干扰抗体和捕获物的结合，提供可选结合位点来检测抗体。动物IgG（例如羊IgG）只能封闭一种类型的干扰物（例如人抗山羊抗体），因此通常不止一种类型的IgG被选用，这取决于捕获和检测抗体的性质。动物IgG应该过量添加，有效性取决于动物IgG对干扰抗体的亲和力。推荐使用浓度:
在检测中需要使用10倍于的多抗 /单抗的浓度 (例如 5mg/mL 的偶联单抗, 要加50mg/mL 动物IgG).可以直接加到样本或酶联物稀释液中，但理想的状态是在加入检测捕获抗体孵育前先和病人的样本混合。
动物IgG (如：羊 IgG)干扰抗体
(如：人抗羊 IgG)
动物 IgG 干扰抗体
抗原
TRU BLockTM – 针对人抗鼠抗体和类风湿因子的阻断剂
它们是在双鼠单抗检测中另一类的阻断剂。它们被用来去除嗜异类型的干扰，即人抗鼠抗体
（HAMA）和类风湿因子（RF）干扰。HAMA阻断剂含有特异结合位点来结合嗜异干扰物，包括HAMA和RF。TRU BlocK通过与干扰物结合而产生空间位阻进一步阻止干扰物与分析物质结合。这类主动型阻断剂通常使用浓度要低于被动型阻断剂，从而可以减少由于过量使用被动型阻断剂而引起的检测信号减小等负作用。
推荐使用浓度：
TRU Block应该作为样本或酶联稀释液的一部分，以下是推荐的使用浓度范围：
0.5mg/mL – 20mg/mL (稀释过的样本) 或 5mg/mL – 20mg/mL (未稀释过的样本)
TRU BlockIgM 类风湿因子
TRU Block应该作为样本或酶联稀释液的一部分，理想的TRU Block应该在与捕获抗体孵育之前与病人样本结合。
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正确选择阻断剂
双抗体夹心试验
双小鼠单抗
推荐的阻断剂
TRU BlockTM
A66800H (TRU Block 1)
A66802H (TRU Block 2) A66803H (TRU Block 3)A66186M (9-13mg/mL) A66185M (50-55mg/mL) A66185M-LY (冻干)
小鼠 IgG
不同物种
捕获和检测抗体可以是多抗也可以是单抗
兔，鼠，鸡，鼠兔，鼠，鸡，鼠
抗原使用的IgG阻断剂的物种种类一定要和捕获检测抗体宿主的物种种类一致。如果在夹心检测中使用两个物种抗体的话，那应该使用相同两个物种的IgG阻断剂。
山羊多抗
山羊 IgG A66200H
小鼠单抗
小鼠 IgG 鸡 IgY
A66186M (9-13mg/mL)
A66185M (50-55mg/mL) A66185M-LY (Lyophilized)A01302C (Lyophilized)
鸡多抗
大鼠单抗
大鼠 IgG A64391R
兔单抗或多抗
兔 IgG A66100H
绵羊多抗
绵羊 IgG A66400S (70-77mg/mL, Liquid)
8 | 阻断剂 - 应用指南
IgM俘获法中的干扰
IgM抗体是肌体免疫系统对于感染应答所产生的第一种类型的抗体。因此，IgM的检测已被证明是帮助识别早期和近期感染有价值的诊断指标。然而，IgM抗体仅占体内总抗体的5％至10％。与此相反，IgG抗体是体内含量最丰富的免疫球蛋白，它占了体内总抗体的约75％至80％。为了确保IgM的检测的敏感性和特异性，阻断来自含量丰富的IgG抗体和其它非特异性蛋白质，如类风湿因子对于IgM的检测的干扰是十分必要的。
IgG 吸附剂
IgG吸附剂是纯化的山羊抗 - 人IgG（GAH IgG）的Fc片段。它专门为酶联免疫或其他免疫学方法血清检测特异性IgM抗体而设计。 它旨在在IgM抗体检测之前去除人血标本中的IgG以及IgG/类风湿因子（RF）结合物。试验证明，除去IgG的干扰可以显著增加的IgM检测方法的灵敏度。迈迪安公司的IgG吸附剂经由免疫电泳测试以确保特异性地针对IgG而和IgM或IgA没有交叉反应性。
IgM 稀释液
IgM的稀释液用于定性和定量检测IgM抗体。这一稀释剂的配方旨在减少患者血液标本中的IgG抗体，类风湿因子，嗜异性抗体，和任何可以影响IgM抗体免疫学检测结果的非特异性蛋白的干扰。 IgM稀释液含有高浓度的各种阻断蛋白，它们可以封闭任何干扰因素可能结合的位点以防止它们与干扰因素结合。作为免疫测试试剂盒的一部分，IgM稀释液可以增加IgM检测的灵敏度。
推荐原料:
L15406G 山 羊抗人IgG的Fc片段(GAH
IgG) 荐议在与病人标本混合前先用PBS稀释1:10。
1:10比例与病人标本混合以
并孵育 5-30 分钟。 gM 稀释液在一个单独的试I
管中，以1:21或更高稀释度稀释病人血清（混匀）。稀释液必须与试剂其它组分标准量化。
8120
山羊抗人IgG 或IgM 稀释液
标记物
抗原
IgM 俘获法
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动物血清
动物血清中含有各种不同的蛋白质，它们能吸收各种嗜异干扰。动物血清可以代替动物源性IgG或与之合并使用。作为阻断剂
使用的动物血清必须和诊断试剂中的试剂是来自同一种动物。
鸡 IgY
鸡IgY应用于使用鸡抗体的免疫夹心法或竞争发的酶联免疫或横向免疫层析试剂。鸡IgY可以预先结合任何患者样品中人自身抗鸡抗体的抗体以防止其非特异性结合由此可能产生的对于测定结果的干扰
10 | 阻断剂 - 应用指南
山羊 IgG
山羊 IgG应用于使用山羊抗体的免疫夹心法或竞争发的酶联免疫或横向免疫层析试剂。山羊 IgG可以预先结合任何患者样品
中人自身抗山羊抗体的抗体以防止其非特异性结合由此可能产生的对于测定结果的干扰。
小鼠免疫球蛋白
小鼠IgG应用于使用小鼠抗体的免疫夹心法或竞争发的酶联免疫或横向免疫层析试剂。小鼠 IgG可以预先结合任何患者样品中
人自身抗小鼠抗体的抗体（HAMA）以防止其非特异性结合由此可能产生的对于测定结果的干扰。
兔 IgG
兔IgG应用于使用兔抗体的免疫夹心法或竞争发的酶联免疫或横向免疫层析试剂。兔IgG可以预先结合任何患者样品中人自身
抗兔抗体的抗体以防止其非特异性结合由此可能产生的对于测定结果的干扰。
大鼠 IgG
大鼠IgG应用于使用大鼠抗体的免疫夹心法或竞争发的酶联免疫或横向免疫层析试剂。大鼠 IgG可以预先结合任何患者样品中
人自身抗大鼠抗体的抗体以防止其非特异性结合由此可能产生的对于测定结果的干扰。
绵羊 IgG
绵羊 IgG应用于使用绵羊抗体的免疫夹心法或竞争发的酶联免疫或横向免疫层析试剂。绵羊 IgG可以预先结合任何患者样品中
人自身抗绵羊抗体的抗体以防止其非特异性结合由此可能产生的对于测定结果的干扰。
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固相基质封闭缓冲液
固相基质封闭剂旨在饱和封闭在固相上未被包被物占据的结合位点以防止非特异性结合。通常固相基质封闭缓冲液能够封闭固
相基质上的疏水性和亲水性位点。另外，它们还可以作为包被物的稳定剂以及防止包被蛋白质与固相的表面发生反应而变性。.
IgG 吸附剂
IgG 吸附剂专门为酶联免疫或其他免疫学方法血清检测特异性IgM抗体而设计。 它旨在在IgM抗体检测之前去除人血标本中的
IgG以及IgG/类风湿因子（RF）结合物。试验证明，除去IgG的干扰可以显著增加的IgM检测方法的灵敏度。
TRU Block - 人抗鼠抗体和类风湿因子的阻断剂
该类主动型阻断剂是针对人抗鼠抗体（HAMA）和类风湿因子（RF）对于使用小鼠单克隆抗体的免疫夹心法的非特异性的干扰以防止假阳性和假阴性的检测结果。TRU Block我们拥有自主知识产权的主动型阻断剂。它可显著降低在免疫学诊断中出现的
干扰而大大提高检测的可靠性。和被动型封闭试剂如小鼠IgG比较，它使用浓度低，但阻断效果明显。
人抗鼠抗体和类风湿因子阳性标本